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Estudo citoqumico
1. Fixao
Paralisa o metabolismo celular Preserva as estruturas do tecido Evita a autlise celular Impede a proliferao de microorganismos Leva ao endurecimento do tecido Deve causar o mnimo de dano ao tecido. Usa-se formol (glutaraldedo e tetrxido de smio tambm)
Estudo citoqumico
2. Microtomia
Incluir o tecido em parafina ou resina (proteo) Cortar em espessuras de 6 at 0,02m com navalhas de ao ou vidro no micrtomo Microscopia ptica: parafina, cortes maiores, ao Microscopia eletrnica: resina, corte mais finos, vidro
Estudo citoqumico
3. Colorao/Disperso de ePara Microscopia ptica
Corantes bsicos: combinam-se com as molculas cidas das clulas. Ex: Hematoxilina (cora todos os ncleos de todas as clulas de azul). Corantes cidos: combinam-se com as molculas bsica das das clulas. Ex: Eosina (cora o citoplasma de todas as clulas em rosa forte/vermelho).
Estudo citoqumico
Estudo citoqumico
Poder de resoluo: capacidade de separar detalhes A propriedade de aumentar s tem valor se acompanhada de um aumento paralelo da resoluo!
Objetivas
Condensador
Microscpio eletrnico
Parte mecnica: suporte Parte ptica:
Filamento: emite o feixe de eltrons Condensadora: dirige o feixe de eltrons na direo do objeto Objetiva: capta o feixe de eltrons depois que passa pelo objeto Projetora: forma a imagem Ocular: fornece a imagem retina.
Estruturas eltron-densas: escuras. Desviam os eltrons. Estruturas em tonalidades de cinza: desviam pequena porcentagem dos eltrons
Estudo citoqumico
Poder de resoluo
Microscpio eletrnico
10-5
Microscpio ptico
10-4 10-3
Olho humano
10-2 10-1 1 mm
0,1
10
100
1.000
0,1
10
100
1.000
10.000
nm
O micrmetro (m) e o nanmetro (nm) so as unidades de medida usadas em biologia celular. A unidade ngstrm () substituda pelo nanmetro
Estudo imunocitoqumico
Permite localizar intracelularmente as protenas. o conjunto de tcnicas que usam anticorpos para identificar estruturas que funcionam como antgenos nos tecidos. O anticorpo (produzido pela reao de outra espcie com a protena original) marcado com corante fluorescente reage com a protena em questo evidenciando a estrutura.
Estudo imunocitoqumico
Fotomicrografia do citoesqueleto
Membrana celular
Ncleo
Organelas Citoplasma LIC LEC Membranas organelas Sistemas de transporte, biomolculas Comunicao celular, vias metablicas
A MEMBRANA
Membrana celular 7,5 a 10 nm
Lipdios 42%
Barreira
Fosfolipdios
BICAMADA LIPDICA
Colesterol
Presas aos lipdeos: interaes hidrofbicas Protenas transmembrana: atravessam uma vez ou vrias (protenas transmembrana de passagem mltipla). So anfipticas.
Enzimas
Receptores hormonais
Identificadoras
1 2
Glicoclice
Formado por: Pores glico dos glicolipdios; Glicoprotenas; Proteoglicanos: oligossacardeos unidos por pequenas protenas Funes: Carga negativa que repele outros negativos; Fixao entre glicoclice das clulas; Receptores de hormnios; Reaes imunolgicas
A Membrana assimtrica
H diferena no tipo de fosfolipdio que existe na parte interna e parte externa da bicamada (fosfatidilcolina; fosfatidiletanolamina; fosfatidilserina; fosfatidiltreonina; cido fosfatdico) carga negativa interna; As pores glico = lado externo; Protenas perifricas = lado interno
O citoplasma
O citoplasma
Citossol: frao lquida clara do citoplasma, na qual as partculas ficam dispersas (eletrlitos, glicose, protenas, lipdeos...);
O citoplasma
Ectoplasma: parte do citoplasma imediatamente abaixo da membrana (dentro da clula), sendo formada microfilamentos entrecruzados de actina. Tem funo de suporte da membrana. Endoplasma: o citoplasma situado entre o ectoplasma e a membrana nuclear, onde localizam-se as organelas.
1 Cromatina 2 Nucleoplasma 3 Carioteca 4 RER 5 Ribossomos 6 Complexo de Golgi 7 Vesculas secretoras 8 Lisossomos 9 Mitocndrias 10 - REL
1 - O retculo endoplasmtico
uma rede de estruturas tubulares e vesculas achatadas interconectadas umas s outras. Suas paredes so formadas por membranas de bicamadas lipdicas (30%), contendo grandes quantidades de protena (70%). 6 nm de espessura. O espao interior possui a matriz endoplasmtica e est conectado ao espao entre as duas membranas do ncleo.
1 - O retculo endoplasmtico
Membrana do RE
Fosfolipdios:
60% fosfatidilcolina 20% fosfatidiletolamina 10% fosfatidilinositol 4% fosfatidilserina 4% esfingomielina
Estrutura membranosa
Citosssol
O RIBOSSOMO No possui membrana um agregado de protenas e RNA Possui 2 subunidades: uma menor e outra maior. Processo: Inicialmente a subunidade menor se une ao RNAm; Ento, a subunidade maior se associa menor; A cadeia polipeptdica vai sendo formada; Outros ribossomos se associam ao RNA m = polirribossomo
rRNAs:
Polirribossomo
A seqncia sinal
As protenas que devem ser liberadas ao RER possuem uma seqncia sinal que o incio da cadeia; A partcula reconhecedora do sinal (PRS), no RNA, interrompe a sntese para procurar seu receptor; O receptor da PRS fica aderido na membrana do retculo endoplasmtico; Quando PRS e receptor se encontram, a sntese recomea. A PRS volta ao citoplasma.
Inicialmente, a seqncia sinal se liga ao complexo Sec 61, promovendo a abertura do canal (TRAM e TRAP); Quando a seqncia sinal penetra no RER, a peptidase sinal cliva a seqncia sinal e o restante da cadeia liberada no interior; O complexo oligossacaril transferase adiciona oligossacardeos a cadeia peptdica;
As chaperonas
A cadeia polipeptdica que penetra no RER ainda no funcional; Deve ser dobrada ou unida a outras cadeias; As chaperonas so protenas que realizam estes processos; Podem ser intrnsecas da membrana ou solveis na luz do retculo; Elas tambm selecionam as protenas mal formadas e devolvem ao citossol retranslocao;
a Translocao b Papel das chaperonas c Protenas corretamente formadas so transportadas pelas vesculas d Se o sistema de controle do RER deflagras protena mal formada, ela ser retranslocada e degrada
Desintoxicao
do
organismo:
Metabolizao
do
glicognio:
Armazenamento de clcio:
1 Cromatina 2 Nucleoplasma 3 Carioteca 4 RER 5 Ribossomos 6 Complexo de Golgi 7 Vesculas secretoras 8 Lisossomos 9 Mitocndrias 10 - REL
55% so fosfolipdios:
45% fosfatidilcolina 17-19% fosfatidiletolamina 12% esfingomielina 8-9% fosfatidilinositol 3-4% fosfatidilserina
7% de colesterol e derivados
Alteraes ps-trasducionais
As vesculas do RE fundem-se ao Complexo de Golgi para que ocorra:
Glicosilao terminal: hidrlise parcial da frao glicdica existente e adio de outros acares; Adio de oligossacardeos em grupos OH (treonina ou serina); Fosforilao de manose (ismero da glicose) para direcionar a protena para os lisossomos;
Alm de promover...
Sntese da parede celulsica das clulas vegetais (glicoprotenas e componentes glicdicos); Sntese da poro glicdica das proteoglicanas (matriz extracelular); Metabolismo de lipdios: sntese de glicolipdios e esfingomielina a partir da fosfatidilcolina e da ceramida (vindas do REL). So transportados por vesculas, ficando para o lado de fora da membrana plasmtica. Sulfatao de protenas, lipdios e glicdios e da poro glicdica de glicoproteinas e glicosaminoglicanas.
Importante:
A grande variedade de eventos pstraducionais aumenta a diversidade funcional e estrutural das protenas; Porm, aumenta a quantidade enzimas necessrias a estes processos, aumentando tambm a incidncia de doenas...
Ainda, algumas protenas podem ser retidas no Complexo de Golgi para desempenhar funes nesta organela.
COP II
Brotam do retculo endoplasmtico e fazem transporte para o complexo de Golgi.
Lisossomos: degradao de organelas e endossomos; Proteossomos: degradao de molculas proticas que j cumpriram suas funes, foram produzidas de maneira errada
Proteossomo = multienzimas em forma de barril que tem a funo de degradar essas protenas danificadas transformando-as em aminocidos e pequenos peptdios. A ubiquitina liga-se a protena (que tem aminocidos marcando seu tempo de vida ) a ser degradada e a direciona ao proteossomo.
3 - Os Lisossomos
So organelas vesiculares liberadas pelo complexo de Golgi medindo de 0,5 a 3 m de dimetro. Possuem a tpica membrana de bicamada lipdica e so recheados de enzimas hidrolticas (interior cido) Suas enzimas so produzidas pelos ribossomos do RER, transferidas ao complexo de Golgi e ento liberadas como lisossomos.
Particularidades da endocitose
Na verdade so dois tipos:
Fagocitose Pinocitose
Particularidades da endocitose
Fagocitose: ingesto de grandes partculas slidas como bactrias e clulas degeneradas. Apenas macrfagos e alguns leuccitos a fazem. Partes das clulas degeneradas ligam-se aos receptores; As bactrias ligam-se aos anticorpos e estes ligam-se aos receptores (opsonizao) A atividade motora do citoesqueleto promove a invaginao
Particularidades da endocitose
Pinocitose: ingesto de vesculas pequenas contendo lquido. Protenas so ingeridas juntas. Acontece em trs etapas:
As protenas fixam-se a receptores na membrana; O ectoplasma existente abaixo da membrana promove o invaginamento da membrana; A poro invaginada se separa formando uma vescula pinoctica.
O papel da clatrina
Responsvel por: Endocitose; Transporte do lisossomo para o endossomo; Reciclagem de receptores de manose-6fosfato retorno de vesculas para complexo de Golgi
O papel da clatrina
Se associa a membrana atravs de uma famlia de protenas: as adaptinas. Estas se ligam no lado citosslico aos receptores que reconhecem as molculas a serem transportadas. A clatrina se associa s adaptinas. Esta interao que causa a invaginao.
Pinocitose Fagocitose
4 As vesculas secretoras
Fisicamente, so semelhantes aos lisossomos. Assim como os lisossomos, so formadas pelo complexo de golgi. Porm, seu contedo (enzimas, hormnios, neurotransmissores, etc) liberado extracelularmente pelo processo de exocitose.
5 - Os Peroxissomos
Fisicamente, semelhantes aos lisossomos (apesar de menores 0,3 a 1,0 m de dimetro). Mas possuem duas diferenas: So brotamentos do retculo endoplasmtico (ou de outro peroxissomo pr-existente); Possuem enzimas oxidativas.
Christian de Duve
P = Peroxissomos
6 As mitocndrias
Organelas arredondadas que fornecem energia para a funo das outras organelas. Formam ATP (adenosina trifosfato). Possuem dimetro de 0,5 a 1,0 m (podem chegar a 10 m) Esto presentes em todas as partes do citoplasma, mas ficam concentradas nas regies celulares que so responsveis pela maior parte de seu metabolismo energtico. Uma clula heptica normal pode conter de 1.000 a 1.600 mitocndrias
As mitocndrias
So formadas por duas bicamadas lipdicas: uma membrana externa e uma membrana interna, onde muitas pregas formam as cristas, que contm as enzimas oxidativas. Entre as membranas = espao intermembranoso O espao interno denominado matriz mitocondrial
Mitocndria
O ATP = energia
O ATP = energia
ATP HO H ATPase Fosfato + E ADP
Essa energia utilizada nas formas de trabalho do corpo humano: Sntese de substncias; Transporte de substncias pelas clulas; Contrao muscular
A membrana interna:
Possui maiores quantidades de cardiolipina (fosfolipidio com 04 cidos graxos) dificulta passagem Muito parecida com a membrana das bactrias.
1 Cromatina 2 Nucleoplasma 3 Carioteca 4 RER 5 Ribossomos 6 Complexo de Golgi 7 Vesculas secretoras 8 Lisossomos 9 Mitocndrias 10 - REL
Questes de fixao
1. Fale sobre as etapas do estudo citoqumico. 2. Diferencie Microscpio ptico (de luz) do Microscpio eletrnico. 3. Fale sobre Estudo imunocitoqumico. 4. Explique detalhadamente e desenhe a estrutura da membrana celular. a. Constituio e estrutura b. Diferencie protenas intrnsecas e extrnsecas c. Fale sobre glicoclice 5. Cite e explique as trs divises do citoplasma. 6. Caracterize detalhadamente retculo endoplasmtico a. Constituio e estrutura b. Ribossomos e polirribossomos c. Seqncia sinal d. Tipos de clulas quanto ao local de sntese de protenas e. As chaperonas f. Sntese dos lipdios pelo REL g. Outras atividades do REL
Questes de fixao
7. Caracterize detalhadamente Complexo (Aparelho) de Golgi a. Constituio e estrutura b. Alteraes ps-trasducionais c. Destino das macromolculas 8. Caracterize detalhadamente Lisossomos a. Constituio e estrutura b. Endocitose c. O papel da clatrina 9. Caracterize detalhadamente as vesculas secretoras 10.Caracterize detalhadamente os Peroxissomos 11.Caracterize detalhadamente as mitocndrias a. Constituio e estrutura b. Atividades.Como ocorre a formao de ATP? c. Organizao funcional d. A origem das mitocndrias
PARA ESTUDAR
GUYTON, A. C.; HALL, J. E. H. Tratado de Fisiologia Mdica. 11 ed. Rio de Janeiro: Guanabara Koogan, 2006. Captulo 2 A clula e seu funcionamento JUNQUEIRA, L. C.; CARNEIRO, J. Biologia Celular e Molecular. 8 ed. Rio de Janeiro: Guanabara Koogan, 2005 Captulo 1 Introduo: uma vista panormica sobre a estrutura... Captulo 2 Tecnologia da Biologia Celular e Molecular Captulo 3 Bases Macromoleculares da Constituio Celular Captulo 4 Papel das Mitocndrias na Transformao... Captulo 5 Membrana Plasmtica. Digesto Intracelular Captulo 10 Organelas envolvidas na sntese de macromolculas