Para determinar la masa de fitoplancton en las muestras tomadas del canal Mandry se

llevó a cabo el método de espectrofotometría. Este consiste en recolectar muestras de cada

estrata en el cuerpo de agua, evitando que las mismas sean expuestas a la luz. En este caso las

muestras fueron de 1 litro por estrata. Hecho esto se procedió a filtra la muestra con el propósito

de concentrar el fitoplacton. El filtrado por estrata fue de 200ml, a excepción del fondo el cual

fue filtrado a 150 ml. Esto ya que la alta concentración de pigmento que se hallaba en el mismo

obstruía la membrana del filtro. Ya filtrado, a cada membrana por estrata se le añadieron 2 ml de

acetona alcalinizado como homogenizador de tejidos. Hecho esto se procedió a centrifugar cada

una de las muestras para clarificar las mismas. El extracto clarificado obtenido se colocó en

celdas que contenían 2 ml de esta y se procedió a utilizar el espectrofotómetro para contabilizar

el largo de onda de las muestras. Una vez finalizada la espectrofotometría se procedió a realizar

los cálculos correspondientes para determinar la biomasa midiendo la concentración de

pigmentos fotosintéticos en las muestras obtenidas de las estratas de agua. En este caso se

realizaron los mismos utilizando el método tricromático, aplicable a muestras donde no se

encuentra feofitina-a. La feofitina-a es un producto de degradación de la clorofila-a, cuya

región de absorción máxima coincide con la del pigmento parental. Para determinar la

concentración de clorofila-a y de feofitina-a en una muestra de agua hay que acidificar el

extracto. La adición de ácido al extracto va a ocasionar que la clorofila-a presente pierda su

átomo de magnesio y esto hace que la misma se convierta en feofitina-a. La acidificación del

extracto también evita que algunos pigmentos accesorios

absorban al mismo largo de onda de la feofitina-a. Cuando una solución de clorofila-a pura es

convertida a feofitina-a mediante acidificación la razón es:

(DO664nm antes de la acidificación)/(DO665nm después de la acidificación) = 1.70

[DO = densidad óptica].
Este valor es utilizado para corregir la concentración de clorofila-a por la feofitina-a presente.

Los extractos con una razón:

(DO664nm-antes de la acidificación)/(DO665nm-después de la acidificación) = 1.70

Estos no contienen feofitina-a. Esto quiere decir que los fototrofos atrapados en la muestra se

encontraban en un excelente estado fisiológico al momento de realizarse el muestreo. Estas

soluciones soluciones puras de feofitina-a no van a registrar reducción en la absorbancia a

665nm luego de la acidificación, presentando entonces una razón:

(DO664nm-antes de la acidificación)/(DO665nm-después de la acidificación) = 1.0.

Por consiguiente, las muestras de agua donde hallan mezclas de clorofila-a y feofitina-a

presentarán una razón de absorción 664nm/665nm que variará entre 1.0 y 1.7. Esto fue lo que

sucedió en nuestro caso.

El metodo tricromático consiste en corregir los valores de absorbancia de 664, 647 y

630nm por la turbidez del extracto, restándole a cada uno de ellos la lectura obtenida a 750nm.

Una ves corregidos los valores de absorbancia, se calcularon las concentraciones de clorofila a,

b y c en el extracto utilizando las siguientes expresiones:

Ca = 11.85 (DO664) - 1.54(DO647) - 0.08(DO630)

Cb = 21.03 (DO647) - 5.43(DO664) - 2.66(DO630)
Cc = 24.52 (DO630) - 7.60(DO647) - 1. 67(DO664)

Las cuales Ca, Cb y Cc son las concentraciones de clorofila-a, clorofila-b y Clorofila-c

respectivamente. Ya determinadas las concentraciones se procedió a calcular la cantidad de

pigmento en cada muestra de estrata con la siguiente ecuación:

Clorofila-a (mg/m3)= Ca X Vol Extracto (L)

Vol Muestra Filtrada (m3)

 Midiendo la concentración de clorofila-a se pudo estimar la biomasa de la mayor parte

del fitoplancton (en este caso diatomeas) presente en el cuerpo de agua de Mandry. De acuerdo

a los resultados en las muestras de superficie se obtuvo que en la primera muestra había mayor

biomasa en comparación con la segunda. En el caso de la segunda indica que había una posible

cantidad de organismos fotosintéticos en la superficie, puesto que las mismas carecen del

pigmento a ser medido. Las muestras de columna indicaron un patrón de aumento en cuanto a

concentración de clorofila –a se refiere, lo cual implica que había una cantidad significativa de

cianobacterias y diatomeas. En el caso de las muestras de fondo se obtuvo la mayor cantidad de

biomasa entre las estratas, indicativo de mayor cantidad de organismos (cianobacterias,

diatomeas, posible algas) en el fondo que en el resto de las estratas del cuerpo de agua.