You are on page 1of 9

PROCEEDINCS Vol. 18,No.

2/3, t985 nB

5l

SPEKTROFOTODENSITOMETRI UNTUK MENENTUKAN ANTIDEPRESANAMIN TRISIKLIK YANG BEREDAR DI INDONESIADALAM TABLET DAN DALAM URIN. Oleh: RaslimRasyid, Yeyet C. Sumirtapura,TisnoSuwdmo, INK llid jaia, Anwar*

SARI Penentuan kadar antidepresanamin trisiklik yang beredar di Indonesia (amitriptilin, nortriptilin, dan imipramin) dengancaraspektrofotodensitometridilakukan terhadaptablet dan urin. Isolasidari tablet dilakukan denganmetanol dan dari urin denganeter. Cara ini sudah dicoba untuk menentukan kadar senyawaamin trisiklik dalam tablet dan ini setelahpemberiansenyawa-senyawa dalam dosistun88al. urin sukarelawan ABSTRACT method has been caffied out for the determination of tricylic A spectrophotodensitometric available in lndonesia(amitdptyline, nortriptyline, and imipramine) amine antidepressants in tablets and urine. Isolation was done by methanol from tablets and by elher from urine. The method has been applied for examinations of tricyclic amine compounds in tablets aswell asin urine of volunteersreceivinga singledose of the compounds.

+ JurusanFaJmasi ITB, Indonesia.

5)
I Pendahuluan

ITB, ol. ) 8, No. 2/3. 1985 PROCEEDINGS

Pada saat ini di Indonesia cukup banyak beredar scdiaanobat yang menganturunan amin trisiklik, baik yang berisi zat tunggal dung zat aktif antidepresan nraupundalanr kombinasi dengansenyawapsikotropik lain seperti perfenazin, flufenlzin, diazcpamdan klordiazepoksida. Bcrbagaicara penentuankadar senylrvaantidepresan aniin trisiklik, baik untuk p e n c n t u a n n y a a l a r r s e d i a a nn l a L r p L rd a l a n l c a i r a nb i o l o g i s n t u k k c l t e r l L r a n d u n p u r g c n d l l i a nn u t u o b a t t l a n p e r n e r i k s a a ni n i s ,t e l a ht l i k c n r b a n g k ao l e h p a r a kl n p c n e l i t i t e r d a l t u l u ( 1 , 2 ) . C a r a a n a l i s i sy a n g s u d a h d i k e n r b a n g k a ne r s c b u t l nrcncnkttp cara yang seclerhana. seperti spe ktrofotomctri. sirnl\rr cf,rr yrng y n r e l i b r t k a np e r a l a t a n n a l i s i s r n g n r o d e r ns c p e r t ik r o m a t o g r a fg a s( 3 . 4 ) d a n a i p e n a r r p i l a ni n g g i( 5 , 6 , 7 , 8 , 9 ) . k r o r n a t o g r i r f ia i r c t Cara analisis yang sr.rdah dikembangkandi suatu laboratoriunt tidak selalu dafat diterapkan cli laboratoriunr lain karcna nrasalahperalatandan pereaksi y r r r g t e r s e d J aO l c h k a r e n a i t u p e r l u d i k e n r b a n g k a n t e t o d e a n a l i s i sy a n g . n y s c : u l i t l e n g a nk o n d i s i l a b o r a t o r i l r n y a n g a d a u n t L r kt u j u a n a n a l i s i s a n g d r r p c n c l i t i a n c r d a l r u l L e l a hd i k e r r r b a n g k a ne t o d ea n a l i s i s e t r e r a p a hadepi. 'rda I t tr m b s e n ! ' r \ a l ! l n t i d e p r e s atn i s i k l i k d e r r g a n l r a k r o n t a t o g r a flia p i st i p i s ( K L T ) c h n r c s p e k t r o t o t o r n e t r iC u r a i n i r n n s i l rn r e n r i l i k ib e b e r l p a k c l r , ' : t i a ) t a k h L r s r r s n y a . n. n d r l l n r h u l y r e n y i a p a s a n r p e l e k s t r a k s i ) a n b a t a sk e p c k a a n r l e t o d c a n a l i s i s . d L ) a l a n rp c n c l i t i a n : n i d i k e n r b a n g k i l n u a t u c a r a p e n c l t t u i l Dk a d a r b e b e r a p a s p s ! . n y a w ra n t i d e p r c s a t r r n l n a na m i n t r i s i k l i k 1 ' a n g e n r i s a h a n n llrr c n g g u n a k a n n k r o n r a t o g r a f i a p : s t i p i s , s e d a t l g k a lp e n e n t u a nk L r a n t i t a t i f i l a k L r k a n e n g a n l l d d cara spcktrofotodensitometri. T u j u a n p e n e l i t i a n n i t e r u t a n l au u t u k n t e n d a p a t k a n r c t o d ep e n e n t u a n a d a r i k s e n )a w a t e r s c b u t b a i k d a l a n r e d i l l n n r a u p u n a l a n t a r . n p c lr i n . , s d s u

Bahandan alat

2.1 Bohon St'nyawa amin trisiklik munri: arnitriptilin hidroklorida (Roche), ilnipranrin hidroklorida (Ciba Geigy), dan nortriptilin hidroklorida (Squibb); beberapa sediaantablet yang mengandungzat aktif tenebut; pelat lapis tipis silika gel pereaksi 60, E. Merck 20 X l0 cm; metanol dan eter berkualitaspro analisa; lain. kimia 2.2 Alat Bcjana kronratografi untuk ukuran pelat 20 X 20 cm;spektrofotodensitonteter S h i n r a d z uy p e C S - 9 1 0 . t

PR)CE\:DINGS ITB t'ol. lti. i\b.2/3. 1985

f,J

3 3.I

Percobaan Ekstaksi

3.1.l Untuk tablet Satu tablet dimasukkanke dalam vial l0 ml, kemudian ditambahkanair 2 ml. Vial digetarkan dengtrn ultrasomc sampai tablet hancur, tambahkan 8 ml nretrnol tlan isi vial dikocok selanra lt'bih kurang satu nrenit. Bahan pembawa t a b l e t y a n g t i d a k l a n r l d i b i a r k a nn r c n g e n d a p a l t s u p c r n a t a n i a r n b i l u n t u k d d krorlltografi. -1.1.2Untuk uritt L i m a p u l L r h l u r i n d i r l a s u k k a nk e d l l : r m c o r o n g p i s a hb e r k a p a s i t a I 2 5 t n l . m s U r i n d i b r s a k l n d e n g l n p c n l n t b u h a nl n t o n i a k p r k l t ( l 5 i i ) s a n r p a ip H 9 - 1 0 . k e n r u d j u n l i e k s t r r k sd L r ak a l i m a s i n g - n r a s i n g n g a nl 0 n r l e t e r ( l , c n l r o c o k a n c i dc d i l a k u k : r n e n g a n a n g u rk i r e - k i r al 0 r n e n i t ) . d t I r a s ce t e r c l i k t r n t p u l k ad a l a mg e l a sp i a l a 5 0 u r l h l L r d i u a p k a nd i a t a sp c n a n g a s n a i r s a n r p a ik e r i n g . R c s i c l L ri l a n r t k l n k c n t b r l i d a l a n rs a t L rn r i l i l i t e r I n c t a n o l . d k e r r r t r J i : r r r , l i l l k r rk rrotrl r Jo g r J i . k r l l 3.2 Kr0matografi T c r h a d a p l a r u r t a n r t r r l u r n i a t a u c k s t r a k , t l i l a k r r k a nk r o n t a t o - e r a ls e b a g a i z i j b c r i k u t : s : l t u n r i k r o l i t c r l a r u t a n d i t o t o l k a np a d a p c h r l a p i st i p i s i l c n g a n l r a k s a t u s e n t i re t e r c l a r i s i s i b a w a h . d i b i e r k r n s a n l p J i k c r i n g . k c n t L r d i a n i e l u s j d s e j i l u j l I r n l . P c l J t d i k e r i n g k a nP a d t s u l ) u k r : n r r . k e n t r r r l i a n i u k r r r s e c r r a d s p e k t r o l b t o d c n s i t o l t c t rF.a s cg c r t k l a n gd i p a k a ia t J a l l h l c t a l o l . i n 3.3 Spektrofo todcnsitometi N o d a p l d a p c l a t K L T d i u k L r r e c a r a p ! ' k t r o f o t o d e n s i t o n r cdre n g a n p c k t r o s s t i s f o t o d c n s i t o r n c t eS l t i n t l c l z LC S - 9 1 0 . P c r r g u k u r u n i l a k u k a nd c n g a l tI n e t o d c r r d l i r i r . r s l r k e t r o l o t o n r e t r i V s i n g k v a t c l c n g t l rp a d ap a n j a n g e l o r n b a n 2 4 0 n r n . U g g Kccepatan pengukuran (scaning) diatur patla kecr-patan20 mnr,/rnenitdan sensitivitas alat (rckordc'r)diatur pada "X2". 3.4 Perhitungan kador Perhitutrgirn kadar senyarva antidcpresln anrin trisiklik (scblgai seny3',va Lrtuh) d a l a n t s a n r p c lt a b l e t n ) a u p u nc l a l a n t l n t p e l u r i n d i l a k u k a nd e n g a nr n e n r a k l i s k u r v a k l l j b e r a s i .K u r v a k a l i b e r a s d i b u a t d c n g a nc a r a m e n o t o l k a nI a r u t a nz a t i murni rlalam rnetanol, dalant konsentrasi yang bcrvariasi,pada pcll.t yang kemudiln dilakukan krontatografidan spektrolbtodensjtornetri. Kurva kalibcrasi yang tlihasilkan untLrk rnasing-nrasing senyawayang tlicoba p i l d ap e r c o b a r n n i d a p a td i l i h a tp a d ag a n r b a r , 2 .r l a n3 . i 1

54
t,nggi puncak

PRoCEEDINGS tot. t8, No 213.lggs ttB

0.5 Kadar zat {!g)

Gambar 1 Kurva kaliberasi untuk amitriptilin,denganpersamaan garis regresi: y = 6.45 x + 1,43 dan koelisienkorelasi= 0,999, dengan x adalah kadar zat (dalam,gg) dan y adalahtinggi puncak (dalam cml.
12

tt

t,4 Kadar zat l/]g)

3,6

Gambar 2 Kurva kaliberasi untuk imipramin,denganpersamaan garis r e g r e s iy = 3 . 7 ' l x + O , 5 2 d a n k o e f i s i ek o r e l a s i 0 , 9 9 6 . r = n

o,4

0,8

12 1,6 zar Kadar (/rg)

2,O

Gambar 3 Kurva kaliberasi untuk nortriptilin, dengan persamaan ga(s y regresi: = 4,48 x 1,90 dan koefisien = korelasi 0.996.

ITB vol. 18. 2/3. 1985 No. zRo.EEDINGS

Jf,

Hasil percobaan dan Pembahasan

4.1 Ekstraksi dari urin penguapan pelarut relatif Dengan menggunakan eter sebagaipengekstraksi, lebih cepat dan ekstraksi ketiga senyawa amin trisiklik yang dicoba cukup kuantitatif. Jumlah penemuankembali (recovery) zat dari sanlpelurin dengan prosedur ekstraksi ini adalah 89% untuk imipramin, 109% untuk nortriptilin, dan 75% untuk amitriptilin, dilakukan secarailr l,irr.r. Untuk rnengcnrbalikan konsentrasizat dalam ekstrak akhir ke konsentrasidalam urin, maka angkaangka tersebut harus diperhitungkankarenakurva kaliberasidibuat dari larutan zat mumi yang tidak melalui ekstraksi. Dalam penelitian ini pernah dicoba pelarut kloroform sebagaipelarut untuk ekstraksi; pelarut ini biasa dipakai untuk ekstraksi senyawa-senyawa organik dalam fase air. Penggunaan pelarut klorofbrm dalam prosedur ekstraksi percobaanini ternyata serrngmenimbulkan masalah, yaitu sering terbentuknya emulsi yang sukar menrisah pada pengocokan. 4.2 Kromatografi Pada penelitian terdaltulu dipakai pelarut campur untuk fase gerak kromatografi, sedangkandalarn penelitian ini digunakanpelarut tunggal metanol yang ternyata memberikan pemisahanyang cukup baik dan sempufna dari noda pelarut tunggal senyawalain yang mungkin mengganggu. Karena penggunaan ini. fas!' gerak bisa dipakai lebih lama (cukup stabil), tidak perlu mencampur pelarut untuk fase gerak dan reprodusibilitaskronratografi menjadi lebih baik. Dengan kondisi kromatografi ini harga Rp untuk masing-masingsenyawa adalah 0,33 untuk amitriptilin dan imipramin, dan 0,14 untuk nortriptilin. 4.3 Analisis kuantitatif Penggunaan cara spektrofotodensitometriuntuk analisiskuantitatif noda-noda yang dihasilkan dalarn kromatograti memberikan beberapa keuntungan dibandingkandenganmetode sebelumnya,antara lain: (a) tidak perlu mengerok noda dari pelat dan mengekstraksikembali senyawayang diperiksa, dan (b) dapat mengurangi kesalahanyang mungkin terjadi pada waktu pengerokan noda dan ekstrasikembali. Denplan denrikiancaraanalisis rnenjadilebih praktis lebih reprodusibel. dan 4.4 Kepekaan metode analish Uji batas kepekaan alat spektrofotodensitometeryang dilakukan terhadap larutan senyawa murni yang dikrornatografi menunjukkan bahwa jumlah terkecil yang masih dapat diukur secarakuantitatif pada kondisi pengukuran

56

ITB Vol. 18,No. 2/3,1985 PROCEEDINGS

seperti telah disebutkandi muka adalahsekitar 100 ng untuk amitriptilin dan nortriptilin dan 300 ng untuk imipramin. Kalau dikembalikanke caraekstraksi dan kromatografi, dari metode analisisini dapat dihitung bahwa konsentrasi senyawa amin trisiklik terkecil dalam urin yang msih dapat diukur dcngan rnetodeini adalahsckitar 2 ug/ml urin untuk amitriptilin dan nortriptilin, dan yang lebih peka sekitar 6 ug/nrl urin untuk inlipramill. Untuk kcperLrananalisis lagi, yaitu (a) melagi, beberapahal tersebut di bawah ini dapat disesuaikan ngurangi volume pelarut (metanol) untuk melarulkan kembali residu hasil ekstrasi, (b) memperbanyak jumlah ekstrak yang ditotolkan pada waktu kromatografi (rnisalnya sampai l0 pl), dan atau (c) mengatur kepekaanalat spektrofotode nsitonleter. 45 Reprodusibilitas

Reprodusibilitasmctode analisisini telah dicoba dengan menentukan kadar senyawaamin trisiklik dalam beberapasampel urin dengan konsentrasiyang sama. Konsentrasiyang dicoba udalah 20 pg/ml urin untuk anritriptilin dan nortriptilin, dan 40 gg/ml urin untLrk imiprarnin. tlasil yang diperoleh dapat d i l i h a t p a d at a b e l l . S e p e r t i e r l i h a tp a d at a b e lt e r s e b Lr t p r o d u s i b i l i t a s e t o d c t le m a n a i i s i s n i c u k u p b a i k d c n g a nk o e l i s i u rv a r i a s s e b e s a1 . 2 7 u n t u k i m i p r a m i n i i r dan 2,7'l untLrknortriptilin. Senrenlara koefisienvariasiuntuk arrritnptilin itu relatif lebih besar,yaitu 5,27 . Tabel1 Penemuan penentuan kembali amintrisiklikdanreprod usibjlitas lrecoveryl k a d ad a l a m r i n . r u
penemuan Persen kembali No. lmipramin I 2 3 4 5 7 I Nortriptilin Amitriptilin 70,o7 76,67 74 , 1 9 70,89 75,44 75,O2 82,44

88,64 88.64 88,64 90.91 88.64 88,64 88,64 90.9 r 82,2 1,05
1,20/o

108,6 1 1 13 , 1053 11 3 , 9 't08.6 107,2


I tz,0

107,2 109,4 2,88 2,7%

Rata-rata S .D . Koef. var.

74,7 3,89 5,20A

ITB Vol. 18.No.2/3,1985 PROCEEDINGS

f/

4.6 Kespesifikan metode Denganmetode ini amitriptilin dapat ditentukan kadarnyameskipun tercampur dengansalahsatu metabolit utamanya(nortriptilin) karenaamitriptilin terpisah sempurna pada waktu krontatografi. Selain itu, perfenazin yang rrerupakar.r salahsatu zat psikotropik yang biasadikombinasidenganantidepresan trisiklik, tidak mengganggupenentuan kadar amitriptilin dengan mctode analisisini. Kemungkinanadanyainterferensidari senyawa-senyawa metabolit antideprcsan trisiklik yang lain belum dapat dilakukan. 4.7 Peneropdnmetode senyawa Metode analisisini telah diterapkan dalam penentuankadar beberapa antidepresan amin trisiklik dalam sediaantablet dan dalam sampelurin setelalt pemberiansenyawa-senyawa tersebut (clalambentuk tablet) pada sukarclawan schat. 4.7.1 Penentuankadar tlai sediaantablet Pcncntuan kadar dari scdiaan tablet menunjukkan hasil yang baik (tabel 2). Kadar scnyawa antidepresan amin trisiklik dari masing-masing tablet yang diperiksa ada dalam ratlge yang diperbolehkan.Khusus pada penentuan tablet yang selain mcngandurrgamitriptilin mengandungjuga perfenazin, terlilrat bahwa perfenazin tidak mengganggupcnentuan kadar amitriptilin dengan m e t o d ea n a l i s i sn i . i

Tabel2 Hasilpenentuan kadardari sediaan lablet Amitriprilin (25 ms)* No, 1


Kadal

lmipramin(25 mg) No. Kadar Rata-rata No. 'I

Nortriptilin (10 mg) Kadar Rata-rata

Rata-rata

24,87 24,97 25,26 23BO 24,48 24,48 26,O3 26,03 26.03 24,4'l 24,O8

1 25,OO

26,28 26,46 26.46 26,11 26,46 26,46 26,9'1 27,23 26,91

26,37

8,96 9,10 9,03 9,25


o 1? o tn

9,03

24,48

2654

9,1'6

26,O3
4

2 7p 5
4

9,40 9,40 9,40 10,95 10,82

9,40

24,25

25,94 25,95

25,94

10,89

* Mengandungmg perfenazin. 2

58

PRoCEEDINCSITB VoI. )8, No.2/3,1985

4.7.2 Penentuan kadar dai urin sukerelartan dan urin dikunrpulkan Dalam penelitian ini obat diberikan dalam dosistrrnggal periode 0-8 jam sesudahpembcrianobat. Hasil yang diperoleh dapat selama dilihat pada tabel 3 yang menunjukkan bahwa senyawa antidepresanamin trisiklik yang dicoba termetabolisis secara ekstensif dalam tubuh. Untuk ini amitriptilin dan imipramin, denganmetode analisis senyawautuhnya tidak unluk nortriptihn ntasih bisa terdeteksi terdeteksi lagi dalam urin, sedangkan tetapi dalam jumlah yang relatif kecil, yaitu sekitar 10% dari dosisyang diberikan. Oleh karena itu untuk amitriptilin dan imipramin, penentuandalarnurin p p t ' m a k a i o b a t s e b a i k n y a d i a r a h l < a n a d a p e n e n t u a nm e t a b o l i t n y a .K e d u a ekstensifdi dalam tLrbuh. senyawaini mengalamimetxbolist.ne Karena keterbatasan senyawr pcrnbandingyang tersediadalant penelitian ini. t b e h l n ld i t e n t u k a nr n e a b o l i t n y a . penenluan Tabel Hasil 3 senyawa trisiklik amin utuhdalam yang urinsukarelawan meminum obatdalam dosis tunggal.
Antidepresan Amitriptilin lmipramin Nortriptilin
' T. T- = tidak rerderersi

Oosis 25 mg 25 mg i0 mg

Oitemukan kembali

T .T . T, T. 1.05 mg

fustaka
l.

Excretion Nortriptyline of hydrochloAmundson M. E. & J. A. Manthey, (3),277-280. 1966.J,5 ridein Man1,J.Plnrm..lci.. of Pushkar, K., Quantitative N. Deternrination Amitriptyline in Bloo<1, 1 J . P h a r m,.S c i . , 9 7 8 , 6 7 . ( l ) 6 0 6 2 . G. DeterHoward B. H. & C. S. Susan. L. C Method for Quantitative I Sci.,1974,63. mination of Amitriptyline in Human Plasnra, Pharm. (2\.296-297.

2.

5.

GarlandW. A.. QuantitativsDetermination Amitriptyline and Its of Principal Metabolite, Nortriptyline, G. L. C-Chenrical lonization Mass by (l),77-81. 1977,66, Spectrornetry, Phann. Sci., "/. H. Sokoloff,Sinrultaneous lligh Performance Liquid ChroBurke, D. & rnatographicDeterminationof Chlordiazepoxide and Amitriptylille hydrochloride Two Component in Tablet Formulations, Pharm. Sci.. J. (, 1 9 8 O , 6 92 ) , r 3 8 - 1 4 0

PRoCEEDINGS vot. t8, No.2/3,1985 nB

59

6.

Buttedield, A. C. & R. W. Sears, High Perforrnance Liquid ChromatographicDetermin.rtion Perphenazine AmitriptytineHydrochloride of and in Two Component J. Tablet Fonnulations, Pharm. Sci., 1977,66,(8), lllT ll19. Determination ImiRaymond,F. S. & B. C. Thomas., Simultaneous of prame,Desipramine and their 2-HydroxyMetabolites Plasma Ionin by pair Reversed PhaseHigh Performance Liquid Chromatography with ./. Amperonretric Detection, Pharnt. Sci.,1981,70, (3),257-)61 . Frei, R. W. et al, Liguid Chromatography DansylDerivatives some of of Alkoloids and the Application to thc Analysisof Pharmaceuticals, J. (lhromatogr., 1976, I16,365 377. Reece. A. & Z. Rudi,Quantification Imipramine Desipranrine P. of and in Plasma High Pcrforniance by Liquid Chromatography Fluorescence and Detection, Chromatosr.. J. 1979. 63.310-314. 1

7.

8.

9.