PRONATTA

Corporacin Colombiano de Investigacin Agropecuaria

Corpoica

ESTUDIOS BIOLGICOS Y EPIDEMIOLGICOS DE LA ANTRACNOSIS DEL TOMATE DE RBOL Y GENERACIN DE ALTERNATIVAS PARA SU MANEJO INTEGRADO EN COLOMBIA
Informe Tcnico Final

Santaf de Bogot, D.C. Septiembre 30 de 1999

ESTUDIOS BIOLGICOS Y EPIDEMIOLGICOS DE LA ANTRACNOSIS DEL TOMATE DE RBOL Y GENERACIN DE ALTERNATIVAS PARA SU MANEJO INTEGRADO EN COLOMBIA

Proyecto de cofinanciacin PRONATTA

Convenio

PRONATTA - CORPOICA 952250008 INFORME TCNICO FINAL

MIP

Programa Nacional de Manejo Integrado de Plagas

Santaf de Bogot, D.C. Septiembre 30 de 1999

PERSONAL VINCULADO PROFESIONALES Jos Guillermo Rondn C,, M.Sc. Luis Fabio Aranzazu H., M.Sc. Pablo Tamayo, M.Sc. Jos Gabriel Bonett, I.A. Lder Proyecto Coejecutor Coejecutor Coejecutor MIP - CORPOICA Reg. 9 - CORPOICA Reg. 4 - CORPOICA Reg. 1-CORPOICA

ESTUDIANTES

Sandra Elizabeth Romero Mara Jos Botero O. Mara Victoria Zuluaga Ana Priscila Pez P. Gladys Cardona Jorge Mario lvarez L. Carlos Hugo Chiquito N. Efran Alberto Ospina H. Edith Stella Parra P. Sara Anglica Granados A.

Biologa M.Sc. C. Agrarias, U. Nacional Biologa M.Sc. Fitopatologa, U. Caldas Agronoma, U Cundinamarca Agronoma, U Cundinamarca Bacteriologa, U. Colegio Mayor de Agronoma, U Cundinamarca de Caldas de Agronoma, U Caldas de Caldas Agronoma, U U. Colegio Mayor de Cundinamarca Bacteriologa, U. Colegio Mayor de Cundinamarca Bacteriologa,

AUXILIARES Juan Clmaco Ho Dionicio Murillo Sinibaldo Palencia Jess Liborio Castillo Carlos Fernando Urrea Diana Cristina Becerra Manuel A. Hincapi Diana Cristina Cebados

SECRETARIAS

Mara Victoria Valencia Mara Diva Elsa Ramrez Beatriz Camelo Hurtado Mara Elena Rivera

TABLA DE CONTENIDO

RESUMEN EJECUTIVO II. OBJETIVOS DE LA INVESTIGACIN 2.1 GENERAL 2.2 OBJETIVOS ESPECFICOS 2.3 JUSTIFICACIN III. METODOLOGA EMPLEADA 3.1 ESTUDIOS BIOLGICOS DEL PATGENO
3.1.1 Estudios Morfolgicos del Hongo 3.1.2 Curva y Tasa de crecimiento 3.1.3 Compatibilidad somtica 3.1.4 Caracterizacin Molecular 3.1.5 Pruebas de variabilidad patognica

1 7 7 7 8 11 11
11 12 12 12 13

3.2 ESTUDIOS FENOLGICOS DEL TOMATE DE RBOL

3.2.1 Crecimiento vegetativo 3.2.2 Floracin y fructificacin. 3.2.3 Crecimiento del fruto.

13
14 14 14

3.3 VARIACIN ESTACIONAL DE LA ENFERMEDAD 3.4 PERODO DE INCUBACIN Y SEGUIMIENTO DE SNTOMAS Y SIGNOS 3.5 ESTUDIOS PRELIMINARES SOBRE DISEMINACIN DE INOCULO
3.5.1 Fuentes de inoculo. 3.5.2 Diseminacin por insectos. 3.5.3 Diseminacin por agua.

14 16 17
17 17 18

3.6 PERIODOS DE INCUBACIN DE C. gloeosporiodes EN FRUTOS DE TOMATE DE RBOL DE DIFERENTE EDAD

18

3.7 DETERMINACIN DE LA EXISTENCIA DE INFECCIONES QUIESCENTES CAUSADAS POR C. gloeosporiodes CAUSADAS EN FRUTOS DE TOMATE DE RBOL 19 3.8 ESTUDIOS DE LA INTERACCIN BIOLGICA DE MICROORGANISMOS CON C. gloesporioides 22
3.8.1 Aislamiento, identificacin y seleccin de microorganismos ms promisorios con propiedades antagonistas y sinergistas. 22 3.8.2 Muestreo e identificacin de sinergistas en frutos de tomate de rbol con Antracnosis 3.8.3 Deteccin y aislamiento de Trchoderma a partir de frutos de tomate de rbol sanos colocados en un suelo cultivado con tomate de rbol 3.8.4 Aislamiento de Colletotrchum 22 23 23

3.8.5 Experimento germinacin de conidias y formacin de apresorios sobre placas de vidrio In Vitro. 24

3.9 CUANTIFICACIN DE MICROFLORA EN EL FILOPLANO DE TOMATE DE RBOL

3.9.1 Seleccin de la muestra 3.9.2 Aislamiento de microorganismos 3.9.3 Incubacin y evaluacin 3.9.4 Pruebas de Antagonismo

25
25 25 25 26

3.10 AVANCES EN EL CONTROL DE LA ANTRACNOSIS MEDIANTE LA APLICACIN DE FUNGICIDAS PROTECTANTES Y PODA FITOSANITARIA
3.10.1 Se utiliz un diseo en Bloques al Azar con 3 repeticiones y 6 tratamientos. 3.10.2 Descripcin de tratamientos Fase I. 3.10.3 Descripcin de tratamientos Fase II. 3.10.4 Variable a evaluar 3.10.5 Anlisis Econmico y Estadstico.

27
27 27 28 29 29

3.11 EVALUACIN DE ALTERNATIVAS PARA MANEJO DE LA ANTRACNOSIS IV. LOGRO DEL OBJETIVO GENERAL

30 33

V. LOGRO DEL OBJETIVO ESPECFICO: CONTRIBUIR A UN MAYOR CONOCIMIENTO DE LA BIOLOGA DEL PATGENO MEDIANTE ESTUDIOS DE LABORATORIO Y CAMPO. 42 5.1 MORFOLOGA
5.1.1 Caractersticas de la colonia. 5.1.2 Caractersticas de la Conidia. 5.1.3 Curva y Tasa de crecimiento. 5.1.4 Compatibilidad Somtica.

42
43 44 45 46

5.2 CARACTERIZACIN MOLECULAR

5.2.1 Estandarizacin del protocolo de extraccin de ADN de Colletotrichum gloeosporioides, 5.2.2 Diagnstico molecular para C. Gloeosporioides. 5.2.3 Amplificacin al azarcn iniciadores polimorficos (RAPDs).

47
47 47 48

VI. LOGRO OBJETIVO ESPECFICO: ANALIZAR EL PROCESO DE INFECCIN, CON EL PROPSITO DE AMPLIAR LAS BASES PARA LA COMPRENSIN DE LA DINMICA DE ENFERMEDAD EN DIFERENTES ZONAS. VIl.

53

LOGRO DEL OBJETIVO: CONTRIBUIR AL CONOCIMIENTO DE LA RESISTENCIA Y EL ANLISIS DE LA RESPUESTA DE ALGUNOS MATERIALES COMERCIALES, PARA APORTAR INFORMACIN AL MEJORAMIENTO 60

VIII

ESTUDIAR LOS RITMOS DE CRECIMIENTO VEGETATIVO Y REPRODUCTIVO A NIVEL DE DIFERENTES POBLACIONES DE TOMATE DE RBOL PARA CONTRIBUIR A ESCLARECER LAS RELACIONES S. betacea - C. gloeosporioides. 64 64 66 66 68

8.1 CRECIMIENTO DE BROTES 8.2 EMISIN DE YEMAS LATERALES POR BROTE 8.3 EMISIN DE HOJAS EN BROTES 8.4 TENDENCIA PRODUCTIVA

8.5 CRECIMIENTO DEL FRUTO DE TOMATE DE RBOL

71

IX. IDENTIFICAR LA DINMICA DE INFECCIN DE NUEVOS FRUTOS Y POTENCIAL ESPORULANTE POR ESTRATO DEL RBOL, MEDIANTE EL REGISTRO PERIDICO DE FRUTOS ENFERMOS POR RBOL. 75 9.1 DINMICA DE LA ENFERMEDAD 75

9.2 DINMICA DE SIGNOS Y SNTOMAS DE LA ENFERMEDAD 9.3 DINMICA DE LA INFECCIN POR EDAD DEL FRUTO 9.4 DINMICA DE LA INFECCIN POR SITIO EN EL FRUTO 9.5 VARIACIN ESTACIONAL TRATAMIENTO A. DE LA ENFERMEDAD EN MANIZALES,

77 77 79

81 84 86

9.6 VARIACIN ESTACIONAL DE LA ENFERMEDAD EN EL TRATAMIENTO B. 9.7 VARIACIN ESTACIONAL DE LA ENFERMEDAD. TRATAMIENTO C. 9.8 COMPORTAMIENTO DE LA ANTRACNOSIS SEGN LA EDAD O TAMAO DEL FRUTO. 9.9 SNTOMAS, SIGNOS Y SU VARIACIN ESTACIONAL 9.10 UBICACIN DE LOS SNTOMAS EN EL FRUTO Y SU VARIACIN CON EL TIEMPO

87 88

90

X. ESTUDIAR EN FORMA PRELIMINAR LOS MECANISMOS DE DISEMINACIN DEL INOCULO. 94 XI. DETERMINACIN DE LA EXISTENCIA DE INFECCIONES QUIESCENTES CAUSADAS POR Colletotrichum gloeosporiodes PENZ EN FRUTOS DE TOMATE DE RBOL. 97 ESTUDIOS DE LA INTERACCIN BIOLGICA DE MICROORGANISMOS RELACIONADOS CON Colletotrichum gloeosporioides (PENZ) PENZ. SACC. 102

XII.

12.1

PRIMER ETAPA: AISLAMIENTO, IDENTIFICACIN Y SELECCIN DE MICROORGANISMOS MS PROMISORIOS CON PROPIEDADES ANTAGONISTAS Y SINERGISTAS: 102

12.2 MUESTREO, AISLAMIENTO, IDENTIFICACIN DE MICROORGANISMOS SINERGISTAS A PARTIR DE FRUTOS DE TOMATE DE RBOL CON SNTOMAS DE ANTRACNOSIS. 103 12.3 DETECCIN Y AISLAMIENTO DE Trichoderma A PARTIR DE FRUTOS DE TOMATE DE RBOL COLOCADOS EN UN SUELO CULTIVADO CON TOMATE DE RBOL. 103 12.4 EXPERIMENTO SOBRE GERMINACIN DE CONIDIAS Y FORMACIN DE APRESORIOS SOBRE PLACAS DE VIDRIO (IN VITRO). 105 XIII. CUANTIFICACIN DE MICROFLORA EN EL FILOPLANO DE TOMATE DE RBOL (Solanum betacea, (CAV) SENDT), EN EL MUNICIPIO DE SILVANIA (CUNDINAMARCA) 106 13.1 VARIACIN CUALITATIVA 13.2 VARIACIN ESTACIONAL DE MICROORGANISMOS 13.3 POBLACIN MICROBIAL POR ESTRATO. 107 108 109

13.4 MICROFLORA ASOCIADA A RAMAS, HOJAS Y BROTES VEGETATIVOS DEL TERCIO SUPERIOR 110 13.5 POBLACIN MICROBIAL DEL TERCIO MEDIO DE LA PLANTA 13.6 POBLACIN DEL TERCIO INFERIOR DEL RBOL 13. PRESELECCIN DE MICROORGANISMOS MEDIANTE PRUEBAS DE ANTAGONISMO IN VITRO 110 111

112

XIV. AVANCES EN EL CONTROL DE LA ANTRACNOSIS MEDIANTE LA APLICACIN DE FUNGICIDAS Y PODA FITOSANITARIA 114 14.1 CONTROL DE LA ANTRACNOSIS DURANTE LA FASE I 115

14.2 CUMPLIMIENTO DEL UMBRAL, FASE I 14.3 COSTOS FASE I 14.4 CONTROL DE LA ANTRACNOSIS DURANTE LA FASE II. 14.5 CUMPLIMIENTO DEL UMBRAL, FASE II 14.6 COSTOS DE LA FASE II

117 117 119 120 122

14.7 VARIACIN DE LOS TRATAMIENTOS A TRAVS DEL TIEMPO DURANTE LA FASE I YII 123

XV. GENERAR DIFERENTES ALTERNATIVAS Y MODELOS DE MANEJO DE LA ENFERMEDAD, QUE PUEDAN SER EVALUADOS Y UTILIZADOS POR LOS PRODUCTORES. 125 15.1 RESULTADOS PARCIALES MANIZALES 15.2 RESULTADOS FINALES EN SILVANIA CUNDINAMARCA. 15.2.1 Parcela! Testigo del agricultor 15.2.2 Parcela: Remocin total de fruta. 15.2.3 Parcela: Renovacin de copa XVI CARACTERSTICAS DE LA OPCIN TECNOLGICA DESARROLLADA XVII. ACTIVIDADES DE TRANSFERENCIA DESARROLLADAS 125 129 129 132 133 136 137

XVIII. RECOMENDACIONES FUTURAS SOBRE INVESTIGACIONES FUTURAS Y TRANSFERENCIA DE LOS RESULTADOS 142 BIBLIOGRAFA 144

LISTA DE FIGURAS

Pag. Figura 1. Figura 2. Figura 3. La variabilidad ms importante del patgeno est en la patogenicidad, en el desarrollo de sntomas y capacidad destructiva y esporulante. Recoleccin y enterrado de frutos enfermos. Esta prctica debe tener una periodicidad semanal o cada 2 semanas. El establecimiento de cultivos de altura superior a 4 metros, va en contra de un manejo adecuado y eficiente de la fruta enferma (remocin) y del control qumico. Prctica de renovacin de copa y brotacin despus de 4 semanas. Obsrvese la proteccin de los cortes con pasta cicatrizante. Variacin porcentual en el color de la colonia de C. gloeosporoides Crecimiento de los aislamientos de C. gloeosporoides en evaluacin. Electroforesis del oligo OPA-2. Electroforesis del oligo OPA-3. Dendrograma por Camin y Sokal. 35 37 39

Figura 4. Figura 5. Figura 6. Figura 7. Figura 8. Figura 9.

40 44 46 48 49 50 56 57 63

Figura 10. Sntomas hmedo y seco de antracnoss en las pruebas de infeccin con inoculo de campo y de laboratorio respectivamente. Figura 11. Secuencia del desarrollo de sntomas caractersticos de antracnosis en tomate de rbol. Figura 12. Respuesta de los tres materiales de tomate de rbol, Tamaito (T), Rojo Comn ( R) y Amarillo (A) a la infeccin con la cepa 37 de C. gloeosporoides. Figura 13. Estructuras vegetativas y reproductivas el tomate de rbol. Figura 14. Crecimiento caracterstico de los brotes en la Variedad Rojo Comn. Silvania, Cundinamarca. Figura 15. Formacin promedio de yemas laterales por brote. Cundinamarca. Silvania,

65 65 67 68 70 72 72 76

Figura 16. Racimo floral caracterstico del tomate de rbol, obsrvese la proliferacin de flores. Variedad Rojo Comn. Figura 17. Variacin estacional de la floracin, frutos en desarrollo y cosechados vs precipitacin. Silvania, Cundinamarca. Figura 18. Fases de desarrollo del fruto de tomate de rbol. Figura 19. Crecimiento del fruto de tomate de rbol. Silvania, Cundinamarca. Figura 20. Curva de progreso de la infeccin causada por C. gloesporodes en tomate de rbol. Silvania, Cundinamarca.

Figura 21. Variacin estacional de sntomas y signos de antracnosis en tomate de rbol. Silvania, Cundinamarca. Figura 22. Variacin estacional de la infeccin segn tamao del fruto. Silvania, Cundinamarca. Figura 23. Variacin porcentual en la infeccin por tamao del fruto. Silvania, Cundinamarca. Figura 24. Prevalencia de la infeccin de acuerdo a la posicin en el fruto. Silvania, Cundinamarca. Figura 25. Secuencia de infeccin del fruto en la zona media por contacto, en el pice y en el pednculo (causando madurez prematura, fruto amarillo arriba). Figura 26. Curva de progreso de la antracnosis y frutos sano. Manizales, Caldas. Figura 27. Curva de progreso de la antracnosis. Remocin inicial de frutos. Manizales. Figura 28. Prevalencia de antracnosis segn la edad del fruto. Caldas. Manizales,

77 78 79 80 81 82 84 88 89 90 91 92 98 100 109

Figura 29. Variacin cuantitativa de frutos enfermos en sntomas y signos. Manizales, Caldas. Parcela A. Figura 30. Frutos de diferentes edades afectados por antracnosis en diferentes sitios. Figura 31. Infecciones mltiples de antracnosis en frutos de tomate de rbol. Variedad Tamarillo. Figura 32. Variacin estacional de los sntoma segn su ubicacin en el fruto. Manizales, Caldas. Figura 33. Respuesta de los productos con accin quemante sobre la activacin de infecciones latentes de C. gloeosporioides. Prueba 1. Figura 34 Infecciones latentes de C. gloeosporioides activadas por Gramoxone. Figura 35. Variacin cuantitativa de microorganismos en relacin con la precipitacin. Silvania, Cundinamarca.

Figura 36. Antagonismo de hongos colectados con Colletotrchum, 8 das 112 despus de siembra. Figura 37. Promedio de frutos sanos y enfermos por rbol y porcentaje de 116 infeccin de antracnosis en la Fase I. Figura 38. Promedio de frutos sanos y enfermos por rbol y porcentaje de 121 infeccin de antracnosis en la Fase II. Figura 39. Variacin estacional de fruta enferma y sana para las Fases t y II. 124 Manizales, Caldas.

Figura 40. Comportamiento de la antracnosis en el tratamiento testigo sin control y con control mancozeb - clorotalonil en rotacin. Figura 41. Comportamiento de la antracnosis en el tratamiento dos. Remocin de toda la fruta del rbol sin control y con control: mancozaeb clorotalonil en rotacin.

126 127

Figura 42. Comportamiento productivo de las parcelas de renovacin de copa 129 con y sin control, mancozeb y clorotalonil en rotacin. Manizales, Caldas. Figura 43. Comportamiento productivo y de la antracnosis en los tratamientos de manejo. 131

LISTA DE TABLAS

Pag. Tabla 1. Tabla 2. Tabla 3. Tabla 4. Anlisis de varianza para las variables utilizadas en la caracterizacin morfolgica. Incidencia de la antracnosis en tomate de rbol de acuerdo al tipo de inoculo y a la edad del fruto. Periodos de incubacin de CoHetotrichum gloeosporoides segn la evolucin de la enfermedad y condiciones de inoculacin. Promedios para cada variedad de las variables tamao de lesin y tasa de infeccin determinados en la prueba de patognesis. Matriz de coeficientes de correlacin. Variable climticas vs variables biolgicas, desfasadas 5 semanas antes. Epidemiologa antracnosis tomate de rbol. Manizales 52 semanas. 1997. Frutos sanos y enfermos de tomate de rbol y porcentaje de infeccin en los tratamientos A, B y C de remocin de frutos con antracnosis. Resultados del muestreo de agua e insectos como fuente de inoculo de C. gloesporiodes. Total de cepas aisladas de hojas y frutos de tomate de rbol. Cepas aisladas de frutos de tomate de rbol enfermos por antracnosis. Antibiograma para crecimiento micelial en (mm) de C. gloesporiodes. Comportamiento de algunas cepas promisorias sobre la germinacin y formacin de apresnos de C. gloesporoides Poblacin de microorganismos en los estratos de la plata por unidad de muestreo. Estado sanitario inicial en porcentaje de infeccin por antracnosis y nmero promedio de frutos enfermos y sanos por rbol para la Fase I. 45 54 57 62 73 83

Tabla 4a. Crecimiento y desarrollo del fruto de tomate de rbol. Tabla 5.

Tabla 6. Tabla 7. Tabla 8. Tabla 9. Tabla 10. Tabla 11. Tabla 12. Tabla 13.

86 95 103 103 104 105 108 115 116 117 118 119

Tabla 14. Anlisis de varianza para promedio de frutos sanos, enfermos y porcentaje de infeccin por rbol, Fase I (Nov/96 - Jul/97). Tabla 15. Tabla 16. Tabla 17. Porcentaje de infeccin, nmero aplicaciones de fungicidas y su relacin con el umbral de decisin al 11% durante la Fase 1. Costo de control de la antracnosis de tomate de rbol por tratamiento durante 8 meses. Fase ). Estado sanitario del mes de julio de 1997, en porcentaje de infeccin y promedio por rbol de frutos enfermos y sanos para la Fase U.

Tabla 18.

Resultado final del anlisis de varianza para el nmero promedio de frutos por rbol tanto sano como enfermos y porcentaje de infeccin por antracnosis Fase II (Jul/97-Mar/98).

120

Tabla 19.

Porcentaje de infeccin y nmero de aplicaciones de fungicidas 121 segn las semanas en que se cumpli el umbral del 11% durante la Fase II Relacin del costo de control de la antracnosis de tomate de rbol por tratamiento durante 8 meses Fase II. 122

Tabla 20. Tabla 21.

Nmero promedio de frutos por rbol tanto sanos como enfermos y 130 porcentaje de infeccin por antracnosis, ensayo manejo de antracnosis (1-8-98/2-6-99). Porcentaje de infeccin y nmero de aplicaciones de fungicidas segn las semanas en que se cumpli el umbral. Relacin de los costos y la produccin de los tratamientos evaluados por hectrea. 132 135

Tabla 22. Tabla 23.

PRESENTACIN

Este documento rene en pocos prrafos el esfuerzo de un grupo de investigadores, tcnicos, estudiantes y agricultores, quienes apoyados tcnica y financieramente por el convenio PRONATTA - CORPOICA, durante casi cuatro aos de dedicacin permanente y de investigacin meticulosa, han logrado identificar y conocer en ms detalle los componentes ms importantes de la enfermedad conocida como antracnosis, su agente causal Colletotrchum gloeosporioides, la reaccin del tomate de rbol (Solanum betacea) a la infeccin y los procesos de crecimiento vegetativo y productivo del mismo, as como las principales caractersticas de la epidemia, como elementos bsicos para desarrollar una propuesta de manejo ms adecuado del cultivo de tomate de rbol y en especial de la enfermedad ms importante de la especie; a continuacin se presenta un breve resumen de los principales logros alcanzados por el proyecto. Se espera que este boletn tcnico se constituya en una herramienta de trabajo para los tcnicos particulares, las UMATA y agricultores, para que se discutan y apropien de los resultados y de sus aportes; para que los pongan en prctica y puedan de esta manera contribuir al mejoramiento y a la sostenibilidad del sistema de produccin en general, a reducir todos los aspectos negativos que causa la enfermedad y a que el manejo de la antracnosis sea cada vez eficiente, econmico y ambientalmente amigable. Nuestro agradecimiento a PRONATTA por habernos permitido llevar a cabo este trabajo, a los estudiantes por su valiosa labor como asistentes e investigadores y por habernos permitido contribuir a su formacin; a los auxiliares por su excelente trabajo y colaboracin; al grupo de investigadores por su capacidad, dedicacin, inters y apoyo, para la realizacin de este proyecto; finalmente a los agricultores por haber facilitado sus predios para el trabajo, por su permanente inters, sentido crtico y acompaamiento del trabajo. Hemos contribuido al avance del conocimiento de la antracnosis, sin embargo, an falta un largo camino por recorrer.

INFORME TCNICO FINAL Ref: Contrato de Cofinanciacin PRONATTA - CORPOICA Contrato: 952250008 Proyecto: "Estudios biolgicos y epidemiolgicos de la antracnosis del tomate de rbol y generacin de alternativas para su manejo integrado en Colombia". RESUMEN EJECUTIVO

La antracnosis del tomate de rbol causada por Colletotrichum gloeosporioides (Pez.) Penz. & Sacc. = Gloeosporum Desmaz. & Mont. Anamorfo de Glomerella cingulata (Stoneman) Spauld. & Schrenk, es la enfermedad ms importante de las que afectan la fruticultura a nivel mundial y nacional, debido a la severidad de los daos que ocasiona, la magnitud de las prdidas generadas por la enfermedad tanto en produccin como en calidad de la cosecha y a la dificultad que se presenta para su control. Este patgeno en Colombia es de gran importancia en cultivos como aguacate, ann, cacao, caf, ctricos, curuba, fresa, guanbana, guayaba, lulo, mango, maracuy, mora, ame, pimentn, papaya, pina, y tomate de rbol, cultivos que se encuentran distribuidos a lo largo y ancho de la geografa colombiana. Los costos de control de la enfermedad en tomate de rbol corresponden a un 45% de los costos totales de produccin; a pesar del esfuerzo realizado por los productores, las prdidas alcanzan hasta un 50 o ms por ciento, debido exclusivamente a la severidad e intensidad del problema; esto sin tener en cuenta los serios problemas de contaminacin ambiental, los daos ecolgicos y costos socioeconmicos que ocasiona el uso indiscriminado de fungicidas qumicos empleados por los productores, influenciados por las casas comerciales, para el control de la enfermedad, y que redunda en el empleo de ms de 30 productos en distintas combinaciones, frecuencias, dosis y formulaciones. En cuanto al sistema de produccin del trnate de rbol, este se caracteriza por ser tradicional, de economa campesina y semiempresarial, con superficies cultivadas desde 0.22 a 20 hectreas, muchas de las cuales son en compaa, arriendo o propiedad. La

ausencia de una verdadera asistencia tcnica y capacitacin, a excepcin de Antioquia, ha trado como consecuencia un manejo deficiente del cultivo en cuanto a distancias de siembra, manejo del rbol, uso de la materia orgnica y control de las enfermedades, principalmente antracnosis, que en conjunto se traducen en la corta vida productiva del rbol, 2 a 3 aos, y a las grandes prdidas que se suceden al ao en las ms de 5400 hectreas cultivadas en Colombia. Ante esta problemtica, se consider fundamental el establecimiento de una estrategia de manejo integrado del problema, del cual se carece en el caso de la antracnosis en tomate de rbol, sin desconocer que se han realizado diferentes trabajos que apuntan a controlar la enfermedad, pero que son esfuerzos puntuales que es necesario integrar en la prctica y sobre un conocimiento ms detallado de la enfermedad, el patgeno y su entorno. Con el propsito de generar alternativas para el manejo integrado de la enfermedad, un grupo de investigadores de diferentes regionales de CORPOICA, desarroll este proyecto, contando con el apoyo y la cofinanciacin del Programa Nacional de Transferencia de Tecnologa Agropecuaria - PRONATTA. Los objetivos especficos del proyecto fueron: 1) Contribuir a un mayor conocimiento de la biologa del patgeno; 2) Estudiar el proceso de infeccin, por sintomatologa y epidemiologa, para conocer la dinmica de la enfermedad en diferentes zonas; 3) Contribuir al estudio de la resistencia de los materiales y aportar informacin til al programa de mejoramiento. 4) Estudiar los ritmos de crecimiento vegetativo y reproductivo de poblaciones de tomate, para definir las interacciones hospedante-parsito; 5) Estudiar la dinmica de infeccin de nuevos frutos y potencial esporulante por estrato del rbol, mediante registros continuos de enfermedad; 6) Estudiar los mecanismos de diseminacin del hongo, en forma preliminar, en relacin con la fructificacin del hongo, la liberacin de esporas y el clima; 7) Determinar las relaciones entre el proceso infectivo del patgeno en relacin con el inoculo, la fenologa del rbol y factores climticos; 8) Generacin, diseo e implementacin de modelos de manejo de la enfermedad. Un resumen general de resultados se presenta a continuacin.

Respecto a los estudios biolgicos de Colletotrchum gloeosporoides, la caracterizacin de su morfologa indica que es un hongo de muy alta variabilidad en la mayora de las caractersticas estudiadas. La forma tpica de la colonia fue radial 100%, el color fue un 76.9% salmn rosado; la longitud de la conidia vario entre 8.53 -14.35nm y el ancho entre2.1 - 3.5fj,m. La cepa C-40 proveniente de Popayn present el mayor tamao, mientras los aislamientos C-19 y C-52 de Bucaramanga y Une, presentaron el menor tamao. Las pruebas de patogenicidad en las variedades Rojo comn, Amarillo y Tamarllo, tipificaron los mismos sntomas que en campo, con cambios en tamao de lesin, 52.5 en Tamarillo, 42,8 en Rojo y en Amarillo 42,7, indicativo de una mayor susceptibilidad en el Tamarilo que en el Amarillo a la infeccin del patgeno. Dentro de cada variedad se present una reaccin diferencial de virulencia en la interaccin variedad/cepa. La caracterizacin molecular de cepas arroj resultados importantes; se estandariz una metodologa de extraccin y purificacin de DNA que no se tena en el mundo; se realiz el anlisis molecular que confirm una amplia variabilidad dentro del patgeno, la presencia de dos grupos constituidos el primero por aislamientos de Cundinamarca, Santander y Tolima y el segundo por aislamientos de Antioquia, Cundinamarca, Caldas y Popayn y subgrupos que mostraron coincidencia con la mayor diferenciacin en la parte morfolgica (tamao de conidia, color de colonia y tasas de patogenicidad). Este Comportamiento ha sido explicado desde varias pticas que indicaran las diferentes formas en que se pudo haber establecido tal variabilidad, la cual posiblemente se encuentre en estado dinmico. Los estudios de patogenicidad de Colletotrchum gloeosporoides, permiten confirmar en primer lugar que las variedades comerciales de tomate de rbol, Rojo Comn, Amarillo y Tamarillo son susceptibles a la enfermedad, con algunas interacciones diferenciales entre aislamientos y variedades, siendo el material ms susceptible el Tamarillo, seguido del Rojo Comn y el Amarillo, al analizar la interaccin cepa del hongo/variedad, se presenta una interaccin diferencial con mayor patogenicidad de algunas cepas de Santander, Cundinamarca y Popayn. As mismo, el desarrollo de sntomas de la enfermedad y el tamao diferencial de la lesin present diferencias muy amplias entre

cultivares y dentro de cultivares, indicando con ello una muy amplia variabilidad del patgeno. En cuanto a la fenologa del tomate de rbol, se presentan dos pocas de crecimiento, una intensa en verano que coincide con elongacin de ramas, formacin de yemas laterales y hojas nuevas, y a su vez con renovacin de follaje y una leve en invierno; la fase reproductiva presenta floracin permanente en el ao, con un mayor cuajamiento de frutos en el primer semestre, la cosecha aunque continua es mayor al final de cada invierno del primero y segundo semestre. Se requiere de un crecimiento vegetativo permanente para que exista produccin en el rbol, razn que justifica el manejo del rbol mediante podas. La estructura reproductiva es un racimo escorpioide que desarrolla entre 23 y 35 flores de las cuales cuajan en promedio de 1 a 8 frutos mximo; la edad del fruto de formacin a maduracin est entre 24 y 27 semanas, con cinco edades bien definidas. La enfermedad presenta una muy estrecha correlacin con la precipitacin cada 4 a 6 semanas antes, a travs de todo el ao, con un incremento progresivo desde comienzos del ao y hasta fines de junio, comportamiento favorecido por las lluvias ocurridas durante el primer semestre y que finalizan a comienzos de junio; en verano la enfermedad es mnima por ausencia de precipitacin, esto repercute drsticamente en la viabilidad del inoculo del patgeno en los frutos esporulados y en la capacidad esporulativa del hongo sobre frutos enfermos en estado de mancha; esto mantiene la infeccin en muy bajo nivel, con el reinicio de la precipitacin, se reactiva la epidemia hasta un nuevo pico de infeccin de mayor importancia a finales del ao disminuyendo de nuevo por ausencia de lluvias, para iniciar el ciclo de infeccin nuevamente. Esto demuestra la dependencia del hongo de la precipitacin para el desarrollo de la epidemia; es igualmente evidente en este estudio, la alta susceptibilidad del patgeno a estrs de humedad ya que a comienzos y mediados de ao en que se present ausencia de lluvias, se afecta significativamente la capacidad infectiva del patgeno; condicin identificada en otros estudios como indicativo de quiescencia en el patgeno, como se pudo confirmar en este trabajo.

Se confirm la prevalencia de frutos con signos del hongo ms que con sntomas, indicando que la remocin semanal de frutos no es suficiente para manejar la enfermedad; presentaron mayor enfermedad los frutos verdes que los maduros y la infeccin fue mayor en la zona media y el pice del fruto durante el invierno, en verano fue en el pednculo, en el verano son infecciones quiescentes o latentes. La precipitacin puede ser utilizada como un preaviso climtico para el manejo de la enfermedad en pocas crticas. Este comportamiento es similar en todas las regiones. En cuanto a las pruebas de infeccin desarrolladas con inoculo natural e inoculo de laboratorio, los resultados indican que es ms infectivo el inoculo de campo que el de laboratorio en todas las edades del fruto; Es decir, en campo el inoculo de C. Gtoeos pori oides no acta s olo si no en as ociaciones sinergis tas c on otros microorganismos, especialmente bacterias del gnero Pseudomonas; estos microorganismos estimulan la formacin del apresorio y ejercen efectos directos sobre la pared del fruto, facilitando la penetracin del patgeno, otras inhiben la germinacin del hongo. Se comprob la mayor susceptibilidad de los frutos verdes. El ciclo de vida del patgeno fue: primeros sntomas, puntos necrticos caf oscuros a los 5 das, mancha pequea a los 9 das, hundimiento 14 das, necrosis y esporulacin a los 19 das, necrosis total del fruto 34 das; desde los 9 das, ya existe esporulacin incipiente en el fruto. La dispersin del inoculo se realiza principalmente por la precipitacin, ya sea por lavado, salpique o contacto los tres factores son definitivos en el desarrollo de la enfermedad, siendo el follaje o copa del rbol la fuente ms importante de inoculo. Otro factor importante son los insectos, especialmente pequeos dpteros y colepteros que emplean los frutos enfermos para la oviposicin y multiplicacin de sus poblaciones, estos insectos visitan con frecuencia muy alta frutos enfermos y luego van a los sanos o al follaje, transportando inoculo suficiente para la infeccin. Dentro de la generacin de modelos, los estudios confirmaron la necesidad de integrar productos qumicos a la propuesta teniendo en cuenta las particularidades de la epidemia y la virulencia del hongo; se evaluaron diferentes ingredientes de carcter protectante y sistmico, tales como mancozeb, clorotalonil, kocide, citrofun, benomil, y

otros, los mejores compuestos en reduccin de la enfermedad fueron mancozeb y clorotalonil, los cuales reducen hasta un 40% la enfermedad; se confirm la posibilidad de utilizar fungicidas con un umbral de infeccin 1 1 % de los frutos enfermos al momento de la aplicacin; se concluy que una mayor accin de estos productos, requiere de elementos culturales y agronmicos del cultivo complementarios a su aplicacin. En cuanto a la generacin de modelos de manejo, en principio se establecieron todos los aspectos tecnolgicos que deberan tomarse en cuenta para el mejoramiento del cultivo, basados en todos los estudios anteriores, obtenindose un conjunto de recomendaciones que deberan conjugarse en el futuro para mejorar la produccin y sanidad del cultivo, entre las cuales estn: agronmicas, densidad y arreglos de siembra, plantaciones de baja altura, poda de formacin, de mantenimiento, racionalizar uso de materia orgnica, renovacin de copa, etc.; fitosanitarias, remocin semanal de fruta enferma y enterrado en sntomas, poda sanitaria, limpieza y proteccin de follaje, aplicacin de qumicos con umbral de infeccin, manejo del preaviso climtico para prevencin de infeccin, entre otras; se evaluaron tres tratamientos que combinaron muchas de las recomendaciones planteadas, bajo los supuestos de continuar o renovar los cultivos, controlar la enfermedad y mejorar la produccin. Se confirm que la renovacin de copa, bajo condiciones de alta presin de enfermedad, es una alternativa econmica muy eficiente para manejar el problema; bajo las condiciones del agricultor, la aplicacin de algunas tcnicas de manejo de la enfermedad, poda del cultivo, manejo de la fruta enferma y empleo de productos qumicos con un enfoque epidemiolgico, puede resultar en beneficios muy positivos en la reduccin de la enfermedad y una mejor produccin e ingresos. Estas recomendaciones y tcnicas generadas han sido objeto de diferentes actividades de transferencia y capacitacin de tcnicos y agricultores en conferencias, seminarios, simposios, das de campo y demostraciones de mtodo, que se espera poder continuar una vez finalizado el presente proyecto.

II. OBJETIVOS DE LA INVESTIGACIN

2.1 GENERAL
Mediante el estudio biolgico y epidemiolgico de la antracnosis elaborar un(os) modelo de manejo integrado del problema, con el fin de aumentar la productividad del cultivo, mejorar la condicin social y econmica del productor y de proteger el medio ambiente de la contaminacin y el deterioro continuado por el uso excesivo y exclusivo de fungicidas para su control.

2.2 OBJETIVOS ESPECFICOS

Contribuir a un mayor conocimiento de la biologa del patgeno, mediante estudios de laboratorio y campo. Analizar el proceso de infeccin, con el fin de ampliar las bases para la comprensin de la dinmica de la enfermedad en diferentes condiciones agroecolgicas. Contribuir al estudio de la resistencia y el anlisis de la respuesta de algunos de los materiales comerciales, con el fin de aportar informacin de utilidad para futuros programas de mejoramiento gentico de la especie. Estudiar los ritmos de crecimiento vegetativo, floracin y formacin de frutos a nivel de diferentes poblaciones de tomate de rbol con el fin de contribuir al esclarecimiento de las interacciones S. Betacea - C. gloeosporioides. Estudiar la dinmica de infeccin de nuevos frutos y potencial esporulante por estrato del rbol, mediante el registro peridico de frutos enfermos, por rbol y parcela para diferentes condiciones agroecolgicas del pas, los gradientes de la enfermedad en cultivos comerciales y determinar en primera instancia el perfil de prdidas de frutos ocasionada por la enfermedad. Estudiar los mecanismos de diseminacin de la enfermedad, su relacin con la fructificacin del hongo y la liberacin de esporas en funcin del clima.

Generar diferentes alternativas y modelos de manejo de la enfermedad, que puedan ser evaluados y utilizados por los productores en diferentes zonas productoras del pas.

2.3 JUSTIFICACIN
Dentro de los cultivos frutcolas de clima fro moderado en Colombia, el tomate de rbol (Solanum betacea) (Cav) Sendt. constituye una alternativa de gran importancia socioeconmica, como cultivo principal o de rotacin. El aumento en el rea sembrada durante la ltima dcada, le ha permitido superar la barrera de las 5.400 has, siendo las principales zonas productoras, las franjas del clima fro moderado comprendidas entre los 1.600 y los 2.400 m.s.n.m. de los departamentos de Antioquia, Cundinamarca, Boyac, Caldas, Cauca, Huila, Risaralda, Quindo, Santander y Tolima. El tomate de rbol se encuentra arraigado culturalmente en las zonas rurales y urbanas de estas regiones, observndose una amplia diversidad de zonas productoras, resultado de una dispersin aleatoria del material gentico de siembra. Esta coexistencia de variadas formas sociales de produccin en el pas, determina tambin una situacin compleja. Los productores de tomate de rbol son principalmente minifundistas, con una extensin promedio muy variada (0.25-20 ha), siendo el tipo de empresa dominante, la de economa campesina y en algunas regiones de Antioquia, Caldas y Cundinamarca la explotacin semiempresarial; estas caractersticas generales determinan en muchas ocasiones, sino en todas, una actividad econmica variada, relacionada con la supervivencia familiar y la diversidad agroeconmica del entorno. El alto potencial de rendimiento del cultivo por unidad de rea si bien es una caracterstica importante, que ofrece excelentes perspectivas para la generacin continua de ingresos por su estabilidad en el mercado nacional, y las expectativas como generador de divisas en algunos mercados internacionales, se ve seriamente afectada y disminuida en trminos reales por el incremento de diversos factores limitantes, entre los que se destaca la generalizacin de los problemas fitosanitarios, principalmente de la antracnosis, enfermedad que presenta niveles de incidencia y severidad cada vez ms altas en todas las zonas productoras y cuyas prdidas superan el 40% con control y sin

l el 100% de la produccin, con la secuela del abandono de cultivos en algunas regiones, por los bajos rendimientos, y la inminente evolucin de la severidad de la enfermedad en otras, lo que pone en peligro la produccin nacional de la fruta; esta caracterstica unida a la dependencia exclusiva de fungicidas para su control trae como consecuencia la disminucin significativa del ciclo productivo del cultivo. En todas las zonas productoras de tomate de rbol, la intensidad del problema exige de aplicaciones calendario de fungicidas (protectantes y sistmicos), con un mnimo de 24 aplicaciones por ao; esta circunstancia unida al hecho del constante aumento en el costo de los productos y a la presin de las casas comerciales por introducir nuevos ingredientes y formulaciones, ha venido deteriorando la rentabilidad del cultivo con el consecuente desestmulo para los productores, quienes han visto reducirse paulatinamente sus ingresos. La dependencia, casi exclusiva de los fungicidas para el control del problema, adems de causar un aumento significativo en los costos de produccin, se traduce otros efectos concomitantes y que se relacionan directamente con prdidas de efectividad de los productos, disminucin de rendimientos y un progresivo deterioro del agroecosistema por contaminacin y especializacin cada vez mayor de poblaciones de microorganismos plagas, adems del inherente incremento en los niveles de residualidad de los agroqumicos en el producto final a comercializar, niveles que adems de su efecto txico, constituyen una barrera a las posibilidades de comercializacin internacional, de una fruta que presenta buenas perspectivas de mercado. Dado que los actuales sistemas de control basados en la aplicacin peridica (por calendario) de fungicidas, no constituyen una solucin efectiva al problema de reduccin de inoculo potencial y efectivo dentro del cultivo, as como a la disminucin significativa de las prdidas ocasionadas por la enfermedad, es prioritario y fundamental el desarrollo de algunos estudios tendientes a un mejor conocimiento del comportamiento biolgico del patgeno, de los procesos de infeccin y de sus mecanismos de diseminacin, dentro de un contexto epidemiolgico, en los que se consideren los diferentes sistemas de produccin, premisas necesarias para el desarrollo y generacin de alternativas ms

eficientes, estables y econmicas para el manejo integral de la enfermedad en particular y el cultivo en general.

10

III. METODOLOGA EMPLEADA

El proyecto se plante dentro de una concepcin de anlisis de sistemas con el propsito de conocer las interacciones entre el tomate de rbol, el hongo Colletotrchum gloeosporoides, el clima y el productor, con sus decisiones tecnolgicas para el manejo del cultivo. Ello nos permitir conocer la estructura y comportamiento de la epidemia, con el fin de sentar las bases necesarias para la implementacin de un sistema de manejo integrado de la enfermedad. La parte experimental incluye tanto ensayos y estudios de campo como de laboratorio bajo condiciones controladas. Las metodologas para cada experimentacin se presentan a continuacin:

3.1 ESTUDIOS BIOLGICOS DEL PATGENO

3.1.1 Estudios Morfolgicos del Hongo

Inicialmente se realiz una coleccin de muestras provenientes de las principales zonas de cultivo de tomate de rbol en el pas, de donde se obtuvo los diferentes aislamientos de la coleccin; el aislamiento se realiz en el Laboratorio de Fitopatologa, Programa MIP, Corpoica, Tibaitat (Mosquera). Los aislamientos se realizaron de acuerdo a las tcnicas convencionales y que consiste en lavado y desinfeccin de fragmentos de tejido, los cuales se siembran en medio agar-agua o papa-dextrosa-agar y se incuban a 22 Una vez se presenta crecimiento de micelio, se repican y purifican las cepas, las C. cuales se identifican debidamente. Las caractersticas morfolgicas implican una descripcin macro y microscpicas de cada cepa del patgeno, de acuerdo a forma y color de la colonia; crecimiento, aspecto y color del micelio; forma, tamao, color, segmentacin, presencia de ncleo y especulacin de las conidias, estas caractersticas fueron evaluadas en cada uno de los 49 aislamientos obtenidos para el estudio.

3.1.2 Curva y Tasa de crecimiento Cada cepa se sembr en PDA, los cultivos se incuban a 17 C en oscuridad, las evaluaciones del crecimiento o dimetro de la colonia se hizo a los 4, 7, 9 y 11 das. La tasa de crecimiento diario se calcula como la diferencia entre el dimetro final menos el dimetro inicial y dividido por el total de das evaluados. 3.1.3 Compatibilidad somtica Esta prueba es una herramienta til para encontrar en primera instancia similitud o heterogeneidad entre aislamientos. La compatibilidad somtica es la expresin fsica del cdigo gentico de microorganismos y expresada en la afinidad(anastomosis) o repelencia en el crecimiento, al enfrentar dos o ms cepas. Para esta prueba se siembran discos de 5 mm de PDA con micelio de cada cepa, distantes a cuatro centmetros, la incubacin se hace a 22 la evaluacin peridica consiste en observar C; el crecimiento de las dos cepas y si se presenta compatibilidad (formacin de zonas denso) o la incompatibilidad(rea de rechazo entre cepas o antagonismo). 3.1.4 Caracterizacin Molecular Para el estudio comparativo del patgeno de la antracnosis, se utilizar la tcnica de PCR-RAPD, ya que ha demostrado ser eficiente en la bsqueda de diferencias a nivel molecular. Extraccin de DNA. Se obtuvo por el protocolo de extraccin de Genis (1992), el micelio se tritura manualmente con un macerador, se adicionan 150 i de acetato de sodio 3M, pH 5.2 y se lleva a tubos a -20 C por 10 minutos, se centrifuga para quitar sobrenadante, se agrega isopropanol y se obtiene el ADN precipitado, a partir de este se obtienen de 3 a 6 jug de ADN para anlisis por PCR. La reaccin de PCR-RAPD se hace en el siguiente orden: La reaccin de amplificacin se hace en volumen de 25 jjJ con 10 nM de enzima tac polirnerasa, MgCI2 que acta como cofactor de enzima, 0.2 fiM de cada desoxirribonucletido (dATP. dTTP, dCTP y dGTP), buffer de la enzima (10X), 20ng de aislamiento y agua HPLC para completar el volumen, se probaron cinco operones, esta reaccin se hace en termociclador con el siguiente ciclo, 1) 92 C/45s, 12

2) 34 C/60s y 3) 72 C/90s; esto s e repite 45 veces y al final se deja por 10 minutos a 72 C. Anlisis de bandas. Los segmentos amplificados se analizaron por electroforesis en gel de agarosa 1.5% en buffer TBE1X, el gel se corri en cmara de electroforesis 5 horas, se tino con bromuro de etidio, se incluye un marcador de pM de 1 Kb ladder. 3.1.5 Pruebas de variabilidad patognica Este estudio realizado en condiciones controladas de invernadero, se realiz con las tres variedades comerciales de tomate, Rojo Comn, Amarillo y Tamarillo, la concentracin de inoculo se determin mediante una prueba de lmite numrico de infeccin, esta consisti en tomar concentraciones entre 1 x 103 hasta 1 x 106 conidias/mi, se inocula una muestra de frutos de la misma edad, los cuales se cosechan sanos y en laboratorio se lavan y desinfectan y se inoculan en la zona ecuatorial con una mota de algodn humedecida con el inoculo, la dosis que ms frutos infect en menor tiempo fue seleccionada para el estudio. Con esta concentracin se procedi a desarrollar el estudio para lo cual se tomaron 10 frutos por variedad y cepa del patgeno, se inocularon de igual manera y se inici la evaluacin a las 72 horas y hasta que se present la necrosis en cada tratamiento, se determin el ciclo de infeccin y el tiempo entre cada uno, la incidencia y la tasa de infeccin diaria.

3.2 ESTUDIOS FENOLGICOS DEL TOMATE DE RBOL

Estos estudios facilitaron la posterior evaluacin epidemiolgica de la antracnosis, para ello se establecieron parcelas de mnimo cuatro rboles en buen estado de desarrollo y competencia dentro del lote, con buena arquitectura, de la misma edad, de las variedades rojo comn y Tamarillo, por su mayor cultivo; los rboles se protegieron permanentemente con fungicidas e insecticidas para garantizar la sanidad y permanencia de los estratos seleccionados. Los registros de las observaciones fenolgicas, se tomaron semanalmente, al tiempo con los del patgeno, registrndose las siguientes caractersticas.

13

3.2.1 Crecimiento vegetativo En cada rbol seleccionado se realiz una poda de baja intensidad que indujo a la formacin de nuevas yemas; se marcaron cuatro yemas o brotes vegetativos escogidos dentro del rbol y en ramas opuestas en los que semanalmente, se registraron los siguientes parmetros:

Longitud del brote Nmero de hojas nuevas Nmero de hojas totales presentes Nmero de brotes laterales o axilares nuevos 3.2.2 Floracin y fructificacin. En cada rbol se seleccionaron dos ramas con un nmero aproximado de 10 brotes axilares desarrollados, registrando en cada una la cantidad de racimos florales presentes, los cuales se numeraron consecutivamente, adems, se cuantificaron racimos florales nuevos y frutos formados en desarrollo, identificndolos para evitar su recuento en cada fecha de evaluacin. 3.2.3 Crecimiento del fruto. Para ello se identificaron diez frutos al azar por rbol en estado de pepino, escogiendo preferiblemente el primer y segundo fruto por edad de cada racimo, para un total de 40 frutos evaluados; cada 15 das se registr longitud y dimetro en centmetros y cambio de coloracin del fruto. En el caso de los frutos maduros, stos se dejaron en el rbol por dos semanas despus del inicio del cambio de color. 3.3 VARIACIN ESTACIONAL DE LA ENFERMEDAD Para este estudio se establecieron parcelas de 4 rboles en Silvania (Cundinamarca) y de 6 rboles en Manizales (Caldas), en buen estado de desarrollo y competencia dentro del lote, en los que se registr el desarrollo de la enfermedad en los frutos. Estos

rboles no recibieron ningn tipo de control para hongos, al igual que se redujo en ellos el nmero de podas. Los rboles del borde en cada parcela sirvieron de surco de proteccin a los rboles seleccionados en el centro; por lo que a stos s se les llev un estricto control de la enfermedad, por medio de remocin semanal de frutos enfermos, fumigaciones quincenales con mancozeb, adems de manejo agronmico que incluy fertilizacin, manejo de malezas y poda suave. Se cuantific la variacin de la enfermedad a travs del ao, evaluando y registrando cada semana los siguientes variables: Nmero de frutos afectados por Colletotrchum gloeosporoides, con sntomas Nmero de frutos afectados por Colletotrchum gloeosporoides, con signos o esporulados Nmero de frutos afectados por otras causas Nmero de frutos cosechados sanos.

Los frutos enfermos por Colletotrchum gloeosporoides, se clasificaron por tamao y prevalencia del sntoma de la siguiente manera:

Por tamao: Nmero de frutos verde pequeo Nmero de frutos verde mediano Nmero de frutos verde grande Nmero de frutos morado Nmero de frutos maduros Por prevalencia de sntomas: Nmero de frutos afectados en la base del pednculo Nmero de frutos afectados en la zona ecuatorial Nmero de frutos afectados en el pice Nmero de frutos afectados en diferentes partes

15

En Manizales se montaron tres parcelas, en las que se evaluaron las mismas variables, pero con algunos cambios en la ejecucin del trabajo, como fueron: Tratamiento A. Remocin de frutos enfermos y sanos cada semana durante 104 semanas ao 1997 y 1998. Tratamiento B. Remocin inicial de todos los frutos del rbol, tanto "sanos" como enfermos por antracnosis. Posteriormente se inici la remocin de frutos enfermos cada semana. Durante 104 semanas. Tratamiento C. Remocin de frutos enfermos dos veces por semana y cosecha semanal de frutos sanos. Durante 52 semanas. Para efectos de estudiar el comportamiento de la enfermedad con respecto al clima, se llevaron registros diarios de la precipitacin, humedad relativa y temperatura, con el propsito de correlacionar posteriormente los tres parmetros con la enfermedad y determinar el comportamiento de la epidemia.

3.4 PERODO DE INCUBACIN Y SEGUIMIENTO DE SNTOMAS Y SIGNOS

A fin de caracterizar el ciclo de enfermedad y el desarrollo de sntomas de la antracnosis en el tiempo, se establecieron estas pruebas en las variedades rojo comn y Tamarllo, tanto en condiciones de laboratorio como de campo. Para ello, Se seleccionaron 10 frutos de las 5 edades correspondientes a verde pequeo, verde mediano, verde grande, morado y maduro, de acuerdo con los datos del estudio fenolgico. Este estudio se realiz en campo y en los laboratorios de Corpoica de Mosquera y Manizales, en un lugar acondicionado para mantener las condiciones, especialmente de temperatura y humedad relativa propias de la zona. Se utilizaron dos clases de inoculo de Colletotrichum gloeosporioides; el obtenido de frutos enfermos en campo y el otro obtenido en laboratorio por aislamiento del patgeno en medio artificial(PDA); las cepas se obtuvieron del mismo lugar de experimentacin, preparando una dilucin de 1 x 106 esporas por mililitro, como inoculo infectivo.

16

Los frutos fueron previamente lavados con agua destilada, para luego ser inoculados en la zona ecuatorial, con la difusin anteriormente descrita, empleando una mota de algodn, humedecida con el inoculo correspondiente. A los frutos en prueba de laboratorio se les ubic en cmara hmeda, para proporcionar condiciones adecuadas para el desarrollo de la infeccin. En la prueba campo, la mota de algodn se sostuvo del pednculo con un gancho, con el propsito de mantenerla en su posicin en la zona media demarcada para la inoculacin; una vez inoculados se protegieron de la lluvia, con bolsas plsticas, las que contenan una mota de algodn humedecida, para simular una cmara hmeda, despus de tres das de realizada la inoculacin, se retir la mota de algodn y las bolsas plsticas. Las lecturas se iniciaron a los 3-4 das despus de la inoculacin, continundose cada 2 das, los frutos fueron numerados para llevar el registro individual y definir con certeza la evolucin en cuanto a sntomas y signos.
3.5 ESTUDIOS PRELIMINARES SOBRE DISEMINACIN DE INOCULO

3.5.1 Fuentes de inoculo. Este trabajo opcional, en cada localidad se realiz mnimo 2 veces al ao; se recolectaron muestras necrosadas de hojas, flores, tallos, pednculos y otros tejidos en los que se sospecha que sean causados por C. gloeosporioides, las cuales se llevaron al laboratorio, all se lavaron y colocaron en cmara hmeda y otros se sembraron directamente en AA y PDA, con el inoculo obtenido se realizaron inoculaciones sobre frutos de tomate de rbol en laboratorio, determinando as la presencia del patgeno y la existencia de otras fuentes de inoculo, diferentes a las tradicionales. 3.5.2 Diseminacin por insectos. Durante el ao se colectaron muestras de insectos especialmente, dpteros y Colepteros, los cuales viven asociados al sistema de produccin y que emplean los frutos afectados y en descomposicin para su multiplicacin. Estos insectos una vez

17

colectados se sometieron a lavado y agitacin en agua destilada, con el fin de dispensar el agua destilada sobre el medio PDA y someter a incubacin a 22 a las 48 horas se C; inici la evaluacin de las cajas para recuperar los crecimientos miceliales que se presentan y sembrarlos nuevamente en PDA para obtener cultivos puros y as identificar la poblacin de hongos y bacterias presentes. 3.5.3 Diseminacin por agua. Empleando recipientes plsticos pequeos, se recolect en pocas de invierno, agua de salpique y escurrimiento en diferentes estratos del rbol, para ser llevada al laboratorio, donde se dej decantar o se centrifug para concentrar la posible presencia de esporas o unidades formadoras de colonia all presentes; de estas muestras se sembraron en PDA 10 gotas en superficie; a las 48 horas se inici la evaluacin para identificar crecimientos iniciales para su recuperacin y pase a PDA para obtener cultivos puros y lograr su posterior clasificacin taxonmica, para confirmar el papel del agua en la diseminacin del patgeno.

3.6 PERIODOS DE INCUBACIN DE C. gloeosporioides EN FRUTOS DE TOMATE DE RBOL DE DIFERENTE EDAD

El estudio se realiz mediante dos pruebas, una en campo en la finca Tesorito vereda Malteria-Manizales y en el laboratorio de Corpoica, Regional 9. Se utilizaron dos clases de inoculo: Inoculo natural de C. gloeosporioides obtenido directamente de frutos enfermos en el campo e inoculo In Vitro obtenido de cepas puras, aisladas en PDA acidificado. Se prepar una suspensin con una concentracin de 1x 106 esporas/mi. Se utiliz un diseo completamente al azar con diez repeticiones (fruto /repeticin) tanto en campo como en laboratorio, correspondientes a cinco edades diferentes. Para la inoculacin, tanto en campo como en laboratorio se clasificaron los frutos de acuerdo a su edad (tamao), posteriormente se lavaron con agua destilada y con un marcador se seal una zona en la parte del fruto. En la zona demarcada se adheri una mota de algodn humedecida con la suspensin del inoculo, sin causar herida al fruto. Los frutos de la

18

prueba de laboratorio, luego de inoculados se colocaron en cmara hmeda y los frutos de la prueba en campo, se embolsaron por cinco das con mota de algodn humedecida para simular la cmara hmeda. Despus del quinto da y a partir de ste cada dos das se evalu la evolucin de los sntomas y signos de la enfermedad, segn la siguiente Escala: SIGNOS Y SNTOMAS Sano Decoloracin y/o Puntos aceitosos Hundimiento Necrosis incipiente Mancha necrtica Esporulacin Pudricin total GRADO O 1 2 3 4 5 6

3.7 DETERMINACIN DE LA EXISTENCIA DE INFECCIONES QUIESCENTES CAUSADAS POR C. gloeosporioides CAUSADAS EN FRUTOS DE TOMATE DE RBOL Como el objetivo principal fue determinar la posible existencia de infecciones quiescentes originadas por Colletotrichum gloeosporioides, fue necesario recolectar frutos aparentemente "sanos" en estado verde mediano a verde grande, de una plantacin con altos niveles de infeccin y sin ningn tratamiento qumico. Como testigo se utiliz frutos sanos provenientes de una plantacin joven y libre de la enfermedad. El estudio se realiz mediante dos pruebas, bajo un diseo completamente al azar con 8 tratamientos para la prueba 1 y 10 para la prueba 2. El nmero de repeticiones consisti de 16, cada una representada por un fruto de tomate. Los registros se sometieron al anlisis de varianza y prueba de Tukey. Las evaluaciones se hicieron con intervalos de 5 das entre ellas.

19

Las variables evaluadas fueron: Grado de quemazn y ubicacin de la lesin en cada fruto Consistencia de la quemazn Nmero de infecciones activadas de Colletotrchum Ubicacin y nmero de lesiones por fruto Tiempo en das para el desarrollo de las lesiones Para facilitar la toma de registros y anlisis se utilizaron las siguientes convenciones: Efecto quemante del tratamiento Calificacin de quemazn, as. O =No quemazn y 1= quemazn. Ubicacin de la quemazn, as: 1 = Pednculo, 2 = Zona de intercepcin y 3 = Cuerpo del fruto. Consistencia de la quemazn Calificada as. O = Fruto normal, 1 = Quemazn blanda seca y 2 = Quemazn blanda hmeda Ubicacin y nmero de lesiones de Colletotrchum por fruto Calificacin de ubicacin de sntomas, as: 1 = Pednculo, 2 = Zona de intercepcin y 3 = Cuerpo del fruto. Descripcin de las pruebas: Prueba 1. Se evalu productos con posible accin quemante sobre la superficie del fruto de tomate de rbol. En esta prueba se evaluaron varios productos con posible efecto quemante sobre la superficie del fruto, a los cuales se les hizo un lavado suave con agua y jabn. Los tratamientos utilizados fueron:

20

Tratamientos: T1. T2. T3. T4. T5. Gramoxone (Paraquat) al 10%, durante 15 minutos. Roundup (Glifosato) al 1%, durante 15 minutos y luego exposicin al sol durante 30 minutos. Gasolina al 100%, durante 15 minutos. cido actico al 3%, durante 15 minutos Fro (congelador) durante 6 horas

Testigo (1). Frutos "sanos" provenientes de rboles con alta incidencia de Antracnosis Testigo (2). Frutos "sanos" provenientes de rboles "sanos" Testigo (3). Frutos provenientes de rboles "sanos" inoculados (1*10-6 esp/ml)

Para los tratamientos 1, 2, 3, 4, 5 y Testigo (1), se utilizaron frutos "sanos" provenientes de una plantacin con alto nivel de infeccin por Antracnosis. Prueba 2. Evaluacin de diferentes tratamientos combinados para acelerar la existencia de infecciones quiescentes en frutos. Tratamientos: T1. T2. T3. T4. T5. T6. T7. Testigo (1) Lavado suave, Gramoxone (Paraquat) al 10%, durante 15 minutos y Fro (congelador) durante 6 horas. Lavado suave, Gramoxone (Paraquat) al 10%, durante 15 minutos Lavado suave, Gramoxone (Paraquat) al 10%, durante 15 minutos, Fro (congelador) durante 6 horas Lavado fuerte, Gramoxone (Paraquat) al 10%, durante 15 minutos, Fro (congelador) durante 6 horas Lavado suave, Gasolina al 100% Lavado suave, cido actico al 6%, durante 15 minutos Lavado suave, Gramoxone (Paraquat al 10% durante 15 minutos (mejor tratamiento-Prueba 1) T8. Testigo (2) Frutos "sanos" inoculados (1 x 10~6 esporas/mi)

21

T9. Testigo (3) Frutos "sanos" provenientes de rboles enfermos T 10-Testigo (4). Frutos "sanos" provenientes de una plantacin sin Antracnosis Los frutos de los tratamientos 2, 3, 4, 5 y 6, antes de ser sometidos a cmaras hmedas fueron tratados con benomil al 0.1% y cido lctico al 1%, con la finalidad de controlar hongos contaminantes como Fusarium o Penicillium. Como mtodo de inoculacin para los frutos sanos empleados en el tratamiento Testigo (2), se utiliz inoculo natural en aspersin, a una concentracin de 1x106 esporas/mi, sin causar herida a los frutos. Luego de aplicados los tratamientos todos los frutos se colocaron en cmara hmeda. El inoculo natural consisti en obtener directamente de los frutos enfermos esporas para preparar la suspensin de conidias.

3.8 ESTUDIOS DE LA INTERACCIN BIOLGICA DE MICROORGANISMOS CON C. gloesporioides

3.8.1 Aislamiento, identificacin y seleccin de microorganismos ms promisorios con propiedades antagonistas y sinergistas. Se tomaron muestras de hojas nuevas y viejas, frutos verde mediano, verde grande y maduro de 18 rboles que no han recibido tratamiento qumico. Se recolectaron en bolsas plsticas rotuladas y guardadas en neveras de icopor con hielo. Parte de estas muestras se guardaron por 10 das en nevera en bolsas selladas, como reserva. En el laboratorio se tom 1 g de las muestras (hojas o frutos), y se suspendieron en un tubo de ensayo con 10 mi de agua destilada estril, se agit a 2.500 r.p.m. por 10 minutos; y del sedimento tom 0.5 g para iniciar el proceso de siembra en Agar nutritivo (AN), papa dextrosa agar (PDA), papa dextrosa agar + cido lctico al 0.2% (PDA + cido), y Sabouraud y se incubaron a una temperatura de 24 por espacio de 5 das, realizando lecturas sucesivas cada 24 h. C 3.8.2 Muestreo e identificacin de sinergistas en frutos de tomate de rbol con Antracnosis Se tomaron muestras de los 18 rboles que no han tenido tratamiento qumico, recolectando 3 frutos por rbol con sntomas de Antracnosis y ablandamiento bacterial, con el fin de buscar organismos sinergistas que puedan estar acompaando al hongo. Las muestras se

22

colocaron en cmaras hmedas, debidamente desinfectadas, sobre una rejilla para sostener las muestras r y agua destilada estril para generar humedad, se tap la caja y se dej incubar a 17 durante 5 das. C Para clasificar e identificar debidamente las bacterias aisladas, fue necesario realizar algunas pruebas de caracterizacin que se describen a continuacin: Caractersticas microscpicas. Se observ color, forma, superficie y consistencia de cada colonia. Caractersticas microscpicas. Se determinaron algunas pruebas utilizadas en la caracterizacin. Posteriormente las cepas puras se inocularon en tubos con agar infusin cerebro corazn (BHI), y se guardaron a 17 esto con el fin de realizar trabajos de experimentacin C, posteriores. 3.8.3 Deteccin y aislamiento de Trchoderma a partir de frutos de tomate de rbol sanos colocados en un suelo cultivado con tomate de rbol Se colocaron 25 tomates de rbol de diferentes edades y se incubaron por 4 das en un sitio fresco evitando los rayos del sol; se sacaron los frutos y en el laboratorio se lavaron con agua corriente, con el fin de eliminar la tierra adherida. Se dejaron incubando por 2 das, a 24 al C, cabo de este tiempo se busc el desarrollo de un micelio blanco, el cual se sembr en papa dextrosa agar (PDA), con cido lctico al 0.2% y agar Sabouraud y se incubaron en una incubadora por espacio de 8 das realizando lecturas cada 24 h., a las colonias se determin caractersticas macro y microscpicas. 3.8.4 Aislamiento de Colletotrchum Para la obtencin de cepas de Colletotrchum, se escogieron frutos enfermos los cuales se empacaron en bolsas de plstico y se rotularon. Una vez identificados los microorganismos con sinergista o antagonista. El antagonismo se desarroll como se describi anteriormente, se sembraron igualmente cajas testigo (C. gloeosporoides)', se incubaron a 24 durante 18 das, realizando lecturas del crecimiento micelial de C. C gloeosporoides, cada 3 das. Para el caso de Trchodeiwa sp. se sembraron bloques iguales del C, gloeosporoides el cual se coloc en un extremo de las cajas a 4 cm de distancia sobre la lnea sembr el hongo

23
antagonista. Posteriormente se incubaron estas cajas a 24 por espacio de 18 das; C realizando lecturas del crecimiento micelial de C. gloeosporioides cada 3 das a partir del sexto da.

3.8.5 Experimento germinacin de conidias y formacin de apresnos sobre placas de vidrio In Vitro. Se utiliz la misma concentracin. Para la suspensin de C. Gloeosporioides, se tom conidias en 5 mi de agua destilada de cultivo de 10 das estril, en agua destilada y se centrifug a 2.500 r.p.m. por 3 minutos; se contaron las conidias y se ajust a una concentracin de 1x105 conidias/mi. Para el antagonista se prepar una suspensin de conidias tomando el cultivo de 8 das de edad con abundante esporulacin, el cual se mezcl y agit en 25 mi de agua destilada estril y se filtr a travs de una doble capa de gasa estril; se ajust a una concentracin de 1.5x106 conidias/mi. Los grupos 1 y 3 se prepararon en tubos de ensayo, se coloc 1 mi de la suspensin bacterial y 1 mi de la suspensin de conidias, se homogeneizaron, y luego se depositaron 50 uL de esta en un portaobjetos se mezclaron bien y se extendieron sobre una placa de vidrio; posteriormente se colocaron en cajas de plstico con tapa de 350 mi de capacidad que contena un papel de filtro y algodn humedecido con agua destilada estril con el fin de proporcionarle humedad a la placa; estas se almacenaron a 18 durante 24 h en un sitio C oscuro realizando lecturas a las 24 horas. Se tomaron 10 repeticiones y el estudise realiz en 100 conidias escogidas al azar, evalundose el dao, inhibicin y alteracin de la germinacin de las conidias de C. Gloeosporioides frente al testigo. Para evaluar el estmulo en germinacin y formacin de apresnos que ejerzan las bacterias sobre la germinacin de C. Gloeosporioides, se utiliz una concentracin bacteriana de 1 x 107 bacterias/mi. Para la suspensin de C. Gloeosporioides, se utiliz un cultivo de 10 das de edad procedente de un agar Sabouraud a 24 se tomaron sus conidias y se mezclaron C, con 5 mi de agua destilada estril, se filtr y se lavaron dos veces con agua destilada estril y se centrifug a 2.500 r.p.m. durante 3 minutos, se ajust a una concentracin de 5 x 105 conidias/mi, tomndose 25 L de la suspensin bacterial y 25 L de la suspensin de

24

conidias que se colocaron sobre un portaobjetos, se mezclaron bien y posteriormente se colocaron en cmara hmeda a 18 durante 24 h y 48 h. Se montaron 10 repeticiones y el C recuento se realiz en 100 conidias, evalundose el porcentaje de germinacin y la formacin de apresorios, se colore con azul de lactofenol con el fin de visualizar bien las estructuras. 3.9 CUANTIFICACIN DE MICROFLORA EN EL FILOPLANO DE TOMATE DE

RBOL 3.9.1 Seleccin de la muestra Se marcaron cuatro rboles en produccin, dos de los cuales tuvieran control qumico para el manejo de la enfermedad y los dos restantes sin control. Los rboles seleccionados fueron representativos del cultivo. Cada rbol se dividi en tercios, la copa del rbol, donde se identificaron y muestrearon brotes, ramas jvenes y hojas; la zona productiva del rbol se tom muestras de botones florales, flores, frutos y brotes vegetativos; en el mecnicas y naturales. De cada tronco se muestreo cicatrices de heridas se tomaron dos muestras rgano

independientes de tejido sano y dos de tejido enfermo, las cuales se llevaron al laboratorio para su respectivo anlisis. Las muestras se colectaron y transportaron al laboratorio, en bolsas individuales para evitar su contaminacin. 3.9.2 Aislamiento de microorganismos Para realizar el aislamiento de microorganismos, se extendi una capa de medio lquido Agar - Agua, sobre el tejido de la planta a estudiar; una vez condensado el medio se tom 4 Cuadros de 5 mm de dimetro, para ser depositados en cajas de petri, con medio PDA (papa, dextrosa, agar), en el que hongos, bacterias y levaduras se logran desarrollar. 3.9.3 Incubacin y evaluacin Las muestras en medio de cultivo permanecieron en observacin, iniciando las lecturas del nmero de colonias a los 5 das despus de la inoculacin, las cuales fueron

25

cuantificadas, determinando el tipo de organismo u organismos existentes en cada caja de petri. Todas las colonias diferentes que se desarrollaron se purificaron en medio de cultivo, para posteriormente ser pasadas a tubos de ensayo para su preservacin, coleccin y posterior identificacin taxonmica en el laboratorio y el Banco Nacional de Cepas del Programa MIP de CORPOICA. Purificados los aislamientos se procedi a realizar su identificacin, por medio de la observacin de estructuras reproductivas de los microorganismos al microscopio y utilizando las claves taxonmicas de Barnet y Hunter, 1972. Los microorganismos que no desarrollaron estructuras se pasaron a microcultivo, en los que se propici la generacin de dichas estructuras lo que permiti su identificacin. 3.9.4 Pruebas de Antagonismo Se realizaron pruebas de antagonismo In Vitro, entre Colletotrchum gloeosporioides y cada uno de los organismos colectados, para lo cual se sembraron en caja de petri con PDA acidificado, discos de agar de 5 mm de dimetro con micelio de cada hongo; en el caso de las bacterias estas se sembraron tomando una azada y distribuyndolas longitudinalmente frente a C. Gloeosporioides. Las evaluaciones midieron y registraron el radio de crecimiento de los dos organismos, estableciendo as la capacidad de inhibicin del posible antagonista sobre el crecimiento de Colletotrchum gloeosporoides y as seleccionar microorganismos con algn grado de antagonismo; para ello realizaron nuevas pruebas de antagonismo que confirmaron con mayor exactitud, los potenciales antagonistas, en estos casos al momento de realizar los antagonismos se sembr tambin en forma alslada el patgeno, para comparar los crecimientos solos y en competencia. Para determinar el porcentaje de antagonismo se empleo la siguiente frmula, en cada uno de los organismos seleccionados. Cp - Cpa % de Antagonismo ---------------------- x 100, en donde

26

Cp: Crecimiento micelial del patgeno aislado (radio) Cpa: Crecimiento micelial del patgeno en antagonismo (radio)

Los microorganismos seleccionados sern utilizados en posteriores pruebas en condiciones controladas inicialmente y luego en campo, con el propsito de generar una alternativa o control biolgico de la antracnoss. 3.10 AVANCES EN EL CONTROL DE LA ANTRACNOSIS MEDIANTE LA APLICACIN DE FUNGICIDAS PROTECTANTES Y PODA FITOSANITARIA Este trabajo se llev a cabo en el municipio de Manizales, Finca Tesorito. Se trabaj en un lote sembrado con la variedad "Tamarillo" de 2.5 aos edad en distancias de siembra de2.5mx2.5m. 3.10.1 Se utiliz un diseo en Bloques al Azar con 3 repeticiones y 6 tratamientos. Cada parcela const de 24 rboles, seleccionando 8 rboles centrales para la toma de informacin. La unidad experimental tuvo un rea de 10 x 11 m (110m2). Los tratamientos a evaluados se basaron en la realizacin de algunas prcticas agronmicas que involucraron un Manejo de la Antracnoss del tomate de rbol. 3.10.2 Descripcin de tratamientos Fase I. La aplicacin de fungicidas se realiz mediante el criterio de umbral de decisin, que consisti en una evaluacin cada 2 semanas en cada tratamiento. Cuando el porcentaje de frutos cosechados por tratamiento superaba el 11% de infeccin se decida la aplicacin, de lo contrario se seguan realizando las prcticas culturales de acuerdo a los tratamientos. La evaluacin
* TRATAMIENTOS:

Tratamiento 1. Prcticas realizadas por el agricultor para el manejo de la Antracnoss, aplicaciones de mancozeb (3.5g / L de agua) en los perodos lluviosos, se realizaron cada

27

semana y en los perodos secos cada dos semanas. No se realiz la poda de partes enfermas. En los tratamientos nmero 2 y 3 se utilizaron los fungicidas mancozeb (3.5g / L de agua) y benomil (0.5g / L de agua) respectivamente. La aplicacin de estos se realiz teniendo en cuenta el umbral de decisin del 11%. El tratamiento nmero 4 consisti en realizar una rotacin con mancozeb (3.5g / L de agua) y benomil (0.5g / L de agua). Este se empez con mancozeb, cuando el umbral de decisin as lo indic, seguido de benomil y as sucesivamente en forma alterna. En el tratamiento 5 se utiliz el fungicida citrofun (1.5cc / L de agua) cada semana en perodos lluviosos y cada 2 semanas en perodos secos.

El tratamiento nmero 6, consisti en un testigo absoluto, no se aplic ningn fungicida y no se realiz ninguna prctica cultural.

En los tratamientos 4 y 5 se utiliz mezcla de dos fungicidas, mancozeb y clorotalonil, con Hidrxido cprico, dado que este ltimo tiene efecto bactericida que podra contrarrestar la accin sinergista de bacterias del tipo Pseudomonas, con Colletotrchum. En todos los tratamientos la recoleccin de frutos sanos para su comercializacin, se realiz cada dos semanas. La poda de partes enfermas se llev a cabo cada 4 semanas, con excepcin de los tratamientos nmero 1 y 6. Y la recoleccin de frutos enfermos de los rboles y del suelo cada 2 semanas, retirndolos de la plantacin. 3.10.3 Descripcin de tratamientos Fase II. La aplicacin de fungicidas se realiz mediante umbral de decisin. Cuando el porcentaje de frutos cosechados por tratamientos superaba el 11% de infeccin se aplic, de lo contrario se seguan realizando las prcticas culturales de acuerdo a los tratamientos. TRATAMIENTOS: El tratamiento 1 consisti en la aplicacin del fungicida mancozeb fw (6.5cc / L de agua) en frecuencia semanal. Remocin y cosecha cada 2 semanas

28

En los tratamientos nmero 2, 3 y 4 se utilizaron los fungicidas mancozeb fw (6.5cc / L de agua) e Hidrxido cprico (7g / L de agua) respectivamente. La aplicacin se realiz con umbral del 11. La remocin y la cosecha cada semana.

En el tratamiento 5 consisti en realizar una mezcla con clorotalonil (6.5cc / L de agua) e Hidrxido cprico (7g / L de agua), aplicacin con umbral del 11%. Prcticas y frecuencias igual que en los tratamientos nmero 2 y 3.

El tratamiento 6, consisti en realizar una rotacin con clorotalonil (6.5cc / L de agua) y mancozeb (3.5g / L de agua), empez con mancozeb y umbral seguido de clorotalonil y as sucesivamente. FERTILIZACIN: Se realizaron dos aplicaciones de gallinaza (1 kg / rbol) una por cada semestre. Dos aplicaciones de fertilizante grado 15-15-15 (150g / rbol) una por cada semestre. Dos aplicaciones de nitrato de potasio en forma foliar al 0.02%. MANEJO DE MALEZAS: Se realiz un manejo de malezas conservando- una cobertura de 10 - 15cm. Se manejaron intercalando el machete y herbicidas (glifosato y Paraquat). El plato fue manejado con herbicidas para no maltratar las races y tronco. MANEJO DE OTRAS ENFERMEDADES E INSECTOS, PLAGAS: Se realiz un monitoreo peridico del lote con el fin de identificarlos. En perodos secos se realizaron dos aplicaciones de insecticida sistmico (Sistemin) para manejar las altas poblaciones de fidos que se presentaron.

3.10.4 Variable a evaluar Incidencia y Desarrollo de la Enfermedad y Nmero de frutos afectados por Colletotrichum. Semanalmente se registraron datos de precipitacin, temperatura y humedad relativa. 3.10.5 Anlisis Econmico y Estadstico. Se registraron los datos de los costos en los diferentes tratamientos. Se determinaron los costos fijos y los costos variables y, se estim la relacin para las diversas labores

29

dentro de cada uno de los tratamientos. Se realiz anlisis de varianza y pruebas de TUKEY.

3.11 EVALUACIN DE ALTERNATIVAS PARA MANEJO DE LA ANTRACNOSIS

Este ensayo se llev a cabo en Silvania(Cundinamarca) y Manizales(Caldas). En este trabajo se evalu la posibilidad de recuperar cultivos, mejorar las condiciones de manejo de la enfermedad y el cultivo, los lotes a seleccionar deban tener una buena arquitectura y sanidad a nivel radical para soportar con xito ciertos tratamientos y edad superior a 2 aos para evaluar la posibilidad de extender la vida til del cultivo, que actualmente es muy corta (menos de tres aos). Los tratamientos a evaluar en Silvania, Cundinamarca, fueron: 1. Manejo del agricultor ms limpieza del rbol y aplicacin de manzate y clorotalonil calendario. 2. Remocin total de fruta (reduccin total de inoculo), poda fitosanitaria y de produccin para mejorar la capacidad productiva del rbol, aplicacin de fungicidas manzate y clorotalonil con umbral de infeccin de 10%. 3. Remocin total de copa a nivel de ramas secundarias y terciarias, proteccin de cortes con pasta cicatrizante y aplicacin de fungicidas manzate y clorotalonil con umbral de 10%. Para fertilizar se realiz anlisis de suelo en todos los tratamientos, encalamiento por acidez y tratamiento qumico al cuello de la raz por incidencia de Phytophthora, estimulada por el mal manejo de la materia orgnica (gallinaza) en Cundinamarca. Las evaluaciones sanitarias se realizaron semanalmente y la cosecha cada 15 a 20 das de acuerdo al productor. Evaluaciones: Semanalmente Recoleccin y enterrado de frutos enfermos, discriminando por edad y sitio lesin

30

Determinacin de umbral de infeccin para aplicar o no. Evaluacin de frutos sanos cada 15 o 20 das, segn agricultor

El tamao de parcela fue de 20 a 25 rboles por tratamiento, dependiendo de las posibilidades y oferta del productor, no se utiliz diseo alguno, por cuanto se consider como una prueba de validacin y ajuste. En Manizales se realizaron algunas modificaciones en los tratamientos que vale la pena mencionar. Los tratamientos fueron: Tratamientos: Tratamiento A. Subparcela A1. rboles testigo con remocin de frutos enfermos y sanos cada emana. Subparcela A2. rboles con aplicacin de fungicidas y remocin de frutos enfermos y sanos cada semana. Tratamiento B. Subparcela B1. Remocin previa de todos los frutos del rbol (sanos y enfermos), luego remocin semanal de frutos enfermos cada semana. Subparcela B2. Igual a la subparceta 61, pero con aplicacin de fungicidas Tratamiento C. Subparcela C1. Renovacin total de follaje con poda a rama terciaria (poda candelabro). Posteriormente remocin de frutos enfermos y sanos cada semana. Subparcela C2. Igual a la subparcela C1, pero con aplicacin de fungicidas En las subparcela con manejo qumico se aplic la siguiente metodologa. En todas se aplic mancozeb 6.5 cc/L en rotacin con clorotalonil 6.5 cc/L, bajo el siguiente esquema semanal: Se inicia con mancozeb; a la semana siguiente se repite mancozeb; luego

31

clorotalonil; a la semana siguiente descanso, volvindose a repetir el ciclo en el siguiente periodo. Variable: No. De frutos enfermos discrimados por tamao cada semana. Ubicacin del sntoma (Z. Peduncular, Z. Media y apice) Frutos sanos Fluoracin en cuatro rboles y en 4 ramas por rbol cada 15 das. Nota: La fertilizacin, control de malezas e insectos se realiza oportunamente.

32

IV. LOGRO DEL OBJETIVO GENERAL

El objetivo principal del proyecto fue desarrollar una o varias alternativa de manejo de la antracnoss que sean ms eficiente y en lo posible ms econmicas y sostenibles que las actualmente utilizadas por los productores; todos los trabajos desarrollados apuntaron hacia este objetivo y es as como se logr finalmente llegar a la conclusin de que s es posible manejar el problema desde otra perspectiva. En este orden de ideas, se han obtenido resultados importantes en cuanto a la planta y su comportamiento fenolgico o de crecimiento vegetativo y reproductivo, algunos aspectos bsicos de la biologa del patgeno y el clima; algunos de estos resultados son: LA PLANTA: Los trabajos realizados demuestran una relacin directa con los factores del clima, en especial con la precipitacin y humedad relativa. Aunque presenta un crecimiento permanente durante el ao, se presentan picos de crecimiento vegetativo y de cosecha. Se ha confirmado la capacidad de recuperacin de la planta, ya que responde muy bien y pronto a prcticas de poda y renovacin, esto conduce a plantear cmo estas prcticas podran contribuir a prolongar la vida productiva del cultivo ms all de los 3 aos que hoy presenta por las deficiencias del sistema. El rbol presenta una gran eficiencia productiva ya que durante el ao puede formar en promedio 700 frutos rbol/ao, equivalente a ms o menos 65 docenas, capacidad que se est perdiendo por las prcticas actuales deficientes. Colletotrchum gloeosporoides: como especie presenta regionalmente una alta variabilidad que se expresa en diferencias entre aislamientos en patogenicidad, el abuso de los productos qumicos puede estar induciendo un proceso de seleccin convergente hacia cepas ms patognicas lo que dificultar el manejo. En cuanto al inoculo el obtenido de campo es superior al de laboratorio en patogenicidad, no se requiere hacer heridas en frutos para causar infeccin; se caracteriz la microflora asociada de carcter sinergista (promueven germinacin y formacin de apresorio) y antagonista con potencial para usarlas en control biolgico del patgeno, se identific como la poblacin de microorganismos asociada al cultivo es mayor en rboles no tratados con qumicos y

en el invierno, se estableci una coleccin de potencales antagonistas; se confirmo la presencia de infecciones quiescentes(latentes) en frutos de tomate de cualquier edad con duracin superior a dos meses, debern tenerse en cuenta para la interpretacin de la correlacin clima enfermedad. Es un microorganismo muy veloz en formar estructuras reproductivas, dificultndose su control pues predomina la fruta esporulada durante el invierno (Figura 1). ENFERMEDAD: Presenta su mayor explosin hacia finales de los perodos de invierno, con picos intermedios importantes relacionados con semanas anteriores de ms de 5 das con precipitacin continua. Es afectada drsticamente por el verano. A travs del ao presento una variacin en la presencia de sntomas, los frutos en edad intermedia son los que ms se enferman y presentan mayor cantidad de esporulacin. Se encontr que la sola remocin de frutos enfermos una y dos veces por semana no es eficiente para el control de la enfermedad, esto indica que existen otras fuentes de infeccin que contribuyen a la epidemia y que esta prctica debe ser complementaria a otras de control entre las cuales est el qumico. Presenta una estrecha concomitancia con las fases vegetativas y reproductivas del rbol y la precipitacin. CONTROL: El manejo de la enfermedad requiere de productos qumicos; referente a este punto tanto los trabajos de manejo integrado realizados en Cundinamarca como en Manizales incluyendo control qumico, las mejores respuestas se encontraron con los ingredientes activos mancozeb solo y en rotacin con clorotalonil, sin embargo, para que las prcticas de manejo den resultados satisfactorios es condicin "sin ecuanon", el manejo del rbol con mayor nfasis en la reduccin de altura del mismo. Como se ha confirmado la presencia de inoculo en el follaje, se requiere tambin de un manejo estricto de la sanidad del mismo, en este caso con productos qumicos de carcter sistmico. Se estableci como principio para la aplicacin de fungicidas el umbral de infeccin igual o superior al 11%, determinado sobre la poblacin del lote. En este orden de ideas, consideramos que el manejo integrado de la antracnoss del tomate de rbol, es el resultado de integrar en forma dinmica todos los aportes de la investigacin y las siguientes recomendaciones de orden agronmico y fitosanitario, que

34

Figura 1. la variabilidad ms importante del patgeno est en la patogenicidad en el desarrollo de sntomas y capacidad destructiva y esporulante, se han generado como producto de los diferentes trabajos, tales prcticas son complementarias y desde luego: NINGUNA SUSTITUYE A LA OTRA. DEBEN REALIZARSE ESTRICTAMENTE. Manejo Integrado de la Enfermedad El manejo de la enfermedad se basa fundamentalmente en el manejo del INOCULO a travs del tiempo, de tal manera que se reduzca en nmero como en efectividad expresada en nuevas infecciones de tejidos en la planta; con ese propsito el manejo de una serie de componentes de la planta y el patgeno, de manera cclica y peridica en el tiempo y en el espacio, debern constituirse en herramienta eficiente para un manejo ms sostenible del tomate.

35

A. Control Cultural. El manejo preventivo de la enfermedad debe tener en cuenta las siguientes prcticas agronmicas: Seleccin de zonas aptas para el cultivo, evitando la instalacin de proyectos en regiones que se caractericen por prolongados perodos de lluvia, alta humedad relativa, adems de frecuente y excesiva nubosidad. Distancia de siembra: Utilizar distancias de siembra que originen poblaciones entre 1.000 y 1. 400 plantas/ha, preferiblemente en arreglos asimtricos (3 x 2.50 m) para facilitar el manejo y la aireacin del cultivo, incluya el uso de drenajes independiente de la topografa, si se encharca o por mal drenaje. Utilizar semilla de buena calidad, seleccionada de rboles buenos productores y especialmente libres de virus. Al momento de sembrar incorporar materia orgnica y aplicarla en forma peridica separada del tronco del rbol para evitar daos al cuello que facilitan la entrada de patgenos como Phytophthora y de bacterias como Pseudomonas, establecer, adems, un buen programa de fertilizacin edfica y foliar, incluyendo elementos menores (hacer uso del anlisis de suelo). Realizar la poda de formacin en el momento oportuno para obtener plantas de porte bajo, que facilitarn el manejo posterior de la enfermedad. La primera poda de formacin se debe realizar a una altura entre 40-70 centmetros, seleccione solo tres rebrotes por planta. Posteriormente realizar una nueva seleccin de rebrotes secundarios para formar una buena arquitectura del rbol, bien balanceada, eliminando los brotes que se dirigen al centro del rbol. Realizar semanalmente rondas sanitarias al comenzar la formacin de frutos del primer ciclo de cosecha, para determinar la presencia de antracnosis en forma oportuna y retardar su dispersin.

36

 Efectuar podas de mantenimiento despus de cada pico de cosecha regulando especialmente la altura del rbol a un mximo de 2.5 m, Eliminando chupones, ramas entrecruzadas, especialmente aquellas que se dirigen hacia el interior del rbol, para facilitar la aireacin y visualizacin de los frutos enfermos y sanos. Efectuar podas sanitarias cada tres meses, eliminando especialmente hojas, ramas, residuos de inflorescencias y brotes secos, para reducir las fuentes ocultas de inoculo. Una vez establecida la enfermedad, la prctica de remocin y enterrado de fruta enferma debe ser complementaria a las otras prcticas de control, con periodicidad no mayor a dos semanas (Figura 2). Realizar cosechas frecuentes de frutos sanos, no dejando sobremadurar los frutos, para evitar activacin de infecciones latentes. En el caso de frutos morados y maduros enfermos, dado que la enfermedad no afecta la pulpa del fruto, se recomienda no enterrarlos sino aprovecharlos en la elaboracin de pulpas en forma artesanal, las cuales pueden ser comercializadas.

Figura 2. Recoleccin y enterrado de frutos enfermos. Esta prctica debe tener una periodicidad semanal o cada 2 semanas.

37

B. Control qumico. En la actualidad para el manejo de esta enfermedad se ha comprobado que es necesario el uso de fungicidas. El control qumico debe ser muy estricto y cuidadoso, especialmente en las pocas de mayor floracin y cuajamiento de frutos; utilice equipos de bajo volumen, buscando una mejor cobertura y eficiencia del producto y disminuir el uso excesivo de agua. Los mejores tratamientos qumicos que resultaron de la investigacin en Epidemiologa y manejo de esta enfermedad fueron: Teniendo en cuenta que las fuentes primarias y ms permanentes de inoculo se localizan en las hojas, residuos de la floracin y cosecha, es necesario proteger el follaje del rbol en una forma integral. Para lograrlo se recomienda realizar durante los perodos de invierno y especialmente en las pocas de mayor floracin aplicacin de fungicidas sistmicos a base de benomil o Difenoconazol, cada dos meses en rotacin (Figura 3). Mancozeb. 6.5 ce/litro, en rotacin con clorotalonil, 6.5 ce/litro; aplicar cuando el nivel de incidencia(umbral) de la enfermedad por lote sea igual superior al 1 1 % de infeccin. Este debe ser evaluado cada 2 semanas para decidir si se aplica o no. El manejo del umbral de infeccin debe ser aplicado siempre y cuando el agricultor tenga y maneje el follaje en forma permanente, si no el riesgo de infeccin es muy alto por el inoculo presente en hojas, ramas, etc. Mancozeb en rotacin con clorotalonil, en aplicaciones tipo calendario, espaciadas cada dos semanas. En ocasiones la enfermedad alcanza niveles epidmicos graves y permanentes, si el cultivo presenta rboles libres de virus y un sistema radical sano, es posible recuperar la plantacin y volverla nuevamente productiva, mediante la combinacin de los siguientes mtodos de rehabilitacin, que se deben aplicar en forma individual a todo el cultivo.

38

Figura 3. El establecimiento de cultivos de altura superior a 4 metros, va en contra de un manejo adecuado y eficiente de la fruta enferma (remocin) y del control qumico. A. Eliminacin total de frutos: Este mtodo es aplicable en rboles que posean un porte bajo, una aceptable arquitectura y un follaje y raz en buen estado. Remocin de todos los frutos presentes en el rbol Hacer inmediatamente una poda de mantenimiento para reducir la altura del rbol a 2.5 metros y poda sanitaria. Hacer un programa de fertilizacin, iniciando con aplicacin de materia orgnica y elementos menores (segn anlisis de suelo). 39

Posteriormente sanear y proteger el follaje, empleando fungicidas sistmicos en rotacin.

Iniciar el ciclo de proteccin a los frutos con cualquiera de los tratamientos antes mencionados, aplicando los fungicidas con umbral del 11%, evaluando la infeccin cada dos semanas.

B. Renovacin de copa y races. Este mtodo se debe emplear en rboles que presentan alturas exageradas, mala arquitectura y/o un follaje deteriorado por insectos, antracnoss y otras enfermedades, pero libres de virus y problemas bacteriales. Eliminacin de todo el follaje de la planta, haciendo los cortes a nivel de rama secundaria o terciaria(poda candelabro. Proteger los cortes gruesos con pasta cicatrizante (Figura 4).

Figura 4. Prctica de renovacin de copa y brotacin despus de 4 semanas. Obsrvese la proteccin de los cortes con pasta cicatrizante.

40

Realizar poda de races en crculo, a 50-60 cm del cuello del rbol a una profundidad de 15-20 cm, con paln.

Aplicacin inmediata de materia orgnica para estimular nueva emisin de races y establecer un programa definido de fertilizacin.

Despus de dos a tres meses de realizada la poda de follaje, se debe proteger los rebrotes empleando preferiblemente fungicidas sistmicos cada dos meses en rotacin, si se comprueba la presencia de plagas se aplican insecticidas.

Una vez se inicie la floracin y cuajamiento de los frutos, hecho que se produce luego de cuatro meses de realizada la poda, se deben iniciar las aplicaciones de fungicidas, para proteccin de los frutos, utilizando cualquiera de los tratamientos mencionados anteriormente.

Nota: Estos tratamientos de rehabilitacin se recomiendan hacerlos en las pocas de verano.

41

V. LOGRO DEL OBJETIVO ESPECFICO: CONTRIBUIR A UN MAYOR CONOCIMIENTO DE LA BIOLOGA DEL PATGENO MEDIANTE ESTUDIOS DE LABORATORIO Y CAMPO.

En trminos generales se logr desarrollar en su totalidad este objetivo correspondiente al estudio de la biologa del patgeno, en especial su caracterizacin morfolgica macro y microscpica, evaluacin del tamao de conidia; se establecieron pruebas de compatibilidad somtica, pruebas de variabilidad patognica con base en tres variedades de tomate y diversos aislamientos del patgeno y finalmente se desarrollo una prueba de caracterizacin molecular del hongo, ante los resultados de la morfologa y patogenicidad. Los logros ms importantes tienen que ver con los siguientes aspectos: 5.1 MORFOLOGA Se confirm en trminos generales que la poblacin muestreada del hongo corresponde a la especie Colletotrichum gloeosporoides, pero dado el sesgo de la muestra y lo escaso de la misma, tanto en nmero por regin como nmero de regiones no se puede afirmar categricamente que solo se presente esta especie. Los diferentes trabajos de caracterizacin morfolgica realizados en la coleccin de 45 aislamientos del patgeno, adems de confirmar la morfologa tpica de la especie, indican de manera muy parcial la existencia de una variabilidad parcial en los caracteres evaluados, por el tamao de muestra. Se present mayor variabilidad en el tamao de conidia, por lo que se lleg a la conjetura de indicar en primer lugar la existencia de mnimo tres especies (gloeosporioides, acutatum y destructivum). Loas estudios de compatibilidad somtica confirmaron la variabilidad entre algunos aislamientos, identificada como incompatibilidad expresada como la no-combinacin de micelios, confirmndose la variacin identificada antes. La patogenicidad de la coleccin, identific tambin una muy amplia variabilidad patognica, expresada en tasas diferenciales de infeccin y en severidad de la lesin dentro y entre variedades de tomate de rbol, utilizadas en la prueba indicio de una

variacin a nivel de ecotipos o razas del patgeno, o de un proceso de seleccin intraespecfica, que nos indujo a la realizacin del estudio molecular. El estudio molecular estandariz una metodologa de extraccin y purificacin de ADN que no se tena, confirm que las cepas pertenecen a C. Gloeosporoides y se encontr polimorfismo, lo que indicara en primera instancia la existencia de diversidad gentica entre los aislamientos provenientes de un mismo departamento y entre los aislamientos de la misma especie, no obstante los aislamientos comparten desde el 50% hasta el 70% de similitud, es decir, no constituyen grupos genticamente homogneos, sin embargo, debido al muestreo incompleto y al nmero de "primers" quiz incompleto, no se puede establecer claramente si los procesos de seleccin son divergentes o convergentes, y a su vez si las caractersticas morfolgicas y patognicas de virulencia analizados han sido o no sometidos a alguna presin de seleccin, circunstancia que se considera posible por el tiempo que lleva el cultivo, ms de 20 aos y la dependencia del control qumico para contrarrestar los efectos cada vez ms devastadores de la enfermedad; tambin se debe tomar en cuenta que el ciclo productivo del rbol ha disminuido significativamente por causa de la enfermedad en ms de 2 aos. RESULTADOS DEL ESTUDIO BIOLGICO 5.1.1 Caractersticas de la colonia. La forma tpica de la colonia de los 45 aislamientos fue radial, con bordes enteros; el color un 76.9% de los aislamientos, present tonalidades salmn rosado, El 10.2% de los aislamientos colonias crema, otro 10.2% present color verde y solamente un 2.5% de las cepas fueron color blanco, hacindose ms evidente con la edad del cultivo (Figura 5). El color de las colonias es caracterstico del gnero Colletotrichum de acuerdo con Simmons(1965), aunque Adaskaven y Hartin (1997) indican que la morfologa de la colonia de C. gloeosporoides vara dependiendo del medio o sustrato y de las variaciones de temperatura. El micelio de todos los aislamientos es esponjoso y denso, present una variacin de blanco (79.4%) a crema (21.5%). En cuanto a la cantidad de esporulacin observada "in Vitro", el 76.9% de las cepas present esporulacin escasa y un 23.1% abundante. 43

Figura 5. Variacin porcentual en el color de la colonia de C. Gloeosporioides. 5.1.2 Caractersticas de la Conidia. Las 45 cepas presentaron conidias entre ovoide, cilndrica y fusiforme, algunas con una ligera constriccin; su citoplasma es uniforme observndose en algunos casos una vacuola de gran tamao; sus dimensiones presentaron diferencias altamente significativas que evidencian de alguna manera variaciones intra o interespecficas, de acuerdo con los criterios establecidos por Simmons (1965) y O'Neill (1996) para diferenciacin de especies dentro de este gnero, estos investigadores plantean para C. gloeosporioides rangos de longitud de conidias entre 9.8 y 18.2 mieras y un ancho entre 2.2 a 4.0 mieras, dato que confirma la uniformidad de los aislamientos dentro de esta especie. La longitud de las conidias vari desde 8.49m a 14.36m. La mayor longitud promedio la present el aislamiento C-41 proveniente de Popayn y la menor, los aislamientos C43 y C-21 provenientes de Suba y San Luis (Cundinamarca). Para la longitud de conidia se encontr un promedio total de 9.77 y un coeficiente de variacin de 1.16%, con diferencias altamente significativas entre los aislamientos, lo que indica que al considerar la magnitud de esta medida exista una variabilidad consistente dentro de la coleccin de trabajo (Tabla 1).

44

El ancho de las conidias vari entre 2.5m y 3.97m, con un promedio de 2.61 m. Las conidias del aislamiento C-6 proveniente de Fusagasug y C-52 del Banco de cepas del MIP presentaron el mayor promedio con 3.52m y 3.50m respectivamente; el menor promedio fue para los aislamientos C- 17 y C-18 provenientes de Manizales y Bucaramanga con 2.08m y 2.1um. Se observ una amplia variabilidad en tamao y Tabla 1. Anlisis de varianza para morfolgica. las variables utilizadas en la caracterizacin
Cuadrados Medios Dimetro 0.03** 1.02ns 0.03 2.46 7.68 Largo conidia 0.006** 4.68ns 0.01 9.77 1.16 Ancho Conidia 0.006** 0.62ns 0.01 2.61 3.86 T. crecim. Da 0.0003** 0.004ns 0.03 0.14 14.94

FdeV.
Tratamiento Repeticin Error Exp. Promedio V. C. Variacin

** Diferencia altamente significativa (P<0.01) ns hay diferencia significativa (P>0.05)

aunque algunos autores como Simmons (1965), Holliday (1995) y O'Neill (1996) afirman que se podran identificar aislamientos por tamao, Adaskaveg y Martn (1997) dicen que sta no es una base slida de caracterizacin. 5.1.3 Curva y Tasa de crecimiento. Con base en la curva de crecimiento en PDA evaluada hasta 12 das despus se determin la tasa de crecimiento de los diferentes aislamientos, establecindose tres grupos: el G1 conformado por aislamientos provenientes de Cundinamarca y Quindo, los cuales presentaron un promedio que oscil entre 1.02mm y 2.30 mm, y una tasa de crecimiento diario entre 0.1Q-0.12mm. El G2 conformado por aislamientos provenientes de Cundinamarca, Quindio y Santander con un crecimiento total que vari entre 2.31 mm y 2.83 mm, con una tasa de crecimiento diario de 0.13 mm a 0.19 mm y el tercer grupo G3 conformado por aislamientos provenientes de Cauca, Antioquia y Quindio, con un promedio total de crecimiento que oscil entre 2.93 mm y 4.45 mm, con una tasa de

45

crecimiento diario de 0.19 a 0.27mm. El promedio para todos los aislamientos fue de 0.14 mm (Figura 6).

Figura 6. Crecimiento de los aislamientos de C. Gloeosporioides en evaluacin. 5.1.4 Compatibilidad Somtica. En el estudio se estableci que aunque todos los aislamientos tienen el mismo origen vegetativo, los enfrentamientos realizados mostraron algunos caractersticas similares en cuanto al tipo de micelio formando y denominado la "masa salvaje" producto de la anastomosis hifal; otros aislamientos mostraron incompatibilidad expresada como la nocombinacin de micelios, lo que nos indica en primer lugar una variacin intraespecfica, que se podra estar expresando a nivel de ecotipos, patovares o razas que aun no conocemos y para la cual se tendra que englobar toda la variabilidad posible, representada en todos los grupos de compatibilidad que puedan establecerse entre aislamientos de diferente origen. Dicha compatibilidad vegetativa ha sido empleada para establecer la variabilidad gentica existente en hongos imperfectos encontrndose que los aislamientos compatibles, con capacidad de anastomosarse y formar heterocariontes estables, con

46

caractersticas similares como el tamao de la colonia, la produccin de antibiticos, los patrones de isoenzimas y la virulencia (Anagnostakis, 1982; Bosland y Williams, 1987). A pesar de que esta prueba ha mostrado ser una herramienta til para la caracterizacin de la diversidad entre aislamientos de otras especies, en et caso de C. gloeosporioides no se pudo diferenciar entre aislamientos ya que parece que existe un origen vegetativo comn entre ellos. 5.2 CARACTERIZACIN MOLECULAR 5.2.1 Estandarizacin del protocolo de extraccin de ADN de Colletotrichum gloeosporioides. Teniendo en cuenta la semejanza en caractersticas culturales y de localidad se seleccionaron un grupo de 12 aislamientos incluyendo la cepa de referencia para realizar los siguientes estudios. La cuantificacin arroj concentraciones de ADN en un rango amplio comprendido entre 39 y 273 ng/ul. En el caso particular de las cepas C-27 y C-42 siempre presentaron concentraciones bajas, lo que las hace diferentes para esta caracterstica. Luego de obtener el protocolo base, se realiz la extraccin del ADN del grupo de los aislamientos seleccionados, los cuales se visualizaron en un gel de agarosa al 0.8% para observar su calidad, y se cuantificaron para establecer su concentracin. 5.2.2 Diagnstico molecular para C. Gloeosporioides. La diagnosis molecular se realiz con los 12 aislamientos seleccionados. El total arroj resultados positivos para C. gloeosporioides. La necesidad de una tcnica que soporte la identificacin confiable de C. gloeosporioides es importante, puesto que en algunos casos se pueden aislar especies cercanas como C. acutatum, con alta semejanza morfolgica y cultural, cuya diferencia con las conidias de C. gloeosporioides es un pequeo aumento de tamao (O'Neill 1996); ello corrobora la importancia del mtodo de diagnostico molecular realizado.

47

5.2.3 Amplificacin al azar con iniciadores polimorficos (RAPDs). El anlisis RAPDs se realiz empleando cinco iniciadores, obtenindose 60 bandas, con un promedio de 12 bandas por cada iniciador. El nmero total de bandas estuvo en un rango entre 75 y 738pb. Los datos obtenidos de los bandeos entre los pesos ya mencionados fueron usados en el anlisis siendo adecuados para determinar las relaciones genticas entre los doce aislamientos en estudio. De los cinco "primers" utilizados el OPA 2 gener mayor nmero de bandas polimrficas legibles. Estos informes son corroborados con los estudios realizados por Munaut et al, (1998), los cuales establecieron relaciones genticas de aislamientos de C. gloeosporoides en Stylosantes en frica y Australia, utilizando el mismo oligonucletido. En ambos estudios se presume un polimorfismo parcial asociado con el origen geogrfico de los aislamientos, y el nmero pequeo de aislamientos utilizados, ya que dentro del dendograma se encuentran ramas de aislamientos de diferentes municipios. Realizada la totalidad de reacciones, se elabor la matriz primara de datos, de la cual se parti para realizar el anlisis estadstico. El polimorfismo obtenido producto de los RAPDs, es un tanto inespecfica, debido a que se desconoce el sitio de amplificacin de los fragmentos de ADN molde y sus secuencias. En esta prueba se pudo observar polimorfismos, lo que indicara en primera instancia la existencia de diversidad gentica entre los aislamientos provenientes de un mismo departamento y entre los aislamientos de la misma especie (Figura 7 y figura 8).

Figura 7. Electroforesis del oligo OPA-2. En el carril 1 marcador de peso 123pb, en el carril 2 aislamiento C-10, carril 3 O12, carrii4 C-18, carril 5 C-19, carril 6 C-27, carril 7 C-32, carril 8 carril 11C42, carril 12 C46 y carril 13 C-52 C-36, carril 9 C-37, carril 10 C-40,

48

Figura 8. Electroforesis del oligo OPA-3. En el carril 1 marcador de peso 123pb, en el carril 2 aislamiento C-10, carril 3 C-12, carrito C-18, carril 5 C-19, carril 6 C-27, carril 7 C-32, carril 8 C-36, carril 9 C-37, carril 10 C-40, carril 11 C-42, carril 12 C-46, carril 13 C-52 y carril 14 control negativo. De las 60 bandas obtenidas en las reacciones el 32 (53%) fueron consideradas como marcadores polimrficos, confirmando la alta diversidad gentica que presenta este patgeno, por lo menos en cuanto a bandas RAPDs que corresponden a caracteres neutros, no seleccionados. Para analizar las tendencias evolutivas del patgeno y determinar si los aislamientos de C. gtoeosporioides presentan algn tipo de organizacin o estructura intra e nterregional, se estableci un dendograma calculado con el ndice de similitud de Dice (1945), el agolpamiento UPGMA y el mtodo de anlisis de mxima parsimonia de Camtn-Sokal (1965). As, para el primer ndice se determinaron cinco grupos o "clusters" separados entre s por un porcentaje de similitud del 50%. Dentro de los grupos, los aislamientos comparten entre ellos desde el 50% hasta el 70% de similitud. Los aislamientos dentro de cada grupo fueron diferentes, o sea, no comparten el mismo origen geogrfico (Figura 9). El grupo I conformado por dos subgrupos, el primero conformado por las cepas (C-10 y C-12) provenientes de Manizales con una similaridad del 92%; el subgrupo dos por la cepa (C-18) de Bucaramanga con una similaridad del 76% con respecto al primero. La

49

introduccin o intercambio de material de propagacin puede explicar la congruencia de estos aislamientos ya que a pesar de que su origen geogrfico es diferente sus caractersticas morfolgicas, patognicas y moleculares presentan una alta similaridad.

Figura 9.

Dendrograma por Camin y Sokal. Las cepas estn representadas con el nmero del cepario. La C-37 corresponde al municipio de ntrenos.

El grupo II con una similitud del 58% entre los dos subgrupos conformados asi: el subgrupo Ha por la cepa C-32 proveniente de Manizales, la cual en la prueba de patognesis mostr ser ms virulenta con respecto a las dems; el subgrupo llb conformado por los aislamientos C-40 y C-52, provenientes de Popayn y la del cepario

50

del MIP respectivamente mostraron diferencias relevantes en cuanto a tamao de conidias y menor virulencia en las pruebas de patogenicidad. La estabilidad de las diferencias moleculares observadas en este patrn de bandeo para las cepas que conforman el grupo II sugiere que ocurren variaciones estables en C. gloeosporoides, a pesar de la ausencia de la etapa sexual (Munaut et al, 1998). El grupo III, con una similaridad del 83% presenta dos subgrupos: el Illa conformado por los aislamientos C-19 proveniente de Bucaramanga (Santander), C-36 proveniente de Silvania (Cundinamarca) y C-37 proveniente de ntrenos (Antioqua),con origen geogrfico diferente, mostraron baja tasa de crecimiento en medio PDA; el subgrupo Illb con una similaridad del 65% conformado por la cepa C-46 proveniente de Une (Cundinamarca); con una alta tasa de crecimiento en PDA. El grupo IV (C-42) proveniente de Popayn (Cauca) y V (C-27) proveniente de Suba (Cundinamarca), con una similaridad con respecto a los dems grupos del 50%. Estas dos cepas dentro de las bandas RAPDs, fueron muy heterogneas con respecto a las del grupo principal, su ubicacin geogrfica es diferente por cuanto se presume una evolucin convergente para su patrn de virulencia. Este fonograma muestra la conformacin de dos grupos muy heterogneos en cuanto a correlacin geogrfica. Adems, se pudo evidenciar de manera grfica las relaciones existentes entre los aislamientos, aunque no se presente una diferencia marcada por municipios. Esto implica sectorizacin de caracteres del patgeno dentro del patrn de bandeo, que no tienen correlacin con la localidad, porque dentro del mismo dendograma se presentan ramas con individuos de diferentes municipios. Estos resultados significan que los aislamientos de C. gloeosporoides no constituyen grupos genticamente homogneos y, por lo tanto, sugieren que los diferentes aislamientos que pertenecen a diferente regin han sufrido un proceso de evolucin convergente. Es decir, aislamientos con posicin gentica diferente han adquirido el mismo fenotipo de virulencia. Es de destacarse que la virulencia es un carcter que siempre ha sido fuertemente seleccionado y un reflejo indirecto de los genes de resistencia presentes en las 51

variedades que se siembran en una localidad. Por el contrario, los caracteres detectados mediante la tcnica RAPDs son caracteres neutros, que se encuentran a travs del genoma y no se han seleccionado. Por esta razn, no es de extraar que los dos tipos de caracteres hayan evolucionado en forma divergente y a diferente ritmo. Adems, la inoculacin de los aislamientos en las variedades no da informacin alguna sobre el contexto gentico de estos: un gran nmero de biotipos puede estar agrupados en una misma especie (Zadok, 1959). As el polimorfismo del ADN observado es independiente de la virulencia: dos aislamientos pueden ser la misma especie pero con contextos genticos diferentes (pertenecen a grupos RAPDs diferentes) y han adquirido el mismo poder patognico por evolucin convergente pues han estado enfrentados a la misma presin de seleccin (Balardn, 1997). Es de esperar que todas las lneas lleguen a los mismos patrones de virulencia si la presin de seleccin se mantiene. Esta explicacin se puede aceptar si la evolucin del patgeno en Colombia es reciente y, si solo hasta ahora, los aislamientos ms complejos estn mostrando los genotipos encontrados. Sin embargo, lo ms probable en este caso, es que la poblacin muestreada y el nmero de "primers" fueran incompletos para poder establecer claramente si los procesos de seleccin son divergentes o convergentes, y a su vez si las caractersticas morfolgicas y patognicas de virulencia analizados han sido o no sometidos a alguna presin de seleccin, circunstancia que se considera posible por el tiempo del cultivo, ms de 20 aos y la dependencia exclusiva del control qumico para contrarrestar los efectos cada vez ms devastadores de la enfermedad.

52

VI.

LOGRO

OBJETIVO

ESPECFICO:

ANALIZAR

EL

PROCESO

DE

INFECCIN,

CON EL PROPSITO DE AMPLIAR LAS BASES PARA LA COMPRENSIN DE LA DINMICA DE ENFERMEDAD EN DIFERENTES ZONAS.

LOGROS: En esta fase del trabajo se ha logrado confirmar que el fruto es susceptible al patgeno en todas las etapas de su desarrollo, con mayor incidencia o susceptibilidad en las etapas tempranas de su desarrollo, frutos verdes medianos, verdes grandes y verdes pequeos, resultado que corresponde con el comportamiento epidemiolgico de la enfermedad en campo, en cuanto a edad del fruto enfermo. Se ha logrado identificar como ms efectivo el inoculo obtenido de campo(de frutos enfermos directamente), que el obtenido del laboratorio. Por otra parte en el desarrollo de la infeccin, todas las pruebas indican que entre el sntoma reconocido por los productores como "mancha" y la presencia de estructuras reproductivas del hongo en acrvulos " o inoculo, no transcurren ms de 5 das, lo que significa en trminos epidemiolgicos y de control, que la remocin semanal de frutos, en primer lugar favorece el incremento de inoculo y facilita el que se disperse en el cultivo; en segundo lugar que esta prctica no es eficiente para el control de la enfermedad o para la reduccin de inoculo, si no se detecta antes la enfermedad.

RESULTADOS
En las pruebas de infeccin realizadas tanto en Cundinamarca (Silvania) como las de Caldas (Manizales), los resultados indican que todas las edades del fruto son susceptibles a la enfermedad, aunque en proporciones diferentes, en condiciones de campo y de laboratorio, como se observa en la Tabla 2; en esta, se presenta tambin el resultado individual promedio de las diferentes pruebas realizadas y expresado en porcentaje de infeccin de acuerdo a la edad del fruto, el tipo de inoculo utilizado y el lugar de la prueba. Una primera observacin general en los resultados es que en las pruebas con inoculo natural tanto en campo como en laboratorio, los resultados de Manizales son superiores a los de Silvania, condicin que se explicara corno una diferencia de ambientes durante

las pruebas, especialmente en las condiciones de temperatura y humedad ambiental, las cuales fueron de ms estrs en Silvania, ello se traduce en una menor tasa de germinacin de esporas, una mayor desecacin del inoculo y por tanto menor infeccin, situacin totalmente contraria a la que se presenta permanentemente en Caldas y otras regiones productoras. De alguna manera esa misma respuesta se presenta en condiciones naturales para las dos regiones Tabla 2. Incidencia de la antracnoss en tomate de rbol de acuerdo al tipo de inoculo y a la edad del fruto. Tratamiento Laboratorio Campo Laboratorio Campo

Tipo de inoculo

% de infeccin - Manizales % Infeccin - Silvania Natural

u

1- Verde Pequeo 2- Verde Mediano 3- Verde Grande 4- Maduro 5- Maduro 6- Verde Pequeo 7- Verde Mediano 8- Verde Grande

40 c 70 b 80 b 100a 80 b Oc
20a 20a

70 b 70 b 90a 60 b 20 c Oa Oa Oa Oa Oa

18 15 7
37 23 36 27 3 22 18

26 28 24 9 12 25 30 23 7 17

In Vitro
If

((

9- Maduro 10- Maduro

10 b
20a

En cuanto a las pruebas realizadas con inoculo in Vitro, los resultados de infeccin fueron superiores en Silvania, respuesta explicable toda vez que la prueba en Cundinamarca, cont con la adecuacin ideal de espacios para la prueba; se cont con un ambiente regulado y adecuado de humedad relativa y temperatura favorable para la prueba, aunque las mayores diferencias se presentan especialmente en los estados de crecimiento iniciales del fruto (verde).

54

La infeccin en Manizales, con inoculo natural present porcentajes que oscilaron entre un 20 y un 100%, mientras con inoculo in Vitro fueron mucho ms bajos, oscilando entre un O y un 20%, esto para la prueba de laboratorio. En Silvania los porcentajes con inoculo natural fueron ms estrechos y mucho ms bajos, entre 7 y 37%. En campo, vemos que ninguna de las edades de los frutos presentaron infeccin alguna cuando se utiliz inoculo in Vitro, resultado no explicable si se consideran los resultados de Cundinamarca y que en condiciones favorables se espera que el inoculo puro pueda desarrollar infecciones; por su parte con inoculo natural, los porcentajes de infeccin estuvieron entre un 20 y un 90% para las diferentes edades. En Silvania los porcentajes fueron nuevamente ms bajos, con variaciones entre 3 y 36%. Estos resultados ms oros, obtenidos preliminarmente, ratifican que el inoculo natural obtenido directamente de frutos enfermos, es ms patognico que el inoculo puro que se obtiene In Vitro; y explica en muchos casos, los resultados negativos o los bajos porcentajes de infeccin que han obtenido algunos investigadores, cuando han utilizado el inoculo In Vitro sin causar herida al fruto. El hecho de haber obtenido altos porcentajes de infeccin utilizando inoculo natural sin causar herida a los frutos, permite sospechar la existencia de una accin sinergista de otros organismos con C. gloeosporioides, especialmente con bacterias del gnero Pseudomonas que luego de aprovechar el hierro presente en la masa de conidios, promueve la germinacin de los mismos e induce la formacin de apresnos, estructura sin la cual C, gloesporioides es incapaz de causar infeccin como lo menciona Baley, 1992. Sobre este aspecto Brown y Swinburne (1981), determinaron que agentes quelantes como los siderforos bacteriales, procedentes de la cepa de Pseudomonas UV3, presentan una alta afinidad por el hierro contenido en la matriz conidial de Colletotrichum gloeosporioides, siendo un factor importante en la estimulacin de la germinacin de Colletotrichum musae, alslado de bananos. Tambin Me Cracken y Swinburne (1979), encontraron que Bacillus sp. alslado de hojas de ctricos, promueve la formacin de apresnos en C. gloeosporioides, y que Pseudomonas alslada de hojas de remolacha, muestran tambin este efecto en C. dematium y C. acuatatum, debido a la competencia por nutrientes (Figura 10). 55

Figura 10. Sntomas hmedo y seco de antracnosis en las pruebas de infeccin con inoculo de campo y de laboratorio respectivamente.

En cuanto a la evolucin de sntomas, se observ que la evolucin de la enfermedad a travs del tiempo, fue ms rpido la aparicin de los sntomas y la evolucin de los mismos, cuando se utiliz inoculo natural en laboratorio; es as como el da 7 despus de la inoculacin casi todas las edades de los frutos presentaban al menos el primer sntoma, mientras que con inoculo in Vitro, slo presentaban sntomas los frutos morados. Tambin para mancha necrtica (Grado 4) con inoculo natural en todas las edades de los frutos se present al da 12 despus de la inoculacin, mientras con inoculo in Vitro se present al da 17. Los periodos de incubacin en Manizales, para el periodo de incubacin a primer sntoma "decoloracin y/o puntos aceitosos", fueron de 5 das en laboratorio y de 7 das en campo (Tabla 3). Para mancha necrtica, que es sntoma ms visible para el agricultor, fue de 9-12 das en laboratorio y de 15-20 das en campo, resaltando que entre 12-18 horas despus de conformada la mancha se comenz a desarrollar acrvulos de color salmn. En Silvania el desarrollo de sntomas es similar con algunas

56

variaciones en cuanto al desarrollo de la mancha y la aparicin de los sntomas con +/- 2 das (Figura 11). Tabla 3. Periodos de incubacin de Colletotricum g/oeospono/cfes segn la evolucin de la enfermedad y condiciones de inoculacin. Sntomas y Signos Laboratorio Campo

Evolucin en das Decoloracin - Puntos Hundimiento Necrosis incipiente Mancha necrtica Especulacin 5 6-8 8-9 9-12 9-12 7 8-10 10-15 15-20 15-20

Figura 11. Secuencia del desarrollo de sntomas caractersticos de antracnoss en tomate de rbol. El perodo de incubacin no vari con la edad del fruto, pues para cada una de ellas fue el mismo. Navarro y Puerta (1978), estudiaron el desarrollo de la infeccin encontrando que los primeros sntomas (incubacin), se presentaron a los 6 das en laboratorio; y,

57

adems, demostraron que los frutos de la semana 1 a la 24 son susceptibles al ataque de la enfermedad; ratificndose de esta manera los resultados encontrados en este estudio. Estos resultados demuestran que el desarrollo de los sntomas es muy rpido, lo mismo que la capacidad de generar inoculo, pues del sntoma que comnmente conocen los agricultores "mancha necrtica", a esporulacin, el lapso de tiempo es muy corto. Este comportamiento explica el porque muchas veces con aplicaciones semanales de fungicidas protectante y remociones semanales de frutos enfermos, los niveles de infeccin no se modifican ni bajan, especialmente en poca de invierno. Tambin el por qu el 66% de los frutos enfermos cosechados semanalmente presentaban signos de la enfermedad (esporulados), ya que al momento de realizarse sta cosecha los frutos que presentan sntomas en Grado 1, 2 y 3 se quedan en el rbol por no ser fcilmente visibles, cuando se vuelve a recoger 8 das despus los frutos iniciando mancha ya estn esporulados y ya han infectado otros frutos que posiblemente estaban sanos, y que si no estn protegidos con qumico se desarrollar la enfermedad. En cuanto a determinar si la edad o estado de desarrollo del fruto de tomate de rbol influye en la mayor o menor susceptibilidad a la Antracnoss, en Manizales, utilizando el inoculo natural, que fue ms patognico, se encontr diferencias significativas entre las edades de los frutos, siendo los ms susceptibles en su orden los frutos en estado de desarrollo verde grande, seguido de verde mediano y morado, con un porcentaje de infeccin que oscil entre 80 y 100%, los frutos verde pequeo los menos susceptibles con 40% en condiciones de laboratorio. En la prueba de campo, los frutos ms susceptibles fueron verdes grande y verde mediano, con 90 y 70% de infeccin respectivamente y los menos susceptibles el fruto maduro con 20%, Tabla 2. Cuando se utiliz inoculo In Vitro en laboratorio, los porcentajes de infeccin fueron muy bajos siendo los ms susceptibles el verde grande y verde mediano con 20% de infeccin. En campo no se registr infeccin. En Silvania con inoculo natural en campo la mayor infeccin se present en frutos verde mediano 28%, seguido de verde pequeo y verde grande con 26 y 24% y en menor proporcin morado y maduro con 9 y 12% respectivamente. En laboratorio, la proporcin

58

cambio significativamente, ms por error de la prueba. No obstante las diferencias significativas, en trminos prcticos todos los estados de desarrollo (edades) de frutos de tomate de rbol fueron susceptibles al ataque de la enfermedad, de ah la importancia de proteger los frutos desde floracin, sucede en aguacate, mango y ctricos (Batey, 1992). teniendo en cuenta que C. gloeosporioides es un patgeno que causa infeccin en cliz, ptalos, pednculos como

59

VIl.

LOGRO DEL OBJETIVO: CONTRIBUIR AL CONOCIMIENTO DE LA RESISTENCIA Y EL ANLISIS DE LA RESPUESTA DE ALGUNOS MATERIALES COMERCIALES, PARA APORTAR INFORMACIN AL MEJORAMIENTO

LOGROS: Los logros destacados de este trabajo son dos. El primero que el tomate de rbol en cuanto a los materiales comerciales conocidos como Rojo Comn, el ms cultivado, el Tamarillo, preferido para la exportacin, y el Amarillo, muy poco cultivado, son materiales totalmente susceptibles a la enfermedad, lo que indica que existen muy pocas posibilidades de encontrar fuentes de resistencia en ellos, a menos que se realice una bsqueda estricta de individuos dentro de los cultivos, para identificar los ms tolerantes. Los tres materiales presentan una reaccin diferente a cada cepa del patgeno y cada variedad responde tambin diferente a todas las cepas. La conclusin es la de que el patgeno ha variado en el tiempo en su virulencia, incrementndola cada vez ms. Lo evidente es que en el hospedero(tomate de rbol) no conocemos las fuentes ni el carcter de la resistencia. En general la variacin ha sido del hongo y no de la especie, ya que esta no ha sufrido ningn proceso de seleccin o de mejoramiento por resistencia, lo que nos podra indicar que si la presin de seleccin en el patgeno sigue por factores externos, la especie dejara de ser importante econmicamente, esto en un campo hipottico. Otro aspecto definitivo es que la inoculacin de los aislamientos en las variedades no da informacin alguna sobre el contexto gentico del tomate, pues un gran nmero de biotipos pueden estar agrupados en una misma especie.

RESULTADOS
Con base en las pruebas de patogenicidad desarrolladas con los 45 aislamientos del patgeno, se present una respuesta diferencial de los tres materiales a la antracnoss, siendo aparentemente ms susceptible el Tamarillo, seguido del Rojo comn y del Amarillo. Fue difcil identificar el tipo de resistencia, mxime cuando en la poblacin del

patgeno existe tambin una reaccin diferencial de aislamientos con cada variedad, indicndose con ello dificultades an mayores para indicar el tipo de resistencia. El tamao promedio de lesin para cada variedad, 22 das despus de inoculado sin tener en cuenta el tipo de aislamiento fue: para la variedad Tamarillo de 51.3 mm, para la variedad Rojo de 43.2 mm y para la variedad Amarillo de 46.4 mm; de estos resultados se podra inferir mayor susceptibilidad de la variedad Tamarillo al ataque del patgeno. La mayor infeccin en esta variedad probablemente refleja la adaptacin del patgeno dentro de Colombia reduciendo los posibles genes de resistencia presentes en el tomate de rbol, ya que se encuentran principalmente expuestos; adems, se ha venido aumentado y concentrando el rea de siembra, lo que conlleva a mayor disposicin de material para la propagacin del patgeno y de la enfermedad, y por otra parte su origen hbrido y neozelands podra estar incidiendo en su menor tolerancia a la infeccin; sin embargo, al interior de cada variedad es evidente y significativa la gran variabilidad en tamao de lesin y tasa de infeccin para cada aislamiento. De la misma manera existe una reaccin diferencial de los mismos aislamientos en las tres variedades. Al interior de cada variedad se observaron variaciones en cuanto a virulencia con respecto a las cepas de estudio. La cepa C-32 en la variedad Tamarillo alcanz los mayores valores en tamao de lesin (55.9 mm) y una tasa de infeccin diaria de 2mm, la cepa C-36 el menor valor con 45.6 mm y una tasa de infeccin de 1.3 mm (Tabla 4). En la variedad Rojo comn, la cepa C-37 present mayor virulencia resultado que se relaciona con un mayor tamao de lesin (51.4 mm), con una tasa de infeccin diaria de 1.6 mm y con una esporulacin abundante sobre la lesin como se muestra en la figura 20 (Figura 12); la cepa C-42 present la menor virulencia con un tamao de lesiones de 32.6 mm, y con una tasa de infeccin de 0.79 mm. Finalmente en la variedad Amarillo, la cepa C-40 mostr los valores ms bajos (37.3 mm), con una tasa de infeccin diaria de 1.2 mm, y los valores ms altos de 55.2 mm correspondieron a la cepaC-19.

61

A pesar de tales diferencias, es evidente que aislamientos como el C-18 y el C-37 presentan una respuesta muy similar en las tres variedades, a diferencia de las dems, lo que las cataloga como muy uniformes en su interaccin patognica con la variedad. Tabla 4. Promedios para cada variedad de las variables tamao de lesin y tasa de infeccin determinados en la prueba de patognesis. Cepa

Tamarillo Promedio de Lesin (mm)

Promedio tasa de infeccin (mm) 2.0 1.9 1.8 1.9 1.8 2.0 1.3 1.8 1.9 1.4 1.8 1.6 1.76 43.3 49.9 50.3 47.7 39.2 45.1 40.7 51.4 34.2 32.6 38.3 46.3 43,2

Rojo Promedio de Lesin (mm)

Amarillo

Promedio tasa de infeccin (mm) 1.3 1.5 1.9 1.7 1.3 1.5 1.4 1.6 1.4 0.79
1.2 1.6 1.4

Promedio de Lesin (mm)

Promedio tasa de infeccin (mm) 1.6 1.6 1.9 2.0 1.4 1.7 1.6 1.8 1.2
1.3 1.3 1.6 1.58

10
12 18 19 27 32 36 37 40 42 46 49

53.5 54.4 53.1

54.3 49 55.9 45.6 52.7 48.8 47.5 49.9 49.6 51.3

48.7 47.8 52.6 55.2 41.7 49.8 48.0 48.6 37.3 37.8 45.0 44.6 46.4

Prom. Var.

El hecho de que los resultados del estudio muestren diferencias entre la respuesta de los cultivares sugiere de manera categrica la posible existencia de variantes de este hongo as como en la interaccin variedad/patgeno. Otra explicacin que puede ser viable cuando se trata de entender la severidad tan similar en las variedades, producto del ataque del patgeno, puede estar asociado con la concentracin de esporas utilizada en

62

la prueba, ya que son excesivas pero necesarias para causar la infeccin, por la severidad de sntomas, lo cual podra impedir (a expresin de reacciones diferenciales

Figura 12. Respuesta de los tres materiales de tomate de rbol, Tamarillo(T), Rojo Comn(R) y Amarillo(A) a la infeccin con la cepa 37 de C. Gloeosporioides. Obsrvese la abundante esporulacin y el tamao de la lesin. importantes entre las variedades que se expresan normalmente en condiciones de campo; este hecho se ha observado al realizar pruebas de inoculacin de C. graminicola en frjol (Rivera, 1986). Concluyendo, las diferencias en los aislamientos patognicos entre dos o ms regiones probablemente refleja las diferencias a nivel gentico en el germoplasma usado y las practicas agrcolas desarrolladas en cada regin.

63

VIII ESTUDIAR LOS RITMOS DE CRECIMIENTO VEGETATIVO Y REPRODUCTIVO A NIVEL DE DIFERENTES POBLACIONES DE TOMATE DE RBOL PARA CONTRIBUIR A ESCLARECER LAS RELACIONES S. betacea - C. gloeosporioides.

LOGROS: Se identificaron y cuantificaron los procesos fisiolgicos del tomate de rbol Rojo Comn y en Tamarillo; en cuanto al Rojo Comn, el crecimiento vegetativo presenta dos perodos de crecimiento una lento en invierno y uno intenso en el verano de ramas, hojas, brotes y renovacin de follaje; la brotacin es un fenmeno continuo en la planta y de su continuidad depende el desarrollo de nuevos racimos florales y la produccin. La floracin y llenado de frutos, presentan una estrecha concomitancia con la precipitacin, siendo permanente todo el ao, con mayor intensidad en el primer semestre, especialmente de formacin y llenado de frutos. El cuajamiento y desarrollo de frutos presenta una alta competencia en favor de los formados inicialmente. El fruto se desarrolla en 168 das, con cinco etapas de; la productividad del rbol es de hasta 800 frutos por ao. Todos los procesos de crecimiento del rbol se dan en invierno, coincidiendo con las pocas propicias para la antracnoss, quiz esta sea la explicacin de la gravedad del problema en Colombia.

RESULTADOS 8.1 CRECIMIENTO DE BROTES

El crecimiento de brotes es producto del desarrollo permanente del meristemo apical, originando peridicamente la diferenciacin y crecimiento de otros tejidos, este presenta dos ritmos de elongacin, uno lento con un crecimiento de 2 a 3 centmetros en 16 semanas, que coincide con el invierno y una alta concentracin de frutos en el rbol; otro crecimiento rpido de 20 a 40 centmetros en 14 semanas, en condiciones ambientales ms favorables(alta temperatura y baja humedad) y una alta concentracin de fotoasimilados que permiten llevar a cabo dicha funcin, acompaada de la formacin de ramas laterales, brotes y hojas nuevas, que luego posibilitan la formacin de estructuras reproductivas, como se aprecia en las figuras 13 y 14.

Estos resultados parecen coincidir con los de otras especies tropicales como el cacao, en el que existe una alta competencia por fotoasimilados en la planta, en favor del sustrato de mayores requerimientos, que para la poca de invierno son los frutos, traducindose en una menor tasa de crecimiento de ramas vegetativas.

Figura 13. Estructuras vegetativas y reproductivas del tomate de rbol

Figura 14. Crecimiento caracterstico de los brotes en la Variedad Rojo Comn. Silvania, Cundinamarca

65

Otra de las causas puede ser la mayor actividad hormonal en esta poca, especialmente por parte de las citoquininas, auxinas y cido indolactico, sustancias promotoras del crecimiento y la elongacin de los tejidos (Beyer y Quevedaux, 1974 citado por Grange, 1993). En general el tiempo de duracin de un ciclo de brotacin, desde la activacin de la yema hasta madurez, es muy variable y oscila desde menos de 10 semanas hasta 50 para la yema terminal; para las axilares, el promedio de duracin en proporcin es menos de la tercera parte del tiempo, aunque se presentan casos particulares en la planta.

8.2 EMISIN DE YEMAS LATERALES POR BROTE

La emisin de yemas laterales es funcin del crecimiento longitudinal de la rama, en el brote 3 de la Figura 13, no se present un marcado crecimiento, debido posiblemente a la emisin y desarrollo de yemas laterales, que retardan el crecimiento de la yema apical; esto se traduce en una curva de tipo sigmoide, de menor intensidad en comparacin a los dems brotes estudiados, los cuales presentan crecimiento indeterminado, si las condiciones ambientales y nutricionales son favorables a la planta. Al proyectar los resultados de brotacin por rama, al rbol se observa en general, que la planta presenta un muy alto potencial de crecimiento continuo a travs del ao, condicin que debe mantenerse para la expansin en ancho y alto de la copa, requisito indispensable por dems, para el mantenimiento de una buena produccin, ya que los tejidos reproductores (racimos florales), deben renovarse continuamente, despus de cada cosecha, (Figura 14).

8.3 EMISIN DE HOJAS EN BROTES

Desde el punto de vista fenolgico, existe una estrecha relacin entre todas las estructuras del rbol, estableciendo procesos paralelos de crecimiento y formacin de estructuras; de esta manera la emisin de hojas en brotes es una funcin directa y relacionada con el crecimiento del brote. As, en la primera fase de crecimiento del brote (Figura 14), se presenta emisin de hojas, aproximadamente de 1 a 7 por brote, siendo la emisin proporcional a la elongacin del brote; a su vez, durante el perodo de lento crecimiento, primer semestre del ao, la emisin de hojas se redujo a cero; muy

66

posiblemente por los factores de competencia planteada posteriormente entre frutos en desarrollo (dominantes), sobre el crecimiento vegetativo. Una vez finalizado el pico de cosecha, se reanud el crecimiento y aumento progresivo de la longitud del brote; esta progresin en la morfologa de las hojas en el crecimiento vegetativo, corresponde a la transicin existente entre la fase juvenil y la fase adulta del meristemo vegetativo apical (Poething, 1990), dicha transicin se ha relacionado por algunos investigadores, como Mc Daniel y Colls, 1992, como la maduracin del meristemo apical y la adquisicin de competencia para responder a estmulos florales. Igualmente, el crecimiento de hojas es funcin de la elongacin del brote y parece estar relacionado con los fenmenos de cambio climtico y/o acumulacin de humedad por precipitacin, ya que se presenta un mayor nmero total de hojas y hojas nuevas, en poca de baja precipitacin. Por otra parte, la emisin de hojas es de carcter individual en cada brote.

Figura 15. Formacin promedio de yemas laterales por brote. Silvania, Cundinamarca.

67

8.4 TENDENCIA PRODUCTIVA

El tomate de rbol presenta un comportamiento permanente en la emisin de cojines, racimos florales y frutos, fenmeno relacionado directamente con el crecimiento de ramas y yemas en la planta; dicho proceso tiene lugar durante condiciones climticas diversas, pero puede reaccionar indirectamente bajo clima marcado, ya que este factor incide en el crecimiento vegetativo y por ende se refleja en la floracin. La estructura reproductiva en tomate de rbol es un racimo floral de estructura escorpioide por la forma de desarrollarse; desde su origen, los botones florales aparecen dicotmica y lateralmente sobre el eje principal, llegando a formar entre 20 y 33 botones como mximo, los cuales van abriendo progresivamente desde la base del racimo (Figura 16). Dada la condicin autgama del tomate de rbol, la fecundacin de flores maduras es inmediata, por lo que los frutos que aparecen generalmente son los de la base, en nmero no mayor a cuatro y excepcionalmente 6 u 8, especialmente en plantas jvenes y en proporciones muy bajas.

Figura 16. Racimo floral caracterstico del tomate de rbol, obsrvese la proliferacin de flores. Variedad Rojo Comn.

68

Al parecer existe un factor de dominancia y competencia dentro del racimo, en favor de los primeros frutos formados, ya que la mayor proporcin de flores por racimo son abortadas o se presenta secamiento de frutos muy pequeos por lo menos de 5 mm de dimetro, dada la gran capacidad de cuajamiento de frutos, que llegan a desarrollarse fisiolgicamente bien (Figura 17). Por otra parte, el nmero de frutos por racimo es tambin funcin de la posicin del racimo en la planta, siendo mayor hacia la base de las ramificaciones y menos hacia el extremo de ramas, observndose aqu un mejor ejemplo de la relacin fuente - destino de los asimilados de la planta. Como se aprecia en la Figura 17, la floracin mantiene un ritmo permanente de formacin a travs del ao, con algunas disminuciones significativas en perodos de alta precipitacin; se destaca la floracin, durante las semanas 25 a la 36, poca para la cual se present tambin la elongacin de los brotes (Figura 14); a su vez, la curva de frutos cosechados presenta una relacin inversa con la floracin, destacndose un pico mximo de cosecha para la semana 18 del ao (100 frutos / rbol), y una disminucin significativa de racimos florales (slo 7 / rbol), que vuelven a incrementarse en semanas posteriores. Los factores ambientales que han sido determinantes en la transicin floral de la mayora de las especies, en el tomate de rbol no parecen constituir una influencia directa, en la emisin de inflorescencias, ya que a pesar de existir algunos picos de emisin, esta se mantiene a lo largo del ao, demostrando estar mas relacionada con el crecimiento vegetativo de la planta. El comportamiento de la emisin floral del rbol, se encuentra tambin ntimamente relacionado con la permanencia de frutos en desarrollo en la planta, afirmacin corroborada con estudios realizados en meln y tomate por Grange y Robert, 1993, en los que la formacin de flores se inhibe en presencia de frutos cercanos en desarrollo; de esta manera, en el tomate de rbol en aquellas pocas de menor emisin de

69

inflorescencias, se percibi un aumento significativo en la cantidad de frutos en desarrollo.

Figura 17. Variacin estacional de la floracin, frutos en desarrollo y cosechados vs precipitacin. Silvania, Cundinamarca. En cuanto al cuajamiento de frutos, esto obedece a un patrn fisiolgico, variando en nmero por rama, en forma aleatoria en la planta; El desarrollo de frutos, Figura 14, mantiene una tendencia cualitativa similar a la de la floracin, aunque numricamente superior, en razn de nmero de frutos por cada racimo; cabe destacar que el pico de mximo desarrollo de frutos, coincide con la disminucin de la floracin y el mximo de cosecha, de las semanas 16 a 18 y siguientes semanas. As mismo, durante el perodo de la semana 30 a la 46 (Figura 17), se present un descenso progresivo y altamente significativo de los frutos en desarrollo, periodo que coincide con la sustancial disminucin de la precipitacin que para esa semana descendi en 80 mm. Dicha situacin se prolong hasta finales del segundo semestre del ao, ocasionando muy seguramente un descenso significativo de frutos.

70

Lo anterior demuestra una estrecha relacin entre el desarrollo del fruto, y los factores ambientales, especialmente precipitacin, debido a que durante perodos de estros hdrico el proceso de crecimiento y maduracin del fruto se ve afectado por el aumento en la transpiracin de la planta y del mismo fruto, situacin que concuerda con lo planteado por Pearce, 1991; Johnson y Cois, 1992, en estudios realizados acerca del proceso de crecimiento del fruto frente a condiciones ambientales. 8.5 CRECIMIENTO DEL FRUTO DE TOMATE DE RBOL Los resultados obtenidos para cada fruto indican que la forma es un parmetro gentico establecido por el cultivar, sin embargo, el tamao obedece a una serie de parmetros ambientales, fenolgicos y de ubicacin en el rbol. El fruto de tomate de rbol del material rojo comn, presenta para la zona de Sumapz, un ciclo de crecimiento de 168 das, desde cuajamiento hasta la madurez comercial, perodo que consta de cinco fases, bien diferenciadas por dimensiones y color, como son: verde pequeo, verde mediano, verde grande, morado y maduro (Figura 18). El estado de verde pequeo, tiene una duracin de 28 das, equivalente al 17% del tiempo; en esta fase se presenta el 53 % del crecimiento total del fruto, en cuanto a dimetro y 51% de su longitud, etapa significativa del crecimiento total en un perodo muy corto (Figura 19). Adems, durante las primeras cinco semanas, como lo describe Edwards y Cois, 1970, hay abundante divisin celular, por lo cual el dimetro es levemente mayor que la longitud, situacin que vara con el tiempo. En esta etapa se presenta mayor participacin del cido indolactico el cual posiblemente estimula la elongacin celular e incrementa el potencial del fruto, como sumidero de fotoasimilados (Beyer y Quevedaux, 1974 citado por Grange, 1993). Esta etapa es igualmente importante por la sensibilidad de su cutcula, haciendo ms vulnerable el fruto a patgenos, insectos y a condiciones ambientales adversas, como se analiza mas adelante.

71

Figura 18. Fases de desarrollo del fruto de tomate de rbol

COLOR
LONGITUD DIMETRO

Figura 19. Crecimiento del fruto de tomate de rbol. Silvania, Cundinamarca En la segunda etapa el ritmo de crecimiento disminuye, tiene un perodo de 28 das, equivalente al 16% del tiempo, indicando que el ritmo de crecimiento en esta fase desciende a la mitad de la inicial, a pesar de durar el mismo tiempo. Sin embargo, este

72

aumento en el crecimiento, es significativo por ocupar el 26% del total del crecimiento del fruto, lo que demuestra que an en este perodo contina la elongacin celular, aunque no presenta cambios morfolgicos perceptibles, permaneciendo de coloracin verde y con sensibilidad en la cutcula, que como se ver en el anlisis de epidemiologa de Antracnoss, es un perodo importante en el desarrollo de la enfermedad. La etapa verde grande, corresponde al perodo entre los 56 y 140 das, constituyendo el 49% del tiempo total de crecimiento; a pesar de ser un perodo prolongado, el fruto tan solo aument en 18% y 21%, en dimetro y longitud, alcanzando para este momento el 97% del dimetro y 99% de la longitud total del fruto, que al llegar a esta fase cesa progresivamente la elongacin de sus clulas, para dar inicio a un perodo de cambios internos y externos, propios de la maduracin (Tabla 4a). Tabla 4a. Crecimiento y desarrollo del fruto de tomate de rbol
Variables Verde Pequeo Verde Mediano Verde Grande Morado Maduro Tiempo (Das)
1-28 29-56 57-140 141-154 155-168

Dimetro (cm)
0.7-2.26 2.27-3.94 3.95-4.86 4.87-4.94 4.94-5.0

Longitud (cm)
0.5-3.24 3.25-4.96 4.97-6.36 6.36-6.36 6.36-6.37

Color Dimetro (%) VerdeMorado Verde Verde Morado RojoAmarillo

53 79 97 99 100

Longitud Tiempo (%) (%)

51 78 99 99 100 17 33 82 92 100

El estado de desarrollo morado precede a la maduracin, con una duracin de 14 das, corresponde al 10% del perodo de crecimiento del fruto, en el que se presenta un aumento del 2% del dimetro y 0% en la longitud, debido a que el fruto es receptor de nutrientes para el engrasamiento final de ste. Entre tanto, el aumento en dimensin diametral y longitudinal disminuye, se aceleran los cambios bioqumicos y morfolgicos, en cuanto a que el contenido de clorofila disminuye y el de carotenoides aumenta, dando inicio al proceso de maduracin (Tabla 4a). Como se puede observar de lo expuesto anteriormente, es evidente que la planta por su

73

estructura y capacidad de crecimiento es una especie C4, con una caracterstica muy particular; por el tamao de la hoja, su capacidad fotosinttica debe ser lo suficiente como para lograr una alta capacidad de asimilacin y ptima distribucin de asimilados, ya que como se ver mas adelante el potencial productivo del rbol alcanza a superar los 800 frutos al ao, que equivalen en promedio a unos 66 kilos; como puede apreciarse son pocas las especies que tienen tal eficiencia fotosinttica y capacidad productiva, siendo an ms eficientes en la acumulacin de materia seca. Relacionando los procesos de crecimiento del rbol con la enfermedad, es evidente la concomitancia de los procesos ms vulnerables de la planta con los perodos del ao ms aptos para el desarrollo epidmico de la antracnoss, los perodos de crecimiento reproductivo predominan en invierno y de alguna manera la parte vegetativa tambin, de manera que todas las condiciones en esencia son potencialmente aptas para el patgeno; ello significa que en trminos de manejo del cultivo, existe una marcada necesidad de intervenir el rbol en determinadas pocas para disminuir el impacto de la antracnoss, circunstancia que actualmente no se hace. Idealmente el cultivo debera ubicarse en zonas secas y con disponibilidad de agua para riego, esta sera la nica forma de eludir la enfermedad. Este quiz ser uno de los primeros retos que tendrn que afrontar los productores, el de manejar el rbol, buscando disminuir la ventaja natural que tiene en patgeno actualmente.

74

IX. IDENTIFICAR LA DINMICA DE INFECCIN DE NUEVOS FRUTOS Y POTENCIAL ESPORULANTE POR ESTRATO DEL RBOL, MEDIANTE EL REGISTRO PERIDICO DE FRUTOS ENFERMOS POR RBOL.
LOGROS: La epidemia es de carcter bimodal y presenta caractersticas graves en invierno; los frutos ms afectados son los jvenes(verdes); en invierno, la prevalencia de la infeccin en los frutos es en la zona media y el pice en Silvania, y zona media y pednculo en Manizales; en verano predomina la infeccin quiescente en el pednculo. Con recoleccin de frutos semanal predominan los frutos esporulados(con signos del patgeno), indicando un potencial esporulante imposible de cuantificar y que la prctica cultural de remocin no es eficiente. En condiciones del agricultor las prdidas superan con facilidad el 50%; sin control las prdidas alcanzan hasta el 100%; Prcticamente todo el rbol es susceptible al patgeno, el follaje es la fuente de inoculo ms importante en la epidemia. La alta densidad, el no-control de altura, la no poda del rbol, la ausencia de manejo de la fruta enferma por los agricultores, las deficiencias en la aplicacin del control qumico, contribuyen en un alto porcentaje a las prdidas por antracnoss.

RESULTADOS 9.1 DINMICA DE LA ENFERMEDAD

La dinmica de frutos enfermos en el cultivo de tomate Rojo Comn(Silvania), de dos aos de edad, present un comportamiento cualitativo similar en todos los rboles de la parcela evaluados, pero con diferencias cuantitativas por el comportamiento individual de los mismos. Los resultados para la parcela se observan en fa figura 20; a partir de la semana 6 del ao (febrero), el nmero de frutos enfermos disminuye hasta un mnimo, en la semana 8 se inicia un crecimiento progresivo la infeccin, estimulada por el incremento continuado de la precipitacin semanas antes y hasta junio, alcanzando el primer pico de infeccin hacia la tercera semana del mismo mes; a partir de all, se inicia una rpida disminucin de la infeccin(al disminuir drsticamente la precipitacin), alcanzando un mnimo hacia finales de julio que se mantiene a niveles ms bajos durante agosto, septiembre y octubre; esta situacin es favorecida por los efectos del fenmeno del pacfico durante los meses julio y parte de agosto.

Figura 20. Curva de progreso de la infeccin causada por C. Gloeosporioides en tomate de rbol. Silvania, Cundinamarca.

Reiniciadas las lluvias a partir de la semana 35, mediados de septiembre, la enfermedad comienza a aumentar progresivamente hasta lograr el pico ms importante hacia mediados de noviembre, producto de la precipitacin y la alta cantidad de frutos presentes en los rboles, para disminuir de nuevo hacia la ltima semana de diciembre, en respuesta a la disminucin de las lluvias semanas antes; en enero del ao siguiente (1998), aunque las lluvias son intensas, la infeccin se mantiene baja debido a la poca cantidad de frutos presentes en el rbol y la disminucin de inoculo; solo hasta la semana siete (mediados de febrero) se volvi a reiniciar la epidemia. La enfermedad presenta una alta correlacin con la precipitacin a travs de todo el ao; durante el segundo pico de infeccin, de mayor importancia, se removieron frutos enfermos en promedio entre 50 y 280 frutos en la parcela de cuatro rboles, lo que demuestra la eficiencia del patgeno. Es igualmente evidente, la susceptibilidad del patgeno a estrs de humedad, como se observa en la Figura 20, ya que a comienzos y mediados de ao en que se present ausencia de lluvias, se afecto significativamente la capacidad infectiva del patgeno.

76

9.2 DINMICA DE SIGNOS Y SNTOMAS DE LA ENFERMEDAD El comportamiento de los sntomas y signos, entendiendo por sntomas, puntos necrticos, reas hundidas y clorticas y manchas pequeas de color caf necrticas y por signos, lesiones esporuladas, se analiz clasificando semanalmente los frutos afectados por el patgeno, los resultados se presentan en la Figura 21; se present dominio de frutos con signos, este comportamiento de la epidemia responde de manera directa al proceso de remocin de inoculo semanal, ya que las pruebas de infeccin y desarrollo de sntomas dan clara evidencia de que la diferencia entre frutos con mancha y el inicio de la esporulacin es tan solo de cinco das. El anlisis de la infeccin acumulada, confirma que los frutos con signos superan en 30% el nmero de frutos con sntomas a travs del ao, a excepcin de la poca seca del fenmeno del pacfico, diferencia que se acenta en los picos de invierno.

Figura 21. Variacin estacional de sntomas y signos de antracnoss en tomate de rbol. Silvania, Cundinamarca. 9.3 DINMICA DE LA INFECCIN POR EDAD DEL FRUTO Conocida la susceptibilidad del fruto a la antracnoss se determin la variacin de la

77

infeccin por tamao de fruto, de acuerdo a las edades identificadas en el estudio de fenologa realizado, los resultados se observan en la Figura 18; la mayor intensidad de la infeccin, expresada en nmero de frutos enfermos, se present en los de tamao verde mediano, seguido de frutos verdes grande y verde pequeo (Figura 22). El comportamiento de la infeccin mantiene la misma tendencia de la epidemia en general; esta distribucin de la infeccin parece lgica, si se compara con la curva de desarrollo de frutos (Figura 19), en la que se puede observar como la fase de crecimiento del fruto en estado verde predomina sobre la condicin de fruto morado y maduro; la mayor susceptibilidad de frutos verdes, parece estar relacionada con la constitucin bioqumica del mismo, pues como se plante en el estudio fenolgico, el crecimiento del fruto es acelerado y los cambios son muy evidentes, tal como ocurre en los cambios de coloracin, la cual pasa de un verde claro a morado y luego nuevamente a verde en muy poco tiempo.

Figura 22. Variacin estacional de la infeccin segn tamao del fruto. (Cundinamarca).

Silvania

78

Et total de frutos afectados discriminados porcentualmente por edad se presenta en la Figura 23; se puede corrobora como la infeccin en frutos verdes medianos alcanza el 53% de la infeccin, mientras que en verdes pequeos el 16% y el verde grande un 24%, mientras que en el morado solo se infecta el 2% y el maduro un total de 5%; numricamente estos porcentajes de prdidas por rbol son equivalentes a 111 frutos verde pequeo, 367 frutos verde mediano, 166 frutos verde grande, 14 morados y 35 maduros que en total significan un producido de 693 frutos por rbol ao.

Figura 23. Variacin porcentual en la infeccin por tamao del fruto. Silvania(Cund). 9.4 DINMICA DE LA INFECCIN POR SITIO EN EL FRUTO Se realiz tambin la clasificacin de frutos enfermos de acuerdo al sitio donde se presentaba la infeccin, identificando para ello como reas crticas de infeccin, el pednculo, la zona media y el pice principalmente (Figura 24), adems, se defini una zona mltiple como aquella en donde se presentan infecciones en reas definidas al mismo tiempo. La prevalencia de infecciones mantiene la misma tendencia de la enfermedad. Durante los perodos de mxima precipitacin, predomina la infeccin en la zona media del fruto, seguida de la infeccin en el pice, luego est la infeccin en zonas mltiples de infeccin y finalmente la infeccin en el pednculo del fruto; En el verano es totalmente contraria, ya que dominan las infecciones en el pednculo y prcticamente desaparecen las dems infecciones.

79

Figura 24. Prevalencia de la infeccin de acuerdo a la posicin en el fruto. Silv (Cund).

El inoculo llega a cada sitio del fruto por accin del agua (escorrenta o salpique) de la parte superior (copa) y por desplazamiento superficial por el tronco y/o ramas, hasta ubicarse en el pice en el que la escorrenta termina en forma de gota suspendida en el pice fruto, condicin ideal para la germinacin e infeccin del fruto; en cuanto a infecciones en zona media, esta se origina cuando se desarrollan en forma paralela dos o ms frutos que permanecen en contacto; al llover, el inoculo se deposita en la zona de contacto, facilitando la infeccin de al menos uno de los frutos, el cual transmite el problema a los dems del racimo, condicin bastante frecuente. Respecto a las infecciones mltiples, lo evidente de stas es que en muchas ocasiones el inoculo depositado sobre los frutos se debi muy posiblemente al papel de los insectos, los cuales en la poca de invierno proliferan en mayor cantidad y visitan con mucha ms frecuencia frutos en descomposicin por antracnoss en el rbol y/o en el suelo, cerca de su sitio de alimentacin. Uno de los sntomas de difcil observacin por los productores es la infeccin en el pednculo, la cual puede permanecer en el rbol hasta la descomposicin y momificacin del fruto, el fruto se convierte en una fuente activa de inoculo, bsicamente por no manejar el rbol, lo que impide una buena eficiencia de la prctica, figura 25.

80

Figura 25. Secuencia de infeccin del fruto en la zona media por contacto, en el pice y en el pednculo (causando madurez prematura, fruto amarillo arriba).

9.5 VARIACIN ESTACIONAL DE LA ENFERMEDAD EN MANALES, TRATAMIENTO A.

En trminos generales, el comportamiento de la enfermedad en Silvania y Manizales, fue similar, con algunas variaciones de tipo cuantitativo y cualitativo, basados en la distribucin de las lluvias en cada regin. Con relacin a la severidad, es claro la mayor incidencia de antracnoss en la zona de Silvania, la cual se refleja en mayor nmero de frutos enfermos en dicha regin, y en cuanto a prevalencia cambia la importancia de la infeccin en el pednculo, siendo mayor en Manizales.

81

En la Figura 26, se presenta el comportamiento de la infeccin, del promedio de frutos sanos y enfermos cosechados semanalmente, comparados con la precipitacin en milmetros y semanas con nmero de das con ms de 2 mm de lluvia.

Figura 26. Curva de progreso de la antracnoss y frutos sanos. Manizales(Caldas). Analizando el porcentaje de infeccin se observa que la enfermedad alcanz niveles altos, superiores al 60%, durante los meses o perodos hmedos, y disminuy a finales de los meses o periodos de menores lluvias (julio, agosto, enero y febrero). En cuanto a la fluctuacin de frutos sanos y enfermos la mayor cosecha de frutos, tanto sanos como enfermos se registr durante los meses de invierno, septiembre, octubre, noviembre del ao 1997, mayo y junio del ao 1998. A su vez se destaca que los perodos de menores lluvias influyen levemente en la disminucin de la enfermedad. A continuacin se relaciona el comportamiento productivo por ao, tanto de los frutos sanos y enfermos, as como del porcentaje de infeccin en el tratamiento A. Segn estos resultados se deduce que con la remocin de frutos enfermos cada semana, no es posible mantener la infeccin en niveles tolerables.

82

En cuanto al efecto de los factores climticos sobre la antracnoss, se desfasaron los frutos enfermos cosechados 3, 4, 5 semanas antes, con relacin a los registros de precipitacin con la finalidad de encontrar la mejor correlacin. Este se hizo teniendo en cuenta que el perodo de incubacin, reportado para Manizales es de 15-20 das, tambin se tuvo en cuenta que Colletotrichum produce infecciones quiescentes (latentes) en los frutos, por perodos que pueden ser superiores a 3 semanas. Balley (1992), Jarvis (1994). La correlacin ms cercana se encontr cuando los frutos se desfasaron cinco semanas con respecto a la precipitacin, especialmente durante el ao 1997, que present perodos marcados de sequa (verano), entre la semana 27 y la semana 34 y perodo de lluvias entre la semana 11 y la 23 y entre la semana 37 y la 52 del mismo ao. El anlisis estadstico de correlacin, desfasando los frutos enfermos 1,2,3,4,5 semanas antes, arroj coeficientes de correlacin altamente significativo a nivel del 1%, cuando se desfasaron los frutos enfermos cinco semanas antes. En Tabla 5, se presenta la matriz con los coeficientes de correlacin para cinco semanas, destacando que los factores climticos que resultaron ms comprometidos en forma directa con la enfermedad fueron: La precipitacin; las semanas con mayor nmero de das con precipitacin mayor de 2 milmetros (semanas muy hmedas); total horas con humedad relativa mayor del 95%; duracin de la humedad relativa del 95% mayor de tres horas por da. Coeficientes de correlacin negativa, se encontraron con la mayor duracin de la temperatura superior a 17 tanto en horas como en das. C, Tabla 5. Matriz de coeficientes de correlacin. Variables climticas vs variables biolgicas, desfasadas 5 semanas antes. Epidemiologa Antracnoss tomate de rbol. Manizales 52 semanas. 1997. Variables No. de frutos enfermos 0.65** 0.62** 0.64** 0.61** -0.70** -0.64**

Infeccin
0.54** 0.50** 0.48** 0.46** -0.77** -0.65**

Precipitacin (mm) No. das pp > 2 mm Total h HR > 95 % HR 95 > 3 h/da T. horas temperatura > 17 C No. das temperatura 17 C > 3 h/da Diferencias significativas a nivel 1%

83

9.6 VARIACIN ESTACIONAL DE LA ENFERMEDAD EN EL TRATAMIENTO B.

Este tratamiento pretenda conocer cual sera la variacin estacional de la antracnoss con relacin al clima, iniciando las evaluaciones, con cero frutos sanos y/o enfermos presentes en los rboles. El seguimiento se realiz durante dos aos, realizando remocin total de los frutos al comienzo de cada fase. En la Figura 27 se presenta para cada Fase, el comportamiento de la enfermedad relacionada con los frutos sanos cosechados semanalmente, en comparacin con la precipitacin y nmero de das por semana de ms de 2 milmetros.

Figura 27. Curva de progreso de la antracnoss. Remocin Inicial de frutos. Manizales.

84

El comportamiento de los frutos sanos y enfermos durante la Fase I, ao 1997, se caracteriz por la presencia del Fenmeno del Pacfico, entre los meses de julio-agosto (semana 28 a la 36); los frutos enfermos en cantidad muy baja comenzaron a presentarse cuatro semanas despus (semana 11) de iniciado el tratamiento, aumentando progresivamente hasta la semana 31, para presentar luego una drstica disminucin a finales del perodo de intenso verano, con bajo nmero de frutos enfermos, luego se increment el nmero de frutos enfermos en forma drstica, con promedios por rbol del orden de 30 (semana 44) y 35 (semana 28), para luego disminuir, en este caso no tanto por los factores climticos sino por la escasez de frutos en el rbol. En cuanto a los frutos sanos maduros stos se empezaron a recolectar, exactamente 5 meses despus de haberse removidos los frutos (semana 28), como era de esperarse, incrementndose entre la semana 40 y 48, producto de las condiciones climticas favorables por efecto del Fenmeno del Pacfico. A finales del ao la produccin de fruta sana fue mnima, debido a que la mayora de la fruta ya haba salido enferma semanas antes. Durante la Fase II -1998, ao considerado normal en cuanto a clima, se registr luego de seis semanas de removidos los frutos (semana 12), un acelerado incremento en el nmero de frutos enfermos, alcanzando en la semana 25, un nivel de 42 frutos enfermos/rbol. Luego el nmero fue disminuyendo, conservndose en un promedio semanal de 10 frutos por rbol, hasta el final de la Fase, en enero/99. En cuanto al nmero de frutos sanos cosechados, su inici se present en la semana 26, en igual tiempo que se registr en la Fase I; sin embargo, debido a las condiciones climticas favorables a la enfermedad, en ningn momento se registr un incremento apreciable de frutos sanos, permaneciendo cada semana en un nivel de aproximadamente 5 frutos/rbol, hasta la semana 46, para luego casi desaparecer a finales de la Fase, en enero de 1999.

85

9.7 VARIACIN ESTACIONAL DE LA ENFERMEDAD. TRATAMIENTO C.

Los resultados de este tratamiento, que se dise posteriormente con el fin de evaluar el efecto de la remocin de frutos enfermos por antracnoss, con una periodicidad de dos veces por semana. Las evaluaciones se iniciaron en la semana 31 de ao 1997, durante el Fenmeno del Pacfico, razn por la cual el nmero de promedio de frutos enfermos por rbol, era inferior a 5 y el nmero de frutos sanos maduros se inici y mantuvo en un promedio de 10 frutos/rbol, hasta la semana 47. El nmero de frutos enfermos se elev bruscamente entre la semana 40 a la 51, con promedios, durante ese perodo de 20 frutos enfermos/rbol/semana. Posteriormente, durante el ao 1998, la enfermedad se volvi a incrementar, causando gran prdida de frutos, desde la semana 19 hasta la semana 28 y finalmente desde la semana 45 de 1998 a la semana 3 del ao 1999. Los resultados del comportamiento de la enfermedad a travs del tiempo, tanto en la parcela B como en la C corroboran los obtenidos en la parcela A, sobre la dependencia de C. gloeosporiokies de perodos hmedos, especialmente de semanas hmedas con ms de 3 das de lluvias. Se encontr que el nmero de frutos enfermos disminuye poco despus de perodos de verano o cuando el rbol est en floracin, preparando y formando un nuevo ciclo de cosecha, que en la zona de estudio ocurre en los primeros tres meses de cada ao. En la Tabla 6, se relaciona el promedio de frutos por rbol tanto sanos como enfermos y el porcentaje de infeccin obtenida en los tratamientos A, ByC.

Tabla 6. Frutos sanos y enfermos de tomate de rbol y porcentaje de infeccin en los tratamientos A, B y C de remocin de frutos con antracnoss. Tratamiento* Remocin A. Semanal
B. Totalmente Y luego/semana C. 2 veces por semana

Ao 1 2 1 2 1

%de Infeccin

63 60
67 82 60

Frutos por rbol Sanos Enfermos Total 429 253 465 180 369 180 493 107 288 431

682 645 549 600 719

86

Esta Tabla resalta que los porcentajes de infeccin fueron superiores al 60%, an con recoleccin de frutos enfermos dos veces por semana; este resultado est indicando que existen otras fuentes de infeccin en los rboles, diferentes a los frutos enfermos y que son posiblemente ms importantes; entre ellas las hojas, flores y ramas viejas, como fuentes o portadoras de inoculo. En efecto Whiteside (1996), reporta la existencia de infecciones asintomticas en las hojas de los ctricos, que luego se tornan quiescentes y que una vez se activan, originan el inoculo que ataca los frutos en proceso de formacin. Balley (1992) y Jarvis (1994), indican que Colletotrichum gtoeosporoides es un organismo tpico y especializado en atacar inflorescencias, impidiendo el cuajamiento de los frutos y produciendo altas cantidades de inoculo en los residuos de las inflorescencias. En cuanto al total de frutos cosechados, es importante resaltar el alto ndice de produccin de frutos cosechados por rbol que se registra en la zona, fluctuando entre 445 a 719 frutos/rbol/ao. Llama la atencin el comportamiento de la produccin de los rboles del tratamiento 6, a los cuales se les removi la fruta inicialmente cada ao y cuyo registro no aparece en la Tabla, estando alrededor de 200 frutos. El comportamiento de la produccin de frutos en este tratamiento, indica la gran capacidad de compensacin que tiene el rbol de tomate y que este tratamiento (remocin de toda i la fruta que tiene el rbol en un momento determinado), puede convertirse en una nueva estrategia para el manejo de la antracnoss, como estrategia para el inicio del control qumico en plantaciones muy afectadas. Los resultados de este estudio epidemiolgico ratifican la dependencia que para el control de esta enfermedad se tiene de los fungicidas. 9.8 COMPORTAMIENTO DE LA ANTRACNOSIS SEGN LA EDAD O TAMAO DEL FRUTO, En la Figura 28, se presenta en porcentaje el comportamiento de la enfermedad segn el tamao o edad de los frutos enfermos que se cosecharon en el campo para en el tratamiento A (remocin semanal de frutos enfermos), durante dos aos consecutivos desde febrero de 1997 a enero de 1999. En la figura se observa como los frutos de tamao verde mediano, presentaron los mayores ndices de infeccin 32%, obedeciendo 87

este resultado ms al tiempo de duracin de los frutos en este estado que al factor susceptibilidad. En trminos generales todos los tamaos de los frutos resultaron ser susceptibles, aunque en los frutos maduros su presencia fue menos notoria 11%, coincidiendo con los resultados de Tamayo (1985).

Figura 28. Prevalencia de antracnoss segn la edad del fruto. Manizales, Caldas. 9.9 SNTOMAS, SIGNOS Y SU VARIACIN ESTACIONAL El comportamiento de la enfermedad en cuanto a frutos enfermos cosechados en sntomas y en signos, se presenta en la figura 29. En esta figura se observa que bajo remociones semanales de frutos enfermos el mayor porcentaje, 68% fue frutos con presencia de esporulacin, estos se concentraron especialmente en los perodos de invierno; sin embargo, es importante anotar que en pocas de intenso verano los frutos presentaron esporulacin, como sucedi durante los meses del Fenmeno del Pacfico, semanas 27 a la 36 del ao 1997. Este resultado demuestra la gran capacidad que tiene este organismo de producir inoculo en altas cantidades, una vez que se desarrolla la mancha necrtica, independientemente de las condiciones ambientales. Este resultado induce a pensar que en el futuro hay necesidad de buscar otras alternativas para el manejo de la enfermedad, como el empleo de controladores biolgicos, que tiendan a

Porcentaje de frutos enfermos por Antracnoss cosechados con sntomas y signos

Figura 29. Variacin cuantitativa de frutos enfermos en sntomas y signos. Manizales, Caldas. Parcela A.

Limitar la capacidad de esporulacin de este patgeno (antiesporulantes) y que bloqueen las infecciones latentes en el follaje y frutos. La velocidad con que este microorganismo produce inoculo, as como su cantidad, puede ser una de las razones que explique el por qu los bajos controles que se obtienen en la mayora de los casos con el empleo de fungicidas protectantes, a lo cual debe unirse los problemas concomitantes, entre los cuales se destacan la ausencia de manejo del rbol, deficientes prcticas agronmicas y sistemas de aplicacin prcticamente obsoletos en cuanto a mtodo y vehculo de aplicacin.

89

9.10

UBICACIN DE LOS SNTOMAS EN EL FRUTO Y SU VARIACIN CON EL TIEMPO

En la Figura 30, se puede observar de manera general la ubicacin de las infecciones por antracnoss en los frutos de diferentes edades, en esta grfica es evidente la prevalencia de las infecciones en la zona media y en el pice, seguidas de las infecciones en la zona de insercin del pednculo con el fruto.

Figura 30. Frutos de diferentes edades afectados por antracnoss en diferentes sitios. Segn prueba de laboratorio y observaciones de campo, un fruto puede desarrollar infecciones mltiples ya sea en forma simultnea o en forma secuencial. Figura 31. Este tipo de lesiones mltiples es indicio de un alto nivel de inoculo en la plantacin con la participacin activa de la fauna insectil. Sin embargo, lo ms corriente es encontrar una o dos lesiones por fruto, ya que la remocin frecuente de frutos enfermos, no permite el desarrollo de las dems, y slo se observan si los frutos son dejados en el rbol hasta su momificacin.

90

Figura 31. Infecciones mltiples de antracnoss en frutos de tomate de rbol. Variedad Tamarillo. En la figura 32, se presenta el comportamiento de estas infecciones acumuladas y a travs del ao. Segn los resultados consignados en esta figura, se observa que la mayor cantidad de frutos se cosech con infecciones en la zona media del fruto 48%, seguido de la infeccin en el cuello del fruto, 37% y en tercera instancia en el pice 15%. En la variacin estacional de los sntomas se observa que la infeccin en la parte media del fruto sobresale siempre, presentando grandes picos durante el perodo de abundantes lluvias. La infeccin en este sitio y su mayor participacin tiene su explicacin debido a la acumulacin de agua y mayor duracin de la humedad en este sitio, dado el contacto permanente de los frutos. Se resalta que en los perodos de fuerte verano, as como de menores lluvias, la infeccin que ms sobresali fue la infeccin en la zona de insercin del fruto con el pednculo, como sucedi entre las semanas 25 a la semana 42, durante el Fenmeno del Pacfico.

91

Este tipo de infeccin viene acompaada de un amarillamiento prematuro del fruto y su posterior cada, debido a la lesin interna que se presenta en los vasos que alimentan e) fruto; se considera latente o quiescente, originada posiblemente durante el proceso de floracin, teniendo en cuenta que los residuos de los ptalos necrosados, se quedan adheridos al fruto por varios das, aprisionados con los spalos del cliz, o por efecto de la humedad, facilitando el proceso de infeccin de C. gloeosporioides, presente como saprofito en estos residuos. Figura 32. Variacin estacional de los sntomas segn su ubicacin en el fruto.

Manizales, Caldas. Teniendo en cuenta el fuerte verano ocurrido durante el "Fenmeno del Pacfico", cuando, no se deberan recolectar frutos enfermos con antracnoss, dado que este patgeno requiere de humedad para los procesos de liberacin de los conidias, as como para su germinacin e infeccin, coloca en evidencia la existencia de infecciones quiescentes (latentes), con perodos superiores a un mes, tal como ya est reportado

92

para este patgeno en otros cultivos como aguacate, mango, banano, papaya. (Jarvis, 1994)(Whiteside, 1996). Durante el desarrollo del proyecto, el tema de la determinacin de infecciones quiescentes fue objeto de un trabajo especial. Efectivamente, mediante el empleo de paraquat, un producto reportado (Cerkauskas, 1988) como activador de infecciones quiescentes, se logr ratificar que en tomate de rbol, tambin se presentan dichas infecciones. Pruebas preliminares realizadas en hojas de tomate, tambin demostraron que en estos tejidos ocurren estas infecciones y que en ctricos estn reportados como infecciones asintomticas (Whiteside, 1996). Estos resultados dan a entender el por qu esta enfermedad es tan persistente y difcil de manejar, especialmente despus del segundo ao pues una vez se establece en la plantacin, ya que puede afectar todos los sitios de la planta (inflorescencias, frutos, hoja, brotes y ramas) y producir inoculo permanentemente a partir, tanto de tejidos con infecciones quiescentes como de infecciones ocultas y difcil de detectar en el rbol.

93

X. ESTUDIAR EN FORMA PRELIMINAR LOS MECANISMOS DE DISEMINACIN DEL INOCULO.

LOGRO: El estudio realizado confirm el papel que tienen el agua y los insectos en la dispersin de la enfermedad a travs de sus esporas; en particular la precipitacin present eficiencia en el transporte as travs del tronco, el follaje, los frutos y las flores, siendo mayor en los dos primeros; por su parte los insectos de los grupos dptera y coleptera, tambin son portadores de inoculo, siendo mayor en los insectos capturados en frutos enfermos en el rbol y frutos enfermos en el suelo y menor el inoculo detectado en insectos volando. Estos resultados permiten concluir que el manejo de la altura del rbol y la poda para disminuir follaje, pueden atenuar el papel del agua en la diseminacin. RESULTADOS Un resumen general de los resultados se presenta en la tabla 7; como se observa, de las 100 muestras de agua tomadas la mayor cantidad fue de tronco y frutos, seguidas de follaje y flores, en trminos generales, se encontr una mayor cantidad de muestras efectivas en tronco(8) y el follaje(3), seguidas de frutos(4) y flores(2), la eficiencia total de muestras de agua fue del 17%, lo que confirmara el papel del agua en el transporte de esporas de C. Gloeosporioides; estas muestras fueron tomadas en un lapso de 45 das, durante la poca de invierno del segundo semestre, el cual fue ms corto que el del primer semestre, fuego es posible que en ese los porcentajes de muestras efectivas se incrementen notablemente, en todos los sitios se detecto inoculo del patgeno. Respecto a las muestras de insectos colectados, los resultados tambin mostraron evidencias positivas en el transporte de inoculo dentro del cultivo, observndose que en la poblacin de insectos predominan los microdpteros, seguidos de los colepteros pequeos; estos utilizan los frutos enfermos como lugar para su alimentacin y multiplicacin, ya sea en el suelo o localizados en la planta.

Tabla 7.

Resultados del muestreo de agua e insectos como fuente de inoculo de C. Gloeosporioides.

Tipo muestra Agua colectada

Sitio muestreo Tronco Follaje Flores Frutos

Muestra por estrato 35 15 15 35 50 50 50

Muestras positivas 8 3 2 4 9 7 2

Colonias por muestra 5 2 1 2 4 4 1

Eficiencia % 23 20 13 11.4 18 14 4

Insectos colectados

Fruto rbol Fruto suelo En el alre

De las 150 muestras analizadas, se presentaron ms muestras positivas en frutos colgados en el rbol con 9, seguidas de los frutos en el suelo con 7 y finalmente los insectos colectados volando, con solo 2 positivas; en general, el porcentaje de eficiencia de las muestras de insectos fue del 12%, que sin ser alta, esta demostrando claramente que estos interviene en el transporte de esporas dentro y entre rboles. En particular, la lluvia tiene una connotacin precisa en cuanto al papel que juega en el transporte de esporas a travs del arquetipo del rbol; la diseminacin del hongo por este mecanismo parece estar limitada al entorno del mismo rbol, en virtud a un mayor arrastre y luego por salpique; aunque la captura de esporas fue muy parcial en nuestro caso; los resultados obtenidos son confirmados por los resultados planteados por Andebran, 1987, acerca de la diseminacin de basidiosporas de Crinipellis perniciosa, agente causal de la escoba de bruja del cacao; Fitt et aj 1986, acerca de los efectos de la intensidad de la lluvia y variacin sobre la dispersin de esporas de Rhynchosporium seca// en hojas de cebada infectadas. En cuanto al salpique, no se realiz una cuantificacin exacta de la accin de este, en cuanto a su accin diseminadora, sin embargo,se considera como muy importante, pues si tenemos en cuenta el carcter musilaginoso de la esporulacin (acrvulos), es lgico pensar que no existe otra va de diseminacin, ya que si se coloca una gota de agua

95

sobre una lesin esporulada, de inmediato comienza a tornarse lechosa, porque empieza a liberar y diluir las esporas, formndose un lquido lechoso. La lluvia al caer sobre el cultivo, por lo entrelazado de sus copas, debe interceptar la mayor parte de la lluvia y producir salpique que llega sobre los frutos sanos o enfermos, dividindose en gotas ms pequeas. Este planteamiento es corroborado por los estudios climatolgicos realizados en Brasil por Miranda, 1985, en sistemas multiestrata confirmando que la interceptacin directa del agua lluvia por las diferentes zonas del rbol es la siguiente: copa, 83%; ramas y hojas, 15% y tronco, 2%. El segundo mecanismo de dispersin, el cual tambin se ha identificado jugando un papel determinante en la diseminacin de esporas, est constituido por un grupo variado de insectos a partir de frutos enfermos en descomposicin en el rbol y en el suelo; la poblacin es diversa entre pequeos dpteros y colepteros de diferentes familias, por su condicin de saprofito y por el empleo de estos substratos para su reproduccin. Estas poblaciones mantienen un permanente contacto entre frutos enfermos en el rbol y el suelo, con hojas, flores y frutos sanos, convirtindose en efectivos inoculadores del hongo. Si bien los ritmos de captura de esporas y portadores, no fue similar ni aproximado al ritmo de la esporulacin del hongo en el rbol, se ha determinado en primera instancia el papel de estos factores en la diseminacin del hongo.

96

XI. DETERMINACIN DE LA EXISTENCIA DE INFECCIONES QUIESCENTES CAUSADAS POR Colletotrchum gloeosporioides PENZ EN FRUTOS DE TOMATE DE RBOL.

LOGROS: Se comprob que la especie Tomate de rbol (Solanum betacea) presenta infecciones quiescentes en sus frutos, causadas por Colletotrchum gloeosporoides Penz. El herbicida Paraquat, result ser el mejor producto para causar senescencia sobre la superficie del fruto de tomate de rbol, permitiendo despertar y/o acelerar infecciones normales y/o quiescentes de Colletotrchum gloeosporioides. El mejor tratamiento para activar infecciones quiescentes en frutos, fue Paraquat utilizado al 10% durante 15 minutos, ms fro a congelacin por 6 horas Para evitar la accin de organismos contaminantes en las cmaras hmedas se debe aplicar a los frutos benomil al 0.1% y cido lctico al 1%. Se determin que las zonas de mayor frecuencia para mantener infecciones quiescentes son el pednculo y la zona de interceptacin de ste al fruto. Se corrobor que el inoculo natural definido como aquel que se recolecta directamente de frutos enfermos en el campo es muy eficiente con porcentajes de infecciones superiores al 90% sin causar heridas a los frutos al momento de la inoculacin. Estos resultados nos permiten confirmar que quiz muchas de las infecciones que se observan en el rbol hayan sucedido mucho antes(meses), razn por la que el control debe ser eminentemente preventivo y no curativo para la antracnoss. RESULTADOS Prueba 1. Evaluacin a productos con posible accin quemante sobre la superficie del fruto de Tomate de rbol. En la Figura 33, se observa la respuesta de los productos con actividad quemante en la activacin de posibles infecciones latentes de Colletotrchum en frutos de tomate de rbol y la separacin de medias segn la prueba de Tukey. En dicha Tabla se observa que se encontraron diferencias significativas entre los productos evaluados. En efecto, los tratamientos 1, 2, 3, 5 fueron iguales al testigo donde se uso inoculo natural.

Figura 33. Respuesta de los productos con accin quemante sobre la activacin de infecciones latentes de C. gloeosporoides. Prueba 1. Los tratamientos, donde se uso Paraquat, Roundup, Gasolina y Fro a congelacin por 6 horas, en frutos "sanos" procedentes de rboles con altos niveles de infeccin, lograron activar las infecciones quiescentes por Colletotrichum en porcentajes superiores al 62%. Caso contrario sucedi con el tratamiento 6, cuyos frutos que no fueron tratados, present solamente un 31% de infeccin. En la Figura 34, se observa la accin quemante del Paraquat hacia la zona de intercepcin con el pednculo y activacin de las infecciones quiescentes por C. gloeosporoides con abundante esporulacin. Los resultados obtenidos con iguales tratamientos de accin quemante sobre la activacin de las infecciones en diferentes partes del fruto. En cuanto al resultado estadstico, se encontraron diferencias altamente significativas entre los tratamientos al interior de cada regin del fruto. Es importante resaltar como el Paraquat y el Glifosato, activaron en porcentajes superiores al 75%, las infecciones en el pednculo. En la zona de intercepcin el tratamiento 1 con Paraquat fue el mejor, activando la infeccin en un 69%.

98

En conclusin, los resultados de esta prueba indican que el mejor producto para activar infeccin latente o quiescente en tomate de rbol fue el Paraquat, utilizado al 10% durante 15 minutos, siendo viable reforzarlo con un tratamiento de Fro a congelacin por 6 horas. Los resultados indican que tambin en Tomate de rbol se presenta el fenmeno de infeccin quiescente, tal como est reportado para otros frutales (Jarvis, 1994). Prueba 2. Evaluacin de diferentes tratamientos combinados para la determinacin de la quiescencia en frutos de Tomate de rbol En esta segunda prueba se encontraron diferencias significativas en cuanto al porcentaje de frutos con infecciones quiescentes en cada tratamiento. En trminos generales, con esta prueba se ratific que el mejor producto para activar las infecciones quiescentes en los frutos, es el Paraquat; tratando los frutos con solucin al 10%, durante 15 minutos, complementando el tratamiento con la aplicacin de fro a congelacin por 6 horas, con la adicin de benomil al 0.1% y cido lctico al 1%, con el fin de evitar organismos contaminantes. En todos los tratamientos donde el Paraquat estaba siendo evaluado, se activaron las infecciones en porcentajes superiores al 62%; mientras que en el tratamiento 9, que consisti en una muestra de los mismos frutos que provenan de una plantacin con altos niveles de infeccin y que no recibieron tratamiento con Paraquat, solamente se obtuvo el 19% de los frutos enfermos (Figura 34). En cuanto a los resultados sobre activacin de infecciones quiescentes en diferentes partes del fruto se destaca el alto porcentaje de frutos con lesiones en el pednculo, con el uso de Paraquat en los tratamientos 1, 2, 3, 4 y 7. El tratamiento Testigo No. 7, no desarroll lesiones de Antracnoss en estas regiones. Con relacin al porcentaje de frutos que activaron infecciones, no se observan diferencias apreciables, resultado lgico teniendo en cuenta que es en esta regin donde la infeccin por antracnoss se expresa comnmente.

99

Figura 34. Infecciones latentes de C. gloeosporioides activadas por Gramoxone. En cuanto al nmero de lesiones activadas por fruto, se evaluaron en dos niveles: Nivel A, porcentaje de frutos con ms de tres (3) lesiones activas y Nivel B, entre 1-2 lesiones por fruto. Se observa como todos los tratamientos a base de Paraquat, activa prcticamente todas las infecciones latentes. Es de aclarar que una lesin se consider como antracnoss, solo si sobre ella se desarrollaban los acrvulos tpicos de C. gloeosporioides. Este resultado da a entender que los frutos de tomate de rbol, en su desarrollo son infectados en mltiples partes, pero pocas veces se manifiestan en condiciones de campo, donde lo ms corriente es observar entre una o dos lesiones como mximo y la mayora ubicadas en la parte media del fruto. Las infecciones en la zona de interseccin con el pednculo son infecciones ocurridas en las primeras fases de desarrollo del fruto y ocasionadas ptalos que se quedan adheridos al fruto, aprisionados por los spalos del cliz que en fase necrtica albergan al patgeno. El inoculo natural tomado de frutos enfermos en el campo, demostr en las inoculaciones un alto grado de efectividad en diferentes pruebas realizadas. Teniendo en cuenta el

100

gran nmero de lesiones por Antracnoss que puede tener un fruto y el afta grado de eficiencia del inoculo natural, es posible pensar que junto con Colletotrichum, existe una biota que puede estar actuando como sinergista, dado que este es considerado un patgeno dbil, con caractersticas de oportunista.

101

XII.

ESTUDIOS DE LA INTERACCIN BIOLGICA DE MICROORGANISMOS RELACIONADOS CON Colletotrichum gloeosporioides (PENZ) PENZ. SACC.

LOGROS: se obtuvieron un total de 53 aislamientos, de los cuales 20 cepas son de Bacillus, 31 cepas de Pseudomonas_ y de Trchoderma - 2 cepas. La cepa de Bacillus -18, Pseudomonas fluorescente - 31 y Trchoderma - 2, ejercieron un efecto antagnico importante sobre la germinacin de conidias de C. gloeosporioides. Por su parte la cepa 2 de Trchoderma, fue el microorganismo que ms inhibi el crecimiento micelial de C. gloeosporoides. La cepa de Pseudomonas no fluorescente - cepa 39, favoreci la germinacin y estimul la formacin de aprsorios de C. gloeosporioides. Es importante continuar la evaluacin sinergista y/o antagonista, con las tres cepas antagonistas y la cepa sinergista "in vivo" en el laboratorio y en el campo. Las pruebas de laboratorio son importantes para determinar el modo de accin de los antagonistas y sinergistas, pero para hacer la seleccin por eficiencia en el control de la enfermedad o en un mayor desarrollo de la enfermedad es necesario realizar experimentos en el campo.

RESULTADOS

12.1 PRIMER ETAPA: AISLAMIENTO, IDENTIFICACIN Y SELECCIN DE MICROORGANISMOS MS PROMISORIOS CON PROPIEDADES ANTAGONISTAS Y SINERGISTAS: Se obtuvo en total 36 aislamientos de antagonistas, 20 de los cuales corresponden al gnero Bacillus y 16 corresponden al gnero Pseudomonas. Como se observa en la Tabla 8, dichos aislamientos se obtuvieron de hojas nuevas, hojas viejas y frutos de 3 edades diferentes: verde mediano, verde grande y maduro de 18 rboles que no haban recibido tratamiento qumico. Su clasificacin se realz mediante las diferentes pruebas bioqumicas necesarias.

Tabla 8. Total de cepas aisladas de hojas y frutos de Tomate de rbol

Estratificacin del rbol Bacillus Pseudomonas

Fluorescentes
Superior Medio Inferior Total 7 2 11 6 3 5 14

NO Fluorescentes

0 0 2 2
DE MICROORGANISMOS

20
AISLAMIENTO,

12.2

MUESTREO,

IDENTIFICACIN

SINERGISTAS A PARTIR DE FRUTOS DE TOMATE DE RBOL CON SNTOMAS DE ANTRACNOSS.

Se obtuvieron en total 15 aislamientos de Pseudomonas no fluorescentes, los cuales se tomaron de 18 rboles de tomate de rbol que no haban recibido tratamiento qumico, de frutos con sntomas de la Antracnoss y ablandamientos bacteriales (Tabla 9). Tabla 9. Cepas aisladas de frutos de Tomate de rbol enfermos por Antracnoss
Pseudomonas Tamao del fruto Fluorescente NO Fluorescente

No.
Maduro Verde grande Verde mediano

No. 10
4 1

0
0 0

12.3 DETECCIN Y AISLAMIENTO DE Trichoderma A PARTIR DE FRUTOS DE TOMATE DE RBOL COLOCADOS EN UN SUELO CULTIVADO CON TOMATE DE RBOL.

Se obtuvieron 2 aislamientos de Trichoderma, de los 25 tomates de rbol de diferentes edades ubicados en el suelo problema.

103

Una vez identificados los microorganismos con potencialidad para ejercer accin sinergista o antagonista, se procedi a observar su comportamiento mediante las siguientes pruebas. Antibiograma Se pudo establecer que en condiciones de laboratorio es factible el control de C. gloeosporoides mediante la utilizacin de aislamientos de Trchoderma spp., Pseudomonas fluorescente y Bacillus spp., lo que coincide con las investigaciones realizadas con estos aislamientos por (khetmalas et al., 1984; Lenne, 1991). El aislamiento que caus mayor inhibicin del crecimiento del patgeno a los 18 das fue el Trchoderma - 2, el cual mostr una alta eficiencia en el control. Los aislamientos de Pseudomonas Fluorescente - 31 y Bacillus - 18 tambin presentaron un buen control, mientras que el aislamiento de Pseudomonas no fluorescente - 39 (sinergista) no inhibi el crecimiento micelial de C. gloeosporoides (Tabla 10) Estos resultados demuestran que el hongo C. gloeosporoides es controlado de manera efectiva "in Vitro" por los tres aislamientos anteriormente citados. Adems, permiten iniciar trabajos en el laboratorio (in vivo), y en el campo para la comprobacin de este control en condiciones naturales. Tabla 10. Antibiograma para crecimiento micelial en (mm) de C. gloeosporoides
DAS No.
T1 T2 T3 T4 T5 Tratamiento Trichoderma Vs Colletotrichum Pseudomonas fluorescente Vs Colletotrichum Bacillus Vs Colletotrichum Pseudomonas no fluorescente Vs Colletotrichum

3
0 6 7 6 7

6 6 11 12 12 12

9 12 18 15 17 15

12 16 21 23 21 25

15 17 23 25 28 33

18 20 25 27 30 40

Colietotrichum (Testigo)

104

12.4

EXPERIMENTO SOBRE GERMINACIN DE CONIDIAS Y FORMACIN DE APRESORIOS SOBRE PLACAS DE VIDRIO (IN VITRO).

Se present una inhibicin fuerte de la germinacin de conidias de C. gloeosporioides. El porcentaje de germinacin de conidias fue de 82% a las 24h y 84% a las 48h en el testigo. En los tratamientos la germinacin estuvo entre 49% - 57% a las 24h y 55% - 62% a las 48h. Las cepas de Pseudomonas fluorescente aislamiento - 31, Bacillus aislamiento 18 y Trichoderma aislamiento 2, demostraron su efecto antagonista. De acuerdo con los anlisis estadsticos no se presentaron diferencias significativas entre ellas. El aislamiento de Pseudomonas no fluorescente - 39, evaluado en el presente estudio, estimul la formacin de apresorios maduros y protoapresorios ms que los otros aislamientos; el porcentaje de apresorios maduros fue de 24% a las 24h y 31% a las 48h, lo que coincide con las investigaciones realizadas con aislamientos de Pseudomonas sp. por (Blakeman, 1977; Me. Cracken, 1979). Colletotrchum gloeosporioides forma ambos protoapresorios y apresoro maduro en presencia de una cepa sinergista comparado con el testigo sin bacteria sinergista (Tabla 11). Tabla 1 1 . Comportamiento de algunas cepas promisorias sobre la germinacin y formacin de apresorios de C. gloeosporioides. Tratamiento Testigo Pseudomonas no fluorescentes - 39 Trichoderma - 2 Bacillus - 1 8 Pseudomonas fluorescente Tiempo (h)

31 CV

24 48 24 48 24 48 24 48 24 48

Germinacin % 82a 84a 77 ab 79 ab 57 c 62 c 51 cd 56 cd 49 cd 55 cd 11.9

Protoapresorio % 1 2 5 7 1 2 1 1 1 1

Apresoro % 5b 6b 24a 31 a 3b 5b 1b 2b 2b 3b 10.9

105

XIII. CUANTIFICACIN DE MICROFLORA EN EL FILOPLANO DE TOMATE DE RBOL (Solanum betacea, (Cav) Sendt), EN EL MUNICIPIO DE SILVANIA (CUNDINAMARCA)

LOGRO
En la dinmica microbial en el filoplano, los gneros con mayor frecuencia de fueron Fusarium, Haplographium, bacteria 3, Alternara, Cladosporium, Nigrospora, Peyronaellaea, Pestalotia y Colletotrchum, identificndose que el comportamiento en cuanto a la dinmica poblacional tiene una relacin directa con los factores climticos, especialmente la precipitacin. El fruto y el racimo floral constituyen los rganos mas afectados por Colletotrchum y a la vez, las estructuras donde mayor cantidad de microorganismos se desarroll, con un alto potencial de antagonistas y saprofitos. Los gneros que demostraron un buen potencial antagonista en pruebas in Vitro, fueron Fusarum, Pestalotia, Alternara, Gliocladium, un Verticilado, Rosellnia, dos bacterias Gram negativa y dos levaduras principalmente, con porcentajes de inhibicin del 50 a 100%; sin embargo, por ser algunos de estos, patgenos en otros cultivos se requiere continuar el anlisis detallado de tales cepas. De la poblacin microbial analizada se seleccionaron como potenciales biocontroladores de C. gloeosporoides, Gliocladium, un verticilado, una bacteria Gram negativa del gnero Pseudomonas, Geotrichum y las levaduras 1 y 2, que potencialmente tendran una mayor posibilidad y xito. La poblacin global de microorganismos en la planta es afectada notoriamente por la aplicacin de fungicidas, llegando a disminuir hasta en un 5% la poblacin, ocasionando, no solo desequilibrio en las poblaciones de microorganismos, si no que puede llevar a que organismos secundarios que no son patognicos, puedan constituirse en potenciales generadores de dao de la planta.

RESULTADOS 13.1 VARIACIN CUALITATIVA Entre las semanas 30 y 47 del ao 1997, se colectaron 36 gneros de microorganismos clasificados y otros 15 que no pudieron ser identificados. Los identificados pertenecen a la base Deuteromycetos, destacndose el orden Moniliales, con los gneros de la familia Moniliaceae: Phaecilomyces, Penicillium, Verticillium, Ramulara, Fusarum, Dactylaria, Alternara, Cephalosporum, Cercospora, Cladosporium, Epicocum, Geotrichum, Gliocladium, Haplographium, Harposporum, Mycogine, Nigrospora, Pithomyces, Ulocladium, Scolecotrichum; de la familia Dematiaceae, Curvularia; en segundo lugar se encontr el orden Sphaeropsidales, del cual se encontraron los gneros Diplodia, Peyronellaea y Sphaeropsis, en tercer lugar, se encontr el orden Melanconiales, con los gneros Colletotrichum y Pestalota, y por ltimo dos Oomycetos, muchos de estos gneros son por naturaleza saprofitos, otros patgenos y otros biocontroladores. Se encontraron diversas colonias bacteriales, identificadas como Gram negativas y Gram positivas, denominadas en el estudio como Bacteria 1, de color blanco lechoso semitransparente de forma irregular y mucosa; Bacteria 2 Gram negativa, de color amarillo claro transparente, borde definido; y Bacteria 3, de color amarillo fuerte borde definido, colonias dispersas en puntos pequeos. Se encontr una levadura color rosado, borde definido, de contextura compacta y sobresaliente. En las ramas superiores del rbol, de plantas sin control, sanas como enfermas, la poblacin microbial alcanz el 15% del total de microorganismos cuantificados; en brote vegetativo del tercio superior del rbol se present un 14.3% de los aislamientos, la unidad de muestreo con mayor cantidad de microorganismos es la correspondiente a enfermos sin control y la menor a enfermos con control (Tabla 12). Sin embargo, el fruto y el pednculo del racimo floral ocupan un lugar importante en cuanto a la cantidad de organismos all presentes, los que llegan al 12.8% y 12.4%, respectivamente. Los lugares en que se hall menor poblacin de microorganismos fue

107

en cicatrices, ramas inferiores, inflorescencias y hojas con 11.4%, 11.3%, y 10.7%, respectivamente. Tabla 12. Poblacin de microorganismos en los estratos de la planta por unidad de muestreo
ESTRATO

1
79 112 94 69 354 14.3

2 94 89 105 85 373 15.1

3 78 44 80 63 265 10.7

4 88 59 94 65 306 12.4

5 80 61 83 54 728 11.3

6 102 55 108 50 315 12.8

7 78 50 94 60 282 11.4

8 69 81 70 73 293 11.9

Total 668
551 728 519
2466

% 27
22.3

Sano sin control Sano con control Enf. Sin control Enf. Con control Total

27 21

%
5: Inflorescencia

100

1: Brote vegetariano superiores

2: Ramas superiores 6: Frutos

3: Hojas 7: Rama Inferior

4: Pednculos 8: Cicatriz

El hecho de que el arquetipo de la planta permita mayor recepcin de luminosidad en el tercio superior de la planta, estimulara el mayor crecimiento de microorganismos en esta zona del filoplano, la cual es dispersa por el viento, el arrastre y salpique del agua, que favorecen el depsito de esporas en la copa del rbol, lo que no implica que con otras condiciones de densidad del cultivo, la penetracin de luz y viento sea homognea en todos los estratos de la planta y pudiera presentarse una relacin similar en la cantidad de microorganismos distribuidos en todo el rbol. 13.2 VARIACIN ESTACIONAL DE MICROORGANISMOS La presencia semanal de microorganismos present, para el perodo de evaluacin, un coeficiente de variacin del 39%; as hacia la semana 30 se obtuvo 51 colonias y en la 47, 636 colonias, variacin que se relaciona directamente con la precipitacin, como se observa en la Figura 35; se confirma que en el perodo de baja precipitacin correspondiente a las semanas entre la 24 y 34, el acumulado de microorganismos es bajo con respecto a las otras semanas, en las cuales tras el aumento progresivo de la

108

precipitacin, se presenta un marcado ascenso de la cantidad de organismos cuantificados.

Figura 35. Variacin cuantitativa de microorganismos en relacin con la precipitacin. Silvania, Cundinamarca. En la semana 47 hay un 28% ms de microorganismos identificados, siendo esta, la de mayor presencia microbial, seguida por la semana 41 con un 22% y de la semana 30, que presenta un 2% de los microorganismos cuantificados; esta situacin es apenas lgica, dado que la condicin ms favorable a cualquier microorganismo para su multiplicacin, es la humedad y por ende la precipitacin.
13.3 POBLACIN MICROBIAL POR ESTRATO.

En los estratos evaluados del rbol desde el tallo hasta la parte superior o copa de este, se encuentra una cantidad apreciable de diferentes microorganismos, los cuales estn representados en los gneros de Alternara. Con 12.5%. Cladosporium, 9.8%, Colletotrichum, 4.9% Dactylara, 0.7%, Fusarum 18%, Geotrchum, 3.6%, Bacteria 2, 9.7%, Bacterial 5.5%, Haplographium, 2.8%, Harposporum, 1%, Nigrospora, 1.7%, Penicillium, 0.8%, Pestalotia, 4.2%, Peymnaellaea, 6.6%, Phymatium, 2%, Rose/inia,1.3%, Ulocladium, 1.5%, otros microorganismos no identificados corresponden al 15.8%; esto demuestra la gran diversidad microbial presente en los diferentes estratos del rbol independientemente de la condicin fitosanitaria.

109

13.4 MICROFLORA ASOCIADA A RAMAS, HOJAS Y BROTES VEGETATIVOS DEL TERCIO SUPERIOR
Haciendo relacin a las estructuras vegetativas del rbol, correspondiente a ramas, hojas y brotes vegetativos del tercio superior de la planta, donde se encuentra la mayor cantidad de microorganismos, se aislaron en orden de importancia; Fusarum, Bacteria 4, Bacteria 3, Cladosporium, Peyronaellaea, Alternara, Geotrchum, Pestalotia y Colletotrchum, encontrndose una diversidad similar de microorganismos a las encontradas en otras estructuras, con un coeficiente de variacin de 9.5%, organismos que se encuentran dentro de las estructuras de la planta con mayor frecuencia. En las hojas se present la menor cantidad de microorganismos con un total de 265 aislamientos, correspondiendo al 10.7% del total de microorganismos, en aislamientos obtenidos predominaron Fusarum, Cladosporium, Bacteria 3, Haplographium, Peyronallaea Pestalotia, Nigrospora, Geotrchum, Alternara, Bacteria 4 y Colletotrchum entre otros.

13.5 POBLACIN MICROBIAL DEL TERCIO MEDIO DE LA PLANTA

En el estrato medio de la planta existe un nmero inferior de colonias aisladas con respecto al tercio superior, se encontr una leve variacin en el aumento de la diversidad de especies detectadas. En el caso del pednculo del racimo floral, se cuantific el 12.4% de organismos, durante el perodo de evaluacin, encontrando a Fusarum como dominante sobre otros organismos entre los que se encuentran Cladosporum, Peyronaellaea, Bacteria 3, Pestalotia, Alternara, Phymatium, Haplographium, y Colletotrchum, entre otros. Para el caso de las inflorescencias, aparecen en su orden, la Bacteria 4, Cladosporium, Fusarum, Alternara, Colletotrchum, Peyronallaea, Bacteria 2, Phymatium, y Gliocladium, entre otros, correspondiendo al 11.3% del total cuantificado. En los frutos, se obtuvo el 12.8% de la microflora cuantificada, destacndose en orden de importancia Fusarum, y Colletotrchum', tambin se encuentra en su orden la Bacteria 3,

110

Cladosporum, Peymnallaea, Haplographium, Geotrichum, Phymatium, Alternara y la Bacteria 2 entre otros.

En la rama inferior Fusarum, supera notoriamente en cantidad a los organismos restantes, entre los que se encuentran la Bacteria 4, Geotrichum, Pestalotia, Peymnallaea, Cladosporum, Bacteria 3, Colletotrichum, Alternara, Phymatium, y Bacteria 2, obteniendo el 12.4% del total. Como puede apreciarse la diversidad de microorganismos identificada en este tercio del rbol, corresponden al 47.9% del total de microflora cuantificada en el rbol, constituyendo la zona de ms diversidad de microflora, debido a que en este estrato se evaluaron ms estructuras, sin embargo, cuantificando estructura por estructura es muy notoria la mayor cantidad de microorganismos encontrada en el tercio superior del rbol en donde se obtuvo el 29.4%, en tan solo dos estructuras del rbol.

13.6 POBLACIN DEL TERCIO INFERIOR DEL RBOL

En cuanto a cicatrices en el tercio inferior del rbol, los gneros que prevalecen son Fusarum, Alternara, Bacteria 4, Pestalotia, Geotrichum y Ulocladium; siendo este el estrato con mayor cantidad de microorganismos, debido posiblemente a la susceptibilidad de los tejidos, y a la permanencia como a la invasin de saprofitos que a su vez se benefician de la morfologa corrugada del tallo y de las deformaciones causadas por heridas mecnicas y naturales. En todas las estructuras de la planta, es notoria la prevalencia de Fusarum spp, con respecto a los dems organismos; constituyndose el de mayor distribucin en la planta con una frecuencia del 37%, mientras que los microorganismos que presentaron menor frecuencia fueron Phitomyces, Scolecotrchum, Cephalosporum, Curvulara, Phaeclomyces, Ramulara y Verticillium. Lo anterior no implica que en trabajos posteriores, an ms detallados que el presente, se presenten con mayor frecuencia y cantidad.

111

13.7

PRESELECCION

DE

MICROORGANISMOS

MEDIANTE

PRUEBAS

DE

ANTAGONISMO IN VITRO Estas pruebas se realizaron en principio para todos los gneros colectados, de acuerdo a la metodologa planteada. Las pruebas arrojaron en primer lugar la seleccin de 21, aislamientos de un total de 52, morfolgicamente diferentes que presentaban algn tipo de antagonismo. Los hongos que presentaron el mayor porcentaje de inhibicin del crecimiento de CoHetotrchum, fueron Gliocladium, Fusarum, Zigomyceto y Rosellinia con el 100%, mostrando un tipo de antagonismo por contacto, extendindose sobre CoHetotrchum (Figura 36). Rosellinia, especficamente "consume" totalmente a CoHetotrchum, aspecto muy importante en su microhabitat, pues se present a travs del tiempo en un bajo porcentaje. A pesar de esto no lo consideramos como potencial antagonista, por su condicin patognica en muchos cultivos, al igual que Fusarum.

Figura 36. Antagonismo de hongos colectados con Colletotrchum, 8 das de despus de siembra

112

Otros hongos, entre los que se encuentran Alternara, Ulocladium, Curvularia, Nigrospora, presentan un porcentaje mayor al 60% de inhibicin; a diferencia de Curvularia, que solo se present en la poca seca, los dems, Ulocladium, Alternara y Nigrospora, se presentan durante todo el tiempo de estudio, desde la semana 35 a la 47, poca en la que se presenta alta humedad. Las bacterias Gram negativas 2 y 3 no presentaron inhibicin, por el contraro mostraban los dos microorganismos un crecimiento normal de la colonia, lo que indica que posiblemente hay cierto grado de sinergismo entre estas y Colletotrchum. Por el contraro, dos de las bacterias Gram negativas colectadas en el agua, en las pruebas de dispersin mostraron antagonismo del 92% sobre Colletotrchum, bacterias identificadas preliminarmente como Pseudomonas en Agar - P, igualmente se encontr en estas pruebas dos levaduras que tambin ejercieron antagonismo a Colletotrchum. Estos resultados nos permiten concluir que existen grandes posibilidades de desarrollar en corto tiempo una alternativa de manejo de la antracnoss de tipo biolgico, con lo cual se estara dando un gran salto en el compromiso de contribuir a la sostenibilidad del sistema de produccin, esta investigacin se seguir desarrollando.

113

XIV.

AVANCES EN EL CONTROL DE LA ANTRAGNOSIS MEDIANTE LA APLICACIN DE FUNGICIDAS Y PODA FITOSANITARIA

LOGRO
Se confirm que es posible recuperar cultivos altamente infectados si se maneja en forma apropiada la poda sanitaria y de mantenimiento, adems de un estricto manejo de productos qumicos, aplicados bajo el criterio de umbral de infeccin. En todos los casos la respuesta al manejo no es inmediata y solo hasta cuando se coseche toda la fruta existente al inicio, se comenzarn a ver los beneficios. Entre los tratamientos evaluados se presentaron diferencias altamente significativas, siendo los mejores tratamientos, el mancozeb FW, 6.5cc/L, cada semana y recoleccin de frutos enfermos cada 2 semanas, con un 13% de infeccin, seguido del tratamiento 6, que consisti en la aplicacin en rotacin de clorotalonil y mancozeb, 6.5cc/L y recoleccin de frutos enfermos cada semana, con 20% de infeccin, seguido del tratamiento 2, que consisti en la aplicacin de mancozeb FW, 6.5cc/L, con umbral al 11% y recoleccin de frutos enfermos cada semana, con un 23% de infeccin. Con el manejo del umbral se logr reducir en 11 el nmero de aplicaciones. Los anteriores tratamientos fueron tambin los ms econmicos, con un costo total de $1.189.000/ha, $1.694.000/ha y 1.734.000/ha, respectivamente, mientras el ms costoso result ser la aplicacin de la mezcla de clorotalonil mas Hidrxido cprico, con un costo total de $4.188.000/ha. Se logr confirmar que cuando se realiza un manejo integral del follaje, se redujo el inoculo efectivo y la incidencia de antracnoss.

RESULTADOS
La investigacin se realiz en los perodos que se denominaron Fase I y Fase II en la misma finca y en las mismas parcelas experimentales. La Fase I que comprendi un perodo de 8 meses, desde noviembre 16 de 1996 hasta julio 4 de 1997 y la Fase II, desde julio 10 de 1997 hasta marzo 3 de 1998. Aclarando que el experimento que se estableci en la Fase II, obedeci al bajo control de la Antracnoss obtenido en la Fase I.

14.1 CONTROL DE LA ANTRACNOSS DURANTE LA FASE I Con la finalidad de conocer el estado sanitario del lote experimental, en la tabla 13, se presenta el estado sanitario, en nmero de frutos enfermos, sanos, porcentaje de infeccin y total de frutos cosechados. Como se aprecia el porcentaje de infeccin super el 89% en todos los tratamientos, lo que signific un nmero elevado de frutos enfermos por rbol superior a 64 frutos. Tabla 13. Estado sanitario inicial en porcentaje de infeccin por Antracnoss y nmero promedio de frutos enfermos y sanos por rbol para la Fase I.
Tratamiento No. Frutos sanos/rbol 8 5 6 3 8 7 6,17 No. Frutos enfermos/rbol 73 77 71 87 64 64 74,4 90 94 92 97 89 90 92,4 % de Infeccin Total de frutos/rbol 81 83 78 90 72 72 80,8

1
2 3 4 5 6 Promedio

Despus de 8 meses de aplicacin de los tratamientos no se logr controlar la enfermedad; sin embargo, y haciendo referencia al anlisis de varianza, se encontraron diferencias altamente significativas entre los 6 tratamientos para las variables: porcentaje de infeccin, nmero de frutos enfermos y nmero de frutos sanos. En la figura 37 y tabla 14 y, se puede observar que despus de los 8 meses de aplicaciones de fungicidas aunque existen diferencias significativas, el porcentaje de infeccin y el promedio de frutos enfermos por rbol fue alto. Segn la prueba de tukey, el mejor tratamiento fue el 1, que consisti en la aplicacin de mancozeb cada semana en poca lluviosa y cada 2 semanas en poca seca, con remocin de frutos enfermos cada semana.

115

Figura 37. Promedio de frutos sanos y enfermos por rbol y porcentaje de infeccin de antracnoss en la fase I. Tabla 14. Anlisis de Varanza para promedio de frutos sanos, enfermos y porcentaje de infeccin por rbol, Fase I (Nov/96 - Jul/97).
Tratamiento No. Frutos sanos No. Frutos enfermos % de Infeccin Total de frutos

1
2 3 4 5 6 CV

5 6 A* 36 AB 19 C 28 BC 24 C 19 C 29

175 C 203 C 300 A 254 B 285 AB 241 B 24

76 C 85B 94A 90 AB 92 A 93 A 34

231 240 319 282 310 260

* Valores con la misma letra no difieren estadsticamente a nivel del 5% segn Tukey.

116

Teniendo en cuenta el escaso control obtenido an con la aplicacin de fungicidas sistmicos cada dos semanas, es posible deducir que la mayor parte de la fruta cosechada ya se encontraba enferma, antes del comienzo de la aplicacin de los fungicidas en los tratamientos, debido posiblemente a infecciones ocurridas en los comienzos del desarrollo de los frutos, que se pueden volver latentes o quiescentes y solo se activan cuando los frutos estn prximos a la madurez o despus de la cosecha.

14.2 CUMPLIMIENTO DEL UMBRAL, FASE I

En la tabla 15, se detalla el nmero de aplicaciones realizadas durante los 8 meses de la fase I, el porcentaje de infeccin, el nmero de veces en que se cumpli el umbral y las semanas del ao en las cuales se cumpli este. En los tratamientos donde se program realizar las aplicaciones con umbral, no se cumpli durante los 8 meses, por la alta incidencia. Tabla 15. Porcentaje de infeccin, nmero aplicaciones de fungicidas y su relacin con el umbral de decisin al 11% durante la Fase I. Tratamiento
1 2 3 4 5 6

%de Infeccin
76 85 94 90 92 93

No. De aplicaciones 22
14 14 14 22 0

veces que se cumpli umbral 0 0 0

Semanas en que se cumpli umbral -

14.3 COSTOS FASE I

En la tabla 16, se detallan los costos de aplicacin de fungicidas de acuerdo al tratamiento y fungicida utilizado, los costos de remocin de frutos, la produccin el Kg/ha y el ingreso bruto. Se observa que el costo de la remocin de frutos enfermos del rbol, como en el caso del tratamiento 1, es ms costoso que la misma aplicacin del fungicida. Dicho resultado da a entender que el manejo de esta enfermedad debe ser preventivo,

117

para evitar que la enfermedad alcance niveles epidmicos, donde es casi imposible lograr controles satisfactorios de la enfermedad a costos razonables. Se diferencian el tratamiento 1 y 2, por alcanzar mayor produccin de fruta sana con 4978 Kg/ha y 3200 Kg/ha respectivamente y, con el mayor ingreso bruto $2'489.000/ha y $1'600.000/ha respectivamente. El menor costo por aplicacin se obtuvo en el tratamiento 2 con $568.000/ha. El tratamiento 1 debido al mayor nmero de aplicaciones, 22, result ser ms costoso que el tratamiento 2, con 14 aplicaciones, teniendo en comn el mismo fungicida, mancozeb 3.5 g/L. Tabla 16. Costo de control de la Antracnoss de tomate de rbol por tratamiento durante 8 meses. Fase I. Tratamiento Costo aplicacin * Costo manejo cultural remocin de 1 '050.000 840.000 840.000 840.000 840.000 840.000 Produccin en kg /ha 4978 3200 1689 2489 2134 1689 Ingreso bruto 2'489.000 1 '600.000 844.500 1 '244.500 1 '067.000 844.5000

1
2 3 4 5 6

/ ha ($) 893.000 568.000 594.000 581.000 900.000 0

En cuanto a la prctica de manejo cultural, remocin de frutos enfermos, el costo fue igual para los tratamientos 2, 3, 4, 5, y 6, con periodicidad cada dos semanas, $840.000/ha, con excepcin del tratamiento 1, cuyo valor fue $1'050.000/ha, debido a la frecuencia semanal; la remocin de frutos es ms costosa que el solo testigo qumico, Aunque los mejores tratamientos fueron el 1 y 2 con aplicacin de mancozeb, con porcentajes de control entre 70 y 95%, este experimento con duracin de 8 meses, no super el 24%. Este resultado se atribuye al alto nivel de enfermedad y concentracin de inoculo al comienzo del experimento y muy posiblemente a la existencia del fenmeno de infecciones latentes las cuales se activan meses despus, como se registra para banano, aguacate y mango entre otros Balley (1992).

118

14.4 CONTROL DE LA ANTRACNOSIS DURANTE LA FASE II.

Debido a los resultados negativos de la fase I, se crey necesario replantear nuevamente los tratamientos, iniciando un nuevo experimento, y, que en este trabajo se relaciona como fase II, utilizando para tal efecto los mismos rboles que la Fase I. En la tabla 17, se observa el estado inicial de la enfermedad, en cuanto a nmero de frutos sanos, enfermos y porcentaje de infeccin para cada tratamiento, solo el tratamiento 1 (aplicacin de mancozeb cada semana) inici con el porcentaje mas bajo de infeccin, con 45%. En los dems tratamientos el porcentaje de infeccin inicial super el 76%. Tabla 17. Estado sanitario del mes de julio de 1997, en porcentaje de infeccin y promedio por rbol de frutos enfermos y sanos para la Fase II. Tratamiento No. Frutos sanos No. Frutos enfermos %de Infeccin 45 76 87 82 89 92 75,8 Total de frutos

1 2
3 4 5 6 Promedio

19 9 8 9 6 3
10,2

16 30 53 42 48
35 37,8

35 39 61
51 54 38 48

En la tabla 18, se presenta el resultado final en cuanto al nmero de frutos sanos y enfermos por rbol y porcentaje de infeccin de la fase II. Se encontraron diferencias altamente significativas entre los tratamientos para todas las variables analizadas. Se obtuvo el mayor control de la enfermedad en el tratamiento 1 (aplicacin de mancozeb semanal y recoleccin de enfermos cada 2 semanas), con un 13% de infeccin. Sin embargo, segn la prueba de Tukey, con respecto al porcentaje de infeccin no se encontraron diferencias estadsticas entre el tratamiento 1 y los tratamientos 2, 5 y 6. Con relacin al nmero de frutos enfermos, el mejor tratamiento tambin fue el 1, con 52 frutos, seguido del tratamiento 6 que consisti en la rotacin de clorotalonil - mancozeb,

119

Tabla 18. Resultado final del anlisis de Varianza para el nmero promedio de frutos por rbol tanto sanos como enfermos y porcentaje de infeccin por Antracnoss Fase II (Jul/97 - Mar/98). Tratamiento No. Frutos sanos 361 A* 290 B 203 C 268 B 287 B 281 B 26

No. Frutos enfermos

52 D 88 B 134 A 100 B 96 B 69 C 28

% de Infeccin Total de frutos

13C 23 BC 40 A 27 B 25 BC 20 C 29 413 378 337 368 383 350

1
2 3 4 5 6 CV

' Valores con la misma letra no difieren significativamente a nivel del 5% segn Tukey.

y recoleccin de frutos enfermos cada semana, con 69 frutos. En nmero de frutos sanos el mejor tratamiento fue el 1, con 361 frutos seguido del tratamiento 2 (aplicacin de mancozeb con umbral del 11% y recoleccin de frutos enfermos cada semana), con 290 frutos. En la figura 38, se detalla el resultado final de la fase II en nmero promedio de frutos sanos y enfermos por rbol lo mismo que el porcentaje de infeccin durante los 8 meses; se destaca el aceptable comportamiento de los tratamientos 1, 2 y 6, como los de menor cantidad de frutos enfermos y a su vez mayor produccin de frutos sanos, con porcentajes de infeccin final por debajo del 30% para los tratamientos 1, 2, 4, 5 y 6. 14.5 CUMPLIMIENTO DEL UMBRAL, FASE II En la tabla 19, se presenta el porcentaje de infeccin y el nmero total de aplicaciones de fungicidas durante la fase II, el nmero de veces en que se cumpli el umbral y las semanas del ao en las cuales este criterio se cumpli. Los resultados indican que se logr una reduccin significativa en el nmero de aplicaciones, especialmente en los tratamientos 2 y 6, en los cuales se realizaron solo 24 aplicaciones, comparadas con 35 aplicaciones que fueron realizadas en el tratamiento 1, donde se utiliz mancozeb como

120

Figura 38. Promedio de frutos sanos y enfermos por rbol y porcentaje de infeccin de antracnoss en la fase II. testigo. El umbral para el tratamiento 2, se cumpli en 11 oportunidades, 7 veces durante el ao 1997 y 4 en el primer semestre del ao 1998. En el tratamiento 2 tambin se cumpli en 11 oportunidades. Tabla 19. Porcentaje de infeccin y nmero de aplicaciones de fungicidas segn las semanas en que se cumpli el umbral del 11% durante la Fase II. Tratamiento %de infeccin No. De aplicaciones 35 24 32 29 30 24 veces en que Semanas que se cumpli el se cumpli el umbral (11%)1 997 - 1998 umbral (11%)

1
2 3 4 5 6

12 23
40 27 25 20

11
3 6 5 11 46 44 a 46, 52, 39 a 44,46, 3, 4, 6, 8 3,4,8 2, 3, 4, 6, 7, 8 2, 3, 4, 8 1 a 4, 6 a 8

121

Teniendo en cuenta los aspectos de sostenibilidad y menor contaminacin ambiental, los tratamientos 2 y 6, fueron los mas apropiados, ya que con un menor nmero de aplicaciones en el perodo de duracin de la fase II (8 meses), no presentaron diferencia significativa, en porcentaje de infeccin con los otros tratamientos. Segn estos resultados, se puede deducir que tambin para el control de la Antracnoss en tomate de rbol la decisin de aplicar un fungicida, se puede hacer teniendo como principio el conocimiento de la variacin de enfermedad por medio del monitoreo constante de los niveles de infeccin y el componente climtico, lo que se traduce en la utilizacin del umbral de decisin, para un manejo ms eficiente y sostenible de la enfermedad.

14.6 COSTOS DE LA FASE II

Los costos del manejo de la Antracnoss, calculados por hectrea, se presentan en la tabla 24, incluyendo costos de aplicacin por tratamiento, el fungicida utilizado, costos de remocin de frutos enfermos, la produccin en Kg/ha y el ingreso bruto para el perodo. En cuanto al costo de aplicacin, los tratamientos ms econmicos fue el 2, 6 y 1 con un costo total de $1'189.000, $1'694.000 y 1734.000 respectivamente, siendo tambin el tratamiento 2, mancozeb con umbral del 1 1 % el ms sostenible de todos, seguido del tratamiento 6, rotacin de mancozeb - clorotalonil y umbral al 11%. El ms costoso, result ser el tratamiento 5 (mezcla de clorotalonil + Hidrxido cprico con umbral del 11%), con una inversin de $ 4.188.000 (tabla 20). Tabla 20. Relacin del costo de control de la Antracnoss de tomate de rbol por tratamiento durante 8 meses Fase II. Tratamiento Costo de aplicacin / Valor manejo cultural Produccin en ha($) remocin de frutos($) kg/ha 1734.000 1 '050.000 32086

1
2 3 4 5 6

Ingreso bruto ($) 16'043.000 12'887.500 9'021.500 11'910.000 12754.500 12'487.500

1'189.000 2'269.000 2'829.000 4'188.000 1 '694.000

2'1 00.000 2'1 00.000 2'1 00.000 2'100.000 2'100.000

25775 18043 23820 25509 24975

122

En cuanto al costo del manejo cultural de remocin de frutos enfermos, el tratamiento ms econmico result ser el 1 (remocin cada 2 semanas), el cual en comparacin con los dems tratamientos solo requiri la mitad de los jornales utilizados en los otros tratamientos. Este elevado costo en el control cultural podra explicar el por qu el agricultor es muy renuente a la revisin y remocin de frutos enfermos en forma peridica, aunque en realidad los productores desconocen el costo, y solo lo hace muchas veces en forma deficiente, cuando est cosechando fruta sana madura. En cuanto a la produccin en Kg/ha para la fase II, el tratamiento de mayor rendimiento fue el 1, con 32086 Kg/ha, seguido del tratamiento 2, 5 y 6 con 25775 Kg/ha, 25509 Kg/ha y 24975 Kg/ha respectivamente. Con relacin al ingreso neto, los mejores tratamientos resultaron ser el 1, 2 y 6, con $16'043.000, $12'887.500 y $12'487.500 respectivamente. Para este clculo se tom como referencia el precio de $500 por kg de tomate, registrado en Marzo de 1998.

14.7 VARIACIN DE LOS TRATAMIENTOS A TRAVS DEL TIEMPO DURANTE LA FASE IYII
En la figura 39, se presenta el comportamiento de todos los tratamientos a travs del ensayo; en cuanto al nmero de frutos sanos y enfermos, los resultados fueron contrarios, mientras en la fase I, la cantidad de frutos cosechados fue enferma, en la fase II la cantidad de frutos cosechados fue sana, resaltando los tratamientos 1, 2 y 6 como los mejores. En todos los tratamientos, la fluctuacin, tanto en frutos sanos como enfermos fue similar, indicativo del efecto fisiolgico del rbol como del factor climtico. Los resultados de la fase II ratifican que es viable controlar con eficiencia la enfermedad con fungicidas, especialmente a base de mancozeb y clorotalonil y an ms se pueden reducir los costos si se aplican estos fungicidas con un criterio de umbral de decisin, que en este trabajo fue del 11%, sin dejar a un lado la prctica de recoleccin de frutos cada dos semanas.

123

Tambin es evidente del estudio que para el manejo de esta enfermedad, es

indispensable reducir al mximo la cantidad de inoculo inicial, si se quiere lograr un Figura 39. Variacin estacional de fruta enferma y sana para las fases I y II. Manizales , Caldas efecto con los fungicidas; por lo tanto, el manejo de la arquitectura del rbol mediante podas, limpieza sanitaria, as como la posible eliminacin de todos los frutos del rbol en un momento dado y las podas de mantenimiento para reducir la altura del rbol y facilitar la aireacin son prcticas bsicas y fundamentales en el manejo del inoculo, como se observ en este estudio. En conclusin toda prctica de manejo de la antracnoss, deber contemplar estrategias de manejo agronmico del cultivo, cultural de la enfermedad y aplicacin preventiva de productos qumicos, para tener xito.

124

XV. GENERAR DIFERENTES ALTERNATIVAS Y MODELOS DE MANEJO DE LA ENFERMEDAD, QUE PUEDAN SER EVALUADOS Y UTILIZADOS POR LOS PRODUCTORES.

LOGROS Se ha confirmado de manera prctica la posibilidad de manejar la enfermedad de manera ms integral, con un enfoque epidemiolgico en la aplicacin qumica. Se logr tambin confirmar la posibilidad de prolongar la vida til de la planta ms all de los 2 o 3 aos de produccin, para optimizar los ciclos productivos del tomate de rbol. Se confirm que es posible reducir a cero el inoculo dentro del cultivo, mediante las prcticas utilizadas de remocin total de fruta y renovacin de copa, que en trminos prcticos significa que la enfermedad tiene su propia dinmica dentro del rbol. Tambin se confirm que es posible reducir el nmero de aplicaciones qumicas y el papel del manejo del rbol, podas, limpieza, bajada de altura, fertilizacin, etc., en el control de antracnoss y en la mejora de la produccin. Igualmente se confirm en la prctica, la posibilidad de utilizar la tcnica del umbral del 1 1 % de infeccin, como argumento para aplicar qumico, as como la eficiencia y eficacia de intercalar la aplicacin de mancozeb y clorotalonil. En cuanto a la aplicacin de fungicidas, se evidenci la necesidad de mejorar la aplicacin en cuanto a volumen de agua y sistema de aplicacin(mquina y boquilla). 15.1 RESULTADOS PARCIALES MANIZALES Tratamiento 1. En la Figura 40, se presenta los resultados que hasta el momento se estn obteniendo en el tratamiento de manejo integrado de la antracnoss, mediante la aplicacin de productos con base en mancozeb y clorotalonil en rotacin y en la subparcela testigo, realizando la remocin de frutos enfermos cada semana. En dicha Figura se observa como en la subparcela del tratamiento testigo, las prdidas vienen siendo elevadas, con

Figura 40. Comportamiento de la antracnoss en el tratamiento testigo sin control y con control mancozeb - clorotalonil en rotacin. un promedio de infeccin del 68%, luego de un ao de evaluaciones. El periodo ms crtico de epidemia se ubic entre la semana 44 del ao 1998 y la12 del ao 1999, registrando solo 199 frutos sanos/rbol/ao (17 docenas), con un valor de $ 11.600. Por su parte en el tratamiento qumico, aunque la enfermedad present niveles altos entre la primera y octava semana de 1998, las prdidas durante el primer ao estuvieron en el 39%, con un rendimiento de 425 frutos sanos/rbol/afio, equivalente a 35 docenas, que pueden alcanzar un valor de $ 24.500. Tratamiento 2. En la Figura 41, se detalla el comportamiento del tratamiento donde se realiz remocin de todos los frutos del rbol, sanos y enfermos de cualquier edad, iniciando luego la proteccin a los nuevos frutos con mancozeb y clorotalonil en rotacin y de la subparcela

126

sin control qumico; realizando en ambas subparcelas la remocin semanal de frutos enfermos. En la subparcela sin control qumico, las prdidas tambin fueron elevadas, del orden del 88% y slo 43 frutos sanos/rbol/ao. En cambio en la subparcela bajo control qumico, aunque tambin present un incremento de la enfermedad entre la semana 3 y 12 del ao 1998, el porcentaje de infeccin se ubic en 50%, con 198 frutos sanos (17 docenas). Es de anotar que el promedio de frutos fue ms bajo en las dos subparcelas de este tratamiento, debido a la remocin de todos los frutos del rbol al comienzo del tratamiento. Los resultados de este tratamiento ratifican la necesidad del control qumico de esta enfermedad, y demostrando que al interior del rbol de tomate de rbol existen otras fuentes de infeccin, ocultos o latentes, que los fungicidas protectantes no pueden controlar y que se disparan durante los perodos hmedos.

Figura 41. Comportamiento de la antracnoss en el tratamiento dos. Remocin de toda la fruta del rbol sin control y con control: mancozeb - clorotalonil en rotacin.

127

Tratamiento 3. En la Figura 42, se observa el comportamiento de las dos subparcelas del tratamiento tres, que consisti en la renovacin total de follaje (poda candelabro) a rama terciaria y luego aplicacin de mancozeb- clorotalonil en una subparcela. La otra subparcela se dej como testigo sin fungicidas; en ambas subparcelas se hizo remocin semanal de frutos enfermos. En la subparcela con fungicidas la infeccin se encuentra en un nivel de 6%, con un promedio de frutos sanos por rbol de 153, equivalente a 13 docenas/rbol, que representan un ingreso de $ 9.100/rbol. Por el contrario en la subparcela sin proteccin qumica, el porcentaje de infeccin se encuentra en el 82%, registrando 163 frutos enfermos/rbol. En la figura se detalla que los primeros frutos enfermos recolectados en la subparcela sin fungicida, se presentaron en la semana 8, luego de 7 meses de iniciado el tratamiento. En la subparcela bajo proteccin qumica los primeros frutos sanos se cosecharon 9 meses despus de realizada la renovacin de copa, continuando en aumento, resaltando que el nmero de frutos enfermos/rbol ha sido mnimo. Vale la pena anotar que en este tratamiento, la floracin se present muy tarde, abril-mayo con un cuajamiento de frutos muy regular, situacin que puede atribuirse a factores ambientales, especialmente el invierno y bajas temperaturas al comienzo del ao. Como complemento a este tratamiento, se analizaron los resultados obtenidos en otra parcela de 8 rboles, a los cuales se les hizo la renovacin total de copa a finales del ao 1997, siendo tratados posteriormente con una mezcla de mancozeb ms kocide, aplicados bajo el criterio de umbral de infeccin al 11%, y con evaluaciones semanales. En este tratamiento se logr una gran cosecha de frutos sanos maduros, luego de 8 meses de realizado el tratamiento, con un rendimiento de 146 frutos/rbol/ao y 16% de infeccin. Estos resultados obtenidos en rboles con 6 aos de edad, que presentaban altos niveles de infeccin; demuestran el papel tan importante que estn ejerciendo en el curso de la enfermedad las diferentes fuentes de infeccin ubicados en el rbol, tanto en los residuos de las inflorescencias, como en las hojas viejas y sanas; a su vez ratifican que es perfectamente viable rehabilitar los rboles de tomate de rbol 128

mediante podas severas de renovacin de follaje (copa) y que el rbol paulatinamente vuelve a ser productivo, siendo el manejo de la antracnoss ms fcil.

Figura 42. Comportamiento productivo de las parcelas de renovacin de copa con y sin control, mancozeb y clorotalonil en rotacin. Maniza8s(Caldas).
15.2 RESULTADOS FINALES EN SILVANA CUNDINAMARCA.

En esta zona no se logr llevar parcelas sin control, en virtud a la solicitud del agricultor, "dado que poda perder su cultivo"; solo se establecieron las tres parcelas de manejo planteadas en la metodologa. 15.2.1 Parcela 1. Testigo del agricultor El cultivo presentaba un manejo deficiente del cultivo, en especial de tejidos y ramas enfermas, secas, entrecruzadas, etc., razn por la que fue necesaria una limpieza inicial

129

del rbol, acompaada de una poda suave. Los resultados de este tratamiento se presentan en la Figura 43. Como puede observarse el perodo de trabajo fue muy hmedo, con un total de 1631 mm en 10 meses, que aunque no es muy alta, se encuentra uniformemente distribuida, lo que es muy favorable para la antracnoss; la produccin total de esta parcela por rbol fue de 656 frutos, nivel normal para la zona y la variedad Rojo Comn y g debido tambin al manejo del rbol y a la fertilizacin; los frutos sanos fueron de 377, es decir, 31.4 docenas cuyo valor estimado es de $ 15.700, en cuanto a la antracnoss, los resultados mantienen la misma tendencia de la regin, aunque se puede observar. Que se redujo un poco, el total de frutos enfermos por rbol, para el perodo fue de 279, para un porcentaje de 43%, con aplicaciones calendario de mancozeb. Tabla 21.

Tabla 21. Nmero promedio de frutos por rbol tanto sanos como enfermos y porcentaje de infeccin por Antracnoss, ensayo manejo de antracnoss(1-8/98 - 2-6/99). Tratamiento No. Frutos sanos 377 306 257 No. Frutos enfermos 279 103 33 %de Infeccin 43 25 11 Total de frutos 656 409 290

1
2 3

En este primer tratamiento el perodo crtico de la epidemia se present a finales del ao 1998, para el ao 99, aunque la precipitacin fue permanente, se logr una cierta proteccin de la fruta, reduciendo los niveles de prdidas. Se realizaron 27 aplicaciones en el tratamiento testigo, durante los 10 meses que dur el estudio, un poco alto debido a la continuidad de la precipitacin y a la prevalencia de semanas con ms de 3 das de lluvia, adems de la permanente formacin de frutos que deban ser protegidos, comparativamente con los otros tratamientos(tabla 22), es evidente la diferencia que se presenta en el nmero de aplicaciones, lo cual confirma una vez ms la importancia de utilizar herramientas

130

Figura 43. Comportamiento productivo y de la antracnoss en los tratamientos de manejo. Agricultor con mancozeb calendario, sin frutos y renovacin de copa, mancozeb-clorotalonil en umbral 110%.(Periodo agosto1/98 - Junk>2/99) Como el umbral, para decidir o no la aplicacin de fungicidas. En trminos de eficiencia con las actividades tradicionales que emplean los productores, se puede plantear que para el mismo perodo los agricultores cercanos al lugar del trabajo, han aplicado entre 30 y 34 aplicaciones, indicativo de que las prcticas adicionales de limpieza del rbol, poda suave y recoleccin y enterrado de frutos enfermos semanal, contribuyen a una mejor proteccin de la cosecha.

131

Tabla 22. Porcentaje de infeccin y nmero de aplicaciones de fungicidas segn las semanas en que se cumpli el umbral. Tratamiento %de No. De infeccin aplicaciones 1 2 3
43 25 11 34 18 11

No. De veces en que se cumpli el umbral (11%) 7 7

Semanas calendario en que se cumpli el umbral (11%) 1998-1999

50,51,4,5,15,16,17 8,10,14, 15,17,18,21

15.2.2 Parcela: Remocin total de fruta. Los resultados de la evaluacin de este tratamiento se presentan en la figura 43 y las tablas 25 y 26, en cuanto al total de frutos enfermos y sanos. Con la aplicacin del tratamiento inicial, la parcela permaneci sin frutos por 2 semanas, momento a partir del cual se evidenci la formacin de nuevos frutos en aumento progresivo, los primeros frutos maduros se cosecharon en la semana 25, despus del tratamiento. Durante este perodo se realizaron dos aplicaciones de benomil dirigidas al follaje, para su preservacin sano; tambin se realizaron dos aplicaciones de mancozeb y dos de clorotalonil, hasta el momento de iniciar la cosecha de frutos maduros, dado que en este perodo los daos por antracnoss fueron pocos; esta caracterstica nos indica que el rbol en condiciones de renovacin se comporta como un cultivo nuevo, en el sentido de no presentar infecciones tempranas, siempre y cuando la poda sanitaria y productiva sea ptima y oportuna. La produccin de este tratamiento fue de 409 frutos en ms o menos 4 meses, de tos cuales 306 frutos fueron sanos y 103 enfermos, con un porcentaje de infeccin del 25%, inferior en forma significativa al del tratamiento testigo. En esta parcela se realizaron 18 aplicaciones, 15 para el control de antracnoss con mancozeb y clorotalonil, en rotacin, adems de las 3 aplicaciones de sistmico benomil para proteccin de follaje. El total de frutos es menor a la parcela del agricultor, dado que esta produjo todo el ao. El umbral se cumpli en 7 ocasiones, considerando soto la poca en que se present la 132

enfermedad, es decir, un lapso de 23 semanas. Esto nos indica que es factible y eficiente el aplicar los controles, bajo parmetros biolgicos como el umbral; sin embargo su eficiencia depende tambin del manejo del rbol y de las fuentes primaras de infeccin en el follaje. En cuanto a la dinmica de antracnoss en la parcela, es evidente que a pesar de encontrar condiciones favorables de ambiente el patgeno, los niveles de dao son bajos, sin embargo, dada la poca cantidad de frutos cosechados, hacen que el porcentaje sea alto. 15.2.3 Parcela: Renovacin de copa Como se aprecia en la grfica 43, en esta parcela la produccin de frutos se inici a las cinco semanas en poca cantidad y se fue incrementando en forma intensa, con el cierre del follaje; el inicio de la brotacin fue muy rpido, a las tres semanas ya existan brotes de 5 cm., el follaje se desarroll vertiginosamente, para dar origen a una copa totalmente nueva, de follaje verde intenso y de hoja grande, como de cultivo nuevo, que es lo que ocurre con esta prctica. Los primeros frutos maduros se cosecharon hacia la semana 27, resultado de las inflorescencias que aparecieron tempranamente en las ramas y de las cuales se colect apenas un fruto; para esta misma poca la antracnoss comienza a manifestarse en bajos porcentajes. Para esta fecha los rboles de la parcela, estn casi en plena capacidad de produccin, con ms de 300 frutos desde verdes pequeos hasta morados y algunos maduros, los cuales producen en las semanas siguientes el incremento progresivo e intenso de la cosecha. Es importante manifestar que en esta parcela la incidencia de antracnoss fue significativamente menor, quiz por la formacin de un follaje nuevo, el cual fue protegido adecuadamente en las etapas iniciales y aun en estas pocas de cosecha; la mayor incidencia de antracnoss se present en frutos verdes medianos y grandes. Este tratamiento produjo en los 10 meses del ensayo 290 frutos(Tabia 21), los cuales realmente se concentraron en los ltimos 4 meses, de estos 257 fueron sanos y 33

133

enfermos, lo que equivale a un 11% de antracnoss, resultado muy positivo, si se tiene en cuenta la curva de precipitacin, que fue siempre favorable a la enfermedad. La produccin equivale a 21.4 docenas por rbol, cuyo valor aproximado es de $ 10.708, nada malo para una plantacin apenas iniciando produccin nuevamente. En esta parcela se realizaron 11 aplicaron fungicidas, de las cuales tres fueron de sistmico, benomil para proteccin de follaje y 8 para el control preventivo de la antracnoss, distribuidos a partir de la semana 17 de iniciado el ensayo, cuando se comenzaron a manifestar algunos sntomas iniciales de antracnoss en frutos verdes. El umbral se cumpli en 7 oportunidades(Tabla 22); este se aplic desde el momento en que comenz a manifestarse la enfermedad, semana 18, salvo que no se consider como tal, cuando no se present enfermedad. Costos de los tratamientos Como se puede observar en la tabla 23, los costos del control de la antracnoss y su relacin con el valor de la produccin, indican claramente la importancia de implementar estas prcticas como parte del manejo productivo del cultivo de tomate de rbol. Los costos fueron calculados llevando el ejercicio a hectrea, indicando que estos podran presentar algunas variaciones hacia arriba o hacia abajo en la prctica, dependiendo de la dinmica de la enfermedad y la eficiencia con que se apliquen. Como se puede apreciar en este cuadro resumen de los costos y la produccin para un perodo de 10 meses, es claro que los tratamientos de renovacin del cultivo, presentan algunas ventajas evidentes en cuanto a los costos de control de la antracnoss y en cuanto al potencial de rendimiento de las mismas; aunque la produccin estimada es tan soto para 4 meses en renovacin de copa y de 6 meses para eliminacin de frutos, son una demostracin fehaciente de la bondad de estas prcticas para el manejo de la antracnoss. Lamentablemente no se pudo concluir el ensayo hasta un ao, debido al cambio de propietario de la finca y su intencin de no trabajar con tomate.

134

Tabla 23. Relacin de los costos y la produccin de los tratamientos evaluado por hectrea.
Costo de aplicacin Tratamiento / ha ($) Costo del manejo cultural de remocin de frutos ($) Produccin en kg / ha Ingreso bruto ($)*

1 2 3

1 '377.000

967.500 625.000 540.000

34558 28050 23558

12 '095.3000 9'817.500
8'245.300

1 '088. 164 868.998

* Se tom como valor del Kilo $ 350.oo en finca.

Un aspecto importante aqu es, el alto costo de la prctica cultural de remocin de frutos, lo cual ya se haba comprobado en anterior trabajo; este es quiz el mayor obstculo para su realizacin semanal, por lo tanto se considera que la remocin de frutos debe hacerse cada 2 semanas en invierno y cada mes en verano, lo importante tambin es el enterrado de frutos. En este estudio hasta la prctica del agricultor es eficiente; con el manejo del rbol, de la fruta enferma, la poda sanitaria y el cuidado del cultivo, los rendimientos podran incrementarse en casi un 50%; estos beneficios del manejo del rbol en los tratamientos de renovacin son aun mayores, en cuanto reduccin de enfermedad y mejora de la cosecha. Es importante aclarar que en la zona, la aplicacin de fungicidas se realiz con una nebulizadora de espalda a motor, que ha permitido reducir 50%, el volumen de agua aplicado, mejorar cobertura del producto sobre follaje y frutos y manejar la enfermedad aun en las pocas figura 43. En conclusin el tomate de rbol presenta grandes potencialidades de produccin, una plasticidad enorme y no conocida que facilita su manejo para optimizar procesos; en cuanto a la antracnoss, nos falta mucho por aprender, conocer e identificar, mas con lo construido, podemos hoy manifestar con claridad, que estamos en mejores condiciones para manejar con ms acierto tanto el cultivo como la enfermedad.

135

XVI CARACTERSTICAS DE LA OPCIN TECNOLGICA DESARROLLADA

16.1

Descripcin: La opcin tecnolgica desarrollada es una metodologa para el

manejo integrado de la antracnoss en tomate de rbol en Colombia, la cual se basa en la integracin de prcticas de manejo agronmico del cultivo, prcticas culturales y uso de productos qumicos, utilizando para ello un ndice de enfermedad del 11 por ciento. 16.2 Ventaja que ofrece al productor : Quien aplique esta metodologa, podr esperar una disminucin significativa (ms del 50%) de las prdidas ocasionadas por antracnoss y por ende mejores rendimientos, que fcilmente van a duplicar la produccin por unidad de rea, si se aplica estrictamente. 16.3 Beneficios de su aplicacin: Son vanos los beneficios que se obtienen con su aplicacin, mayor rentabilidad, disminucin en el uso de fungicidas, prolongar la vida til del cultivo, disminuir el impacto ambiental, la contaminacin y el riesgo a la salud. 16.4 Est dirigida a tcnicos, agricultores, auxiliares, operarios y a todos aquellos interesados en hacer uso de ella, con un propsito tcnico, productivo en tomate de rbol o acadmico, pero que tambin puede aportar elementos de juicio para la interpretacin y manejo de la antracnoss en otras especies frutcolas. 16.5 Esta metodologa se puede aplicar en cualquier sistema de produccin y condicin agroecolgica donde se establezca el cultivo y donde la antracnoss sea una limitante del tomate de rbol; sin embargo, se recomienda realizar las actividades de ajuste y validacin que se consideren del caso, para optimizar su aplicacin.

XVII. ACTIVIDADES DE TRANSFERENCIA DESARROLLADAS

Las diferentes actividades relacionadas con capacitacin de productores y tcnicos sobre los avances y resultados del proyecto, se iniciaron prcticamente desde el momento en que se establecieron los diferentes trabajos de investigacin, ya que parte de la estrategia de desarrollo, el que los productores se enteraran sobre los objetivos del proyecto. Una primera masificacin de los alcances que tena el proyecto, se logr cuando se realizaron los tres consensos de agricultores; estos se llevaron a cabo en los municipios de Silvana, Pasca y San Bernardo de la regin del Sumapz, para la caracterizacin socioeconmica de los productores de tomate de rbol; una de las actividades que no estaba propuesta, pero de importancia estratgica para el proyecto, por el conocimiento que se obtuvo de cmo los productores manejan su cultivo y en especial tos criterios que se manejan para el control de la enfermedad. Esta primera estrategia fue de socializar la informacin sobre el proyecto y sus alcances; estas actividades fueron apoyadas por los tcnicos de UMATA, con quienes se asisti a las reuniones. Posteriormente, cuando se consolid mayor informacin y resultados concretos de la enfermedad y su comportamiento, se iniciaron algunas reuniones informales con productores vecinos a las fincas de investigacin; reuniones en las cuales, el nfasis se puso en discutir que conocan ellos de la enfermedad, y, a la vez, lo que se haba encontrado en la investigacin; en esa poca las actividades se enfocaron a indicar la necesidad de modificar o mejorar la agronoma del cultivo, para facilitar el manejo de la antracnoss, aspectos que ya habamos evidenciado, como problema en los consensos de caracterizacin. Cuando se iniciaron algunos trabajos sobre manejo del rbol y se vieron resultados, entonces iniciamos otra serie de actividades a manera de das de campo, reuniones y demostraciones de mtodo. En total se realizaron dos das de campo, dos

demostraciones de mtodo, una reunin con tcnicos de la zona y un curso de capacitacin de tcnicos y agricultores. Adems de estas actividades dirigidas a productores, el grupo de investigacin ha venido participando activamente en diferentes eventos, de los cuales vale la pena mencionar: 1. En 1997, en las instalaciones de la Universidad de Cundinamarca, Fusagasug. Se llev a cabo el primer curso de capacitacin para agricultores y tcnicos del Sumapz, en cuanto a manejo fitosanitario de lulo y tomate de rbol; en esta reunin se presentaron algunos avances de la investigacin y se inform a los asistentes sobre el alcance del proyecto, invitndolos a participar, visitando las fincas de investigacin y atendiendo a las invitaciones que se hicieran llegar. 2. Segundo Seminario Frutales de Clima Fro Moderado, celebrado en la ciudad de Manizales, del 12 al 14 de agosto de 1998. En este evento se presentaron cuatro trabajos sobre avances de la investigacin. Los trabajos presentados fueron: Antracnoss en tomate de rbol(Colletotrichum gloeosporioides Penz). Avances en aspectos epidemiolgicos. Por Fabio Aranzazu H, Efran Ospina, Liborio Castillo. Manejo integrado de la antracnoss (C. gloeosporioides Penz) en tomate de rbol (S. betacea Cav. Sendt) en el Municipio de Manizales. Por Fabio Aranzazu H, Jorge M. lvarez L y Luz E. Zuluaga A. Periodos de incubacin de Colletotrichum gloeosporioides Penz en frutos de tomate de rbol de diferente edad. Por Luis Fabio Aranzazu H. y Carlos H. Chiquito N. Aspectos fisiolgicos del tomate de rbol, epidemiologa de la antracnoss y su relacin con el manejo del problema. Por Jos Guillermo Rondn. Periodos de incubacin de Colletotrichum gloesporioides Penz en frutos de tomate de rbol de diferente edad. Universidad de Caldas. 3. Da de campo en el Municipio de Silvania y demostraciones de mtodos sobre 138 Carlos H. Chiquito, Pasante, Facultad de Agronoma,

manejo de antracnoss, poda del rbol y prcticas culturales. Diciembre de 1988. 4. Da de Campo en San Bernardo, sobre el manejo integrado de la antracnoss, demostraciones de mtodo sobre manejo de la enfermedad, poda del cultivo y fertilizacin orgnica. 5. XX CONGRESO NACIONAL DE FITOPATOLOGA. Recurso Humano, Fitosanidad y Sostenibilidad de cultivos: Nuestro legado para el nuevo milenio. Celebrado en Manizales, del 30 de junio al 2 de julio de 1999. En este certamen cientfico, ya se llevaron los resultados finales sobre diferentes tpicos de la investigacin. All se presentaron seis trabajos. Variacin estacional de la antracnoss (C. gloesporioides Penz) en tomate de rbol (S. b.). Fabio Aranzazu H. Determinacin de la existencia de infecciones quiescentes causadas por C. gloesporioides Penz en frutos de tomate de rbol (S. b.). Enrique A. Ospina H. y Fabio Aranzazu H. Estudio epidemiolgico de la antracnoss (C. gloesporioides) en tomate de rbol (S. b.) en Slvania (Cund.). Ana P. Pez P., Mara V. Zuluaga M. y Guillermo Rondn C. Fenologa del tomate de rbol, epidemiologa de la antracnoss y su relacin con el manejo del problema. Guillermo Rondn C. Manejo integrado de la antracnoss (C. g. Penz) en tomate de rbol (S. b.) en el Municipio de Manizales. Estudio de la interaccin biolgica de microorganismos relacionados con C. gloesporioides (Penz) Penz y Sacc., agente causal de la antracnoss en tomate de rbol (S. b.). Mara J. Botero, Fabio Aranzazu H. Estos documentos o sus resmenes, se anexan a este informe.

139

6. Adems de estos eventos, se han dictado charlas a estudiantes de la Universidad de n Cundinamarca y en seminarios tcnicos que se llevan a cabo en el C.l. Tibaltat, se realizaron cuatro seminarios sobre antracnoss. 7. Se elabor un boletn tcnico sobre los principales resultados de la investigacin y se incluy tambin lo correspondiente al manejo integrado de la antracnoss; una vez entregado el Boletn por la editorial, se program un primer encuentro con productores del municipio de granada y Silvania, evento en el que se realiz la presentacin de los resultados del proyecto y su relacin con el manejo de la enfermedad, se present detalladamente el plan de manejo de la antracnoss y las diferentes alternativas, as como se enfatiz sobre la necesidad de modificar sustancialmente el manejo agronmico, como requisito para que el manejo sanitario pueda tener xito, como se demostr en las parcelas demostrativas de manejo. 8. Se ha programado un segundo encuentro con productores de estos municipios, adems de Pasca, San Bernardo y Cabrera, para la segunda semana de noviembre, que se celebrar en el Municipio de Fusagasug, en las instalaciones de la Universidad de Cundinamarca, donde se har entrega del boletn y los resultados. El Caldas y Antioquia, los investigadores se encuentran programando tambin algunas actividades para hacer entrega del boletn y los resultados; este mismo trabajo lo extenderemos a Boyac, Cauca y Huila posteriormente. 9. Documentos editados: Durante la vigencia del proyecto se desarrollaron algunos trabajos especiales por estudiantes, pasantes y tesistas los cuales se relacionan a continuacin: PAEZ P. ANA P. Y ZULUAGA M. MARA V. 1998 Estudios epidemiolgico de

antracnoss (Colletotrichum gloeosporoides Penz) y cuantificacin de microflora en el filoplano de tomate de rbol (Solanum betacea (Cav.) Sendt), en el Municipio de Silvania - Cundinamarca. Tesis. Facultad de Ciencias Agropecuarias, Universidad de Cundinamarca. Fusagasug LVAREZ JORGE M. 1999. Manejo integrado de la antracnoss (C. gloeosporoides Penz) en el cultivo de tomate de rbol (Solanum betacea) en el Municipio de 140

Manizales. Tesis Facultad de Agronoma, Universidad de Caldas. Manizales ROMERO S. SANDRA E. 1999. Caracterizacin morfolgica, molecular y Tesis Maestra en Ciencias

variabilidad patognica del agente causal de la antracnoss Coltetotrchum gloeosporoides en tomate de rbol en Colombia. Agrarias. Facultad de Agronoma, Universidad Nacional. Bogot. PEZ P. ANA P. Y ZULUAGA M. MARA V. 1998 Caracterizacin socioeconmica de los productores de tomate de rbol en la Regin de Sumapz. Fusagasug. OSPINA EFRALN A. 1999. Determinacin de la existencia de infecciones Prctica empresarial. Facultad de Agronoma, Prctica empresarial. Facultad de Ciencias Agropecuarias. Universidad de Cundinamarca.

quiescentes causadas por Colletotrichum gloesporoides Penz, en frutos de tomate de rbol (Solanum betacea). Universidad de Caldas. Manizales. BOTERO MARA J. 1999. Estudios de la interaccin biolgica de microorganismos relacionados con Colletotrchum gloesporoides agente causal de la antracnoss en tomate de rbol Solanum betacea. Documento parcial tesis Maestra. Facultad de Agronoma, Universidad de Caldas. Manizales. Actualmente estamos organizando los programas de capacitacin mediante una estrategia de investigacin participativa cuyo propsito final es el cambio paulatino del sistema de produccin y del aprendizaje secuencial sobre el manejo de la antracnoss; estas actividades se estn coordinando financieramente con la colaboracin de las regionales del SENA de Cundinamarca, Boyac y posiblemente Caldas, adems de las UMATA y asistentes tcnicos independientes. Este a nuestro modo de ver debe ser el enfoque de la capacitacin - educacin de los productores.

141

XVIII. RECOMENDACIONES FUTURAS SOBRE INVESTIGACIONES FUTURAS Y TRANSFERENCIA DE LOS RESULTADOS

INVESTIGACIN: a pesar de los resultados y avances obtenidos con el presente proyecto, son varios los temas que aun deben ser objeto de investigacin, en especial para optimizar el manejo de la antracnoss, los principales temas son: 1. Aunque se logr de manera indirecta, llegar a sugerir cambios sustanciales en el manejo agronmico del cultivo, es indispensable una investigacin ms a fondo en este campo, en distancias, arreglos, sistemas de produccin, fertilizacin orgnica y biofertilizacin, podas, etc. Actividades en los que los productores deben participar directamente, tanto en las decisiones de investigacin, como sobre lo que se debe investigar, aunque creemos que los temas planteados son los fundamentales. 2. En lo correspondiente al patgeno, es indispensable y estratgico ampliar la

caracterizacin molecular del patgeno, utilizando mustreos jerrquicos, en los que se tenga en cuenta niveles macro y microgeogrficos: como municipios, cultivos, plantas y partes de la planta, y en los que se incluyan aislamientos provenientes de otros cultivos de clima fro, medio y clido; este trabajo es fundamental para el programa de mejoramiento. Tambin se deben incrementar el nmero de marcadores para mejorar el estudio de variabilidad. 3. En cuanto a la epidemiologa de la antracnoss, es evidente que estos trabajos son

de carcter dinmico en el tiempo y en el espacio, solo as se est preparado para prevenir y conocer sus cambios e ir adelante del problema con las soluciones; inicialmente es necesario ampliar esta parte del proyecto a diferentes municipios en Sumapz y en otros departamentos productores, para ajustar mucho ms el esquema de manejo a cada condicin agroecolgica; ojal no fuera solo para tomate de rbol sino prcticamente para todos los frutales, en todos los climas, ya que la antracnoss es el flagelo ms importante que se tiene y para el cual no se conoce un control adecuado. 4. Control Biolgico: en este proyecto hemos iniciado el camino, con dos trabajos

bsicos sobre sinergistas y sobre microflora, que nos han dado luces muy positivas para pensar que es altamente posible, llegar a resultados positivos por esta va, la ms actual de todas, en cuanto a manejo de enfermedades. Creemos que se debe seguir trabajando con la microbiologa del sistema de produccin y con metodologas muy parecidas a las establecidas aqu, pues all esta la clave del xito, como lo demuestran muchos otros trabajos sobre control biolgico de patgenos, en donde se ha postulado que "en la microflora nativa, se encuentra el mejor antagonista". 5. Resistencia gentica: No existe duda sobre la importancia de esta caracterstica en las plantas, en cuanto a costos e impacto ambiental, sin embargo, en la mayora de cultivos es hoy una quimera. En tomate los esfuerzos han sido pocos, por diferentes razones; sin embargo, es necesario comenzar esta investigacin de manera sistemtica, para acortar el tiempo de espera. Aunque existe ya un grupo de profesores en la Universidad de Antioquia trabajando con induccin de resistencia en clulas de tomate de rbol, es necesario explorar otras vas del mejoramiento convencional y no convencional, en busca de una respuesta duradera y estable. 6. En la parte Socioeconmica, un problema evidente de las zonas ms tradicionales de produccin, que son la mayora, es la comercializacin que se encuentra en manos de intermediarios, quienes pagan lo que quieran ante la incapacidad de los productores para negociar, so pena de no volverle a comprar. Es urgente y de extrema necesidad, comenzar un proceso de organizacin de los productores alrededor de cooperativas de comercializacin y/o de socializacin de la produccin, como una manera de mejorar los niveles de ingreso que son pauprrimos, al lado de los costos de produccin; pero no solo en ese sentido se requiere este apoyo, el esquema debe ser integral para el mejoramiento de los niveles de vida y la bsqueda de satisfacer necesidades mnimas, tambin porque la posibilidad de exportacin, que es muy posible, requiere de un gremio fortalecido y unido; este enfoque contribuira enormemente a fortalecer su capacidad de decisin y su actitud frente al gran sector de multinacionales, quienes se han constituido en sus asistentes tcnicos particulares, con un propsito bien conocido, diversificar la gama de productos qumicos.

143

BIBLIOGRAFA

AUDEBRAN, T. 1979. Raln - water as a factor in the disemination of basidiospores of Crinnipellis perniciosa(Stahel) Singer withn cocoa trees. In: Proceedings 10 International cocoa Research Conference. Dominical Republic. 17-23 may. 367369 p. BAYLEY, J. A. and JERGER, M. J. 1992. Colletotrichum biology, Pathology and control. Edited for British society for plant pathology. C.B.A. International. 387 p. BALLEY, J.A., O'CONNELL, R.J, PRING, R.J and NASH, C. Infection Stretagies of Colletotrichum Species. |n: Colletotrichum: Biology, Pathology and Control. Balley J.A and Jeger M.J. British Society for Plant Pathology. U.K. 1992.Pg 88-120. BALARDIN, R. JAROSZ.A. y KELLY, J. 1.997. Virulence and Molecular diversity in Colletotrichum Hndemuthianum from South, Central, and North America. Phytopathology 87: 12:1184-1191 p. BARNETT, H.L. y HUNTER, B.B. 1960. Illustrated genera of imperfect fung. Minneapolis, 2th Edition. (USA): Burgess Publishing Company. 241 p. BEYER, E.M., y QUEBEDAUX, B. Parthenocarpy in cucumber: Mechanism of action of auxin transpon inhibitor. In: Journal of the American Society for Horticultural Science, Pag. 385-390. 1974. BLAKEMAN, J. P. and PARBERY, D. G. 1977. Stimulation of appressorium formation in Colletotrichum acutatum by phylloplane bacteria, Physiological Plant Pathology 11. p. 313-325. BROWN, A. E. and SWIRBURNE, T. R. 1981. Influence of iron and iron chelators on formation of proggresive lesions by Colletotrichum musae on banana fruits. Transadnos of the British Mycological Society. 77 (1). U.K. p. 119-124.

CAMIN. J.H., Y SOKAL, R.R. 1.965. A method for deducing braching sequences in phylogeny. Evolution 19:316-326 p. CES, J.L. 1992. Rapid extraction of fungal DNA by PCR amplificatin. Nucleic Acid Research 20 :9: 2380. CERKAUSKAS, R. F. 1988. Latent colonization by Colletotrichum spp. epidemiological considerations and implications for mycoherbicides. Canadian Journal of plant pathology. 10, 297-310 p. DODD, J. C.; ESTRADA, A.; MATCHAM, J.; JEFFRIES, P. and JEGER, M. J. 1991. The effect of environmental factors on Colletotrichum gloeosporioides, the causal agent of mango Anthracnoses, in the Pilippines. Plant Pathology. p. 40,468-575. FELSENSTEIN, J. PHYLIP( Phylogeny inference package) 1.995. Versin 3.57c. Distributed by the author. Department of Genetics, University of Washington, Seattle. FITT, B.; CREIGTHTON, N.F; LACEY, N.E; and MCCARTNEY, H.A. Effects of ralnfull intensity and duration on dispersal of Rhynchosporum secalis, conidia from infected barley leaves. Trans. Br. Micol. Soc. si. 1986. Vol. 86. No. 4, 611-618p FITZELL, R.D; PEAK, C and DORNELL, R.E. A model for estimating infection leaves of antracnose disease of mango. Jn: Annuals of Applied Biology. No. 104. 1984. 451458p. GIL, F., BALLEY, J., CONNELL, R. y SHERIFF, C. 1994. Caracterizacin morfolgica y celular de aislamientos de Colletotrichum obtenidos de Phaseolus vulgars, Vigna radiata y Vigna unguiculata. Fitopatologa Colombiana. 18 (1): 42-52. GMEZ, J. E. 1993. Evaluacin de fungicidas y algunas prcticas culturales en el control de la antracnoss del tomate de rbol en Sotar (Cauca). ASCOLFI Informa 19(3): 24-25.

145

JANISIEWICH, Wojciech. 1988. Biological Control of Diseaes of Fruits. In: Biocontrol of Plant Diseases. Vol. 2. Florida .1988.Pag 153-177. JEFFERIES, P and KOOMEN.I. Estrattegies and prospects for Biological control of disease caused by Colletotrchum. h: Colletotrchum , Biology, Pathology abd Control. CAB International. 1993. 337-354p. KAUFFMANN, P.J. y WEIDEMANN, G.J. 1996. Isozyme analysis of Colletotrichim gloeosporodes from five host genera. Plant Disease 80: 1289-1293p. LATHAM, A. 1.983. Cultural Characteristics and Pathogenicity of Glomerella cingulata isolates from Aples in Alabama. Plant disease. V:67:10:1065-1068. Me CRACKEN, A. and SWIMBURNE, T. 1.979. Siderophores produced by saprophytic bacteria and stimulants of germination of conidia of Colletotrchum musae. Physiological plant pathology. V.15: 331-340p MADDEN, L.V..WILSON, L.L., YANG, X., and Ellis, M.A. Splash dispersal of Colletotrchum acutatum and Phytophthora cactorum by shortduration simulated ralns. Plant Pathol. Pg.427-436.1992. MADDEN, LV, YANG, X. & WILSON, L.L. 1996. Effect of Raln Intensity on Splash Dispersal of Colletotrchum acutatum. In: Ecology and Epidemiology. The American Phytopathological Society. Vol 86 N 8. 1996.Pg 864-874. MUNAUT F., HAMALDE, N., VANDER STAPPEN, J. Y MARALTE, H. 1.998. Genetics relationships among isolates of Colletotrchum gloeosporodes from Stylosanthes spp. In frica and Australia using RAPD and ribosomal DNA markers. Plant Pathology 47:641-648p. MASEL, A., POPLAWSKI A., IRWIN J. 1.996. Molecular evidence for chromosome transfer between biotypes of Colletotrchum gloeosporodes. Molecular PlantMicrobe Interactions 9: 339-348.

146

MIRANDA. R. 1985. Observacoes iniciis da parda de agua por interceptacao de divua en cacaneiro. En: Revista Theobroma. Vol. 15 No. 2. Brasil. 73-78. NAVARRO, R. & O. D. PUERTA. 1978. Proceso de infeccin de Gloeosporum sp. En frutos de tomate de rbol (Cyphomandra betacea). ASCOLFI Informa 4(3):6-7. PRUSKY, D.; FUCHS, Y and ZAUBERMAN, G. 1981. A method for pre-harvest assessment of laten infections in fruit. h: Annals of Applied Biology. p. 98, 7985. SIMMONDS, J. H. 1965. A study of the species of Colletotrchum causing ripe fruit rots in Queensland. Queensl. Journal of Agricultural and Animal Sciences. 22:437459. SMITH, B. 1990. Morphological, Cultural, and Pathogenic Variation Among Colletotrchum Species isolated from Strawberry. Plant diseaseV. 74:1:69-76. SUTTON, B. 1992. The genus Glomerella and its anamoph Colletotrchum. En: Biology, Pathology, and Control. J.A. Balley and M.J. Jeger, eds. CAB intemational, Wallingfor. United Kingdom. WALLER, J.M. 1992. Colletotrchum diseases of perennial and other cash crops. En: Colletotrchum : biology, pathology and control. Balley, J. y Jeger, M., (eds). CAB International, pp. 167-70, 176-9. WHITESIDE, J. O.; et al., 1996. Plagas y enfermedades de los ctricos. The American phytopathology. Ediciones Prensa Mundial. 80 p. WOLKOW, P.M., SISLER, H.D. and VIGIL, E.L 1983. Effects of inhibitors of melanin biosynthesis on structure and fuction of appressoria of Colletotrchum lindemuthianum. En: Physiological Plant Pathology. 55-71 p. ZODOKS, S. C. and SCHEIN, R.D. 1979. Epidemiology plant disease management. Oxford University Press. England. 427p.

147