El antgeno RPR-carbon es un preparado no treponmico especialmente diseado para la deteccin y semi-cuantificacin por coaglutinacin macroscpica en porta o microplaca de reaginas

plasmticas, un grupo de anticuerpos dirigidos contra componentes tisulares producidos por los pacientes infectados por T. pallidum. La determinacin rpida de las reaginas plasmticas se efecta ensayando el antgeno una asociacin de lpidos complejos y carbn- frente a las muestras problema. La presencia o ausencia de una aglutinacin visible es indicativa de la presencia o ausencia de reaginas luticas en las muestras ensayadas1-4 . COMPOSICION DE LOS REACTIVOS Antgeno RPR-carbon. Suspensin estabilizada conteniendo cardiolipina 0,003%, lecitina 0,020-0,022%, colesterol 0,09%, cloruro de colina 10%, EDTA 0,0125 mol/L, micropartculas de carbn 0,01%, en tampn fosfato. Contiene 0,1% de mertiolato sdico. CONTROL + Suero de conejo inmune. Contiene 0,95 g/L de acida sdica. CONTROL Suero animal. Contiene 0,95 g/L de acida sdica ALMACENAMIENTO Y ESTABILIDAD Conservar a 2-8C. No congelar los componentes del kit ya que podra verse afectada la funcionalidad del test. El Antgeno y los Controles son estables hasta la fecha de caducidad indicada en la etiqueta PREPARACION DE LOS REACTIVOS Resuspender el Antgeno con suavidad para asegurar su homogeneidad, acoplar la aguja dosificadora al vial dispensador y aspirar la cantidad de antgeno que se considere necesaria. Los Controles estn listos para su uso. MUESTRAS Suero o plasma claro, reciente, sin inactivar. Una vez separado, el suero puede guardarse a 2-8C durante 48 horas antes del ensayo, o hasta meses a 20C. Los plasmas se ensayarn dentro de las 48 siguientes a su obtencin EQUIPO ADICIONAL Pipetas de volumen variable. Solucin salina (NaCl 0,9%, para tcnica semi-cuantitativa). Agitador mecnico rotatorio de velocidad regulable a 100 r.p.m. que circunscriba un crculo de unos 2 cm de dimetro en el plano horizontal. Cronmetro.

Prueba cualitativa 1.Equilibrar reactivos y muestras a temperatura ambiente (Mediante una pipeta automtica depositar 50 L de cada muestra en un crculo distinto de la tarjeta visualizadora.) 2.Emplear una punta nueva para cada muestra y desecharla tras su empleo. 3.En dos crculos adicionales, depositar 1 gota de cada uno de los sueros control. 4.Agitar el vial dispensador del antgeno y mantenindolo en posicin vertical, presionar ligeramente hasta asegurarse que la aguja esta libre de aire y que la gota obtenida es correcta. 5.Con el vial dispensador invertido, situar la aguja en posicin vertical perpendicular a la tarjeta visualizadora 6.Oprimir suavemente el vial dispensador, dosificando 1 gota de antgeno en cada crculo, prximo a la muestra que debe ensayarse 7.Efectuar la mezcla con ayuda de un palillo desechable, extendindola de forma que cubra por completo la superficie interior de cada anillo. 8.Emplear palillos distintos para cada mezcla. 9.Depositar la tarjeta en el agitador rotatorio horizontal, previamente ajustado a 100 r.p.m., durante 8 minutos. 10.Observar con la ayuda de una lmpara de alta intensidad o frente a luz diurna fuerte, la aparicin de cualquier signo de aglutinacin dentro del minuto siguiente a la retirada de la tarjeta del agitador. Lectura Reaccin negativa: Las partculas de carbn permanecen en suspensin homognea, sin presencia visible de agregados, tal como se presenta en el control negativo. Reaccin positiva: Un resultado positivo se manifiesta por una agregacin de las partculas de carbn, que puede variar entre una ligera pero claramente definida agregacin y una marcada e intensa. Prueba cuantitativa Para cada muestra a analizar se utilizan 5 crculos de una tarjeta pipeteando 50 L de solucin salina (0,9%) en cada uno de ellos. 1.Pipetear sobre el diluyente del primer crculo 50 L de muestra, y empleando la misma punta, mezclar mediante aspiraciones y expulsiones repetidas, transfiriendo 50 L de la mezcla resultante sobre el diluyente del segundo crculo. 2.Continuar con la serie de dobles diluciones hasta el quinto crculo, desechando los 50 L provenientes del mismo. Las diluciones finales obtenidas sern: 1:2, 1:4, 1:8, 1:16, 1:32.

3.Ensayar cada una de las diluciones 4. El ttulo de la muestra corresponde a la mxima dilucin que presenta reactividad. La dilucin siguiente debe ser negativa. 5.En caso de resultar reactiva la dilucin ms alta ensayada, repetir el ensayo comenzando con una dilucin preliminar al 1:16. 6.Comodiluyente de esta nueva serie de dobles diluciones se emplear Control negativo diluido al 1:50 con solucin salina, en vez de la solucin salina empleada anteriormente. LIMITACIONES DEL PROCEDIMIENTO Tanto en las infecciones tempranas como en los ltimos estadios de la enfermedad pueden darse reacciones negativas falsas. Se han descrito con antgenos cardiolipnicos falsas positividades en enfermedades tales como la mononucleosis infecciosa, lupus eritematoso y neumona viral. El embarazo, la adiccin a narcticos y las enfermedades autoinmunes pueden asimismo dar reacciones positivas falsas. No utilizar con lquido cefalorraqudeo.

El FR-Latex Test es una prueba rpida de aglutinacin basada en una modificacin de la tcnica de Singer1, para la deteccin directa y la semicuantificacin en porta de los factores reumatoideos (FR) presentes en el suero. La determinacin se efecta ensayando una suspensin de partculas de ltex recubiertos con gamma globulina humana frente a los sueros problema. La presencia o ausencia de aglutinacin visible es indicativa de la presencia o ausencia de FR en las muestras ensayadas COMPOSICION DE LOS REACTIVOS Reactivo FR-Latex. Suspensin estabilizada y tamponada de partculas de ltex recubiertas con gamma globulina humana. Contiene 0,95 g/L de acida sdica. CONTROL + Suero humano con una actividad aproximada equivalente a 25 UI/mL. Contiene 0,95 g/L de acida sdica. CONTROL Suero animal con una actividad inferior a 5 UI/mL. Contiene 0,95 g/L de acida sdica. Precauciones: En la preparacin de reactivos de origen humano, intervienen solamente materiales que, frente a tcnicas probadas, han mostrado su negatividad frente a anticuerpos anti-HIV 1+2, anticuerpos antiHCV y HBsAg. Tratarlos, no obstante, como si fueran potencialmente infecciosos. Aviso: Los reactivos de este kit contienen acida sdica. Evitar el contacto

con la piel y mucosas. ALMACENAMIENTO Y ESTABILIDAD Conservar a 2-8C. No congelar los componentes del kit ya que podra verse afectada la funcionalidad del test. El Reactivo y los Controles son estables hasta la fecha de caducidad indicada en la etiqueta. PREPARACION DE LOS REACTIVOS El Reactivo y los Controles estn listos para su uso. MUESTRAS Suero claro, reciente. Una vez separado, el suero puede guardarse a 2-8C durante una semana antes del ensayo, o por un perodo mayor a 20C. EQUIPO ADICIONAL Pipetas de volumen variable. Solucin salina (NaCl 0,9%, para tcnica semi-cuantitativa). Agitador mecnico rotatorio de velocidad regulable a 100 r.p.m. Cronmetro TECNICA Prueba cualitativa 1.Equilibrar reactivos y muestras a temperatura ambiente (Resuspender el antgeno con suavidad. 2.Aspirar y vaciar varias veces el cuentagotas para asegurar su homogeneidad antes del ensayo. 3.Depositar 1 gota (50 L) de suero problema en uno de los crculos de la tarjeta visualizadora. 4.En crculos adicionales, depositar 1 gota de control positivo y 1 gota de control negativo. 5.Aadir a cada crculo 1 gota de Reactivo FR-Latex, prxima a la muestra a analizar. 6.Efectuar la mezcla con ayuda de un palillo desechable, extendindola de forma que cubra por completo la superficie interior de cada anillo. 7.Emplear palillos distintos para cada mezcla. 8.Mover la tarjeta con agitador rotatorio (100 r.p.m.) durante 2 minutos 9.Observar de inmediato con la ayuda de una luz adecuada, la aparicin de cualquier signo de aglutinacin. Lectura Reaccin negativa: Suspensin uniforme sin cambio visible alguno, tal como se presenta en el control negativo. Reaccin positiva: Aglutinacin dbil o intensa, fcilmente visible macroscpicamente. Prueba semi-cuantitativa 1.Para cada muestra a analizar se utilizan 6 crculos de una tarjeta pipeteando 50 L de solucin salina (0,9%) en cada uno de ellos. 2.Pipetear sobre el diluyente del primer crculo 50 L de muestra,

y empleando la misma punta, mezclar mediante aspiraciones y expulsiones repetidas, transfiriendo 50 L de la mezcla resultante sobre el diluyente del segundo crculo. 3.Continuar con la serie de dobles diluciones hasta el sexto crculo, desechando los 50 L provenientes del mismo. Las diluciones finales obtenidas sern: 1:2, 1:4, 1:8, 1:16, 1:32, 1:64. 4.Ensayar cada una de las diluciones tal como se describe en la Prueba cualitativa. SIGNIFICADO CLINICO Los factores reumatoideos son un grupo de anticuerpos, mayoritariamente de la clase IgM, dirigidos contra determinantes de la porcin Fc de la inmunoglobulina IgG del paciente. Aunquepresentes en diversas enfermedades se hallan elevados principalmente en pacientes con artritis reumatoidea. En el diagnstico clnico, los resultados de la determinacin de los factores reumatoideos deben ser considerados siempre en relacin a los hallazgos clnicos y otras pruebas de laboratorio. LIMITACIONES DEL PROCEDIMIENTO Se han descrito reacciones positivas en condiciones clnicas distintas a la artritis reumatoidea como la mononucleosis, hepatitis, sfilis, infecciones diversas y en personas de edad avanzada. La mayora de estos casos, cuando se ensayan cuantitativamente, presentan ttulos de FR muy bajos. Pueden darse reacciones negativas falsas tanto en la fase temprana como en la fase crnica sub-clnica de la enfermedad.