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DISCUSIN N 3: PROPIEDADES GENERALES

DE LAS

ENZIMAS

1. Explicar la naturaleza qumica de las enzimas, sus principales propiedades y la funcin que desempean en los sistemas biolgicos. Las enzimas son catalizadores biolgicos, de naturaleza proteica (con excepcin de algunas molculas de RNA catalizadoras o ribozimas), para las reacciones qumicas, la mayor parte de las cuales ocurriran sino fuera por la catlisis enzimtica; cada enzima cataliza un pequeo numero de reacciones y frecuentemente solo una. Son biocatalizadores porque incrementan la velocidad de las reacciones qumicas en todos los seres vivos. Propiedades: a. Son protenas globulares: tienen un alto nivel de organizacin. b. La mayora de las enzimas necesitan un cofactor, (orgnico e inorgnico), para su actividad. c. Estn formadas por mas de 100 amino cidos d. Disminuyen la energa de activacin. e. Se requieren en cantidades mnimas (eficiencia) f. Pueden ser regulables (alostericas) g. Modifican la estructura qumica del sustrato (segn el tipo de reaccin que catalicen) h. No alteran el equilibrio de la reaccin i. No se modifican permanentemente ni se consumen j. Convierten productos aquirales a productos quirales k. Son selectivas l. Aumentan 10 a la sexta veces la velocidad de reaccin. m. Su actividad es afectada por cambios en el medio (concentracin de iones hidrgeno, pH, temperatura, concentracin de la enzima, concentracin del sustrato, concentracin de los cofactores, inhibidores, etc.). n. Son especificas: capacidad de actuar sobre un solo sustrato o sobre un pequeo conjunto de sustratos estrechamente relacionados, as como tambin para el tipo de reacciones que catalizan. o. Son catalizadores estereoespecificos catalizando por lo general estereoisomeros especficos de un determinado compuesto.

2. Describir como el pH y la concentracin de sales afectan el estado inico de una enzima Los cambios de carga pueden afectar la actividad, ya sea cambiando la estructura o la carga en un residuo que funcione para ligar el sustrato o en la catlisis. Ph extremos (tpicamente por debajo de 4.0 y por encima de 10.0) cambia el grado de ionizacin de numerosos grupos de la enzima, de modo que puede alterar su estructura funcionalmente. Si estos cambios son suficientemente grandes, se desnaturaliza la enzima irreversiblemente perdiendo con esta su actividad. Las variaciones de pH mas pequeas dentro de rangos de 4-10 afectan a un nmero menor de grupos ionizables, y si estos estn en el sitio cataltico, la actividad de la enzima cambia notablemente. La variacin de pH puede as mismo alterar el grado de ionizacin del sustrato, modificando la unin del sustrato a la enzima. Al afectar el estado inico puede hacer que la enzima actu sobre uno u otro sustrato. Afectan las cadenas (-R), las cuales tienen grupos que se ven afectados: -OH, -COOH, -NH2. En conclusin: la actividad enzimtica esta relacionada con las caractersticas del Ph y fuerza inica del medio (concentracin de sales). Estos factores afectan la configuracin de la protena, ya que los diversos grupos funcionales de las cadenas polipeptdicas pueden ionizarse o interactuar con otras cargas o grupos funcionales, modificando su estructura terciaria, ya que las enzimas presentan su mxima actividad a un valor dado de pH, el cual es diferente para cada enzima.

3. Explicar a travs de anlisis de sus respectivas graficas los factores que afectan a la velocidad de reaccin enzimtica, los siguientes factores: concentracin de enzimas, concentracin de sustrato, temperatura y pH. TEMPERATURA: las enzimas como protenas que son se ven afectadas por la temperatura. En una reaccin no catalizada o incluso en las reacciones catalizadas por enzimas, a mayor temperatura mayor velocidad de reaccin, debido a que se incrementa el movimiento de las molculas por un previo incremento de la energa cintica de estas; es decir que es directamente proporcional. Las enzimas actan a una temperatura optima de 37 C, esta temperatura depende de la temperatura normal de las clulas en la que reside la enzima, generalmente las enzimas en el hombre son estables a temperaturas de hasta 45 a 55 C, superior o igual a 55 C la enzima se desnaturaliza, (existen excepciones: proteasa casi en punto de ebullicin), con una perdida de la actividad cataltica. Las temperaturas bajas no la desnaturalizan sino que se desactiva y hasta despus se vuelven activas en temperatura ambiente. Q10: es un coeficiente de temperatura. Si se aumenta la temperatura 10 C, la velocidad de un proceso biolgico aumenta en la misma proporcin. pH: La velocidad de casi todas las reacciones catalizadas por enzimas dependen de la concentracin de iones hidrgenos. La mayora de las enzimas tienen un pH entre 5 y 9 (existen excepciones: pepsina pH 1.5). El pH al que las enzimas llevan a cabo su actividad cataltica es el pH optimo, si este pH es alterado de manera drstica, la enzima se desnaturaliza y por tanto pierde su actividad cataltica. Por lo tanto, cambios mnimos de pH dentro de los limites fisiolgicos, ayudan a regular las reacciones enzimaticas. CONCENTRACIN DE ENZIMAS: es directamente proporcional, a mayor cantidad de enzima, mayor velocidad de la reaccin, pero esto solo se cumple cuando la velocidad inicial depende de la concentracin. CONCENTRACIN DE SUSTRATO: Cuando se incrementa la concentracin de sustrato, la velocidad inicial aumenta hasta que alcanza un valor mximo (Vmax). Cuando se llega al punto en que aumentar mas la concentracin de sustrato no incrementa la velocidad inicial, se dice que la enzima esta saturada con el sustrato, y aunque se le agregara mas sustrato, este ya no influira en la velocidad de la reaccin, se vuelve constante. Con pequeas cantidades de sustrato, la velocidad es directamente proporcional a la concentracin de este; y con grandes cantidades de sustrato, la velocidad se vuelve constante.

4. Explicar porque el pH del ambiente intracelular de las enzimas no es precisamente el pH ptimo de las enzimas. Esto es debido a que hay enzimas que tienen una actividad tan grande, que son capaces de transformar bastantes molculas de sustratos por segundo, y una forma de controlar su actividad en el organismo es mantenerlas a un pH diferente de su pH ptimo. Sino hubiera un metabolismo activado. Adems se debe a que las enzimas manifiestan propiedades diferentes in Vitro que in vivo, donde la interaccin con los componentes celulares pueden modificar la dependencia frente al pH.

5. Definir y ejemplificar: a. Enzimas funcionales del plasma: son las que se encuentran siempre en la circulacin de individuos normales, y desempean un papel fisiolgico en la sangre, encontrndose all en concentraciones equivalentes o mayores que en los tejidos (all esta el sustrato), generalmente son sintetizadas y

b.

c.

d.

secretadas estas enzimas en el hgado. Entre estas tenemos la lipoprotena lipasa, la seudocolinesterasa y las proenzimas de la coagulacin de la sangre y disolucin de cogulos. Enzimas no funcionales del plasma: realizan funciones fisiolgicas desconocidas en el plasma. Estas surgen de la destruccin rutinaria normal de eritrocitos, leucocitos y otras clulas. El dao tisular o necrosis que resulta de lesin o enfermedad por lo regular va acompaado de incrementos en las concentraciones de varias enzimas plasmticas no funcionales. Entre estas encontramos todas las enzimas intracelulares verdaderas y las que existen en las secreciones exocrinas como la amilasa pancretica, lipasa, fosfatasa alcalina, fosfatasa cida prosttica. Enzimas orientadoras de rganos: son enzimas que estn presentes en concentracin apreciables solo en un rgano; estas al incrementar su concentracin en la sangre, orientan al medico para conocer en que rgano o tejido esta la enfermedad. Entre estas estn la acetilcolinesterasa, fosfatasa cida (prstata), alcohol deshidrogenasa en el hgado, fosfatasa alcalina, transaminasas, aldolasas, deshidrogenasa lctica, transcetolasa. Enzimas de secrecin: son aquellas que van a ser secretadas por un rgano o una glndula (secreciones exocrinas) en forma pasiva y van a ejercer su accin a otro sitio. Por ejemplo la amilasa, lipasa y la fosfatasa.

6. Explicar la ubicacin de la amilasa pancretica segn la clasificacin anterior Es una enzima de secrecin, se origina o es secretada por el pncreas y luego se va hacia el intestino delgado y la saliva. 7. Analizar cuales son las muestras biolgicas adecuadas para efectuar las determinaciones enzimaticas. p. Muestras de estratos tisulares q. Lquidos biolgicos: sueros (sangre, orina, saliva, liquido cefalorraqudeo, liquido amnitico).

8. Explicar la relacin que existe entre dao celular y actividad de las enzimas en el plasma Los valores de enzimas plasmticas no funcionales se interpretan como prueba de una necrosis celular o bien de enfermedades en tejidos y rganos. Normalmente los niveles plasmticos son muy bajos o nulos. Una agresin en forma de cualquier proceso patolgico, pueden provocar cambios en la permeabilidad de la membrana celular o incrementar la muerte celular, dando lugar a la liberacin de enzimas intracelulares en el plasma. En casos de cambios de permeabilidad las primeras enzimas que aparecern en el plasma, sern las de menor peso molecular y cuanto mas grande sea el gradiente de concentracin entre los niveles Nitra y extracelular, ms rpidamente difundir la enzima. Las enzimas no funcionales del plasma se incrementaran cuanto mayor sea la cantidad de tejido daado. Y luego desaparecern a velocidades diferentes, de acuerdo con la estabilidad de la enzima y su susceptibilidad al sistema reticuloendotelial.

9. Explicar como puede medirse la actividad de las enzimas en las muestras biolgicas y la razn por la que en los anlisis biolgicos se investiga su actividad cataltica, en el tejido corporal y no su concentracin.

Las diminutas cantidades de enzimas presentes en las clulas hacen complicado determinar su presencia y concentracin. Sin embargo, su habilidad para transformar con rapidez miles de molculas de un sustrato especfico en productos le da a cada enzima la capacidad de revelar su presencia. En condiciones apropiadas la velocidad de la reaccin cataltica en estudio es proporcional a la cantidad de enzima presente. 10. Definir las unidades en que se expresa la actividad de las enzimas. Unidades de Recambio: Es el nmero de molculas de sustrato transformadas por unidad de tiempo por una molcula de enzima. Unidad Enzimtica: La cantidad de enzima que es capaz de catalizar la transformacin de 1 micromol de sustrato por minuto en condiciones estndar, a temperatura de 25 C y a un pH optimo. Katal: La cantidad de enzima que es capaz de catalizar la transformacin de 1 mol de sustrato por segundo. Actividad especfica: unidades de enzima por miligramo de protena. 11. Explicar que son los zimgenos, su proceso de activacin y su importancia ejemplificando hidrlisis selectiva o parcial. Ciertas protenas se sintetizan y secretan como protenas precursoras inactivas conocidas como proprotenas. Las proprotenas de enzima se denominan proenzimas o zimgenos. La protelisis selectiva convierte una proprotena mediante una o ms segmentaciones proteolticas sucesivas en una forma que muestra la actividad caractersticas de la protena madura, por ejemplo, su actividad enzimtica. Entre las protenas sintetizadas como proprotenas se encuentran la hormona insulina (proprotena = proinsulina, de la cual se deriva la insulina por separacin proteolitica de un pptido), las enzimas digestivas que hidrolizan protenas se sintetizan como zimogenos en el estomago y el pncreas y entre estas estn la pepsina, tripsina y quimiotripsina (proprotenas = pepsingeno, tripsingeno y quimotripsingeno respectivamente), varios factores de la coagulacin sangunea y cascadas de disolucin de cogulos de sangre y la protena del tejido conjuntivo colgeno, que se produce en la piel y el hueso, se deriva del procolgeno, un precursor soluble. Dado que este tipo de activacin es irreversible, se necesitan otros mecanismos para inactivas estos enzimas. Las proteasas son inactivadas por protenas inhibidoras que se fijan muy fuertemente al sitio activo de la enzima. La sntesis y secrecin de proteasas como proenzimas catalticamente inactivas protegen el tejido de origen (por ejemplo, el pncreas) contra la autodigestin, como la que puede ocurrir en la pancreatitis. Ciertos procesos fisiolgicos como la digestin son intermitentes pero bastante regulares y predecibles. Otros como la formacin de cogulos de sangre, la disolucin de cogulos y la reparacin de tejido se producen en lnea slo en respuesta a la necesidad fisiolgica o fisiopatolgica apremiante. La protelisis selectiva tiene que ver con uno o ms cortes proteolticos muy especficos que podran ir acompaados o no por la separacin de los pptidos resultantes. Pero lo ms importante es que la protelisis selectiva produce con frecuencia cambios conformacionales que crean el sitio cataltico de una enzima. 12. Explicar la funcin de cada uno de los reactivos y analizar los resultados obtenidos en su determinacin de amilasa. Sustrato reactivo de almidn pH 7 El almidn es un polisacrido de reserva alimenticia predominante en las plantas, y proporciona el 70-80% de las caloras consumidas por los humanos de todo el mundo. Tanto el almidn como los productos de la hidrlisis del almidn constituyen la mayor parte de los carbohidratos digestibles de la dieta habitual. En el experimento sirve de sustrato para poder ser hidrolizado por la enzima. Reactivo de Yodo N/100 Sirve para determinar el efecto de la amilasa sobre la digestin del almidn, es decir, la actividad de dicha enzima se determina por medio de la reaccin del yodo, el cual al combinarse con el almidn produce un color azul verdoso.

Resultado El almidn no hidrolizado da un color azul oscuro con el reactivo de yodo, pero a medida que se efecta la digestin, el color azul se torna cada vez ms plido hasta que por ltimo el color que se obtiene es el del reactivo de yodo lo cul significa que el almidn ha sido hidrolizado.
13. Describir la clasificacin general de las enzimas ubicando a la amilasa dentro de ella. Oxidorreductasa: catalizan reacciones de oxidorreduccin, es decir, transferencia de hidrgeno o electrones de un sustrato a otro. Ej.: succinato deshidrogenasa, citocromo c oxidasa, lactato deshidrogenasa, alcohol deshidrogenasa. Estas a la vez se dividen en deshidrogenasas, reductasas, oxidasas, hidroxilasas y peroxidasas. Transferasas: Catalizan la transferencia de grupo qumico (distinto de hidrgeno) de un sustrato a otro. Ej.: glucoquinasa, hexoquinasa. Esta se divide en transaminasas, transfosforilasas y transmetilasas.

Hidrolasas: Catalizan reacciones de hidrlisis. Ej.: lactasa, quimotripsinas, amilasa. Se dividen en lipasas, fosfatasas, fosfodiesterasas, peptidasas, glicosidasas. Liasas: Catalizan reacciones de ruptura o soldadura de sustratos. Ej.: acetacetato descarboxilasa, fumarasa, piruvato descarboxilasa. Se dividen en descarboxilasas, aldolasas, deshidratasas, desaminasas. Isomerasas: Catalizan la interconversin de ismeros. Ej.: fosfotriosa isomerasa, fosfosglucosa isomerasa, alanina racemasa. Se dividen en epimerasas y mutasas. Ligasas: Catalizan la unin de dos sustratos con hidrlisis simultnea de un nucletido trifostato (ATP, GTP, etc.). Ej.: piruvato carboxilasa. Se dividen en sintetasas y carboxilasas.
14. Describir la reaccin catalizada por la amilasa sealando: sustrato, producto y enlace que rompe La amilasa es una enzima digestiva producida y secretada por las clulas exocrinas de los acinos pancreticos. Su accin es hidrolizar el almidn y el glucgeno hasta maltosa, maltotriosa y una mezcla de oligosacridos ramificados, no ramificados y algo de glucosa. Sustrato: almidn y glucgeno. Producto: maltosa, maltotriosa y una mezcla de oligosacridos ramificados, no ramificados y algo de glucosa. Enlace que rompe: enlace glucosdico alfa 1,4 15. Explicar la razn por la que en el diagnstico diferencial, en la evolucin y en el pronstico de muchos estados patolgicos son importantes los anlisis enzimticos. Las enzimas llevan a cabo funciones vitales relacionadas con la salud y enfermedad, por lo consiguiente, el clnico necesita conocer su funcionamiento y con frecuencia utiliza la medicin de la actividad de las enzimas para ayudarse en el diagnstico de varios estados patolgicos. En la actualidad se sabe que los organismos responden a cambios en su medio interno y externo mediante modificaciones equilibradas y coordinadas en las velocidades de reacciones metablicas especficas. Muchas enfermedades del hombre, como cncer, diabetes, fibrosis qustica y enfermedad de Alzheimer, se caracterizan por disfunciones reguladoras que desencadenan agentes patgenos o mutaciones genticas. Por ejemplo, muchos virus oncognicos elaboran proten-tirosncinasas que modifican los eventos reguladores que controlan patrones de expresin gnica, y contribuyen a la iniciacin y progresin del cncer. Por consiguiente, es esencial conocer los factores que controlan las velocidades de las reacciones catalizadas con enzimas para comprender la base molecular de la enfermedad. Adems, el estudio de la cintica de las enzimas tambin representa el modo principal para identificar posibles agentes teraputicos que, de manera selectiva, incrementan o inhiben las velocidades de procesos especficos catalizados por las enzimas. Un conjunto complejo y equilibrado de actividades enzimticas es el fundamento para mantener la homeostasis. Por consiguiente, es importante entender la cintica de las enzimas para saber cmo las

condiciones fisiolgicas adversas, como anoxia, acidosis y alcalosis metablicas, toxinas y agentes farmacolgicos afectan ese equilibrio. 16. Enunciar los valores normales de amilasa en suero y explicar las posibles alteraciones sricas en procesos patolgicos apendicitis, pancreatitis, insuficiencia renal. Los valores normales de amilasa en suero son de 60-160 U/dL de suero Se encuentran niveles elevados de amilasa principalmente en la pancreatitis, y en la parotiditis, lcera pptica perforada, apendicitis, enfermedad de las vas biliares, insuficiencia renal, etc. Por tanto, se utiliza para evaluar la funcin del pncreas, diagnosticar la presencia de enfermedades del mismo y para controlar su evolucin. Tambin se utiliza para evaluar enfermedades de la vescula biliar (piedras litiasis), problemas intestinales, y otras enfermedades diversas.

Los niveles aumentados de Amilasa en la sangre pueden indicar: a. Cncer de pncreas, ovarios, pulmn. b. Colecistitis. c. Clico de vescula biliar. d. Embarazo ectpico con rotura de trompas. e. Obstruccin intestinal. f. Pancreatitis aguda. g. Problemas de obstruccin de conductos biliares o pancreticos. h. Ulcera de estmago perforada. Los niveles disminuidos de Amilasa en la sangre pueden indicar: i. Cncer de pncreas. j. Lesin pancretica. k. Enfermedades renales. l. Toxemia en el embarazo. 17. Explicar la importancia de las isoenzimas en el diagnstico clnico, ejemplificando. Los organismos superiores suelen elaborar varias versiones fsicamente distintas de una determinada enzima, cada una de las cuales cataliza la misma reaccin. Al igual que los miembros de otras familias de protenas, estos catalizadores protenicos o isoenzimas surgen por la duplicacin de genes. 18. Explicar en que consiste inhibir una enzima y sealar los diferentes tipos de inhibidores enzimticos, diferenciando con el proceso de desnaturalizacin. Las enzimas se pueden inactivar por modificacin irreversible de un grupo funcional esencial para la actividad cataltica. Tambin se pueden inhibir por molculas que se fijan reversiblemente. Los inhibidores competitivos compiten reversiblemente con el sustrato para fijarse en el sitio activo pero no son transformados por el enzima. Los inhibidores no competitivos se fijan al complejo enzima-sustrato en un sitio diferente del centro activo. En la inhibicin mixta, un inhibidor se fija a la enzima o al complejo enzima-sustrato, tambin en un sitio distinto del que une el sustrato. La actividad enzimtica puede ser disminuida o eliminada por la accin de ciertas sustancias a las cuales se les conoce con el nombre de inhibidores enzimticos. Mediante el uso de inhibidores enzimticos se ha obtenido informacin muy valiosa sobre la conformacin del centro activo de algunas enzimas. Las distintas formas de interaccin se traducen en varios tipos de inhibicin perfectamente diferenciables experimentalmente. Los dos tipos ms comunes son la competitiva y la no competitiva. La primera es cuando el inhibidor compite con el sustrato por la unin con el centro activo de la enzima. Este tipo de inhibicin puede

reducirse si se aumenta la concentracin de sustrato. Un ejemplo clsico lo constituye la inhibicin del malonato sobre la enzima succinato deshidrogenasa que cataliza la eliminacin de dos tomos de hidrgeno de los tomos de carbono metilnico del succinato. En la segunda el inhibidor forma un enlace covalente con las enzimas cerca del centro activo sin modificarla irreversiblemente. Un ejemplo son los gases nerviosos, como el fluorofosfato de di isopropilo (DFP) que forma un complejo con la enzima acetilcolinesterasa. Los animales envenenados con este gas quedan paralizados, debido a la imposibilidad de transmitir adecuadamente los impulsos nerviosos. Ciertos metales como el plomo, mercurio y arsnico inhiben enzimas que tienen en su centro activo grupos SH libres. El proceso de inhibicin enzimtica es til para comprender los mecanismos de accin txica y farmacolgica de algunos compuestos. 19. Definir que son enzimas reguladoras y sealar sus principales caractersticas. En cada ruta metablica hay al menos una enzima que fija la velocidad de la secuencia global ya que cataliza la reaccin ms lenta, es decir, la limitante de velocidad. Estas enzimas reguladores, muestran adems una actividad cataltica mayor o menor en respuesta a ciertas seales. Gracias a la accin de tales enzimas reguladores, la velocidad de cada secuencia metablica se ajusta constantemente para adaptarse a los cambios en las necesidades de la clula con respecto a la energa y a las biomolculas requeridas durante el crecimiento celular y en la reparacin de lesiones. La actividad de algunas enzimas reguladoras, llamadas enzimas alostricos, se ajusta mediante la fijacin reversible de un modulador especfico a un sitio regulador. Las enzimas reguladoras o alostricas son estimuladas o inhibidas por la unin con alguna molcula, el efector o modulador, generalmente un producto metablico, cuya concentracin en la clula es crtica, adems le provoca cambio al sitio cataltico, ayuda a que el sustrato se pose adecuadamente, presentan estructura cuaternaria, son oligomericas, son dbiles a temperatura baja, presentan dos o mas cadenas y tienen alto peso molecular.