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DETERMIANCIN DE ETANOL

18 de abril de 2012

DETERMINACIN DE ETANOL POR MICRODIFUSIN POR ESPECTROFOTOMETRIA SEGN FELDSTEIN Y KLENDSHOJ


1. Introduccin
Dentro de los txicos voltiles, los alcoholes Etanol y Metanol son sustancias de Importancia toxicolgica dada su accin farmacolgica depresora del sistema nervioso central (SNC) y el abuso creciente del consumo de bebidas alcohlicas. Esto ltimo, presenta importancia mdico - social debido a que los individuos alcoholizados pueden ser causa de trastornos y accidentes, de los cuales son imputables. Las vas de penetracin posibles de los alcoholes son la digestiva, la respiratoria, y la absorcin a travs de la piel. En el caso del etanol, la intoxicacin ms frecuente ocurre cuando el individuo ingiere cantidades excesivas de esta sustancia por el consumo de bebidas alcohlicas fermentadas y/o destiladas. Los tipos de muestras generalmente usados para estas determinaciones son: sangre (alcoholemia), orina, otros fluidos biolgicos, vsceras, alimentos, etc. Las muestras de sangre se obtienen por puncin venosa, teniendo la precaucin de no utilizar alcohol como antisptico local ni otras soluciones constituidas por sustancias reductoras que puedan interferir en la determinacin posterior. Se recomienda usar solucin jabonosa o solucin acuosa de cloruro mercrico 0.05%. La conservacin de las muestras de sangre requiere el empleo de recipientes de plstico con cierre hermtico (no usar tapones de goma) conteniendo fluoruro de sodio (anticoagulante y preservador) o bien oxalato y citrato (anticoagulante) y su almacenamiento refrigerado a T = 4C. El fluoruro de sodio impide el desarrollo de microorganismos que pueden consumir o generar etanol. Los tapones de goma contienen vulcanizantes que son sustancias reductoras capaces de dar falsos positivos en los mtodos qumicos. El cierre hermtico es necesario dado el carcter voltil del etanol y adems, es importante que no exista cmara de aire en el recipiente de

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recoleccin de las muestras dado que el oxgeno presente podra oxidar al etanol y tambin para minimizar prdidas por volatilizacin.

2. Marco terico
El alcohol es la principal droga de consumo por parte de la sociedad. Dos tercios de todos los abusos de substancias estn relacionadas con el alcohol. (Giannuzzi, 2006) El alcohol etlico es la sustancia psicoactiva de mayor consumo en el mundo. De acuerdo con el informe mundial sobre el consumo de drogas de la ONU del 2009, se estima que en el mundo cerca de 2.600 millones de personas lo consumen ya sea en forma ocasional, habitual, abusiva o adictiva. En Ecuador, se estima que el 80.7% de los estudiantes universitarios son consumidores habituales de alcohol etlico. El etanol es un alcohol de gran importancia toxicolgica dada su accin farmacolgica depresora del sistema nervioso central, que cuando se consume en forma continuada y frecuente produce efectos adversos agudos y crnicos en la salud humana. En intoxicacin aguda se pueden presentar alteraciones en el sistema gastrointestinal, endocrino y en el equilibrio cido bsico. (ura2004)El consumo de etanol tambin se ha asociado con la presentacin de varias alteraciones sociales como incremento en los ndices de violencia intrafamiliar, violencia general, actos delictivos y accidentes de trnsito. (Epetto, 2002) Las vas de penetracin posibles de los alcoholes son la digestiva, la respiratoria, y la absorcin a travs de la piel, es absorbido a partir de los 30 a 60 minutos y hasta 180 minutos, mediante un mecanismo de difusin pasiva, pasando al torrente sanguneo. En ayunas, la absorcin es ms rpida en duodeno y yeyuno. Con el estmago lleno, la absorcin se retarda. El alcohol, una vez en el torrente sanguneo, pasa por el hgado, alcanzando su mayor concentracin alrededor de los30 minutos en la circulacin sistmica (Epetto 2002). Durante la absorcin y la distribucin se va produciendo tambin la biotransformacin para luego producirse la biotransformacin como tal y finalmente la eliminacin. En el organismo, el alcohol sufre un proceso de oxidacin, que se desarrolla exclusivamente en el hgado, transformndose el etanol en acetaldehdo y posteriormente en acetato por medio de la cadena enzimtica. Los metabolitos se excretan por va pulmonar, va urinaria, por la saliva y por la leche en poca de lactancia. (Campos, 2005)Existen varios mtodos para determinar la concentracin de alcohol en un individuo como pruebas en sangre, orina y aliento, el utilizado en nuestra practica fue la determinacin de alcohol en sangre por el mtodo de microdifusin que se realiza en cmaras de Conway, las cualesposeen, en el compartimiento externo, muestra y agente liberador (CO3K2) y, en el interno, el agente atrapante Cr2O7K2 + H2SO4 0,01N. En este caso, se produce la captacin y oxidacin del etanol hacia cido actico, forzndose la remocin completa del primer compuesto al cabo de un tiempo y temperatura previamente determinados, donde el dicromato, de color rojo anaranjado, oxida el etanol a acetaldehdo y es reducido, a su vez, a cromo (III) ,de color verde ,para luego poder ser medida la absorbancia en un espectrofotmetro UV.(Giannuzzi ,2006 )

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3. Parte 3.1. Objetivos:

Identificacin y cuantificacin de alcohol en nuestra muestra problema de sangre.

3.2. Reactivos

Carbonato de potasio 10% Bicromato de potasio 0.1% cido sulfrico 50% Base oleosa hidrosoluble Agua destilada

3.3. Materiales

Frasco con la muestra problema Pipetas Tubos de ensayos Cmara de Conway Campana extracto de gases

Mecanismo de reaccin
O H3C OH H3C O O Cr O OH

HO

Cr O

OH

H2O

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Etanol acido crmico

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cromato acido de etilo (ster)

H3C O

O Cr O OH

H2

H3C

Cr O

OH

H3C

H2CrO3

H2O

H2O

Acetaldehdo

inestable

Luego:
H2CrO 3

H2CrO 4

HCrO 3

H2O

OH H3C

HCrO 3

CH 2CHO

Cr

6+

acetaldehdo

estable

Ecuacin qumica balanceada K2CrO7 Mezcla sulfocromica


H2SO4

[ H2Cr2O7 ] inestable

H2O

2H2CrO4 acido crmico

TOMA DE MUESTRA Se necesito a una persona de sexo femenino a la cual se le hizo beber una vaso de vino , a los 30 minutos de ocurrido esto se extrae 2ml de sangre via endovenosa la cual es llevada a un vial.

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Tcnica operatoria
1.-En la parte del compartimento externo de la cmara de conway se coloca 1 ml de sangre . 2.-En el compartimento interno se aade 2ml de solucin sulfocromica 3.-se completa el borde de la base 4.- Agregar 1 ml de carbonato de potasio 5.- Tapar la cmara 6.-llevar a la estufa a 50 por 20 minutos 7.- retirar de la parte central una alcuota y completar con agua destilada hasta 2 ml 8.- tomar de esta nueva solucin una alcuota de 0,1 ml y llevarlo a una fiola de 10ml y completar hasta el enrase 9.-Leer en el espectrofotmetro a 450 nm .

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Estndares 1 [Etan ol mg/l] Abs 5 0.075 2 10 0.150 3 15 0.225 4 20 0.300

Blanco

0.050

MP = 0.048

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Por regresin lineal Y = BX + A Donde B = 0.015 y A = 0 [ OH ] = [ 0.050 -0.048 ] [ OH ] = 0.002

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0.002 = 0.015X X = 0.133 mg

0.133 ---------- 0.1 mL de SSC X ---------- 2 mL de SSC X = 2.66 mg OH 2.66 mg OH --------------------------------- 1 mL de sangre X --------------------------------- 1 L X = 2.66 g de OH/L de sangre

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4. Discusin

La tasa de alcoholemia permitida en sangre es por debajo de 0,5g/L. si tomamos este valor como referencia, esto quiere decir que la muestra de nuestro paciente se encuentra con los niveles ligeramente elevados de alcohol etlico, al sobrepasar esta escala con 0,27%. Durante aos los estudios efectuados han demostrado que existe una relacin directa entre la concentracin de alcohol en la sangre y algunos factores que pueden alterar o dar falsos positivos, por ejemplo Petkovi (2005 ) nos dice , que para poder diagnosticar a una persona con intoxicacin leve ,la concentracin de alcohol en sangre debe estar entre 0,5-1 ,5g/L ,es importante saber que estos valores van a depender de la edad del sujeto, su historial de consumo de alcohol y grado de desarrollo de tolerancia para el consumo de alcohol ,tambin otros factores como las bajas temperaturas pueden favorecer la toxicidad del alcohol .As mismo ,Campos(2005 ) manifiesta que la concentracin de alcohol vara dependiendo del metabolismo de cada persona y la cantidad de fluido que se encuentre en su organismo ,es as que una persona que se encuentre ligeramente deshidratada la concentracin de alcohol en su sangre ser mucho ms elevada ,es as que podra generar falsos positivos. Creemos que todos estos factores pueden ser los agentes causales de que en

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los resultados obtenidos con la muestra de la sangre resultaran positivos, adems debemos tomar en cuenta que la muestra no fue tomada en el momento exacto de consumo de alcohol.

5. Conclusin

La concentracin de alcohol en sangre se puede cuantificar por espectrofotometra. La concentracin de alcohol en sangre es 2.66 g/L

6.

Cuestionario

1. Indicar las dimensiones de la cmara de conway cell tanto

en material de vidrio, porcelana y plstico y para que sirva? (1)La cmara de conway es un aparato en forma de capsula de petri con tapa esmerilada. Concntricamente tiene soldado un pequeo compartimiento circular de manera que queda un espacio pequeo interior y otro exterior. En la cmara exterior de pone un liquido que contiene un gas de tensin de vapor relativamente alta, y en el espacio interior un liquido que sea capaz de absorber este gas, con lo que el gas se difundir desde el anillo exterior a la cmara interior sin que para ello sea preciso aplicar temperaturas elevadas. (1) La cmara de conway cell sirve para la microdifusion de la sangre y se utiliza en la determinacin por microdifusion del metanol, etanol y monxido de carbono en sangre. La cmara de conway sirve tambin para la microdifusion de otras muestras como orina que contengan un gas de tensin de vapor relativamente alta. (2,3). UNMSM |Farmacia y Bioqumica
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Las dimensiones de una cmara de conway son: Foso profundidad de 4 mm. Cmara profundidad dimetro es 10 x 60 mm. Centro de profundidad dimetro es 4x 35 mm

Cmara de conway de material

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Cmara de conway de material

Cmara de conway de material

Bibliografa

1. Mtodos quilomtricos y otros mtodos volumtricos de anlisis

clnicos. Pagina web:

http://books.google.com.pe/books? id=rTYx8_3gynUC&pg=PA42&lpg=PA42&dq=camara+de+conway&so urce=bl&ots=0hlJh8ogq&sig=00gAgPPdj5_JN1zsQFEoY8hIZyI&hl=es&sa=X&ei=Yt6NT4

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6EHsvOgAfM0-mVDg&ved=0CGIQ6AEwDA#v=onepage&q=camara %20de%20conway&f=false Visitado: 17/04/12 2. Determinacin de monxido de carbono por microdifusion por espectofotometria segn Gettler y Freimuth. Pgina Web: http: //www.biol.u nlp.edu.ar/ toxicologia/ guiastp/guia_tp1/monoxido carbono.html. Visitado: 17/04/12 3. Impacto de la contaminacin atmosfrica en la salud. Pgina Web: http://www.swisscontact.bo/sw_files/mflkapozbyl.pdf Visitado: 17/04/12

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