PRACTICA No.

2 PROPIEDADES IONICAS DE LOS AMINOCIDOS

Gimena Domnguez (201013526), Adolfo Simn (200923364), Byron Prez (201013499)
Departamento de Bioqumica, Facultad de Ciencias Qumicas y Farmacia, Universidad de San Carlos de Guatemala, Carrera de Qumica Biolgica.

INTRODUCCIN Los aminocidos son compuestos que contienen un grupo amino, un grupo carboxilo, un hidrgeno y un grupo R unidos a un carbono alfa, su estructura depende del pH del medio en donde se encuentran, el grupo carboxlico pierde un protn dando lugar a un ion carboxilato; y el grupo amino se protona y da lugar a un ion amino. A esta estructura se le denomina ion dipolar zwitterion y se encuentra en un punto isolectrico. En una solucin cida, el grupo -COO se protona y se obtiene el grupo COOH, y la molcula tiene una carga total positiva. Si el pH aumenta, el grupo COOH pierde su protn aproximadamente a pH= 2. A este punto se le denomina pKa1, primera constante de disociacin cida. Si el pH sigue aumentando, el grupo NH3+ pierde su protn a un pH entre 9 y 10. A este punto se le denomina pKa2, segunda constante de disociacin cida. Por encima de este pH, la molcula tiene una carga total negativa (Wade, 2004, p.1121). Los objetivos a realizar en la prctica fueron determinar grficamente el punto isolectrico del aminocido, utilizando valores de pH y volumen de titulante agregado. De la misma manera se tuvo la capacidad de ubicar en las curvas de titulacin, las regiones que manifiestan la presencia de las formas inicas del aminocido; y de determinar grficamente los valores de pk1 y pk2 METODOLOGA El principal mtodo analtico utilizado en la prctica es la titulacin, ya que se valor el aminocido (glicina) con NaOH y HCl. La titulacin tuvo como objetivo, cambiar el pH del aminocido; para as poder representar los cambios en una curva de calibracin. Para ello se utilizo el potencimetro. De la misma manera se utilizaron mtodos estadsticos (computarizados) para realizar la curva de calibracin y poder observar los constantes de disociacin (pK) y poder determinar las diferentes formas inicas de los aminocidos a los pH distintos. RESULTADOS Grfica 1. Curva de Titulacin de la Glicina

Fuente: Datos experimentales, obtenidos en el Laboratorio de Bioqumica, Edificio T-12, USAC

En la Grfica No. 1 se puede observar en la curva el pH Isoelctrico en donde se tiene un predominio de molculas como Zwitterin en un pH aprox. de 6 donde la glicina muestra una capacidad amortiguadora nula la cual puede observarse en el aumento brusco de pH.

Grfica 2. Determinacin del pKa1, pI y pKa2 de la Glicina

Fuente: Datos experimentales, obtenidos en el Laboratorio de Bioqumica, Edificio T-12, USAC

En la grafica 2 se puede observar el pK1 y pK2 los cuales son representados por los picos ms altos de la grafica en donde se encuentra la zona amortiguadora de los grupos carbonilo y amino donde se tiene la mitad de las molculas protonadas y la otra mitad desprotonadas. Tabla 1. Valores de pH en la titulacin de glicina
No. 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 Vol. de Titulante (mL) -23.50 -23.00 -22.00 -21.00 -20.50 -20.00 -19.50 -19.00 -18.50 -18.00 -17.50 -17.00 -16.50 -16.00 -15.50 -15.00 -14.00 -13.00 -12.00 -11.00 -9.00 -8.00 -7.00 -6.00 -5.00 -4.00 -3.50 -3.00 -2.50 pH 1.76 1.78 1.85 1.88 1.90 1.93 1.96 1.98 2.01 2.03 2.06 2.09 2.11 2.14 2.16 2.19 2.24 2.30 2.36 2.41 2.55 2.60 2.69 2.78 3.01 3.13 3.19 3.26 3.34 pH promedio 1.77 1.82 1.87 1.89 1.92 1.95 1.97 2.00 2.02 2.05 2.08 2.10 2.13 2.15 2.18 2.22 2.27 2.33 2.39 2.48 2.58 2.65 2.74 2.90 3.07 3.16 3.23 3.30 3.40 Vol. (ml) 0.50 1.00 1.00 0.50 0.50 0.50 0.50 0.50 0.50 0.50 0.50 0.50 0.50 0.50 0.50 1.00 1.00 1.00 1.00 2.00 1.00 1.00 1.00 1.00 1.00 0.50 0.50 0.50 0.50

30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 83 84 85 86 87 88 89 90 91 92 93

-2.00 -1.70 -1.30 -1.00 -0.80 -0.60 -0.40 -0.30 -0.20 -0.15 -0.10 -0.05 0.00 0.05 0.10 0.15 0.20 0.30 0.40 0.60 0.80 1.00 1.30 1.70 2.00 2.50 3.00 3.50 4.00 5.00 6.00 7.00 8.00 9.00 11.00 12.00 13.00 14.00 15.00 15.50 16.00 16.50 17.00 17.50 18.00 18.50 19.00 19.50 20.00 20.50 21.00 21.50 22.00 22.50 22.75 23.00 23.25 23.50 24.00 24.50 25.00 25.50 26.00 26.50

3.45 3.51 3.62 3.74 3.84 3.99 4.17 4.30 4.47 4.63 4.87 5.25 5.80 6.12 6.65 6.98 7.20 7.46 7.64 7.88 8.05 8.18 8.33 8.47 8.57 8.68 8.74 8.83 8.90 9.02 9.14 9.23 9.32 9.39 9.54 9.60 9.67 9.73 9.80 9.83 9.86 9.90 9.92 9.96 9.99 10.03 10.07 10.10 10.14 10.17 10.22 10.26 10.31 10.36 10.38 10.41 10.44 10.47 10.52 10.59 10.67 10.74 10.87 11.01

3.48 3.57 3.68 3.79 3.92 4.08 4.24 4.39 4.55 4.75 5.06 5.52 5.96 6.39 6.82 7.09 7.33 7.55 7.76 7.97 8.12 8.26 8.40 8.52 8.63 8.71 8.79 8.87 8.96 9.08 9.19 9.28 9.36 9.47 9.57 9.64 9.70 9.77 9.82 9.85 9.88 9.91 9.94 9.98 10.01 10.05 10.09 10.12 10.16 10.20 10.24 10.29 10.34 10.37 10.40 10.43 10.46 10.50 10.56 10.63 10.71 10.81 10.94

0.30 0.40 0.30 0.20 0.20 0.20 0.10 0.10 0.05 0.05 0.05 0.05 0.05 0.05 0.05 0.05 0.10 0.10 0.20 0.20 0.20 0.30 0.40 0.30 0.50 0.50 0.50 0.50 1.00 1.00 1.00 1.00 1.00 2.00 1.00 1.00 1.00 1.00 0.50 0.50 0.50 0.50 0.50 0.50 0.50 0.50 0.50 0.50 0.50 0.50 0.50 0.50 0.50 0.25 0.25 0.25 0.25 0.50 0.50 0.50 0.50 0.50 0.50

Fuente: Datos experimentales, obtenidos en el Laboratorio de Bioqumica, Edificio T-12, USAC

En la Tabla 1. Se puede observar en la primer columna los mL de los titulantes de forma consecutiva: los mL de HCl en nmeros negativos y de forma inversa (mayor a menor hasta cero) y los mL de NaOH en nmeros positivos, ordenando de menor a mayor a partir de cero, el pH de la titulacin segn el volumen que se adiciona, el pH promedio y los mL de volumen que se adicionan en cada titulacin. DISCUSIN DE RESULTADOS Los aminocidos tienen la propiedad de poder ser ionizados lo que le permite actuar como un donador o aceptor de protones. (Lehninger, 2006, p.81) Durante la prctica se realizo la titulacin acido-base de la glicina para poder identificar los diferentes estados ionizados de un aminocido. A un pH cido la glicina se encontr como un cido diprtico, ya que tanto el grupo amino como el carboxilo se encontraron protonados, es decir, a pH = 1, el 100% de las molculas de aminocido se encontraron en forma de catin. (Ver Grafica 1) Al irle aadiendo equivalentes de base (NaOH), el grupo -carboxilo (-COOH) se disocio, cediendo protones al medio y transformndose en un grupo carboxilato; este equilibrio vino descrito por el pKa1 el cual experimentalmente tuvo un valor de 2.48 con un porcentaje de error de 0.14 y un valor terico de 2.34. Cuando pH = pKa1, la glicina se encontr como 50% catin + 50% zwitterion. Por lo tanto, el par -COOH/-COO- pudo servir como un tampn amortiguador en la regin de pH cerca del valor pKa1. En cuanto a la carga, cuando pH = pKa1, entonces [I] = [II] y por lo tanto Q neta = 0.5; y cuando pH = pKa1 - 2; [I]/[II] = 100:1; Q = 1, es decir prcticamente slo existe la forma I en solucin. (Ver Grafica 2) (Morris, J. 2001, p. 142-149)

En el punto Isoelctrico, prcticamente el 100% del aminocido se encontr como ion dipolar o zwitterion, de forma tal que el aminocido presento una carga neta nula con un valor experimental de 5.80 con un porcentaje de error de 0.17 y un valor terico de 5.97 (en el punto Isoelctrico, la mayora de las molculas del aminocido se encuentran en forma de ion dipolar, pero tambin existen pequeas cantidades equimolares de aniones y cationes, adems de una pequea fraccin de aminocido no ionizado. (Ver Grafica 1) (Donald y J. Voet, 2007, p.84-85) Al seguir aadiendo equivalentes de base, el grupo amino (-NH3+) se disocio tambin, obtenindose la forma totalmente desprotonada de la glicina; este equilibrio estuvo definido por el pKa2 siendo experimentalmente de 9.47 con un porcentaje de error de 0.13 y un valor terico de 9.6. Cuando pH = pKa2, la glicina se encontr como 50% zwitterion + 50% anin. Por lo tanto, el par -NH3+/-NH2 pudo actuar como un sistema tampn disolucin amortiguadora en la regin de pH cerca del pKa2. En cuanto a la carga, cuando pH = pKa2, entonces [II] = [III] y por lo tanto Q neta = -0.5. (Ver Grafica 2) (Morris, J. 2001, p. 142-149) A pH muy elevados, el 100% de las molculas de aminocido se encontraron en forma de ion negativo o anin. Cuando pH = pKa2 + 2; [III]/[II] = 1:100; Q = -1, es decir prcticamente slo existe la forma III en solucin. (Ver Grafica 1) (Morris, J. 2001, p. 142-149) Los valores de los pKa y el punto isoelctrico pudieron haberse variado debido a errores de manipulacin de los instrumentos como no haber calibrado bien el potencimetro o la mala manipulacin de la bureta as como tambin a errores de medicin ya que se observa que los valores de error tiene un valo de 0.14 a 0.17 mantenindose casi constantes en la medicin. (Morris, J. 2001, p. 142-149)

CONCLUSIONES 1. Los pka de la glicina determinan los valores en los cuales empieza a protonarse o desprotonarse uno de los grupos ionizables de la molcula. 2. El punto isoelctrico o pH de la glicina se encuentra a 5.80 lo cual es el estado en equilibrio de las cargas dando la suma de este, 0. 3. Las cargas parciales de la glicina se encuentran en el pka por lo que se comportan como soluciones tampn. 4. Los valores de pKa1 y pKa2 de la glicina fueron 2.48 y 9.47 respectivamente segn la titulacin con HCl y NaOH con una variacin al pKa teorico de 0.14. REFERENCIAS Wade, L. (2004). Quimica Orgnica (5ta Ed). Madrid, Espaa: Persona, Prentice Hall. Lehninger. (2006). Principios de Bioquimica. (4. Ed.) Editorial Omega, Barcelona Espaa. Morris, J. (2001). Fisicoqumica para Bilogos. (2. Ed.) Editorial Reverte, Barcelona Espaa. Donald y J. Voet. (2007) Fundamentos de Bioquimica. (2. Ed.) Editorial Medica Panamericana, Buenos Aires, Argentina.

ANEXOS Grfica 3. Curva de titulacin de la glicina con valores de pKa y pI

Fuente: Departamento de Quimica, UNAM disponible en: http://depa.pquim.unam.mx/proteinas/estructura/EPamm3.html