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[MANUAL PARA EL ANLISIS DE AGUAS RESIDUALES]

I.C. DAYANA KATERINE GRISALES PENAGOS I.M. LINDA JOELA ORTEGA LPEZ SERGIO ANDRS BLANCO LONDOO, ESP TATIANA RODRGUEZ CHAPARRO, PH. D.

FACULTAD DE INGENIERA PROGRAMA INGENIERA CIVIL UNIVERSIDAD MILITAR NUEVA GRANADA BOGOT 2012

CONTENIDO
Pg.

PRESENTACIN....................................................................................................................... 8 PREPARACIN DE SOLUCIONES ............................................................................................. 9 A. SOLUCIN H2SO4 1.0N ................................................................................................... 9 B. SOLUCIN H2SO4 0.5N 0.05N ...................................................................................... 9 C. FACTOR DE DILUCIN .................................................................................................. 10 ANLISIS FSICOS .................................................................................................................. 11 1. COLOR MTODO N 2120 ...................................................................................... 11
A. MTODO ESPECTROFOTOMTRICO ......................................................................... 11 B. PRINCIPIO DEL MTODO ............................................................................................. 11 C. EQUIPOS Y MATERIALES .............................................................................................. 11 D. PROCEDIMIENTO ......................................................................................................... 12 E. CLCULOS ...................................................................................................................... 12

2. SLIDOS MTODO N 2540.................................................................................... 13


A. MTODO GRAVIMTRICO .......................................................................................... 13 B. PRINCIPIO DEL METODO ............................................................................................ 13 C. EQUIPOS Y MATERIALES ............................................................................................. 13 D. PROCEDIMIENTO ......................................................................................................... 13

ANLISIS QUMICOS ............................................................................................................. 17 3. ALCALINIDAD Y CIDOS VOLTILES TOTALES MTODO N 2320 .......................... 17
A. MTODO DE TITULACIN POTENCIOMTRICA .................................................... 17 B. PRINCIPIO DEL METODO ............................................................................................ 17

C. EQUIPOS Y MATERIALES ............................................................................................. 17 E. PREPARACIN DE REACTIVOS ................................................................................... 17 F. PROCEDIMIENTO .......................................................................................................... 19 G. CLCULOS .................................................................................................................... 20

4. REQUERIMIENTO EN DEMANDA OXIDANTE MTODO N 2350 ............................ 22


A. MTODO SEMI BATCH DEMANDA DE OZONO ...................................................... 22 B. PRINCIPIO DEL MTODO ........................................................................................... 22 C. EQUIPOS Y MATERIALES ............................................................................................ 22 D. REACTIVOS ....................................................................................................................23 E. PREPARACIN DE LOS REACTIVOS ...........................................................................23 F. PROCEDIMIENTO ......................................................................................................... 24 G. CLCULOS .................................................................................................................... 24

5. CLORUROS MTODO N 4500-Cl- ........................................................................... 26


A. MTODO ARGENTOMTRICO................................................................................... 26 B. PRINCIPIO DEL MTODO ........................................................................................... 26 C. EQUIPOS Y MATERIALES ............................................................................................ 26 D. REACTIVOS ................................................................................................................... 26 E. PREPARACIN DE REACTIVOS .................................................................................. 27 F. PROCEDIMIENTO ......................................................................................................... 27 G. CLCULOS .................................................................................................................... 28

6. FSFORO ORTOFOSFATOS (PO4-2) MTODO N 4500-P ..................................... 29


A. MTODO CLORURO ESTAGNOSO ............................................................................ 29

B. PRINCIPIO DEL METODO ........................................................................................... 29 C. EQUIPOS Y MATERIALES ............................................................................................ 29 D. REACTIVOS ................................................................................................................... 29 E. PREPARACIN DE REACTIVOS .................................................................................. 30 F. PROCEDIMIENTO ......................................................................................................... 30 G. CALCULOS ..................................................................................................................... 33

7. SULFATOS MTODO N 4500-SO42- ........................................................................ 34


A. MTODO TURBIDIMTRICO ..................................................................................... 34 B. PRINCIPIO DEL MTODO ........................................................................................... 34 C. EQUIPOS Y MATERIALES ............................................................................................ 34 D. REACTIVOS ................................................................................................................... 34 E. PREPARACION DE REACTIVOS .................................................................................. 34 F. PROCEDIMIENTO ..........................................................................................................35 G. CALCULOS .....................................................................................................................37

8. NITRGENO MTODO N 4500-Norg ...................................................................... 38


A. MTODO MACRO-KJELDAHL .................................................................................... 38 B. PRINCIPIO DEL MTODO ........................................................................................... 38 C. EQUIPOS Y MATERIALES ............................................................................................ 38 D. PREPARACIN DE REACTIVOS ................................................................................. 38 E. PROCEDIMIENTO......................................................................................................... 39 F. CLCULOS ..................................................................................................................... 40

9. DEMANDA QUMICA DE OXIGENO (DQO) MTODO N 5220 ............................... 41

A. MTODO ESPECTROFOTOMTRICO ........................................................................ 41 B. PRINCIPIO DEL METODO ............................................................................................ 41 C. EQUIPOS Y MATERIALES ............................................................................................. 41 D. REACTIVOS .................................................................................................................... 41 E. PREPARACIN DE REACTIVOS .................................................................................. 42 F. PROCEDIMIENTO ......................................................................................................... 42

10.

DEMANDA BIOQUIMICA DE OXIGENO DBO5 MTODO N 5210 ....................... 46

A. PRINCIPIO DEL METODO ........................................................................................... 46 B. EQUIPOS Y MATERIALES ............................................................................................ 47 C. REACTIVOS ................................................................................................................... 47 D. PREPARACIN DE REACTIVOS ................................................................................. 47 E. PROCEDIMIENTO......................................................................................................... 49 F. CLCULOS ..................................................................................................................... 50

11.

CONSTITUYENTES ORGNICOS ABSORCIN-UV MTODO N 5910 .................. 52

A. PRINCIPIO DEL MTODO ........................................................................................... 52 B. EQUIPOS Y MATERIALES ............................................................................................ 52 C. PROCEDIMENTO.......................................................................................................... 52 D. CLCULOS .................................................................................................................... 52

12.

MTODO PARA DETERMINAR METANO POR DESPLAZAMIENTO ......................... 54

A. PRINCIPIO DEL MTODO ........................................................................................... 54 B. EQUIPOS Y MATERIALES ............................................................................................ 54 C. REACTIVOS ................................................................................................................... 54

E. ESQUEMA DEL MONTAJE ........................................................................................... 54 F. PROCEDIMENTO ...........................................................................................................55

ANLISIS DE SUELOS ............................................................................................................ 56 13. MTODO PARA DETERMINAR CALCIO Y MAGNESIO SOLUBLES EN SUELO .......... 56

A. MTODO CUANTIFICACIN COMPLEXOMTRICA............................................... 56 B. EQUIPOS Y MATERIALES ............................................................................................ 56 C. REACTIVOS ................................................................................................................... 56 D. PREPARACIN DE LOS REACTIVOS ......................................................................... 56 E. PROCEDIMIENTO......................................................................................................... 57 F. CLCULOS ..................................................................................................................... 57

14.

MTODO PARA LA MEDICIN DE PH EN SUELOS ................................................. 59

A. EQUIPOS Y MATERIALES ............................................................................................ 59 B. REACTIVOS ................................................................................................................... 59 C. PREPARACIN DE LOS REACTIVOS .......................................................................... 59 D. PROCEDIMIENTO ........................................................................................................ 59

15.

MTODO PARA LA MEDICIN DE LA MATERIA ORGNICA EN SUELOS ............... 60

A. EQUIPOS Y MATERIALES ............................................................................................ 60 B. PROCEDIMIENTO ........................................................................................................ 60 C. CLCULOS .................................................................................................................... 60

ANLISIS MICROBIOLGICOS............................................................................................... 61 16. TCNICA DEL FILTRO MEMBRANA PARA MIEMBROS DEL GRUPO COLIFORME ... 61

A. PROCEDIMIENTO DE FILTRO MEMBRANA PARA COLIFORMES FECALES .......... 61

B. EQUIPOS Y MATERIALES ............................................................................................. 61 C. REACTIVOS .................................................................................................................... 61 D. PREPARACIN DE REACTIVOS .................................................................................. 61 E. PROCEDIMIENTO......................................................................................................... 62 F. CLCULO ....................................................................................................................... 62

ANLISIS BIOLGICOS .......................................................................................................... 63 17. ENSAYO DE TOXICIDAD CON BULBOS DE CEBOLLA ALLIUM CEPA L ..................... 63

A. MTODO DE EVALUACIN DE INHIBICIN DEL CRECIMIENTO PROMEDIO DE LAS RAICES ........................................................................................................................ 63 B. PRINCIPIO DEL MTODO ........................................................................................... 63 C. EQUIPOS Y MATERIALES ............................................................................................ 63 D. REACTIVOS ................................................................................................................... 63 E. PREPARACIN DE LOS REACTIVOS .......................................................................... 63 F. PROCEDIMIENTO ......................................................................................................... 64 G. CLCULOS .................................................................................................................... 66

BIBLIOGRAFA ....................................................................................................................... 68

PRESENTACIN
El Laboratorio de Saneamiento de la Universidad Militar Nueva Granada presenta en este documento las tcnicas de laboratorio para el anlisis de la calidad del agua residual y suelos con el objetivo de unificar los procesos seguidos por los usuarios del laboratorio en el desarrollo de las diferentes prcticas. Para la elaboracin de este manual se consultaron las normas del Standard Methods for the Examination of Water and Wastewater de AWWA, APHA y WEF ao 2005, as como el Manual Prctico de Anlise de gua de Funasa Brasil ao 2006 y el manual de Mtodos Analticos del Laboratorio de Suelos del IGAC 2006. En la primera parte del manual se abordan los anlisis fsicos que permiten establecer caractersticas organolpticas en aguas residuales. En la segunda parte se tratan parmetros de anlisis qumicos de compuesto inorgnicos y orgnicos presentes en las aguas residuales. En la tercera parte se presentan anlisis para suelos y extractos de suelo. En la cuarta parte se muestra una metodologa para la determinacin de microorganismos del grupo Coliforme tanto en aguas como en suelos. En la ltima parte se presenta un ensayo biolgico para la determinacin de toxicidad en aguas. De acuerdo con lo anterior deseamos que este documento se utilidad para aquellas personas que deseen realizar ensayos de calidad del agua residual y suelos.

PREPARACIN DE SOLUCIONES
A. SOLUCIN H2SO4 1.0N Para preparar una solucin de H2SO4 1N diluir cuidadosamente 30mL de H2SO4 concentrado en un baln de 1000mL con agua destilada. B. SOLUCIN H2SO4 0.5N 0.05N A partir de la solucin de H2SO4 normalizada se obtienen las respectivas soluciones empleado la siguiente ecuacin:

Donde: V1 = Volumen a tomar C1 = Concentracin conocida V2 = Volumen a preparar C2 = Concentracin esperada Como ejemplo para concentraciones de 0.5N se requiere diluir 500mL de solucin 1N en un baln de 1.0L con agua destilada de acuerdo con lo siguiente:

Como ejemplo para concentraciones de 0.05N se requiere diluir 25mL de solucin 1N en 500mL de agua destilada de acuerdo con lo siguiente:

C. FACTOR DE DILUCIN Para obtener diferentes concentraciones de muestras se requiere realizar diluciones de la misma para esto se emplea el Factor de Dilucin, el cual se presenta en la siguiente ecuacin:

Donde: F.D = Factor de Dilucin VF = VT = C= Volumen final que se coloca de la muestra Volumen total (VF + Vrestante para completar) Concentracin

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ANLISIS FSICOS
1. COLOR MTODO N 2120

A. MTODO ESPECTROFOTOMTRICO Usualmente cuando se examina el agua, las primeras propiedades que se suelen considerar son las siguientes: color, sabor y olor, caractersticas inherentes a ella. El agua de uso domstico e industrial tiene como parmetro de aceptacin la de ser incolora, pero en la actualidad, gran cantidad del agua disponible se encuentra coloreada y se tiene el problema de que no puede ser utilizada hasta que no se le trata removiendo dicha coloracin. Las aguas superficiales pueden estar coloreadas debido a la presencia de iones metlicos naturales (hierro y manganeso), humus, materia orgnica y contaminantes domsticos e industriales como en el caso de las industrias de papel, curtido y textil; esta ultima causa coloracin por medio de los desechos de teido los cuales imparten colores en una amplia variedad y son fcilmente reconocidos y rastreados B. PRINCIPIO DEL MTODO Se pueden efectuar dos medidas de color en el agua: real y aparente. El color real del agua natural es el que presenta cuando se ha eliminado la turbidez (filtrando o centrifugando), siendo principalmente causado por materiales hmicos coloidales. Por el contrario, el color aparente es determinado directamente de la muestra original (sin filtracin ni centrifugacin), es debido a la existencia de slidos en suspensin. Para la determinacin de color en el agua existe el mtodo espectrofotomtrico, el cual se usa principalmente en aguas industriales contaminadas que tienen colores poco usuales, y que no pueden ser igualados por el mtodo colorimtrico. El color se determina mediante un espectrofotmetro, cuyo esquema de funcionamiento se recoge en la figura, a tres longitudes de onda distribuidas por el conjunto del espectro visible: 1 = 436nm; 2= 525nm y 3 = 620 nm, de acuerdo con lo sugerido por ee (1999). C. EQUIPOS Y MATERIALES Fotmetro: Espectrofotmetro. Bomba de vaco. Membrana de filtracin. Probeta 50mL.

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D. PROCEDIMIENTO Para determinar el color real se debe filtrar la muestra en filtro de fibra de vidrio de 1,2 m o en filtro de acetato de celulosa de 0,45 m y para color aparente tomar la muestra de agua directamente de la original. 1. Encender el espectrofotmetro y seleccionar la longitud de onda en 436nm. 2. Calibrar el equipo con la lectura inicial del blanco. 3. Realizar la lectura de la absorbancia de la muestras de agua.

a) Paso 1

b) Paso 2 a 3

c) Paso 4

Figura 1. Pasos para el procedimiento de medicin de color E. CLCULOS Lectura de la absorbancia en longitud de onda 436 nm expresada en cm-1.

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2.

SLIDOS MTODO N 2540

A. MTODO GRAVIMTRICO Los slidos se refiere a la materia en suspensin o disuelta en agua o agua residuales. Los slidos pueden afectar el agua o adversamente la calidad del efluente. Aguas con alto contenido de slidos disueltos en general son de menor potabilidad y pueden inducir a reacciones fisiolgicas en el consumidor. Por estas razones, un lmite de 500mg de slidos disueltos/l es el deseado para el consumo en aguas. B. PRINCIPIO DEL METODO Son los materiales suspendidos y disueltos en un agua. Se obtienen despus de someter al agua a un proceso de evaporacin a temperaturas comprendidas entre 103 y 105C. La porcin filtrable representa a los Slidos Coloidales Totales Disueltos y la no-filtrable son los Slidos Totales en Suspensin. El contenido de slidos voltiles se interpreta en trminos de materia orgnica, teniendo en cuenta que a 55050C la materia orgnica se oxida formando el gas carbnico y agua que se volatilizan. Sin embargo, la interpretacin no es exacta puesto que la prdida de peso incluye tambin prdidas debido a descomposicin o volatilizacin de ciertas sales minerales como por ejemplo las sales de amonio o carbonato de magnesio. C. EQUIPOS Y MATERIALES Desecador Bomba de vaco. Balanza analtica. Horno tipo mufla 550C. Estufa (103C y 105C). Embudo tipo Buchner para membrana con dimetro de 47mm. Membrana filtrante tipo micro-fibra de vidrio, con tamao nominal de abertura de 0,45m-1,2m. Capsulas de porcelana. Pinza metlica. Probeta de 50mL. Guantes para mufla.

D. PROCEDIMIENTO PREPARACIN DE CPSULA Y MEMBRANA PARA ST - SST

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a. Calcinar la capsula de porcelana en mufla a 550C hasta que la masa sea constante (aproximadamente 15 minutos) y dejar enfriar en el desecador. b. Colocar una membrana filtrante en el sistema de filtracin. c. Hacer 3 lavados a la membrana con el sistema de filtracin utilizando 20mL de agua destilada para cada lavado (total de 60mL) que deben ser despreciados. d. Colocar la membrana en la capsula de porcelana y calcinar en la mufla por 15 minutos y dejar enfriar. 1. DETERMINACIN DE SLIDOS TOTALES (ST) Este procedimiento es limitado a una cantidad de slidos secos de 200mg, debido a la posibilidad de la formacin de una capa que impide el secado de los residuos. a. b. c. d. Preparar una cpsula de porcelana Determinar la masa M1 en gramos en la balanza analtica. Transferir un volumen de la muestra V1 (en mililitros. Secar la muestra en el horno a 103C-105 C con tiempo suficiente para lograr una masa constante (24 horas) y determinar la masa despus de enfriar en el desecador M2. ( )( )
( ) ( )

Ecuacin 1

2. DETERMINACIN DE SLIDOS TOTALES FIJOS Y VOLTILES (STF STV) a. Despus de determinar la concentracin de los slidos totales, colocar la cpsula con la muestra en la mufla a 550C para alcanzar masa constante (en este caso, 15 minutos para una nica muestra y, no ms de 2 horas cuando son varias muestras). b. Determinar la masa despus del enfriamiento en el desecador (M 3, en g) en la balanza analtica y calcular STF con la Ecuacin 2 y STV con la Ecuacin 3: ( ( )( ) )(
( ) ( ) ) ( )

Ecuacin 2 Ecuacin 3

3. DETERMINACIN DE SLIDOS SUSPENDIDOS TOTALES (SST) Este procedimiento es limitado a una cantidad de slidos secos de 200mg debido a la posibilidad de la formacin de una capa que dificulta el secado. a. Preparar una cpsula y una membrana para el ensayo. b. Determinar la masa del conjunto (membrana + cpsula) M4 en (g). 14

c. Colocar con una pinza metlica la membrana calcinada en el sistema de filtracin o vacio. d. Filtrar un volumen conocido (V2) de muestra, utilizando el sistema de filtracin o vacio. e. Transferir la membrana que contiene el residuo a la cpsula de porcelana. f. Secar el conjunto (membrana + cpsula) a 103C 105C hasta conseguir una masa constante (por 24 horas) y despus enfriar en el desecador. g. Determinar la masa M5 en (g) y calcular con la Ecuacin 4.
( ( ) )

Ecuacin 4

Figura 2. Paso d a f 4. DETERMINACIN DE SLIDOS SUSPENDIDOS FIJOS Y VOLTILES (SSF SSV) a. Despus de la determinacin de la concentracin de slidos suspendidos totales, colocar el conjunto en la mufla, a 550C por un tiempo suficiente hasta conseguir una masa constante (aproximadamente 15 minutos) y despus de enfriar en desecador determinar la masa M6 en (mg). b. Calcular SSF con la Ecuacin 5 y SSV con la Ecuacin 6.
( ( ( ( ) ) ) )

Ecuacin 5 Ecuacin 6

5. DETERMINACIN DE SLIDOS DISUELTOS TOTALES, FIJOS Y VOLTILES (SDT, SDF Y SDV) Los valores de las concentraciones de slidos disueltos se pueden obtener por la diferencia entre las masas de los slidos totales y de los slidos suspendidos, considerando las respectivas fracciones (totales, fijos y voltiles).

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Slidos Totales (ST)

Slidos Suspendidos Totales (SST)

Slidos Disueltos Totales (SDT)

Slidos Suspendidos Voltiles (SSV)

Slidos Suspendidos Fijos (SSF)

Slidos Disueltos Voltiles (SDV)

Slidos Disueltos Fijos (SDF)

Slidos Voltiles Totales (SST)


ST = SST + SDT = SSV + SSF + SDV + SDF = SVT + SFT; SVT = SSV + SDV y SFT = SSF + SDF; SST = SSV + SSF y SDT = SDV + SDF;

Slidos Fijos Totales (SFT)

Figura 3. Clasificacin de los slidos

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ANLISIS QUMICOS
3. ALCALINIDAD Y CIDOS VOLTILES TOTALES MTODO N 2320

A. MTODO DE TITULACIN POTENCIOMTRICA La alcalinidad de un agua es su capacidad de neutralizar cidos. Las sustancias ms comnmente encontradas en aguas superficiales causadoras de alcalinidad son los carbonatos (CO3-2), bicarbonatos (HCO3-) e hidrxidos (OH-). No obstante, algunas sales de cidos dbiles como boratos, silicatos, nitratos y fosfatos pueden tambin contribuir a la alcalinidad de estar tambin presentes. Estos iones negativos en solucin estn comnmente asociados con iones positivos de calcio, magnesio, potasio, sodio y otros cationes. El bicarbonato constituye la forma qumica de mayor contribucin a la alcalinidad. Dicha especie inica y el hidrxido son particularmente importantes cuando hay gran actividad fotosinttica de algas o cuando hay descargas industriales en un cuerpo de agua (APHA, 2005). La alcalinidad se expresa como la concentracin equivalentes de iones hidroxilo, mg/l o como la cantidad equivalente de CaCO3 en mg/l. B. PRINCIPIO DEL METODO Los iones relacionados a la alcalinidad presentes en una muestra como resultado de la disociacin o la hidrlisis de solutos, reacciona con la adicin de un acido patrn. La alcalinidad como la acidez depende del valor del punto final del pH fijado. C. EQUIPOS Y MATERIALES Medidor de pH, precisin 0.01 Buretas digitales o vidrio, 10, 25mL Pipeta volumtrica Beaker, 80mL Centrfuga Acido sulfrico (H2SO4) concentrado, p. a. Hidrxido de Sodio (NaOH) en lentejas, p. a.

E. PREPARACIN DE REACTIVOS Solucin normalizada de Acido sulfrico (H2SO4) 1N Pipetear 27.5mL de (H2SO4) concentrado y transferir lentamente a un baln volumtrico de 1L con aproximadamente 500mL de agua y completar el volumen del baln. 17

La normalizacin de la solucin de H2SO4 se realiza con patrn primario de Tetra Borato de Sodio Decahidratado (Brax), Na2B4O7.10H2O. La normalizacin debe ser hecha por triplicado, con masas conocidas del patrn en torno de 0,1900 g, disueltas en cerca de 50mL de agua destilada. Se deben usar 2 gotas de solucin de azul de bromotinol como indicador de punto final (color amarillo) o metil naranja hasta un punto final incoloro, el clculo de la concentracin normalizada es:

M H 2 SO4

masa ( g )boraxx1000 volumenH 2 SO4 (mL ) x381,42

Para preparar una solucin de H2SO4 0,05N tomar de la solucin patrn 1,0N. Solucin normalizada de Hidrxido de sodio (NaOH) 1N En un beaker limpio disolver 40 g de NaOH con agua destilada. Dejar enfriar y transferir la solucin cuantitativamente para el baln volumtrico de 1000 ml. Completar el volumen del baln hasta la marca con agua destilada, agitar para homogenizar y transferir para la bureta. La solucin de NaOH es inestable: la reaccin con CO2 atmosfrico exige normalizacin semanal. La normalizacin de NaOH debe ser hecha utilizando como patrn primario Biftalato cido de Potasio (KPH). El KPH se debe secar previamente en el horno a 120 C, por 24 horas y enfriar en desecador. La normalizacin deber ser realizada por triplicado. Se deben determinar masas de KPH prximas de 0,1022 g para normalidades menores o iguales de 0.05N pesar 0,01022g, y debe anotarse el valor exacto de cada una. Posteriormente, se disuelven en cerca de 25 ml de agua destilada, en frascos erlenmeyer. En los frascos erlenmeyer que contienen la solucin de KPH, adicionar 2 gotas de solucin de fenolftalena, trabajar en fondo blanco, luego entonces, adicionar la solucin de NaOH hasta alcanzar una leve coloracin rosada que persista, anotar cada volumen. La molaridad o normalidad de la solucin normalizada se calcula con la siguiente ecuacin:
M NaOH massaKPH ( g ) x1000 volumeNaOH x 204 ,22

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La solucin del indicador de fenolftalena se prepara, disolvindose 80 mg de fenolftalena en 60 ml de Etanol p.a., y completar con agua destilada hasta 100 ml en un baln volumtrico. Para preparar una solucin de NaOH 0,02N tomar de la solucin patrn 1,0N. NOTA: Cuando el indicador es la solucin de fenolftalena se tiene una solucin trasparente para la regin cida y rosa en la regin alcalina. F. PROCEDIMIENTO Calibracin medidor de pH Calibrar el medidor de pH marca Schott con las soluciones buffer de pH 7,0 y 4,0 a temperatura ambiente. De la siguiente manera. a. Lavar la sonda (sensor) y secarlo. b. Presionar la tecla Cal en modo Ct 1 y sumergir en la solucin buffer de pH 7,0. c. Presionar la tecla run/enter en modo Ct 1 AR parpadea y esperar a que se estabilice el valor de milivoltaje (el valor es estable cuando aparece modo Ct 2). d. Lavar la sonda (sensor) y secarlo. e. Sumergir la sonda en la solucin buffer de pH 4,0. f. Presionar la tecla run/enter AR parpadea y esperar a que se estabilice el valor de milivoltaje. g. Presionar la tecla pH. 1. ALCALINIDAD PARCIAL a. Centrifugar la muestra por 3min a 1500rpm. La centrifugacin se puede obviar si la muestra no presenta un contenido considerable de slidos en suspensin. b. Homogenizar el contenido del frasco de la muestra. c. Medir 50mL de la muestra y transferir para un beaker de 100mL. d. Colocar una barra magntica y acomodar el beaker en un agitador magntico. e. Introducir el electrodo del potencimetro en el contenido del beaker y dejar en agitacin. f. Llenar una bureta de 50mL con H2SO4 0,05N y unir al conjunto del beaker y del electrodo. g. Esperar hasta que se estabilice el pH original de la muestra. h. Iniciar la titulacin hasta que se obtenga un pH de 5.75 y anotar el volumen gastado (V1).

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2. ALCALINIDAD INTERMEDIA a. b. c. d. Homogenizar el contenido del frasco de la muestra. Medir 50mL de la muestra y transferir para un beaker de 100mL. Colocar una barra magntica y acomodar el beaker en un agitador magntico. Introducir el electrodo del potencimetro en el contenido del beaker y dejar en agitacin. e. Llenar una bureta de 50mL con H2SO4 0.5N y unir al conjunto del beaker y del electrodo. f. Esperar hasta que se estabilice el pH original de la muestra. g. Iniciar la titulacin hasta que se obtenga un pH de 4.3 y anotar el volumen gastado (V2). 3. CIDOS VOLTILES TOTALES a. Al terminar el ensayo de alcalinidad en pH 4,3 bajar el pH hasta 3,0 con H2SO4 sin contabilizar el volumen gastado. b. Agregar pocas perlas de vidrio y calentar en una plancha de calentamiento hasta que salga vapor y dejar por 3min hacer esto en un lugar aireado preferiblemente con campana extractora y no aspirar los vapores. c. Dejar enfriar en un lugar y luego subir el pH hasta 4,0 con solucin normalizada 0,02N de NaOH, colocar en cero la bureta y titular con NaOH hasta pH 7,0. G. CLCULOS 1. ALCALINIDAD PARCIAL

Donde: N = Normalidad de H2SO4. = Volumen gastado en la titulacin de H2SO4 (ml) = Volumen de muestra, (ml) 2. ALCALINIDAD INTERMEDIA

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Donde: N = Normalidad de H2SO4. = Volumen gastado en la titulacin de H2SO4, (ml) = Volumen de muestra, (ml) 3. ALCALINIDAD TOTAL

Donde: V3 = V1+V2 N = Normalidad de H2SO4 = Volumen gastado en la titulacin de H2SO4, (ml) =Volumen de muestra, (ml)

3. CIDOS VOLTILES TOTALES ( Donde: Vtitulado = Volumen de la muestra titulada, (ml) NNaOH = Normalidad del Hidrxido de Sodio Vmuestra = Volumen de la muestra, (ml) )

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4.

REQUERIMIENTO EN DEMANDA OXIDANTE MTODO N 2350

A. MTODO SEMI BATCH DEMANDA DE OZONO Los oxidantes se adicionan al agua potable y al agua residual para desinfectar. Otro beneficio incluye remocin de limos, la oxidacin de especies inorgnicas no deseables (e.g. iones de hierro, reduccin de manganeso, sulfuros, y amonio) y la oxidacin de constituyentes orgnicos (e.g. compuestos productores de olor y sabor). La demanda oxidante se refiere a la diferencia entre la dosis oxidante agregada y la concentracin oxidante residual medida despus de un tiempo de contacto prescrito a un pH y temperatura dado. La demanda oxidante y los requerimientos de oxidacin estn significativamente afectados por las caractersticas fsicas y qumicas de la muestra y la manera en la cual se mide el consumo del oxidante. Particularmente, la reactividad oxidante est influenciada por la temperatura, el pH, el tiempo de contacto, y la dosis oxidante. La temperatura de la muestra afecta fuertemente las reacciones cinticas y por ende la demanda a un tiempo de contacto dado. El pH de la muestra afecta la forma y naturaleza del oxidante y el grado de demanda. El ozono es inestable a valores de pH muy altos y la demanda de ozono es especialmente sensible al pH de la muestra. La demanda oxidante incrementa con el tiempo y por lo tanto la demanda debe ser definida para un tiempo de contacto dado. La demanda oxidante tambin es independiente de la dosis oxidante pues al incrementar la dosis oxidante usualmente se incrementa la demanda, pero es incorrecto que al duplicar la dosis oxidante se duplicar la demanda oxidante. B. PRINCIPIO DEL MTODO Este mtodo semi-batch involucra la determinacin de la demanda de ozono con una adicin contina de ozono gaseoso al reactor batch. Los resultados obtenidos de este mtodo dependen de la transferencia de masa y las caractersticas del reactor. En adicin, algunos componentes que consumen el ozono se pueden volatilizar durante el ensayo. C. EQUIPOS Y MATERIALES Generador de ozono capaz de proveer por encima del 5% de ozono gaseoso. Botellas limpiadoras de gas, vidrio de borosilicato, con un volumen mnimo 250ml. Tubos, nicamente se deben usar tubos sin metal o un tubo TFE. Vidriera: bureta de 50ml; beaker de 400ml; cilindro graduado de 250ml. Botella de lavado 500ml. Agitador magntico (opcional). Balanza analtica. 22

Mortero.

D. REACTIVOS Agua libre de demanda de ozono. Acido sulfrico H2SO4. Potasio de yodo KI. Tiosulfato de sodio titulante normalizado Na2S2O3 0.1N Tiosulfato de sodio titulante normalizado Na2S2O3 0.005N Solucin indicadora de almidn

E. PREPARACIN DE LOS REACTIVOS Acido sulfrico H2SO4 2N: Con precaucin adicionar 56mL concentrado de H2SO4 a 800mL de agua libre de demanda de ozono en un frasco volumtrico de 1L. Mezclar a fondo y adicionar hasta la marca con agua libre de demanda de ozono. Yoduro de potasio (2%) KI: Disolver 20 g de KI en 800mL de agua libre de demanda de ozono en un beaker y agitar por 1minuto, transferir la mezcla a un baln volumtrico de 1000mL y llenar hasta el aforo con agua libre de demanda de ozono. Tiosulfato de sodio titulante estndar Na2S2O3 0.1N: Disolver 25 g de Na2S2O3 * 5H2O en 1L de agua destilada hervida fresca, almacenar por 24h y normalizar contra el bi-yodato de potasio o con dicromato de potasio despus de dos semanas de almacenamiento. Este almacenamiento inicial es necesario para permitir la oxidacin de cualquier ion de bisulfito presente. Para minimizar la descomposicin bacteriana adiciona agua destilada hervida y adiciona unos mililitros de cloroformo (CHCL3). Tiosulfato de sodio titulante estndar Na2S2O3 0.005N: Diluir 50mL de la solucin de Tiosulfato de sodio 0.1N Na2S2O3 en un 1L de agua destilada. Normalizacin del Tiosulfato de Sodio Mtodo del Yodato: Disolver 3.249g de Bioyodato de Potasio anhidro KH (IO3)2 o Yodato de Potasio KIO3 seco a 103C por 1h en 1L de agua destilada para mantener 0.1N.

23

En 80mL de agua destilada adicione en constante agitacin 1mL de H2SO4 concentrado, 10,0mL de 0.1N de KH (IO3)2 y 1g de KI. Titular inmediatamente con tiosulfato de sodio 0.1N, antes de que el color amarillo desaparezca adicione 1mL de la solucin del almidn y contine titulando hasta que el color azul desaparezca. Calcule la normalidad con la siguiente expresin:

Solucin indicadora de almidn: 1. Disolver 2g de almidn en 100ml de agua destilada caliente, adicionar 0.2g de acido saliclico y dejar enfriar. F. PROCEDIMIENTO 1. Determina la salida del generador de ozono pasando el ozono en fase gaseosa a travs de KI (2%) por unos 10 minutos. La solucin de KI se mantiene en un recipiente aforado con volumen conocido (mnimo 200mL). 2. Transferir cuantitativamente muestras del recipiente ozonizado en un beaker, y titular con 0.1N Na2S2O3 normalizado hasta que el color amarillo del yodo haya casi desaparecido. 3. Adiciona de 1 a 2ml de solucin indicadora de almidn y continuar titulando hasta que desaparezca el color azul. G. CLCULOS CLCULO DE OZONO RESIDUAL:
( )

( )

Donde: V =Volumen gastado en la titulacin de sodio (ml). N= normalidad del Na2S2O3. =0.1N eq = Numero del equivalente en gramos del Ozono = 24mg/m eq t = Tiempo de ozonizacin (min)

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CLCULO DE LA PRODUCCIN Y DOSIS DE OZONO

( ) = Volumen de tiosulfato gastado en la titulacin de la muestra menos volumen gastado en la titulacin del blanco (ml). = Volumen de yoduro de potasio ozonizado (ml). = Volumen de la muestra de yoduro de potasio titulado (ml). t = Tiempo de contacto (min) N = Normalidad del tiosulfato de sodio, preferible 0.025N normalizada.

DOSIS APLICADA (

( )

P = Produccin de ozono en la columna de ozonizacin ( ). t = Tiempo de contacto (min) V = Volumen de agua ozonizada (ml) = Dosis aplicada de ozono

DOSIS EFECTIVA ( ) ( ) ( )

25

5.

CLORUROS MTODO N 4500-Cl-

A. MTODO ARGENTOMTRICO Los cloruros, en forma del in cloruro (Cl-), son unos de los mayores aniones inorgnicos presentes en las aguas. En el agua potable, el sabor salado producido por la concentracin de cloruros es variable e independiente de la composicin qumica del agua. En algunas aguas que contienen 250 mg Cl-/l se puede detectar sabor salado si el catin es sodio. Por otro lado, el sabor salado tpico puede estar ausente en aguas que contienen hasta 1000 mg/l cuando los cationes predominantes son calcio y magnesio. La concentracin de cloruros es mayor en aguas residuales que en agua cruda por causa del cloruro de sodio (NaCl) el cual es un elemento comn de la dieta alimenticia y pasa a travs del sistema digestivo sin cambios. A lo largo de las costas, los cloruros pueden estar en altas concentraciones por causa de la fuga del agua salada dentro de los sistemas de alcantarillado. Este tambin puede aumentar por procesos industriales. Un alto contenido de cloruros puede daar las tuberas metlicas y las estructuras, as como afectar el crecimiento de las plantas. B. PRINCIPIO DEL MTODO En una solucin neutra o ligeramente alcalina, el cromato de potasio puede indicar el punto final de titulacin del nitrato de plata de los cloruros. El cloruro de plata se precipita cuantitativamente antes de que se vuelva rojo el cromato de plata. C. EQUIPOS Y MATERIALES Frasco erlenmeyer, (250ml). Bureta, (50ml). Probeta, (100 ml).

D. REACTIVOS Solucin indicadora de cromato de potasio. Solucin titulante de nitrato de plata estndar 0.0141N. Cloruro de sodio estndar 0.0141N.

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E. PREPARACIN DE REACTIVOS Solucin indicadora de cromato de potasio Disolver 50g de K2CrO4 en un litro de agua destilada. Adicionar solucin de AgNO3 hasta que se forme un precipitado rojo. Esperar por 12h, filtrar y diluir a 1.0l con agua destilada. Solucin titulante estndar de nitrato de plata 0.0141N Disolver 2395 g de AgNO3 en agua destilada y diluir hasta completar 1000 ml. Estandarizar con NaCl 0.0141 N; 1.00 ml = 500 g Cl-. Almacenar en una botella caf. Cloruro de sodio estndar 0.0141 N Disolver 824mg de NaCl (secados a 140C) en agua destilada y diluir a 1000ml; 1.00ml = 500g Cl-. F. PROCEDIMIENTO 1. 2. 3. 4. Hacer un blanco por el mtodo de titulacin. No es usual un blanco de 0.2 a 0.3ml. Tomar 100 ml de muestra o una porcin diluida a 100ml. Adicionar tres gotas de fenolftalena. Ajustar el pH de la muestra entre 7 o 10 con H2SO4 o NaOH si no est en este rango. 5. Adicionar 1.0 ml de la solucin indicadora de K2CrO4. 6. Titular con la solucin estndar de AgNO3 hasta obtener un color ladrillo.

Figura 4. Pasos 1 a 6

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G. CLCULOS Donde: A = ml del titulante gastado para la muestra, B = ml de titulante gastado para el blanco, y N = Normalidad del AgNO3. ( )

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6.

FSFORO ORTOFOSFATOS (PO4-2) MTODO N 4500-P

A. MTODO CLORURO ESTAGNOSO Los compuestos que contienen fsforo ocurren en aguas naturales y en efluentes (domsticos e industriales) en forma de fosfatos. Estas formas son clasificadas en: Orto fosfatos, fosfatos condensados (Poli fosfatos) y fosfatos orgnicos; pueden presentarse en forma de solucin, de partculas o de desechos o en la constitucin de organismo acuticos. Los compuestos que contiene fosforo son esenciales para el crecimiento de organismos y pueden ser considerados como nutrientes que limitan la produccin de nuevas clulas. B. PRINCIPIO DEL METODO Es un mtodo de reduccin con cloruro estagnoso. El fosfato reacciona con el molibdato amnico y luego es reducido por el cloruro estagnoso para formar un complejo azul. Los resultados se expresan en (mg/L) de P. C. EQUIPOS Y MATERIALES Fotmetro: Espectrofotmetro. Bomba de vaco. Balanza Analtica. Pipeta automtica de 10ml. Balones volumtricos de 100ml. Pipetas automticas de 200L y 1000l. Campana de extraccin. Agitador magntico. Beaker. Barras agitadoras. Perlas de vidrio. Erlenmeyers.

D. REACTIVOS Fenolftalena. Fosfato dihidrogeno de potasio (KH2PO4). Acido sulfrico (H2SO4). Persulfato de Potasio (K2S2O8). Acido Ntrico (HNO3). Molibdato de amonio (NH4)6Mo7O24 4 H2O. Cloruro estagnoso dihidratado (SnCl2.2H2O). 29

Glicerol (C3H8O3). Hidrxido de sodio (NaOH).

E. PREPARACIN DE REACTIVOS Solucin estndar de fosfato (KH2PO4): Disolver 219.5mg de Fosfato dihidrogeno de potasio (KH2PO4) en 1L de agua destilada. Solucin Acido Sulfrico (H2SO4) 1.59N: Diluir 15mL de Acido Sulfrico (H2SO4) en 35mL de Agua destilada. Acida Fuerte En un baln volumtrico adicionar a 60mL de agua destilada 30ml de acido sulfrico concentrado (H2SO4), 0.4mL de acido Ntrico (HNO3) y llenar hasta 100ml con agua destilada. Solucin de Molibdato de amonio Disuelva 25g de molibdato de amonio (NH4)6Mo7O24 4 H2O.en 175ml de agua destilada. En 400mL de agua destilada agregar 280mL de Acido sulfrico (H2SO4) concentrado, dejar enfriar y luego agregar la solucin del paso 1. Cloruro estagnoso Disuelva 2.5g de Cloruro estagnoso dihidratado (SnCl2.2H2O) en 100ml de glicerol (C3H8O3). Calentar la solucin al bao mara y revolver con varilla de vidrio. Este reactivo es estable y no requiere preservativos ni almacenamiento especial. Hidrxido de sodio (NaOH) 1N. Disuelva 40g de Hidrxido de sodio (NaOH) en 1l de agua destilada. F. PROCEDIMIENTO DETERMINACIN DE LA CURVA DE CALIBRACION 1. En un erlenmeyer adicionar el volumen de la solucin estndar de fosfato determinada (Tabla 1) y llenar hasta 50mL con agua destilada. 1ml de solucin estndar P = 0.05mg P 30

Tabla 1. Volmenes de la solucin estndar de fosforo para la curva de calibracin mg P ml (Sol. Estndar) mg P ml (Sol. Estndar) 0.00 0.01 0.05 0.08 0.10 0.15 0.0 0.2 1.0 1.6 2.0 3.0 0.20 0.25 0.30 0.40 0.50 4.0 5.0 6.0 8.0 10.0

2. Colocar en agitacin y adicionar 2 gotas de fenolftalena, 1mL de Solucin Acido Sulfrico (H2SO4), 0.5g de Persulfato de Potasio (K2S2O8) y 4 perlas de vidrio. 3. Llevar a digestin hasta que el volumen reduzca a 10mL y se deja enfriar. 4. Agregar a cada erlenmeyer 30mL de agua destilada y 2 gotas de fenolftalena. 5. Adicionar gotas de Hidrxido de sodio (NaOH) hasta que cambie a color rosado. 6. Luego agregar acida fuerte hasta que el color rosado desaparezca. 7. Transferir las soluciones a balones volumtricos de 100mL y llenar hasta el aforo con agua destilada. 8. Adicionar 4mL de Solucin de Molibdato de amonio y 10 gotas de Cloruro estagnoso. 9. Despus de 5 minutos medir la absorbancia con longitud de onda de 690nm.

Figura 5. Pasos 1 a 7

31

Tabla 2. Medida de absorbancia CURVA DE CALIBRACION FOSFORO mg P ml Abs.cm-1 mg P ml Abs.cm-1

(Sol. Estndar) (690nm) 0.00 0.01 0.05 0.08 0.10 0.15 0.0 0.2 1.0 1.6 2.0 3.0 0.000 0.039 0.045 0.055 0.085 0.140 0.20 0.25 0.30 0.40 0.50

(Sol. Estndar) (690nm) 4.0 5.0 6.0 8.0 10.0 0.160 0.250 0.300 0.400 0.600

Para la curva de calibracin, dibujar la absorbancia medida en el eje de las abscisas, versus la cantidad de mg P/l en el eje de las ordenadas y determinar la ecuacin de la recta obtenida (Figura 7).
0.60 0.50 0.40

(mgP)

0.30 0.20 0.10 0.00 0.000

y = 0,8706x + 0,0213 R = 0,9713

0.200

0.400

0.600

0.800

ABSORBANCIA (cm-1)

Figura 6. Curva de calibracin P, Absorbancia vs mg P

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DETERMINACIN DE CONCENTRACIN DE FSFORO 1. Se toma 50ml de la muestra y 50ml de agua destilada (Blanco) en dos erlenmeyers. 2. Colocar en agitacin y adicionar 2 gotas de fenolftalena, 1ml de Solucin Acido Sulfrico (H2SO4), 0.5g de Persulfato de Potasio (K2S2O8) y 4 perlas de vidrio. 3. Llevar a digestin hasta que el volumen reduzca a 10ml y se deja enfriar. 4. Agregar a cada erlenmeyer 30ml de agua destilada y 2 gotas de fenolftalena. 5. Adicionar gotas de Hidrxido de sodio (NaOH) hasta que cambie a color rosado. 6. Luego agregar acida fuerte hasta que el color rosado desaparezca. 7. Transferir las soluciones a balones volumtricos de 100ml y llenar hasta el aforo con agua destilada. 8. A cada muestra se le adicionar 4ml de Solucin de Molibdato de amonio y 10 gotas de Cloruro estagnoso (al blanco no se le agrega Cloruro estagnoso) 9. Despus de 5 minutos medir la absorbancia con longitud de onda de 690nm. 10. Llevar el valor de la diferencia a la curva para encontrar la concentracin de sulfatos. G. CALCULOS CONCENTRACIN DE FSFORO Con el valor obtenido de concentracin de fsforo (P) en la curva calcular: (( ) )

mg P= Valor encontrado de la Concentracin de fsforo P en la curva de calibracin. Vm= Volumen de la muestra, (ml).

33

7.

SULFATOS MTODO N 4500-SO42-

A. MTODO TURBIDIMTRICO Los sulfatos (SO42-) estn altamente distribuidos en la naturaleza y pueden estar presentes en el agua en concentraciones que varan de pocos a cientos de miles de miligramos por litro. Los residuos del drenaje de la minera pueden contribuir con grandes cantidades de SO42- a travs de la oxidacin de la pirita. B. PRINCIPIO DEL MTODO El Ion sulfato (SO42-) es precipitado en un medio de cido actico con cloruro de Bario (BaCl2) para formar sulfato de de bario (BaSO4) en cristales de tamao uniforme. La luz de absorbancia del (BaSO4) es medida por un fotmetro y la concentracin de sulfato (SO42-) es determinada por la comparacin de la lectura en la curva de calibracin. C. EQUIPOS Y MATERIALES Fotmetro: Espectrofotmetro. Bomba de vaco. Balanza Analtica. Pipeta automtica de 10ml. Balones volumtricos de 100ml. Pipetas automticas de 200l y 1000l. Campana de extraccin. Agitador magntico.

D. REACTIVOS Sulfato de Sodio (Na2SO4). Cloruro de Magnesio (MgCl2). Acetato de Sodio (CH3COONa). Nitrato de potasio (KNO3). Acido actico (CH3-COOH (C2H4O2). Cloruro de Bario (BaCl2).

E. PREPARACION DE REACTIVOS Solucin estndar de sulfato: Disolver 147.9 mg de Sulfato de Sodio (Na2SO4) en 1l de agua destilada.

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Solucin Buffer: Disolver 30g de Cloruro de Magnesio (MgCl2), 5g Acetato de Sodio (CH3COONa), 1g de Nitrato de potasio (KNO3) y 20ml de Acido actico (CH3-COOH (C2H4O2).en 500ml de agua y completar a 1l en un baln volumtrico. F. PROCEDIMIENTO DETERMINACIN DE LA CURVA DE CALIBRACION 1. En un erlenmeyer adicionar el volumen de la solucin estndar determinada (Tabla 3) y completar a 100mL con agua destilada. 1ml de solucin estndar de sulfato = 0.1mg SO2 Tabla 3. Volmenes de la solucin estndar de sulfatos para la curva de calibracin mg SO4 ml (Sol. Estndar) 0.0 0.1 0.5 1.0 1.5 0 1 5 10 15 2.0 2.5 3.0 3.5 4.0 mg SO4 ml (Sol. Estndar) 20 25 30 35 40

2. Colocar en agitacin y adicionar 20ml de solucin buffer por 1 minuto, durante la agitacin aadir 1g de Cloruro de Bario (BaCl2) y se deja agitar por 1 minuto. 3. Despus de 5 minutos medir la absorbancia y la turbidez.

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Tabla 4. Medida de la absorbancia y turbidez. mg SO4 ml (Sol. Estd) 0.0 0.1 0.5 1.0 1.5 0 1 5 10 15 Abs.cm-1 (420nm) 0 0 0.03 0.045 0.080 0.15 5.25 30.10 40.40 54.00 2.0 2.5 3.0 3.5 4.0 UNT mg SO4 ml (Sol. Estd) 20 25 30 35 40 Abs.cm-1 NUT (420nm) 0.12 0.17 0.22 0.29 0.37 65 75 95 145 155

Para la curva de calibracin, dibujar la absorbancia media en el eje de las abscisas, versus la cantidad de mgSO4 en el eje de las ordenadas y determinar la ecuacin de la recta obtenida (Figura 8).
5.0 4.5 4.0 3.5 3.0 2.5 2.0 1.5 1.0 0.5 0.0 0.000 0.100 0.200 0.300 0.400 y = 10,936x + 0,3609 R = 0,9599

(mgSO4)

ABSORBANCIA (cm-1)

Figura 7. Curva de calibracin SO4, absorbancia vs mgSO4 DETERMINACIN DE CONCENTRACIN DE SULFATOS 1. Se toman 100mL de la muestra en dos erlenmeyer ms el blanco. 2. Se agrega 20mL de buffer a las muestras y agitar por 1 minuto. 3. A una de las muestras agregar 1g Cloruro de Bario (BaCl2) agitar por 1 minuto y dejar en reposo por 5 minutos. 36

4. Calibrar el espectrofotmetro a 420nm con la muestra del blanco o calibrar el turbidmetro con los patrones segn sea el caso. 5. Medir a la muestra que tiene solo buffer la absorbancia o turbidez (Lectura inicial). 6. A la muestra con Cloruro de Bario (BaCl2) medir la absorbancia o turbidez (Lectura final). 7. Hacer diferencia de absorbancias. ( )

8. Llevar el valor de la diferencia a la curva para encontrar la concentracin de sulfatos. G. CALCULOS CONCENTRACIN DE SULFATOS Con el valor obtenido de concentracin de sulfatos (SO4) en la curva calcular: (( ) )

mgSO4=Valor encontrado de la Concentracin de sulfatos SO4 en la curva de calibracin. Vm= Volumen de la muestra, (ml).

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8.

NITRGENO MTODO N 4500-Norg

A. MTODO MACRO-KJELDAHL El Nitrgeno es uno de los nutrientes de mayor importancia en el vertido de las aguas residuales tratadas. Un agua que contenga gran cantidad de nitrgeno acelerar la eutrofizacin de embalses, ros y lagos, y puede provocar el estmulo del crecimiento de algas y plantas en cursos de agua poco profundos. La reduccin de la concentracin de oxgeno disuelto en las aguas receptoras y la toxicidad para la vida acutica son algunos de los efectos negativos de la elevada concentracin de nitrgeno amoniacal en efluentes tratados. El anlisis de este ensayo suele determinar el NTK (Nitrgeno Total Kjendahl) que incluye el nitrgeno orgnico y el amoniacal. B. PRINCIPIO DEL MTODO La suma de amonio libre y compuestos orgnicos nitrogenados que son convertidos a una sal de amonio (NH4)2SO4 despus de la digestin de la muestra en medio cido y en presencia de un catalizador. El amonio es destilado en medio alcalino y recuperado nuevamente para su cuantificacin. La presencia de acido sulfrico (H2SO4), sulfato de potasio (K2SO4), y sulfato de cobre (CuSO4), como catalizador, convierten el nitrgeno amonio de cualquier material orgnico a amonio. El amoniaco liberado tambin es convertido a amonio, despus se adiciona base y el amoniaco es destilado del medio alcalino y absorbido en cido brico o sulfrico. El amonio liberado es determinado titulando con una solucin estndar de cido sulfrico (H2SO4). Los resultados se expresan en mgN /L. C. EQUIPOS Y MATERIALES Equipo de digestin con sistema de recoleccin de gases (Digestor y Scruber). Equipo de destilacin con flujo de vapor. Equipo titulador. Potencimetro. Erlenmeyers de 250 ml. Vasos de precipitado. Tubos de ensayo para nitrgeno (para digestor y destilador).

D. PREPARACIN DE REACTIVOS Hidrxido de Sodio 6N (NaOH):

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Diluir 320g en agua destilada y completar 1l. Solucin de cido Brico: Disolver 20g de reactivo analtico en agua y diluir a 1l. Solucin indicadora de cido brico: Disolver 20g de H3BO3 en agua, agregar 10ml de la solucin indicadora mixta y diluir a 1l. Preparar mensualmente. Solucin indicadora mixta: Disolver 200mg de indicador rojo de metilo en 100ml de alcohol etlico del 95%. Disolver 100mg de azul de metileno en 50ml de alcohol etlico del 95%. Combinar las soluciones. Preparar mensualmente. Solucin de acido sulfrico (H2SO4) al 0.02N para titulacin: Diluir 3ml de acido sulfrico (H2SO4) concentrado en 1l con agua destilada libre de CO2.Luego diluir 200ml de esta solucin a 1l con agua destilada. Normalizar el cido 0.02N contra una solucin de Na2CO3 0.02N (1.060g de Na2CO3 anhidro secado a 140C, diluido a 1000ml con agua destilada). E. PROCEDIMIENTO VOLUMEN DE LA MUESTRA 1. El volumen de la muestra es 25ml. Para casos particulares de muestras lquidas se puede seguir la siguiente tabla: Tabla 5. Medida de la absorbancia y turbidez. Nitrgeno Orgnico en la muestra, mg/l Volumen de muestra, ml 4-40 8-80 20-200 50 25 10

2. Para muestras de lodos y sedimentos, pesar una porcin de muestra hmeda que contenga entre 0.2mg y 2mg de nitrgeno orgnico. Transferir la muestra al tubo de digestin limpiando el recipiente de pesaje varias veces con pequeas 39

cantidades de agua. Hacer esta operacin con la cantidad ms pequea posible de agua, sin exceder un volumen de 50ml. DIGESTIN 1. Encender el digestor y scrubber 15min antes de iniciar el ensayo y limpiarlos. En el tubo agregar: 25ml de la muestra, 15ml de acido sulfrico (H2SO4), 3,0g de Sulfato de Potasio, 1,0g de Sulfato de cobre. 2. Colocar el digestor en 60C-80C (temperatura). Colocar la Flauta (tapa del digestor para desviar los gases) y conectar la manguera de la flauta al scrubber. 3. Dejar en digestin aproximadamente 2 horas o hasta que las muestras tengan un color azul claro. 4. Al alcanzar ese color se apaga el digestor y se deja enfriar 30min con el scrubber prendido. DESTILACIN 1. Encender la unidad de destilacin hasta que caliente (aproximadamente 15min). 2. Transferir las muestras fras de los tubos de digestin a los tubos de destilacin con mucho cuidado. 3. Agregar a los tubos poco a poco 30ml de agua destilada y agregar Hidrxido de Sodio 6N (NaOH) con la vlvula dosificadora hasta obtener un colar caf. 4. En los frascos erlenmeyers que recibirn el destilado adicionar 100ml de acido brico al 2% y de 3 a 4 gotas de indicador mixto. 5. Destilar entre 150-250mL en los erlenmeyer. TITULACIN Tomar los erlenmeyers y titular entre 150-250mL de destilacin con acido sulfrico H2SO4 0.02N hasta llegar al color rosado. F. CLCULOS ( ( Donde: V(H2SO4).= Volumen gastado de H2SO4 en la muestra, (ml). VBlanco= Volumen gastado de H2SO4 en el blanco, (ml). Vm= Volumen inicial de la muestra, (ml). 40 ) )

9.

DEMANDA QUMICA DE OXIGENO (DQO) MTODO N 5220

A. MTODO ESPECTROFOTOMTRICO La demanda qumica de oxigeno es la medida del oxigeno necesario para oxidar la materia orgnica e inorgnica susceptible de oxidacin, contenida en una muestra bajo condiciones de un agente especifico, temperatura y tiempo. Los valores de este parmetro estn asociados al grado de avance de la oxidacin de los contaminantes. B. PRINCIPIO DEL METODO Las sustancias orgnicas e inorgnicas oxidables presentes en la muestra, se oxidan mediante reflujo en solucin fuertemente cida (H2SO4) con un exceso conocido de dicromato de potasio (K2Cr2O7) en presencia de sulfato de plata (AgSO4) que acta como agente catalizador, y de sulfato mercrico (HgSO4) adicionado para remover la interferencia de los cloruros. Despus de la digestin, el remanente de K2Cr2O7 sin reducir se titula con sulfato ferroso de amonio; se usa como indicador de punto final el complejo ferroso de ortofenantrolina (ferroina). La materia orgnica oxidable se calcula en trminos de oxgeno equivalente. C. EQUIPOS Y MATERIALES Espectrofotmetro. Bomba de vaco. Balanza Analtica. Pipeta automtica de 5.0ml. Digestor de DQO. Dispensadores de 5.0ml. Estufa (103C y 120C). Embudo tipo Buchner para membrana con dimetro de 47mm. Membrana filtrante tipo micro-fibra de vidrio. Balones volumtricos de 10.0ml, 500ml, y 1000ml. Beaker de 500ml y 1000ml. Pipetas automticas de 200l y 1000l. Tubos DQO. Campana de extraccin.

D. REACTIVOS Sulfato de plata (Ag2SO4). 41

cido sulfrico (H2SO4, 96-97% Pureza). Sulfato de mercurio (HgSO4). Dicromato de potasio (K2Cr2O7). Hidrogenoftalato cido de Potasio (KPH) HOOCC6H4COOK.

E. PREPARACIN DE REACTIVOS Solucin de sulfato de plata en acido sulfrico Solucin de 5.5g/Kg de H2SO4 ,96-97% Pureza. ATENCION: Trabajar en la campana. Triturar con bastn de vidrio 10.12g de sulfato de Plata (Ag 2SO4) y transferir para un frasco con un contenido de 1l de cido sulfrico (H2SO4, 96-97% Pureza), adicionar ene le mismo frasco de origen del acido). Cerrar el frasco hermticamente. La mezcla deber ser mantenida en oscuro durante dos das antes de ser utilizada. Solucin de Digestin (2l) Solucin de K2Cr2O7 + HgSO4. ATENCIN: Trabajar en campana y con guantes. Secar cerca de 25g de K2Cr2O7 a 103C en una estufa durante 24 horas. Enfriar en el desecador. Transferir 1.5L de agua destilada para un beaker de 2.0l. Adicionar cuidadosamente 334mL de cido sulfrico (H2SO4) sobre un bao de hielo. Retirar del bao, adicionar 66.6g de HgSO4 y agitar para disolver. Adicionar 20.432g de K2Cr2O7 previamente seco a 105C por 2 horas y mantener en agitacin. Dejar Enfriar y transferir a un baln volumtrico de 2.0L y completar el volumen con agua destilada. La utilizacin de una nueva solucin de digestin exige una nueva preparacin de una recta de calibracin. F. PROCEDIMIENTO DETERMINACIN DE LA CURVA DE CALIBRACION 1000mg de Hidrogenoftalato de Potasio (KHP)= 1.176mg DQO 1. Secar aproximadamente 500mg de KHP en capsulas de porcelana a 120C en estufa hasta que la masa sea constante (24h) y enfriar el KHP en desecador. 2. Disolver cerca de 0.425g aproximadamente de KHP en agua destilada, transferir cuantitativamente al baln volumtrico de 500ml y completar el volumen con agua destilada. Entonces como caso de ejemplo:

42

Tomamos 0.4639g KHP 436.9mg KHP

1000mg KHP1176mgDQO 436.9mg KHP X

X=513.79mgDQO Lo llevamos a Litros: 513.79mgDQO500mL X1000mL

X=1027.58mgDQO/L X=1.02758mgDQO/ml Luego aplicar C1V1=C2V2 para determinar DQOTeorica. (1.02758mgDQO/ml)V1= DQOTeorica 2.5mL

DQOTeorica=

Hacer la curva de calibracin con concentraciones conforme a los volmenes deseados para el procedimiento de la determinacin de concentracin de DQOTeorica. (Tabla 6) y completarlos con agua destilada para un volumen total de 2.5mL.

43

Tabla 6. Curva de calibracin para hallar la DQOTeorica CURVA DE CALIBRACION DQO V1


Sol.KHP

DQOTeorica ABS.1 ABS.2 41.10 82.21 164.41 246.62 411.03 657.65 739.86 822.06 904.27 986.48 1027.58 0 0.006

ABS (Xmed) 0.003 0.016 0.040 0.072 0.119 0.175 0.199 0.222 0.240 0.276 0.275

100 200 400 600 1000 1600 1800 2000 2200 2400 2500

0.016 0.016 0.04 0.040

0.063 0.080 0.119 0.119 0.177 0.172 0.199 0.198 0.228 0.216 0.238 0.241 0.268 0.283 0.273 0.276

Para la curva de calibracin, dibujar la absorbancia media en el eje abscisas, versus la DQOTeorica en el eje de las ordenadas y determinar la ecuacin de la recta (Figura 9).

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1200.00 1000.00 800.00 600.00 400.00 200.00 0.00 0.000 y = 3489,1x + 53,611 R = 0,9792

0.100

0.200

0.300

ABSORBANCIA

Figura 8. Curva de calibracin DQO, absorbancia vs DQOTeorica. DETERMINACIN DE LA CONCENTRACIN DE DQO. 1. En tubos de borosilicato con tapa de rosca, adicionar 2.5ml de la muestra concentrada o diluida (la dilucin de la muestra se hace necesaria cuando la DQO esperada es mayor que 800mg/l) o 2.5ml de agua destilada (para el blanco) o de las soluciones patrn preparadas para la curva de calibracin. 2. Adicionar enseguida con ayuda de dispensadores 1.5ml de solucin de digestin y vigorosamente 3.5ml de la solucin de sulfato de plata en acido sulfrico. 3. Cerrar hermticamente los tubos y agitar. 4. Colocar los tubos en el digestor a temperatura de 150C y dejarlos calentando por un periodo de 120 minutos. 5. Despus enfriar y limpiar los tubos con papel absorbente humedecido con alcohol y en seguida secar. 6. Observar el espectrofotmetro hora antes de la lectura y fijar la longitud de onda en 620m. 7. Reiniciar el equipo con la solucin de la muestra para el blanco. Leer la absorbancia de la solucin patrn y de las muestras.

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10.

DEMANDA BIOQUIMICA DE OXIGENO DBO5 MTODO N 5210

La Demanda Bioqumica de Oxigeno (DBO) es un mtodo emprico en el cual su procedimiento es usado para determinar la cantidad de oxigeno relativo en aguas naturales, efluentes domsticos e industriales. El test de DBO es empleado para determinar los niveles de contaminacin, evaluar cargas contaminantes y para evaluar la eficiencia de un determinado sistema de tratamiento. A. PRINCIPIO DEL METODO Gran parte de los organismos vivos dependen, directa o indirectamente del oxigeno para mantener sus proceso metablicos que producen la energa necesaria para su crecimiento y reproduccin. Se le llaman organismos aerobios a aquellos que dependen exclusivamente del oxigeno de forma libre para la mineralizacin de materia orgnica, resultando como producto final substancias inorgnicas ms simples, tales como CO2, NH3, H2O, etc. La materia orgnica presente en aguas naturales y en los efluentes domsticos e industriales tienden a ser mineralizadas naturalmente por los microorganismos aerobios existentes, consumiendo oxigeno disuelto en el medio acuoso. El test de DBO tiene por objetivo, determinar esas cantidades de oxigeno consumido, y as mismo, relacionar con las cantidades de materia orgnica biodegradable presente en una muestra. Los mtodos usualmente empleados para la determinacin de la DBO es el de la dilucin, incubacin por un periodo de 5 das a 20C, con una determinacin de los niveles inciales y finales de oxigeno a travs del mtodo de Azida modificado. Para garantizar una mejor eficiencia en el metabolismo de los microorganismos desarrollados en el test es adicionado a el frasco de incubacin, soluciones nutritivas y una solucin buffer, con el fin de garantizar un pH neutro de 6.5 a 7.5 (Llamada agua de dilucin). Es importante que durante los 5 das del test, la muestra se encuentre en un ambiente sin luz, a fin de evitar el aparecimiento de seres clorofilados fotosintticos.

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B. EQUIPOS Y MATERIALES Incubadora (Termo regulable). Frascos DBO. Pipetas volumtricas. Balones Volumtricos. Beaker. Erlenmeyer. Equipo de titulacin (Bureta de 50mL).

C. REACTIVOS Solucin Buffer de Fosfato. Solucin de Sulfato de Magnesio (MgSO4.7H2O). Solucin de Cloruro de calcio (CaCl2). Solucin de Cloruro Frrico (FeCl3). Agua de dilucin. Inhibidor de Nitrificacin Sulfito de Sodio. Cloruro de Cobalto. Solucin Patrn de cido glutmico/glucosa. Solucin de sulfato Manganoso (MnSO4.H2O) Solucin de lcali Ioduro-Azida (AIA). cido Sulfrico Concentrado. Solucin Indicadora de Almidn.

D. PREPARACIN DE REACTIVOS Solucin Buffer de Fosfato Disolver en aproximadamente 600mLde agua destilada, 8.5g de fosfato monobsico de Potasio (KH2PO4), 21.75g de fosfato bibsico de Potasio (KHPO4), 33.4g de Fosfato bibsico de sodio heptahidratado (Na2HPO4.7H2O) y 1.7g de Cloruro de Amonio (NH4Cl). Transferir para un baln volumtrico de 1L y completar el volumen con agua destilada, tal solucin debe ser guardada en baja temperatura y en ausencia de luz. Solucin de Sulfato de Magnesio (MgSO4.7H2O) Disolver 22.5g de sulfato de magnesio heptahidratado en aproximadamente 800ml de agua, transferir para un baln volumtrico de 1l y completar el volumen; tal solucin debe ser guardada en baja temperatura y en ausencia de luz.

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Solucin de Cloruro de Calcio (CaCl2) Disolver 27.5g de Cloruro de Calcio anhidro en aproximadamente 800ml de agua, transferir para un baln volumtrico de 1L y completar el volumen; tal solucin debe ser guardada en baja temperatura y en ausencia de luz. Solucin de Cloruro Frrico (FeCl3) Disolver 0.25g de Cloruro Frrico hexahidratado en aproximadamente 800ml de agua, transferir para un baln volumtrico de 1l y completar el volumen; tal solucin debe ser guardad en bajas temperaturas y en ausencia de luz. Agua de dilucin Adicionar en un garrafn previamente limpio y estril agua destilada de acuerdo con las necesidades a ser empleada en la prueba. Mantener el contenido de este garrafn en aireacin por un mnimo de 24 horas; dejar en reposo por aproximadamente 30 minutos y aadir al agua 1ml de cada una de las soluciones mencionadas anteriormente para cada litro de agua destilada usado. Solucin Patrn de cido glutmico/glucosa Disolver, previamente seco en estufa a 103C por 1hora, 150mg de glucosa y 150mg de cido glutmico, en aproximadamente 800mL de agua destilada. Transferir para un baln volumtrico de 1L. Preparar semanalmente. Tal solucin debe presentar una DBO terica de 194mg/L (Siendo tolerado un desvi patrn de hasta +/-15%). Solucin de sulfato Manganoso (MnSO4.H2O) Disolver 364g de sulfato Manganoso monohidratado (MnSO4.H2O) en aproximadamente 800mL de agua destilada, filtrar en papel de filtro Watman N4 y diluir en baln volumtrico de 1l. Solucin de lcali Ioduro-Azida (AIA). Disolver en aproximadamente 800mL de agua, 500g de Hidrxido de Sodio (NaOH), 135g de Iodeto de sodio (NaI) y diluir en 1L de agua destilada; adicionar 10g de Azida Sdica (NaN3), previamente disuelta en 40mL de agua destilada. Guardar en un frasco de PVC. Solucin Patrn de Tiosulfato de Sodio (Na2S2O3.5H2O) 0.025N Disolver 6.205g de Tiosulfato de sodio pentahidratado con 1.5ml de Hidroxido de sodio 6N (o 0.4g de NaOH), en aproximadamente 800ml de agua destilada, transferir para un baln volumtrico de 1l y completar el volumen. 48

Normalizacin: Normalizar con 10ml de solucin de Dicromato de Potasio (K2Cr2O7) 0.1N, 1ml de cido sulfrico concentrado y cerca de 80ml de agua. Se debe dejar por 6 minutos y en la oscuridad, en seguida adicionar con una esptula (+/-1g) de KI y titular la solucin de Tiosulfato hasta que aparezca una coloracin amarillo paja, en ese punto adicionar almidn y proseguir la titulacin hasta que cambie de azul a incoloro. Calcular la normalidad real del tiosulfato: Na2S2O3= Solucin Indicadora de Almidn Disolver 2g de almidn en 100 ml de agua destilada hervida, mezclar y dejarla sedimentar por una noche. E. PROCEDIMIENTO PREPARACIN DE LOS FRASCOS DBO 1. Dejar con jabn extran alcalino por 1 da. 2. Enjuagar varias veces con agua del grifo y en seguida con agua destilada. 3. Autoclavar los frascos a una temperatura de 120C y 1kg/cm2 de presin, por 30 minutos. 4. Dejar enfriar en lugar limpio y seco. 5. Almacenar en lugar limpio y seco. PROCEDIMIENTO DBO SIN INOCULO 1. Adicionar una muestra a los frascos preparados de DBO y completar hasta la tasa de dilucin de acuerdo con la Tabla 7, hacer por lo menos 4 diluciones diferentes. 2. Anotar el nmero N y el volumen del frasco. 3. Adicionar si es necesario inhibidor de nitrificacin. 4. Completar el volumen del frasco con agua de dilucin evitando la formacin de bolas y turbulencia. 5. Agregar a cada botella 1ml de sulfato manganoso y posteriormente 1ml de reactivo alcalino. 6. Tapar la botella y agitar 20 veces, luego agregar 1mL de acido sulfrico concentrado (H2SO4) alrededor del cuello de la botella con mucho cuidado y volver a agitar por 20 veces. 7. Transferir 200mL de la muestra que se encuentra en la botella Winkler a un beaker y poner en agitacin.

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Tabla 7. Tabla de Diluciones. Tasa de dilucin (ml) 0.001 0.002 0.005 0.02 0.1 0.2 1 128000-130000 118000-125000 60000-115000 12000-42000 6000-21000 300-10000 600-2100 Rango de DQO Tasa de dilucin Rango de DQO (ml) 2 5 10 20 50 100 300 300-1050 120-420 60-210 30-105 12-42 6-21 0-7

ODi - ODf 2mg/L; 1 ODf 6 mg/L. 8. Titular la muestra con Tiosulfato de Sodio 0.025N hasta que la muestra tenga un color amarillo paja y agregar 1mL de almidn. 9. Seguir titulando con Tiosulfato de Sodio 0.025N hasta que el color cambie de azul oscuro a transparente. 10. Medir el OD inicial. 11. Llevar a la incubadora la rplica de las botellas y despus de 5 das de encubar medir OD final. F. CLCULOS OXIGENO DISUELTO Si la normalidad del Tiosulfato de Sodio es 0.025N el volumen gastado es la misma concentracin de OD, sino utilizar la siguiente ecuacin. ( )( )( )

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PORCENTAJE DE REDUCCIN OXIGENO DISUELTO ( DBO SIN INOCULO ( ) ( ) ) ( )

Donde

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11.

CONSTITUYENTES ORGNICOS ABSORCIN-UV MTODO N 5910

Algunos compuestos orgnicos comunmente encontrados en agua y aguas residuales, tales como la lignina, tanino, sustancias hmicas, y varios compuestos aromticos, fuertemente absorbidos por la radiacin ultravioleta (UV). Puede existir una fuerte correlacin entre la absorcin UV y el contenido de carbn orgnico, color y precursores de trihalometanos (THM) y otros productos de la desinfeccin. Este mtodo se pretende ser empleado como una indicacin de la concentracin de los constituyentes orgnicos de abdorcin-UV. A. PRINCIPIO DEL MTODO Los constituyentes orgnicos de absorcin-UV de una muestra absorben la luz UV en proporcin a su concentracin. Las muestras son filtradas para controlar las variaciones en absorcin UV causadas por partculas. El ajuste del pH es opcional. La absorcin UV se mide a 253.7 nm (a menudo redondeado hasta 254 nm). B. EQUIPOS Y MATERIALES Espectofotmetro Filtro de fibra de vidrio Bomba de vacio.

C. PROCEDIMENTO 1. 2. 3. 4. Filtrar al menos 50mL de muestra a travs de la membrana filtrante. Preparar un blanco con agua destilada. Encender el espectofotmetro 15min antes de iniciar el ensayo. Ajustar a una longitud de onda de 240nm y ajustar en cero de absorbancia con el blanco de agua destilada. 5. Medir la absorbancia UV a 240nm al menos a dos porciones de la muestra filtrada a temperatura ambiente. D. CLCULOS Reportar el valor medio de absorcin UV en unidades de cm-1 empleando la siguiente notacin. Para reportar unidades en m-1 multiplicar la ecuacin por cien.

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[ ] Donde: UVpH =Valor medio de absorcin UV, cm-1 (el subndice denota la longitud de onda, nm, y denota el pH empleado si es diferente de 7.0). b= = D= longitud de la celda, cm. absorbacia media medida, y factor de dilucin resultante del ajuste con agua destilada.

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12.

MTODO PARA DETERMINAR METANO POR DESPLAZAMIENTO

A. PRINCIPIO DEL MTODO B. EQUIPOS Y MATERIALES Equipos para venoclisis Botellas para digestin Recipientes de plstico Manguera Agujas Soportes Mallas

C. REACTIVOS Hidrxido de Sodio (NaOH) 1N Fenolftaleina

D. PREPARACIN DE REACTIVOS Solucin de Hidrxido de sodio (NaOH) 1N En un beaker limpio disolver 40 g de NaOH con agua destilada. Dejar enfriar y transferir la solucin cuantitativamente para el baln volumtrico de 1000 ml. Completar el volumen del baln hasta la marca con agua destilada. E. ESQUEMA DEL MONTAJE

Figura 9. Montaje mtodo por desplazamiento 54

F. PROCEDIMENTO

MTODO PARA DETERMINAR METANO POR DESPLAZAMIENTO

Agregar la solucin de hidrxido de sodio 1 N en una botella para digestin.

Agregar 10 gotas de fenolftaleina.

Instalar el equipo para venoclisis en las botellas con la solucin de NaOH y unirlas al biodigestor.

Unir con la ayuda de una manguera y aguja la botella para digestin con el recipiente plstico.

Colocar las botellas en las mallas y colgarlas de forma invertida en el soporte.

El volumen atrapado en el recipiente de plstico ser el volumen de metano.

Si se torna transparente la solucin SOLO se puede reutilizar si se agrega NaOH

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ANLISIS DE SUELOS
13. MTODO PARA DETERMINAR CALCIO Y MAGNESIO SOLUBLES EN SUELO

A. MTODO CUANTIFICACIN COMPLEXOMTRICA. B. EQUIPOS Y MATERIALES Balanza analtica de 0.0001g de precisin. Materiales. Erlenmeyer de 125ml. Pipetas aforadas de 1.5 y 20ml. Microbureta de 10ml. Soporte universal.

C. REACTIVOS Solucin EDTA 0.02N. Solucin patrn de Ca 0.02N. Solucin amortiguadora cloruro de amino-hidrxido de amonio. Hidrxido de sodio 6N. Solucin de carbamato al 1.5%. Indicador murexide. Indicador Negro de Eriocromo T.

D. PREPARACIN DE LOS REACTIVOS Solucin EDTA 0.02N Pesar en un vaso de 250 ml 7.4448 g de sal disdica del cido etilen-diamino tetraactico ( ), adicionar 100ml de agua destilada y agitar. Transvasar a un baln aforado de 2l y completar el volumen. Normalizar la solucin estndar de ZnO 0.02N. Solucin patrn de Ca 0.02N Pesar 1g de Cp., pasar cuidadosamente la muestra a un erlenmeyer de 250 ml de forma alta. Tapar el vaso con un vidrio de reloj y agregar poco a poco HCL al 10%. Hasta que cese la efervescencia. Llevar a sequedad en plancha caliente y disolver luego el residuo con HCL 0.01N. Pasar a un baln aforado de 1l y ajustar el volumen con el mismo cido.

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Solucin amortiguadora cloruro de amino-hidrxido de amonio Disolver 67.5g de cloruro de amonio en 570ml de hidrxido de amonio concentrado y llevar a 1l con agua destilada. Hidrxido de sodio 6N Disolver 240 g de NaOH, en 1l de agua destilada. Almacenar en frasco de plstico. Solucin de carbamato al 1.5% Disolver 1.5g de sal del acido dietilditiocarbmatico en agua destilada y llevar a volumen de 100ml con agua destilada. E. PROCEDIMIENTO 1. Del filtrado proveniente de la muestra de agua tomar con una pipeta aforada una alcuota de 5ml y colocar en un Erlenmeyer de 125ml. Llevar muestra a control y blanco de proceso. 2. Diluir con 20 ml de agua destilada y agregar 5ml de solucin de carbamato. 3. Agregar 1ml de hidrxido de sodio 6N y mezclar bien. Agregar 0.05g de indicador murexide. 4. Titular con EDTA 0.02N hasta que cambien el color de rosado a prpura. 5. Consignar el nmero de ml de EDTA gastados. 6. Tomar una alcuota de 5ml con una pipeta aforada en un Erlenmeyer de 125ml. 7. Diluir con 20ml de agua destilada y agregar 1ml de solucin buffer. 8. Agregar 5 gotas de solucin de carbamato y agregar 0.05g de indicador negro ericromo T. 9. Titular con EDTA hasta que desaparezca el color vinotinto y se torne azul celeste o verde. 10. Anotar el nmero en ml de EDTA gastado. F. CLCULOS Se deben realizar los siguientes clculos:

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Donde: V = Volumen de EDTA gastados en la titulacin. N = normalidad del EDTA

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14.

MTODO PARA LA MEDICIN DE PH EN SUELOS

A. EQUIPOS Y MATERIALES Potencimetro.

B. REACTIVOS Solucin amortiguadora (Buffer) de cido ftalato de potasio (0.05M). Solucin de cloruro de calcio. Solucin de cloruro de calcio (0.01M).

C. PREPARACIN DE LOS REACTIVOS Solucin amortiguadora (Buffer) de cido ftalato de potasio (0.05M) Se disuelven 10.21g (secado por una hora) de ftalato en agua y se diluye hasta 1l. El pH de esta solucin deber ser 4.0 a 20C. Se protege la solucin contra la evaporacin y la contaminacin de mohos. Se debe remplazar la solucin en presencia de mohos. El efecto demuestra que el pH de la solucin no cambia en los lmites de temperatura de 5 a 37C. Solucin de cloruro de calcio Disolver 147 g de volumen con agua y mzclese. en agua, en un frasco volumtrico de 1l, enfriar, diluir su

Solucin de cloruro de calcio (0.01M) Diluir en 20ml de solucin de trabajo 1.0M deber estar entre 5 y 7. D. PROCEDIMIENTO 1. Se coloca el suelo al aire para poder tamizarlo por un tamiz No. 10 (2mm). 2. Se pesan aproximadamente 10g de suelo seco al aire. Se coloca el suelo en un recipiente de vidrio y se aaden aproximadamente 20ml de 0.01M. se mezcla por 30 minutos y se deja reposar por 30 minutos. 3. Leer el pH del medidor. a 2l de agua. El pH de esta solucin

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15.

MTODO PARA LA MEDICIN DE LA MATERIA ORGNICA EN SUELOS

A. EQUIPOS Y MATERIALES Horno. Balanza (sensibilidad de 0.01g). Mufla. Crisoles o platos de evaporacin. Desecadores.

B. PROCEDIMIENTO PREPARACIN DE LA MUESTRA 1. Se deber tomar una muestra representativa, que pese al menos 100g, de una porcin de material que pase el tamiz de 2mm. 2. Se coloca la muestra en un recipiente y se lleva al horno a una temperatura de 105C para secarla hasta peso contante. Posteriormente se remueve la muestra del horno y se lleva a un desecador y se permite su enfriamiento. MEDICIN MATRIA ORGNICA 1. Se coge una muestra que pese aproximadamente de 10 a 40g, se coloca en crisoles tarados o en platos de evaporacin de porcelana y se pesa. 2. Se coloca el crisol o el plato que contiene la muestra dentro de la mufla durante 6 horas a 44510C. Se saca la muestra de la mufla, se coloca en un desecador y se permite su enfriamiento. 3. Se remueve del desecador la muestra y se pesa. C. CLCULOS El contenido orgnico deber expresarse como un porcentaje del peso del suelo en el horno de la siguiente forma

Dnde: A = Peso del crisol ms el suelo antes de la ignicin. B = Peso del crisol o plato de evaporacin despus de la ignicin. C = Peso del crisol. 60

ANLISIS MICROBIOLGICOS
16. TCNICA DEL FILTRO MEMBRANA PARA MIEMBROS DEL GRUPO COLIFORME

A. PROCEDIMIENTO DE FILTRO MEMBRANA PARA COLIFORMES FECALES Este procedimiento se realiza para determinar la densidad de bacterias fecales en una muestra de agua o suelo. Se trata de separar los microorganismos del agua por filtracin a vacio a travs de membranas filtrantes de 0.45 micras de tamao de poro, y depositar las membranas con el residuo en cajas de Petri, que contienen un medio de cultivo M-FC para el crecimiento de los microorganismos que se desea determinar, en un soporte de papel de filtro. Todo el material que se utiliza debe estar esterilizado con el objeto de que no exista contaminacin externa. El medio de cultivo propuesto es lquido ya que este medio tiene ms facilidad para penetrar en los poros de las membranas y baar la superficie de las mismas. B. EQUIPOS Y MATERIALES Placas de cultivo. Unidades de filtracin. Filtro de membrana dimetro de poro de 45 micras. Almohadillas absorbentes (Pads). Pinzas sin dientes esterilizados. Incubadora. Lupa para aumento.

C. REACTIVOS Medio M-FC

D. PREPARACIN DE REACTIVOS Medio M-FC La necesaria uniformidad obliga a emplear medios deshidratados. Nunca se preparan medios a partir de sus ingredientes bsicos, si se dispone de medios deshidratados adecuados.

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Para la rehidratacin se siguen las instrucciones del fabricante. Para este caso y de acuerdo al producto que se tiene, se disuelve el 3.7g del polvo en 100ml de agua purificada o destilada, aadiendo 1ml de cido roslico al 1 por 100. Se debe calentar hasta casi ebullicin y dejar enfriar. Luego ajustar si es necesario el pH a 7.4. El medio debe ser usado para un solo da, luego desecharlo. E. PROCEDIMIENTO 1. En el caso del suelo, en el laboratorio se debe tomar 5g del mismo en un tubo para centrifuga con 10ml de agua destilada y centrifugar a 2000 revoluciones durante 5 minutos. Luego tomar el sobrenadante como muestra para filtrar. 2. La seleccin del tamao de la muestra depender de la densidad bacteriana que se espere, y estar limitada por el grado de turbidez o por el crecimiento de no Coliformes en el medio. Un volumen ideal de muestra es el que proporciona alrededor de 20 a 60 colonias fecales por membrana. 3. Se filtran 10 ml de cada muestra si la dilucin es menor a estos. 4. A cada caja Petri debidamente esterilizadas se pone un pad y se impregna con la pipeta alrededor de 2 a 3 ml del medio M-FC, preparado como se ha descrito, hasta saturar el pad. 5. Se coloca con pinzas estriles un filtro de membrana estril con la trama hacia arriba sobre la placa porosa del receptculo, se sita la unidad de embudo sobre el receptculo y se fija. Se filtra la muestra diluida o no segn el caso y se hace un enjuague final con un poco de agua destilada. La filtracin se lleva a cabo bajo un vacio parcial. 6. Luego se desconecta el proceso de vaco, se desbloquea y retira el embudo, inmediatamente se quita el filtro de membrana con unas pinzas estriles colocndolo sobre el pad impregnado con el caldo M-FC. 7. Se tapa cada caja y se voltea. Luego se llevan a incubacin durante 24 2 horas a 44.5C 2C. 8. Las colonias producidas por bacterias Coliformes Fecales en el medio M-FC presentan distintos matices de azul. Las colonias se cuentan a simple vista o mediante la lupa. F. CLCULO La densidad de Coliformes se presenta como el total de Coliformes Fecales por 100ml. Se calcula a partir de las cantidades de muestra que producen recuentos en FM dentro de los lmites deseados de 20-80 colonias de Coliformes Fecales. Empleando la siguiente ecuacin: ( )

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ANLISIS BIOLGICOS
17. ENSAYO DE TOXICIDAD CON BULBOS DE CEBOLLA ALLIUM CEPA L

A. MTODO DE EVALUACIN DE INHIBICIN DEL CRECIMIENTO PROMEDIO DE LAS RAICES B. PRINCIPIO DEL MTODO Cuando un bulbo de cebolla (Allium Sp.) se rehidrata se produce una estimulacin del crecimiento de las clulas, lo cual permite la elongacin de las races de la planta. Sin embargo, cuando la hidratacin se lleva a cabo en presencia de sustancias txicas, la divisin celular de los meristemos radiculares puede inhibirse, ya sea retardando el proceso de mitosis o destruyendo las clulas. Este tipo de alteraciones generalmente impide el crecimiento normal de la raz, y por tanto su elongacin (Fiskesjo 1985, 1993, 1997). C. EQUIPOS Y MATERIALES Potencimetro. Balanza analtica. Tubos de ensayo. Gradilla. Pipeta. Agitador.

D. REACTIVOS Acido clorhdrico HCl. Sulfato Cprico Pentahidratado CuSO45H2O. (Control positivo).

E. PREPARACIN DE LOS REACTIVOS Control negativo El control negativo se realiz con una muestra de agua de llave. Control positivo Se preparan tres diferentes soluciones de sulfato de cobre (CuSO45H2O) diluidas en agua as:

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Al 25% 25 mg/L Al 15% Al 5% Solucin agua problema El agua problema consiste en el agua cuya toxicidad ser analizada, en este caso en particular fue escogida el agua residual proveniente del Hospital Militar Central, tratada por medio de un reactor anaerobio de flujo ascendente y de biomasa inmovilizada, se analiz tanto el efluente como el afluente del sistema. El valor de pH de todas las muestras debe ser analizado y estandarizado en 7. De esta forma se descarta, que la inhibicin en el crecimiento de la raz pueda ser derivada de que tan acida o bsica este el agua. Se realizaron dos tipos de controles el positivo, solucin de sulfato de cobre con el fin de inhibir por completo el crecimiento de la raz y por otro lado el control negativo, el cual no posee ningn componente causante de inhibicin por esta razn usamos agua de la llave. Ambos controles se realizan con el fin de estandarizar la longitud de las races y determinar la toxicidad. F. PROCEDIMIENTO SELECCIN DE LOS INDIVIDUOS Los bulbos utilizados fueron cebollas Allium Cepa L, una planta bienal de la familia de las liliceas. Sus hojas son semicilndricas y nacen de un bulbo subterrneo, sus races son poco profundas. 1. Seleccionar los bulbos de las cebollas que estn libres de contacto con pesticidas, con un dimetro aproximado de 20 mm. 2. Cortar las races muertas. 15 mg/L 5 mg/L

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Figura 10. Seleccin de los bulbos de cebolla MONTAJE DEL EXPERIMENTO 1. Retirar cuidadosamente la primera capa de piel de la cebolla, tomando cuidado de no lastimar la superficie donde crece la raz.

Figura 11. Pelado de cebollas 2. Determinar los dimetros de las cebollas hicimos uso de un calibrador, con el fin de establecer una medida promedio y lograr uniformidad. 3. Medir el pH de las muestras. 4. Se exponen 12 bulbos a las muestras correspondientes, situando una por cada tubo con el rea radicular en contacto con la solucin por 72 horas (3 das). Positivo 1: Sulfato de cobre (CuSO45H2O) 25mg/L Positivo 2: Sulfato de cobre (CuSO45H2O) 15mg/L Positivo 3: Sulfato de cobre (CuSO45H2O) 5mg/L 65

Efluente Efluente Afluente

Figura 92. Exposicin de bulbos con diferentes diluciones 5. Se debe reponer hasta 1.5mL por cada tubo cada 24 horas con la muestra correspondiente (por que se pierde por evaporacin), ayudados de una pipeta Pasteur manteniendo las races inmersas. Los bulbos deben estar alejados de fuentes luminosas, adems de permanecer a una temperatura constante de 20 0C. 6. Las races son medidas en papel milimetrado, aquellas que sean muy largas o muy cortas deben ser descartadas. G. CLCULOS Porcentajes de inhibicin (Soluciones al 100%) % inhibicin =
longitudmediacontro ln egativo longitudmediamuestra *100 longitudmediocontro ln egativo

Calculo del CE50 ensayo de toxicidad con Allium cepa L. De acuerdo con Fiskesjo (1993), el CE50 en el ensayo de toxicidad con Allium cepa L, significa, la dilucin de la sustancia estudiada que permite el crecimiento de la raz del 50% cuando comparada con el control negativo. El clculo se realiza con la siguiente ecuacin:

%crecimientoraiz

longitudraiztratamientox100 % longitudmediacontro ln egativo

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En la Tabla 8 se tiene un ejemplo de clculo para un experimento realizado aplicando ozono en diferentes tiempos de reaccin. Tabla 8. Datos para clculo del CE50 % crecimiento tratamiento 1 38,78 44,90 67,35 61,25 % crecimiento tratamiento 2 64,24 65,31 89,90 80,61 Dilucin tratamientos (%) 100 50 25 12,5

La concentracin CE50 se obtiene de forma grafica as.

100

Trat 1 Trat 2
75

Crecimiento de la raiz (%)

50

25

CE50=45%
0 0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100

Dilucion muestra (%)

Figura 103. Determinacin del CE50 para un ensayo de toxicidad utilizando Allium cepa L.

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BIBLIOGRAFA
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