Actividad Enzimtica

Practica 9

UNIVERSIDAD DE GUANAJUATO Divisin De Ciencias Naturales Y Exactas. Departamento de Qumica. Laboratorio De Fisicoqumica en Biologa y Farmacia. QU 30605 RESPONSABLE: Martha Lilia Ramrez Ramrez EQUIPO 1 INTEGRANTES DE EQUIPO: Bautista Garca Diana Jessica. Jurez Prez Gabriela de Jess. Ugalde Estrella Georgina.

PRACTICA No. 9

ACTIVIDAD ENZIMATICA

OBJETIVOS 1. Observar la actividad de la enzima catalasa. 2. Comparar la actividad de la catalasa de tejidos de organismos vivos, con un catalizador no proteico. 3. Examinar los factores que afectan la actividad enzimtica. INTRODUCCION Las enzimas son molculas de naturaleza proteica que catalizan reacciones qumicas, siempre que sean termodinmicamente posibles: Una enzima hace que una reaccin qumica que es energticamente posible pero que transcurre a una velocidad muy baja, sea cinticamente favorable, es decir, transcurra a mayor velocidad que sin la presencia de la enzima. En estas reacciones, las enzimas actan sobre unas molculas denominadas sustratos, las cuales se convierten en molculas diferentes denominadas productos. Casi todos los procesos en las clulas necesitan enzimas para que ocurran a unas tasas significativas. A las reacciones mediadas por enzimas se las denomina reacciones enzimticas. Debido a que las enzimas son extremadamente selectivas con sus sustratos y su velocidad crece slo con algunas reacciones, el conjunto (set) de enzimas sintetizadas en una clula determina el tipo de metabolismo que tendr cada clula. A su vez, esta sntesis depende de la regulacin de la expresin gnica. Como todos los catalizadores, las enzimas funcionan disminuyendo la energa de activacin (G) de una reaccin, de forma que se acelera sustancialmente la tasa de reaccin. Las enzimas no alteran el balance energtico de las reacciones en que intervienen, ni modifican, por lo tanto, el equilibrio de la reaccin, pero consiguen acelerar el proceso incluso millones de veces. Una reaccin que se produce bajo el control de una enzima, o de un catalizador en general, alcanza el equilibrio mucho ms deprisa que la correspondiente reaccin no catalizada. Al igual que ocurre con otros catalizadores, las enzimas no son consumidas por las reacciones que catalizan, ni alteran su equilibrio qumico. Sin embargo, las enzimas difieren de otros catalizadores por ser ms especficas. Las enzimas catalizan alrededor de 4.000 reacciones bioqumicas distintas.4 No todos los catalizadores bioqumicos son protenas, pues algunas molculas de ARN son capaces de catalizar reacciones (como la subunidad 16S de los ribosomas en la que reside la actividadpeptidil transferasa). Tambin cabe nombrar unas molculas sintticas denominadas enzimas artificiales capaces de catalizar reacciones qumicas como las enzimas clsicas. La actividad de las enzimas puede ser afectada por otras molculas. Los inhibidores enzimticos son molculas que disminuyen o impiden la actividad de las enzimas, mientras que los activadores son molculas que incrementan dicha actividad. Asimismo, gran cantidad de enzimas requieren de cofactores para su actividad. Muchas drogas o frmacos son molculas inhibidoras.

Igualmente, la actividad es afectada por la temperatura, el pH, la concentracin de la propia enzima y del sustrato, y otros factores fsico-qumicos. Algunas enzimas son usadas comercialmente, por ejemplo, en la sntesis de antibiticos y productos domsticos de limpieza. Adems, son ampliamente utilizadas en diversos procesos industriales, como son la fabricacin de alimentos, destincin de jeans o produccin de biocombustibles. MATERIAL REQUERIDO
8 tubos de ensaye de 13 x 100 mm 1 agitador de vidrio 2 pipetas graduadas de 5 mL 1 vaso de precipitados de 150 mL 1 gradilla metlica 1 parrilla de calentamiento con agitacin

REACTIVOS
Perxido de hidrgeno al 3 % Acido clorhdrico 0.1 M Hidrxido de sodio 0.1 M Cianuro de potasio 0.1 M

DESARROLLO EXPERIMENTAL
En los siguientes experimentos mide la velocidad de reaccin de acuerdo a la siguiente escala: 0 = no hay reaccin; 1 = lenta; 2 = moderada; 3 = rpida; 4 = muy rpida.

PARTE A. Comparacin de la actividad de la catalasa y el dixido de manganeso 1. Coloca en 4 tubos de ensaye 1 mL de perxido de hidrgeno al 3 %.
2. Agrega a cada tubo las siguientes sustancias: 3. Registra la velocidad de reaccin en cada tubo y compara los resultados obtenidos.

Observaciones y resultados.
Tubo 1 2 3 4 Agregar (1) 1 ml de H2O2 al 3% 1 ml de H2O2 al 3% 1 ml de H2O2 al 3% 1 ml de H2O2 al 3% Agregar (2) Un poco de arena fina Un poco de MnO2 Una porcin de papa cruda Una porcin de hgado Velocidad 0 3 2 4

PARTE B. Efecto del pH sobre la actividad enzimtica 1. Coloca una pequea cantidad de papa fresca en 3 tubos de ensaye. Usa el agitador y un poco de arena fina para triturar la papa. 2. Agrega 1 mL de agua destilada al primer tubo, 1 mL de HCl 0.1 M al segundo y 1 mL de NaOH 0.1 M al tercer tubo. Registra el pH de cada tubo. 3. Adiciona a cada tubo 1 mL de perxido de hidrgeno al 3 % y registra los resultados al cabo de 5 minutos.

Observaciones y resultados.
Tubo c/papa 1 2 3 Agregar (1) 1 ml H2O d. 1 ml HCl 0.1M 1 ml NaOH 0.1M pH (1) 5 1 12 Agregar (2) 1 ml de H2O2 al 3% 1 ml de H2O2 al 3% 1 ml de H2O2 al 3% pH (2) 5 1 11

PARTE C. Efecto de la temperatura 1. Coloca una pequea cantidad de papa en un tubo de ensaye y tritura con arena, Pon el tubo en un bao de agua hirviendo durante 5 minutos. 2. Aade 1 mL de perxido de hidrgeno al 3 %. Observa y registra los resultados. 3. Repite lo anterior pero a temperatura ambiente. 4. Coloca en dos tubos de ensaye 1 mL de perxido de hidrgeno al 3 %. Coloca uno de los tubos en un bao de agua a 37C y el otro tubo en un bao de agua helada, durante 5 minutos. Agregar una pequea cantidad de papa triturada a cada tubo. Compara las velocidades de reaccin.

Observaciones y resultados.
Tubo C/papa en B.M 5 min. C/papa a Temp. ambiente Agregar 1 ml de H2O2 al 3% 1 ml de H2O2 al 3% Observaciones La reaccin se observo mas rpida. La reaccin fue mnima de cero.

Tubo C/1 ml de H2O2 al 3% en B.M a 37C 5 min. C/1 ml de H2O2 al 3% en B.H a 0C 5 min.

Agregar Papa triturada Papa triturada

Observaciones Se observa reaccin con mayor rapidez y ms efervescencia. Si se observa reaccin con efervescencia.

PARTE D. Efecto de un inhibidor 1. Coloca una pequea cantidad de papa en un tubo de ensaye y tritura con arena, agrega 3 gotas de KCN 0.1 M. Mezcla bien el contenido del tubo. 2. Aade 1 mL de perxido de hidrgeno al 3 % al tubo y registra los resultados.

Observaciones:
Cuando se agrego el KCN 0.1M no se observaron cambios; al agregar el ml de H2O2 al 3% no se observo reaccin ni cambio alguno.

Anotacin de los resultados del experimento y discusin

1. Elabora una tabla con los resultados obtenidos y 2. Basado en tus anotaciones sobre la velocidad de las reacciones de los experimentos anteriores, elabora un grfico de barras.

Tubo 1 c/arena 2 c/MnO2 3 c/papa cruda 4 c/hgado

4.5 4 3.5 Velocidad 3 2.5 2 1.5 1 0.5 0 1 c/arena 2 c/MnO2

Velocidad 0 3 2 4

Actividad Enzimatica

Serie 1

3 c/papa cruda Tubo

4 c/hgado

3. Puede el perxido de hidrgeno ser descompuesto por otros catalizadores diferentes de los que se encuentran en los tejidos vivos? Explica.

A pesar de que el perxido de hidrgeno es relativamente estable a temperatura ambiente, numerosas sustancias actan como catalizadores de su descomposicin, entre otras: metales de transicin, lcalis, y xidos metlicos. La luz del da tambin favorece la descomposicin del perxido de hidrgeno, por lo que debe conservarse en envases opacos.
4. Describe el efecto del tamao de partcula, de la temperatura, el pH y del inhibidor sobre la velocidad de reaccin de la enzima.

Efecto del pH sobre la actividad enzimtica

Los enzimas poseen grupos qumicos ionizables (carboxilos -COOH; amino -NH2; tiol -SH; imidazol, etc.) en las cadenas laterales de sus aminocidos. Segn el pH del medio, estos grupos pueden tener carga elctrica positiva, negativa o neutra. Como la conformacin de las protenas depende, en parte, de sus cargas elctricas, habr un pH en el cual la conformacin ser la ms adecuada para la actividad cataltica .Este es el llamado pH ptimo. La mayora de los enzimas son muy sensibles a los cambios de pH. Desviaciones de pocas dcimas por encima o por debajo del pH ptimo pueden afectar drsticamente su actividad. As, la pepsina gstrica tiene un pH ptimo de 2, la ureasa lo tiene a pH 7 y la arginasa lo tiene a pH 10. Como ligeros cambios del pH pueden provocar la desnaturalizacin de la protena, los seres vivos han desarrollado sistemas ms o menos complejos para mantener estable el pH intracelular: Los amortiguadores fisiolgicos. Efecto de la temperatura sobre la actividad enzimtica En general, los aumentos de temperatura aceleran las reacciones qumicas: por cada 10C de incremento, la velocidad de reaccin se duplica. Las reacciones catalizadas por enzimas siguen esta ley general. Sin embargo, al ser protenas, a partir de cierta temperatura, se empiezan a desnaturalizar por el calor. La temperatura a la cual la actividad cataltica es mxima se llama temperatura ptima. Por encima de esta temperatura, el aumento de velocidad de la reaccin debido a la temperatura es contrarrestado por la prdida de actividad cataltica debida a la desnaturalizacin trmica, y la actividad enzimtica decrece rpidamente hasta anularse. A mayor temperatura, mayor velocidad de reaccin. La temperatura representa uno de los tipos de energa presente en la reaccin. El sentido del flujo de energa entre los miembros de la reaccin, determina si esta es exotrmica o endotrmica.

Efecto de los inhibidores sobre la actividad enzimtica Ciertas molculas pueden inhibir la accin cataltica de un enzima: son los inhibidores. Estos inhibidores bien pueden ocupar temporalmente el centro activo por semejanza estructural con el sustrato original (inhibidor competitivo) o bien alteran la conformacin espacial del enzima, impidiendo su unin al sustrato (inhibidor no competitivo). Efecto del tamao de partcula: Superficie de contacto: A mayor superficie de contacto, mayor velocidad de reaccin. La superficie de contacto determina el nmero de tomos y molculas disponibles para la reaccin. A mayor tamao de partcula, menor superficie de contacto para la misma cantidad de materia.

Conclusiones Se cumpli el objetivo de la practica al comparar la actividad de la enzima catalasa en diferentes muestras observando su velocidad de reaccin, donde logramos ver que en un tejido vivo la actividad enzimtica de la catalasa es muy rpida; Se demostr que el pH influye en la actividad enzimtica de las protenas as mismo se comprob que el factor temperatura es de gran

influencia en la actividad enzimtica ya que se observo mayor velocidad de actividad a temperaturas altas que en temperatura ambiente o bajas. En la prueba del efecto de inhibidor se corrobor que al adicionar una especie qumica con esta funcin si se evita que la enzima tenga actividad pues despus de agregar el inhibidor y realizar la prueba ya no se observo reaccin como en los casos que no tenan inhibidor. Bibliografia:
http://es.wikipedia.org/wiki/Enzima www.scribd.com/doc/19002681/actividad-enzimatica genesis.uag.mx/edmedia/material/quimicaII/enzimas.cfm