MICROBIOLOGA DE ORGANISMOS EN SUELOS AGRICOLAS OBJETIVO: Aislar microorganismos a partir de muestras naturales de suelo y conservar algunos de ellos en cultivo

puro. I. GENERALIDADES

Los microorganismos del suelo juegan un papel muy importante manteniendo la fertilidad de los suelos. Elementos esenciales para el crecimiento, tales como oxgeno, nitrgeno, carbn, azufre y fsforo, son reciclados por microorganismos del suelo. La mayora de los microorganismos que viven en el suelo juegan un papel indispensable en el mantenimiento de la vida sobre este planeta.

Bacterias. En general, el grupo ms numeroso de bacterias en el suelo son los Actinomicetos que resisten condiciones secas y pueden sobrevivir en suelos desrticos. Los gneros ms comunes son: Nocardia, Arthrobacter, Streptomyces, Bacillus, Clostridium. Las bacterias del gnero Streptomyces adems de producir antibiticos, producen metabolitos llamados geosminas las cuales dan al suelo su olor caracterstico. Otro grupo comn de bacterias heterotrficas del suelo es el Myxobacteria que son pigmentadas y forman masas brillantemente coloreadas. Bajo condiciones de inanicin se acumulan para formar complejos cuerpos fructificantes macroscpicos. Hongos. Los gneros de hongos varan con el tipo de suelo y sus propiedades fisicoqumicas. Algunos son de vida libre y otros como las Micorrizas, en forma simbitica con las races de plantas. Son comunes, especies de los gneros Candida, Aspergillus, Penicillium, Rhizopus y Mucor. Algunos hongos son importantes patgenos de plantas atacando trigo y maz entre otros. Los hongos del suelo son extremadamente importantes en la descomposicin de materia de plantas, degradando y utilizando macromolculas complejas tales como celulosa y lignina.

Las familias Bacillaceae y Clostridiaceae se caracterizan por ser cocos o bacilos gran positivos, formadores o no de endosporas, comprendiendo microorganismos de amplia distribucin en la naturaleza. Cumplen una funcin fundamental en el ciclo de la materia, ya sea degradando compuestos organicos o fijando elementos inorgnicos tales como nitrgeno, azufre y fosforo. Algunos pueden estar asociados a hospederos vertebrados o invertebrados pudiendo producir patogenia. Los miembros de la familia Bacillaceae, usualmente son mviles y poseen flagelos peritricos. De acuerdo alas concentraciones de oxigeno pueden aerobios estrictos, microaerofilos y anaerobios facultativos y anaerobios. Los miembros del genero Clostridiaceae, estn presente en una gran variedad de ambientes. De acuerdo a los requerimientos de oxigeno pueden se microaerofilos y anaerobios facultativos y anaerobios estrictos II. METODOLOGIA DE ESTUDIO.

AISLAMIENTO DEL GENERO BACILLUS Recoleccin de muestras. Bacillus puede ser aislado a partir de muestras de tierra y de aguas de regados. Si las muestras son de tierra , esta debe de ser recolectada en bolsas de primer uso con la ayuda de cucharas esteriles. Para el caso de aguas de regado estas deben ser recolectadas en frascos esteriles con topa de rosca. Procesamiento de la muestra. Realizar diluciones seriadas de 10-1, 10-2, 10-3, 10-4 y 10-5 de la muestra en solucin salina. Someter las diluciones 10-4 y 10-5 a tratamiento trmico en bao mara a 80C x 15 minutos y luego enfriar bruscamente sometiendo los tubos a chorro continuo de agua de cao.

Aislamiento primario. Sembrar alcuotas de 0.1 mL de cada dilucin en agar nutritivo por el mtodo de diseminacin. Incubar las placas en aerobiosis a 37C x 24 a 48 horas.

Identificacin presuntiva.

Reconocimiento de colinas. las colonias de Bacillus en agar nutricio son grandes, opacas, secas, pocos elevadas, a veces corrugads , serosas, con bordes irregulares y muchas veces con proyecciones a manera de cabellera despeinada. En coloracion GRAM.- se presenta como bacilos gran+ grandes, con extremos generalmete rectangulares y dispuestos en cadena. Si se colorean cultivos de mas de 48 horas de incubacin pueden observarse bacilos gran negativos. Motilidad.- al ser observadas al microscopios una gota de cultivo liquido en un portaobjetos, se pueden apreciar bacilos mviles, con ecepcion de B. anthracis. Se recomienda realizar la coloracin de flagelos con lo que se aprecia los flagelos peritricos. Prueba catalasa.- el gnero Bacillus produce catalasa.

AISLAMIENTO DEL GENERO CLOSTRIDIUM. Recoleccin de muestras. Clostridium puede ser aislado a partir de muestras de tierra, de aguas servidas y de regado as como de heces de animales. Si las muestras son de tierra , esta debe ser recolectada en bolsas de primer usocon la ayuda de cucharas esteriles. Para el caso de aguas servidas y de regado asi como las heces, estas deben ser recolectadas en frascos esteriles con tapa de rosca.

Procesamiento de la muestra. Realizar diluciones seriadas de 10-1, 10-2, 10-3, 10-4 y 10-5 de la muestra en solucin salina. Someter las diluciones 10-4 y 10-5 a tratamiento trmico en bao mara a 80C x 15 minutos y luego enfriar bruscamente sometiendo los tubos a chorro continuo de agua de cao.

Aislamiento primario Enriquesimiento selectivo depositar alcuotas de 0,1 ml con la ayuda de una pipeta esteril en caldo de carne glucosado o caldo cerebro corazn tratando de inocular las muestras en el fondo de los tubos. No agitar los tubos despus de inocularlos sellar los cultivos con una capa de parafina liquida esteril. Incubar en una jarra de anaerobiosis a 37 C x 24 a 48 horas.