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Determinao de protena bruta

Determinao de protena bruta

Grego "proteios": ocupar o primeiro lugar (o mais importante) Contm: C (50 - 55%) H (6 - 8%) O (20 - 24%) N (15 - 18%) S (0,2 - 0,3%)

MS do corpo animal - at 70% protena Polmeros de aminocidos


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Determinao de protena bruta

Grupo carboxlico

Grupo amina

COOH

H 2N
Cadeia lateral Carbono a

Determinao de protena bruta

Aminocidos: 20 diferentes
Essenciais e no essenciais Diferenciam-se pelo radical "R"

Determinao de protena bruta

Aminocidos apolares

(grupo R hidrofbico)

Determinao de protena bruta

Aminocidos polares sem carga

(grupo R hidroflico)

Determinao de protena bruta

Aminocidos polares com carga positiva

Aminocidos bsicos - aceptores de prtons.

Determinao de protena bruta

Aminocidos polares com carga negativa

Aminocidos cidos - doadores de prtons

Determinao de protena bruta

Aminocidos aromticos
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Determinao de protena bruta

Ligao peptdica

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Determinao de protena bruta

Polipeptdeo

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Determinao de protena bruta

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Determinao de protena bruta

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Determinao de protena bruta

Funes biolgicas compreendem:


Estrutural (tecidos - queratina, colgeno)
Catlise (enzimas - amilase, hexoquinase...) Transporte (hemoglobina, calbindina) Hormnios (insulina; GRH...) Proteo (anticorpos; imunoglobulinas) Armazenamento (ferritina) Nutricional (casena; ovoalbumina)
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Determinao de protena bruta

Vegetais sintetizam suas protenas


fazemos adubao nitrogenada!)

(por isso

Animais precisam ingerir protenas Ruminantes convertem N inorgnico em protena (graas simbiose microbiana) Valor biolgico (perfil de aminocidos)
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Determinao de protena bruta

Determinao de nitrognio total (Kjeldahl)


Mtodo do biureto
(nome dado estrutura originada a partir da decomposio da ureia, quando essa submetida a uma temperatura de 180oC / presena de ligaes peptdicas)

Absoro no Ultra-violeta (devido Trp e Tyr)

Presena de grupos amino livres


Capacidade de ligao com corantes (Bradford)

Presena de AA aromticos (fluorescncia)


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Determinao de protena bruta

Soma de todo nitrognio presente na amostra protena verdadeira aminocidos

amidas
cidos nuclicos uria

amnia
outros
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COMPONENTES DO ALIMENTO
AGUA
NITROGNIO NO PROTEICO

Anlises de protena Determinao Laboratoriaisbruta


Estufa, MS

COMPOSTOS NITROGENADOS
PROTENA

PROTENA BRUTA (PB) Todo contedo de nitrognio: uria, aminas, aminocidos, protena

A L I M E N T O
LIPIDEOS MATERIA SECA VITAMINAS MATERIA ORGANICA CARBOIDRATOS

NO PAREDE

100 - PB - EE - FDN - MM Usualmente calculada: glucose, pectina, amido, outros aucares Fibra Detergente Neutro FDN Hemicelulose Celulose Lignina FDA

PAREDE CELULAR

LIGNINA COMPOSTOS FENLICOS

TANINOS SIMPLES

No analisado rotineiramente EXTRATO ETREO (EE) Triglicerdeos, cidos graxos, fosfolipdios, ceras, pigmentos, etc.

COMPOSTOS LIPOSSOLVEIS

No analisado rotineiramente HIDROSSOLVEIS

NO ESSENCIAIS MATERIA INORGANICA ESSENCIAIS MICRO CINZAS (Matria Mineral) todos os minerais, slica, etc. Mufla a 550 C.

MACRO

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Determinao de protena bruta

Histria... 1849-1900
Johan Gustav Kjeldahl Qumico dinamarqus

Descobriu

mtodo

rpido

para

se

determinar o valor nitrogenado dos alimentos (1883)


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Determinao de protena bruta

Proposto por J. G. Kjeldahl (1883)


Protena da dieta= PB (nico valor analisado e
constatado!)

PB = %N x 6,25 Assume que toda protena tem 16% de nitrognio (100/16 = 6,25) PB = N protico + N no protico
(aminocidos, amnia, amidas, cidos nuclicos,

peptdeos...)
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Determinao de protena bruta

AMOSTRA Fator geral Gelatina Ovos


Produtos lcteos

FATOR 6,25 5,55 6,68


6,38

Soja
Farinha de trigo Arroz

6,25
5,70 5,95

Carnes

6,25
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Determinao de protena bruta

Vantagens do mtodo de Kjeldahl

aplicvel a todos os tipos de alimentos simples relativamente barato boa preciso ( oficial)
mede N total (protico ou no) biureto mais preciso demorado usa reagentes corrosivos

Desvantagens

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Determinao de protena bruta

Passo 1: Digesto da amostra Passo 2: Destilao da amostra

Passo 3: titulao da amostra


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Determinao de protena bruta

1 ETAPA: DIGESTO DA AMOSTRA

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Determinao de protena bruta

1 ETAPA: DIGESTO DA AMOSTRA

Protenas e outros compostos nitrogenados so decompostos na presena do cido sulfrico (H2SO4) concentrado, a quente, com produo de sulfato de amnio (NH4)2SO4 + SO2 + CO2 + H2O
CUSO4 + K2SO4 + (H2SO4) (NH4)2SO4 + SO2 + CO2 + H2O

Sulfato de amnio

Matria orgnica (contendo N)

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Determinao de protena bruta

1 ETAPA: DIGESTO DA AMOSTRA


Sulfato de potssio (K2SO4) ou de sdio adicionado, a fim de aumentar o ponto de ebulio do cido sulfrico de 337C para mais de 400C, tornando a digesto rpida Outros compostos como sulfato de cobre (CuSO4), mercrio e selnio so catalisadores auxiliam na digesto da matria orgnica

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Determinao de protena bruta

1 ETAPA: DIGESTO DA AMOSTRA

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Determinao de protena bruta

1 ETAPA: DIGESTO DA AMOSTRA

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Determinao de protena bruta

1 ETAPA: DIGESTO DA AMOSTRA

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Determinao de protena bruta

1 ETAPA: DIGESTO DA AMOSTRA

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Determinao de protena bruta

1 ETAPA: DIGESTO DA AMOSTRA

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Determinao de protena bruta

1 ETAPA: DIGESTO DA AMOSTRA

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Determinao de protena bruta

1 ETAPA: DIGESTO DA AMOSTRA

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Determinao de protena bruta

1 ETAPA: DIGESTO DA AMOSTRA

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Determinao de protena bruta

1 ETAPA: DIGESTO DA AMOSTRA

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Determinao de protena bruta

1 ETAPA: DIGESTO DA AMOSTRA

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Determinao de protena bruta

1 ETAPA: DIGESTO DA AMOSTRA

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Determinao de protena bruta

1 ETAPA: DIGESTO DA AMOSTRA

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Determinao de protena bruta

2 ETAPA: DIGESTO DA DESTILAO

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Determinao de protena bruta

2 ETAPA: DIGESTO DA DESTILAO

nitrognio de

capturado amnio, na de

na

forma

de da de

sulfato soluo

presena hidrxido

concentrada

sdio, d origem ao hidrxido de amnio

que libera amnia (NH3) na forma de


vapor a qual condensada sobre a soluo de cido brico.
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Determinao de protena bruta

2 ETAPA: DIGESTO DA DESTILAO


(NH4)2SO4 + 2NaOH
Sulfato de amnio Hidrxido de sdio

2NH4OH + Na2SO4
Hidrxido de amnio

Sulfato de sdio

2NH4OH
Hidrxido de amnio

2NH3
Amnia

2H2O

Amnia

2NH3 + 2H3BO3
cido brico

2NH4H2BO3
Borato de amnio
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Determinao de protena bruta

2 ETAPA: DIGESTO DA DESTILAO

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Determinao de protena bruta

2 ETAPA: DIGESTO DA DESTILAO

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Determinao de protena bruta

2 ETAPA: DIGESTO DA DESTILAO

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Determinao de protena bruta

2 ETAPA: DIGESTO DA DESTILAO

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Determinao de protena bruta

2 ETAPA: DIGESTO DA DESTILAO

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Determinao de protena bruta

2 ETAPA: DIGESTO DA DESTILAO

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Determinao de protena bruta

2 ETAPA: DIGESTO DA DESTILAO

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Determinao de protena bruta

3 ETAPA: DIGESTO DA TITULAO

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Determinao de protena bruta

3 ETAPA: DIGESTO DA TITULAO

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Determinao de protena bruta

3 ETAPA: DIGESTO DA TITULAO


O borato de amnio titulado em cido clordrico (HCl) de concentrao conhecida at a "viragem" da cor rosa, gerando cloreto de amnio mais cido brico Em funo do volume de cido clordrico (HCl) consumido, e conhecendo sua normalidade, ento possvel calcular a concentrao de nitrognio captada a partir da amostra

NH4H2BO3 + HCl
Borato de amnio cido clordrico

NH4Cl
Cloreto de amnio

+ H3BO3
cido brico
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Determinao de protena bruta

3 ETAPA: DIGESTO DA TITULAO


O princpio da equivalncia entre o contedo de N na amostra que est na forma de borato de amnio e a quantidade de HCl necessria para converter todo o N para a forma de cloreto de amnio
Se calcularmos quantos Eqg de HCL forma necessrios para reagir com o NH4+, considerando que a proporo de 1:1, poderemos saber quanto de NH4+ estava contido na amostra
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Determinao de protena bruta

3 ETAPA: DIGESTO DA TITULAO

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Determinao de protena bruta

3 ETAPA: DIGESTO DA TITULAO

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Determinao de protena bruta

3 ETAPA: DIGESTO DA TITULAO

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Determinao de protena bruta

Eqg: peso atmico em gramas


Eqg N = 14 gramas Normalidade (N): Eqg / 1000 mL Soluo 1N de nitrognio = 14/1000 mL Cada mL de soluo 1 N = 0,014 g de nitrognio Cada mL de soluo 0,1 N = 0,0014 g de nitrognio

N x V = N' x V'
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Determinao de protena bruta

1 Eqg de HCl 1 mL de HCl 0,1N Vol de HCl 0,1 N

1 Eqg de N 0,0014 g de nitrognio X g de nitrognio

X = (0,0014 g x Vol HCl 0,1 N) / 1

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Determinao de protena bruta

% PB = % N x

6,25

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