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FONDECYT 2012

CONCURSO NACIONAL DE PROYECTOS REGULAR

COMISIN NACIONAL DE INVESTIGACIN CIENTFICA Y TECNOLGICA

INVESTIGADOR(A) RESPONSABLE: CONSTANZA DANIELLA PINOCHET BAIER

FONDO NACIONAL DE DESARROLLO CIENTIFICO Y TECNOLOGICO (FONDECYT) Bernarda Morn 551, Providencia - casilla 297-V, Santiago 21 Telfono: (56-2) 365 44 44 Fax (56-2) 3654492 e-mail: dir.fcyt@conicyt.cl SANTIAGO CHILE

CONCURSO NACIONAL DE PROYECTOS FONDECYT REGULAR 2008

CONCURSO NACIONAL DE PROYECTOS FONDECYT REGULAR 2008


I. ASPECTOS GENERALES
Tipo Proyecto

Consejo

1.- Ciencia 2.- Tecnologa

Duracin 8 (mximo 4 meses aos)

TITULO:

Determinacin del estado actual de la mastitis subclnica producida por agentes patgenos, en los principales rebaos de produccin lechera pertenecientes a las comunas de Pitrufqun, Loncoche y Temuco en la IX regin.

Escriba 3 palabras claves que identifiquen el proyecto

Mastitis Subclnica
Disciplina Principal

Industria Lechera
Disciplina Secundaria

Localidades de Pitrufqun, Loncoche y Temuco


Sector de Aplicacin Regin de Aplicacin IX

I.1. RESUMEN DE RECURSOS SOLICITADOS (miles $) DESGLOSE PRESUPUESTARIO Personal Viajes Gastos de Operacin Bienes de Capital Total Solicitado (m$) 2008 2009 Montos Anuales (m$) 2010 2011 400.000 60.000 500.000 300.000 1.260.000 Total 400.000 60.000 500.000 300.000 1.260.000

I.2. INVESTIGADOR(A) RESPONSABLE Pinochet


APELLIDO PATERNO

Baier

Constanza Daniella
NOMBRES

16.996.426-2
RUT

APELLIDO MATERNO

Los colonos N 2890 villa Altamira


DIRECCIN PARA ENVIO DE CORRESPONDENCIA (CALLE, N, DEPTO., COMUNA)

Temuco
CIUDAD CASILLA

063048937
TELFONO FAX

Konie_14@hotmail.com
DIRECCIN DE CORREO ELECTRNICO

Universidad de La Frontera
INSTITUCIN

FIRMA INVESTIGADOR(A) RESPONSABLE Uso FONDECYT

I.3. INSTITUCION(ES) PATROCINANTES: Unidad(es) Ejecutora(s)


Institucin (Universidad/Facultad/Departamento) Firma Representantes Legales

1 2 3 4

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I.4.

FINANCIAMIENTO ADICIONAL COMPROMETIDO. Slo considere aportes financieros o de infraestructura de entidades o instituciones interesadas en el proyecto. Si los hay, adjunte carta(s) de compromiso.
INSTITUCION(ES) TOTAL APORTE (m$)
Uso FONDECYT

TOTAL

I.5 COINVESTIGADORES(AS). ATENCIN De acuerdo a lo expresado en las Bases del Concurso Nacional de Proyectos FONDECYT Regular 2008 tenga presente que la firma de un(a) investigador(a) como: COINVESTIGADOR(A) EN DOS PROYECTOS SIMULTANEAMENTE RESPONSABLE EN DOS PROYECTOS SIMULTANEAMENTE

ser causal de la eliminacin inmediata para el presente concurso de los proyectos en que participen. Los (Las) Coinvestigadores(as) que firman a continuacin se comprometen formalmente a participar en este proyecto hasta su trmino, de acuerdo a lo establecido en las Bases Concursales (punto 3.7) Indique frente al asterisco (*) el(la) Coinvestigador(a) que actuara como reemplazante en caso de ausencia temporal del Investigador(a) Responsable. No incluya la participacin de Coinvestigadores(as) no residentes en Chile. El financiamiento respectivo, si es pertinente, puede ser solicitado en la seccin Viajes.
R.U.T APELLIDO PATERNO APELLIDO MATERNO NOMBRE FIRMA

*
Institucin Ejecutora

Institucin Ejecutora

Institucin Ejecutora

Institucin Ejecutora

Institucin Ejecutora

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II.

RESUMEN: Debe indicar claramente los principales puntos que se abordarn: objetivos, metodologa y resultados que se espera obtener. Su extensin no debe exceder el espacio disponible. Considere que una buena redaccin facilita la adecuada comprensin y evaluacin del proyecto. El resumen de los proyectos aprobados, podr ser publicado en la pgina web de CONICYT. . La extensin mxima de esta seccin es de 1 pgina (letra tamao 10, se sugiere Arial o Verdana).

La siguiente investigacin tiene como finalidad conocer el estado actual de la mastitis subclnica producida por agentes patgenos, en los principales centros de produccin lechera bovina pertenecientes a las comunas de Loncoche, Pitrufquen y Temuco en la IX regin. La metodologa se basar en qu a cada animal durante el ordeo se le realizar una prueba de deteccin para mastitis con el kit Mastitest CMT. A la vez, se colectarn muestras (leche) las que se trasladarn refrigeradas hacia el laboratorio; en dnde mediante el mtodo de anlisis bacteriolgico de la leche se confirmar la presencia de agentes patgenos productores de mastitis subclnica de la totalidad de la poblacin de vacas de cada localidad. Para la deteccin de agentes etiolgicos involucrados en la mastitis, las muestras de leche que den positivo para el kit Mastitest se cultivarn de manera asptica en agar sangre durante 48 horas, para as descartar los bovinos que expresen la enfermedad debido a otros factores. Todos los resultados (positivos o negativos) se tabularn para posteriores anlisis estadsticos de la prevalencia e incidencia de la enfermedad en los animales. Estos procedimientos se realizarn cada dos meses a lo largo del semestre (7-8 meses). La ronda inicial se considerar como el control, y en base a sta se determinarn los resultados. Se espera que a travs de los resultados pueda desarrollarse un control actualizado de la mastitis en la regin haciendo monitoreos de las zonas que presentan mayor incidencia de sta; para posteriormente dedicarse a su disminucin y erradicacin con el fin de prevenir prdidas econmicas por parte de los productores y de esta manera potenciar el desarrollo econmico de esta industria en la regin.

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III. III.1

INVESTIGACIN PROPUESTA. FORMULACIN DEL PROYECTO, MARCO TERICO Y DISCUSIN BIBLIOGRFICA: Esta seccin debe contener la exposicin general del problema y su relevancia como objeto de investigacin. Es importante precisar los aspectos nuevos a desarrollar a la luz del estado del arte de la investigacin en el tema de la propuesta, as como el anlisis bibliogrfico que lo avala. La extensin mxima de esta seccin es de 7 pginas ( letra tamao 10, se sugiere Arial o Verdana). En hojas adicionales incluya el listado de referencias bibliogrficas citadas.

III. 1.1

PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA

La mastitis es una de las enfermedades de mayor impacto econmico para la actividad lechera (Kruze, 1988a; Moraga, 1988; Pedraza, 1995; Philpot, 1999). Alrededor del 70% de las prdidas atribuibles a mastitis estn dadas por la disminucin en la produccin de leche (Kruze, 1988; Hoblet et al., 1991; Philpot, 1999); el resto se debe a descarte de leche por anormalidades notorias o residuos de antibiticos, gastos en medicamentos, honorarios de veterinarios, trabajo extra, prdida de valor gentico por eliminacin prematura de vacas, reduccin del valor comercial de las vacas eliminadas e incremento en los costos de reemplazo (Moraga, 1988; Hoblet et al., 1991; Morin et al., 1993; Philpot, 1999). Los principales causantes de esta son los patgenos contagiosos que tienen como principal reservorio la glndula mamaria infectada, por lo que su diseminacin suele ocurrir principalmente durante el proceso de ordea a travs de la mquina de ordea, manos del ordeador, trapos y esponjas de uso comn para preparar la ubre durante la rutina de ordea o a travs de los patgenos ambientales que se encuentran en el entorno de las vacas como el estircol, barro y agua estancada, pomos intramamarios, etc. (Smith y Hogan, 1995; Philpot, 1999). En la actualidad, se desconoce cul es el estado de esta enfermedad en las zonas productoras de leche de la IX regin o cual es el grado de prdida (econmica, ganadera, etc.) que genera, debido a que no se han efectuado estudios que permitan determinar con exactitud la magnitud de su prevalencia e incidencia a nivel regional (Bezama, 1991; Agero, 1995).

III. 1.2

JUSTIFICACIN

La Regin de la Araucana se caracteriza por presentar una gran tradicin en la produccin agrcola y ganadera, uno de sus principales rubros se basa en la produccin nacional de leche, ocupando el segundo lugar en el pas (13,4% durante el ao 2006) 1. Lamentablemente a pesar de la importancia biolgica, social o econmica que esta industria presenta, se desconoce el estado de la mastitis subclnica en las zonas productoras de leche de la IX regin. No se han efectuado de manera sistemtica estudios que permitan determinar con exactitud la magnitud de su prevalencia e incidencia a nivel regional (Bezama, 1991; Agero, 1995).La importancia de la mastitis tanto por razones de salud humana como de salud animal y los costos que este padecimiento representa en la economa del sistema de produccin afectado, justifican la trascendencia del estudio para la pronta y acelerada identificacin de la glndula mamaria que sufre de mastitis subclnica debido a agentes patgenos (Smith y Hogan, 1995). La investigacin permitira conocer el estado actual de la salud mamaria de los principales rebaos de produccin lechera pertenecientes a las comunas de Pitrufqun, Loncoche y Temuco en la IX regin. A la vez, evaluar la frecuencia de mastitis subclnica producida por agentes patgenos en dichas localidades y posteriormente generar nuevas estrategias que permitan disminuir o eliminar los ganados que se vean ms afectados con sta; lo que posiblemente se vera reflejado en un aumento en la produccin y/o en mayores beneficios econmicos. Adems, segn los resultados se podra averiguar si se esta desarrollando resistencia microbiana, lo que explicara por que esta enfermedad no se ha erradicado y sigue expresndose a lo largo del tiempo.

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III. 1.3 Mastitis

MARCO TERICO

La mastitis es la enfermedad ms comn en los bovinos lecheros y la ms costosa para el productor debido a las perdidas econmicas que genera o por los costos que produce su diagnstico y terapia. No existe un solo rebao de ganado lechero en cualquier parte del mundo que est absolutamente libre de este mal. La sintomatologa se basa en una reaccin inflamatoria de la glndula mamaria que normalmente puede ser ocasionada ya sea por factores fsicos (lesiones traumticas), qumicos, mecnicos o infecciosos. En la mayora de los casos de mastitis (80%) la inflamacin se desarrolla debido a la presencia de leucocitos los cuales son creados por el sistema inmune de la vaca y transportados hacia la ubre debido a la presencia de agentes patgenos especficos en el canal del pezn. Puede ser causada por ms de 140 microorganismos, incluyendo bacterias, mycoplasmas, hongos, algas y virus, siendo las bacterias el grupo de mayor importancia (Philpot, 1999). Trabajos relacionados con la determinacin de los microorganismos productores de mastitis bovina, coinciden en que el Streptoccocus agalactiae es el mayor agente productor de la enfermedad, seguido del Staphyloccocus aureus (Alvarez, 1986).

Presentacin de Mastitis Se han descrito muchas formas de presentacin de mastitis, incluyndose entre las principales la mastitis subclnica, clnica, aguda, crnica y gangrenosa, pudiendo variar desde una reaccin leve hasta una toxemia grave con signos sistmicos manifiestos (Blood et al., 1992). Sin embargo, para la mayora de los autores existen dos formas bsicas de presentacin; la mastitis subclnica y clnica (Kruze, 1988a; Philpot, 1999). La primera se caracteriza por no provocar una inflamacin visible de la glndula mamaria, ni cambios macroscpicos en la leche, siendo necesarias para su diagnstico pruebas que permitan detectar los microorganismos involucrados o los cambios ocurridos en la leche producto de la inflamacin (Philpot, 1999). En cambio, la mastitis clnica se caracteriza por anormalidades detectables en un examen clnico, alteraciones en la secrecin lctea y cambios de tipo inflamatorio en la glndula mamaria, incluyendo eventualmente reaccin sistmica (Philpot, 1978; Kruze, 1988a; Blood et al., 1992; Philpot, 1999). La mastitis subclnica pasa fcilmente desapercibida para el productor, lo que la hace causante de la mayora de las prdidas econmicas (alrededor del 70%).

Agentes patgenos causantes de mastitis:

Streptococcus agalactiae: Es clasificado como un patgeno contagioso, ya que su diseminacin ocurre principalmente durante el proceso de ordea. Tiene como principal reservorio la ubre infectada, por lo que se considera un parsito obligado de la glndula mamaria (Harmon, 1996; NMC, 1999; Smith y Hogan, 2000c). Responde bien a tratamientos y medidas de control convencionales, principalmente terapia de secado y dipping postordea, pudiendo erradicarse del rebao (Hogan et al., 1989; Bray y Shearer, 1993; Philpot, 1999). Staphylococcus aureus: Es un patgeno contagioso cuyo principal reservorio es la glndula mamaria infectada, pudiendo encontrarse tambin en lesiones de los pezones y otras partes del cuerpo, como en vagina; sin embargo, no es capaz de colonizar la piel sana (NMC, 1999). Otros reservorios de menor importancia los constituyen el hombre, las moscas, alojamientos, equipos y otros animales no bovinos (Smith y Hogan, 2000c). Las infecciones tienden a ser subclnicas y crnicas, con episodios peridicos de mastitis clnica, pudiendo causar tambin mastitis gangrenosa. Este patgeno se asocia a una disminucin considerable en la produccin de leche y un gran aumento de su contenido celular (Harmon, 1996; NMC, 1999).

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Bacterias gram negativas: Las bacterias gram negativas son consideradas patgenos ambientales, por lo que la exposicin a ellas ocurre principalmente entre ordeas, ya que se encuentran en el entorno de la vaca, como camas, agua y alimentos. Entre stas se encuentran Escherichia coli, Klebsiella spp., Enterobacter spp., Serratia spp., Pseudomonas spp., Proteus spp., Pasteurella spp. y Citrobacter spp.. (Smith y Hogan, 1995; NMC, 1999). Mycoplasma spp.: El patgeno ms comn de este gnero lo constituye Mycoplasma bovis. Es un patgeno contagioso, cuyo principal reservorio es la glndula mamaria infectada, tractos respiratorio y urogenital. Generalmente se transmite durante la ordea, pudiendo adems entrar a la ubre a travs de una terapia intramamaria aplicada en forma inadecuada (Johnson, 1998). La leche

Es la secrecin natural de las glndulas mamarias y constituye un alimento de importancia universal. Se compone principalmente de agua en un 80%, protenas (casena, globulina y albmina), lactosa (glucosa y galactosa), enzimas (fosfatasa, catalasa, xantinoxidasa, reductasa, peroxidasa y lipasa), grasas, vitaminas (vitamina A, vitamina D, vitamina B1 y vitamina B2), minerales (calcio, sodio, potasio, magnesio y hierro) y sales minerales (nitratos, sulfatos, carbonatos y fosfatos). Debido a la riqueza en protena de alto valor biolgico, el aporte energtico y la contribucin de minerales osteotrficos, hacen que la leche forme parte esencial de la dieta del hombre. Por lo general, debido a la gran variedad de fuentes de contaminacin como los mtodos de ordea, heridas, etc.; se suelen encontrar en sta ciertos microorganismos patgenos principalmente del genero staphylococcus. Estos corren el riesgo de provocar enfermedades en animales como la mastitis. La lucha contra los patgenos causantes de enfermedades transmitidas al hombre a travs de los alimentos como la leche requiere de procedimientos adecuados de inspeccin sanitaria, lo que ha llevado al desarrollo de mtodos cada vez ms rpidos y efectivos para la deteccin e identificacin de los animales que la presentan. Metodos de deteccin:

Mastitest CMT*: La empresa Agrovet Market presenta la prueba de Mastitis del Dr. Caldern que es una prueba de campo que detecta la Mastitis Subclnica Bovina a partir de muestras de leche fresca de manera simple, rpida, precisa y econmica. Caractersticas: Permite una rpida deteccin de la Mastitis Subclnica, ya que evidencia los resultados de manera inmediata; la prevencin de muertes y descartes prematuros parciales o totales, debido a que al detectar la enfermedad en fases iniciales permite hacer las correcciones en el manejo sanitario y evitar prdidas de animales y/o econmicas. (W. Zapata, Agrovet Market, 2010) Cultivo agar sangre: La Base de Agar Sangre (tambin es conocido como BAB) es un medio utilizado para el aislamiento y cultivo de una amplia variedad de microorganismos, adicionado de sangre (carnero, conejo o caballo al 5-10%) es til para el cultivo de microorganismos fastidiosos. Se utiliza para detectar patgenos de mastitis. (MCD LAB, S.A. de C.V., 1993)

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III. 1.4

REVISIN BIBLIOGRFICA

1. Agero, H. 1995. Situacin actual de la calidad lctea en Chile y en pases desarrollados. En:
Lanuza, F. ed. Seminario Calidad de Leche Bovina. Osorno, CL. 23-24. Colegio Mdico Veterinario de Chile, Consejo Regional Osorno. 3-32. 2. Alvarez J, Hedalgo, J. 1987. Microbiologa de la leche. Leche y sus derivados. Manual de higiene de los alimentos II. Ediciones Isaac. Habana: 89-166.

3. Azocar Soza, Juaquin Eugenio. (2001), Prevalencia, incidencia y etiologa de mastitis en un centro
de acopio lechero, comuna Mara Pinto, regin metropolitana, Facultad de Ciencias Veterinarias y Pecuarias, Escuela de Ciencias Veterinarias, Universidad de Chile, Santiago-Chile.

4. B. San Martion, Dr. Med. Vet.; J. Kruze, Ph.D. M. Morales, H. Agero (2002), Resistencia bacteriana
en cepas patgenas aisladas de mastitis en vacas lecheras de la V Regin, Regin Metropolitana y X Regin, Chile, Arch. med. vet. v.34 n.2 Valdivia, Chile.

5. Blood, D. C., O. M. Radostis, J. H. Arundel, C. C. Gay. 1992. Medicina Veterinaria: libro de textos de
las enfermedades del ganado vacuno, ovino, porcino, caprino y equino. 7 ed. Mxico DF, MX. Interamericana McGraw-Hill.

6. Harmon, R. J. 1996. Controlando la mastitis causada por patgenos contagiosos. In: Reunin
Regional 1996 Consejo Nacional de Mastitis. Quertaro, MX. National Mastitis Council (NMC). p 11-19.

7. Hoblet, K. H., G. D. Schnitkey, D. Arbaugh, J. S. Hogan, K. L. Smith. 1991. Costs associated with
selected preventive practices and with episodes of clinical mastitis in nine herds with low somatic cell counts. J Am Vet Mec Assoc 199: 190-196.

8. Kruze, J. 1988. Diagnstico bacteriolgico de mastitis. En: IV Curso Mastitis del Bovino y su
Impacto Econmico. p. 169-184. U. Chile, Fac. Cs. Veterinarias y Pecuarias.

9. Kruze, J. 1999. Calidad higinica de leche cruda en Chile. En: Curso de Perfeccionamiento
Mejoramiento de la Calidad Higinica de Leche de Pequeos Productores. p 1-33. U. Chile, Fac. Cs. Veterinarias y Pecuarias; UFOCO S.A. M. Resndiz, E. Villarreal, N. Trejo, V. Garca, Diagnstico de la mastitis subclnica en bovinos lecheros del municipio de Tochtepec, estado de puebla.

10. 11. 12.

Moraga. 1988. Prdidas econmicas atribuibles a mastitis. En: IV Curso Mastitis del Bovino y su Impacto Econmico. p 146-153. U. Chile, Fac. Cs. Veterinarias y Pecuarias. Morin, D. E., G. C. Petersen, H. L. Whitmore, L. L. Hungerfold, R. A. Hinton. 1993. Economic analysis of a mastitis monitoring and control program in four dairy herds. J Am Vet Med Assoc 202: 540-548. O. Betancourt, C. Scarpa y K. Villagrn (2003), Estudio de resistencia de cepas de Staphylococcus aureus aisladas de mastitis subclnica bovina frente a cinco antibiticos en tres sectores de la IX regin de Chile, Revista Cientfica, FCV-LUZ / Vol. XIII, N 5, 413-417, Temuco, Chile.

13.

Pedraza, G., H. Agero, M. Gomez, E. Jahn, F. Lanuza, S. Hazard, A. Vidal, P. Fajardo, R. Leiva. 1994. Relacin entre la concentracin de clulas somticas y produccin diaria de leche, determinada en cinco rebaos de Chile.Agric Tc (Chile). 54:259-267.

14.

Philpot, W. N., S. C. Nickerson. 1992. Mastitis: El contra ataque. Ed. Surge International Babson Brothers Co. USA, p 147-234.

15.

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Philpot, W. N. 1999. Aumento de la rentabilidad mediante el mejoramiento de la calidad de leche y la reduccin de la mastitis. En: Curso de Perfeccionamiento Mejoramiento de la Calidad Higinica de Leche de Pequeos Productores. p 49-84. U. Chile, Fac. Cs. Veterinarias y Pecuarias; UFOCO S.A.

16.

Smith, K. L., J. S. Hogan. 1995. Epidemiology of mastitis. In: Proceedings 3rd IDF International Mastitis Seminar. Tel Aviv, IL. May 28-June 1, 1995. Federation Internationale de Laiterie/International Dairy Federation (FIL/IDF). book II, session 6, p. 3-12.

17.

Estrategia regional de competitividad por rubro Bovinos leche IX regin Julio de 2007 Instituto de desarrollo agropecuario.

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III.2

HIPTESIS DE TRABAJO: Explicite la(s) hiptesis de trabajo o preguntas que orientarn la investigacin. La formulacin de sta(s) debe articularse con la fundamentacin terico-conceptual contenida en el proyecto. La extensin mxima de esta seccin es de pgina (letra tamao 10, se sugiere Arial o Verdana).

- Cul es el estado de la mastitis subclnica en las zonas productoras de leche de la IX regin? - Existen estudios que permitan determinar con exactitud la magnitud de su prevalencia e incidencia a nivel regional? A travs de estas preguntas podemos formular la hiptesis: Los principales centros de produccin lechera bovina de las localidades de Pitrufqun, Loncoche y Temuco de la IX regin no han desarrollado estrategias para conocer el estado actual de la mastitis subclnica producida por agentes patgenos.

III.3 OBJETIVOS: Seale los objetivos generales y especficos. La extensin mxima de esta seccin es de pgina (letra tamao 10, se sugiere Arial o Verdana).

Objetivo general:

- Conocer el estado actual de la mastitis subclnica producida por agentes patgenos, en los principales ganados bovinos de produccin lechera pertenecientes a las comunas de Loncoche, Pitrufquen y Temuco en la IX regin.

Objetivos especficos:

- Realizar pruebas de deteccin para mastitis como el Mastitest CMT en los principales rebaos de las industrias lecheras de las comunas de Loncoche, Pitrufquen y Temuco en la IX regin. - Recolectar muestras de leche en tubos previamente esterilizados de la totalidad de animales bovinos pertenecientes a los centros de produccin lechera de cada localidad. - Detectar agentes etiolgicos involucrados en la mastitis a travs de cultivo en agar sangre. - Determinar y evaluar el estado de la prevalencia de mastitis subclnica a nivel de productores de leche bovinos basado en la informacin que se obtenga durante 7-8 meses aproximadamente. - Realizar los anlisis estadsticos correspondientes en base a los datos que se obtengan.

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III.4

METODOLOGA: Describa los mtodos que planea utilizar para abordar cada uno de los objetivos del proyecto. (Por ej. Describa las tcnicas experimentales, justifique los tamaos muestrales, precise los anlisis estadsticos, etc.). La extensin mxima de esta seccin es de 3 pginas (letra tamao 10, se sugiere Arial o Verdana).

1. Se trabajar en los principales centros de produccin lechera de las localidades de Loncoche, Pitrufqun y Temuco en la IX regin. De cada centro se colectarn muestras de leche y har una prueba de deteccin para mastitis con el kit MastitestCMT de la totalidad de los animales bovinos. 2. A cada animal se le realizar una prueba para determinar la presencia de mastitis subclnica usando el kit MastitestCMT. La ventaja es qu puede realizarse en seguida durante el trabajo de campo. Todos los resultados positivos o negativos sern tabulados para ms adelante compararlos con los resultados que se obtengan del anlisis bacteriolgico de la leche y as descartar a los animales que posean la enfermedad debido a otros factores (fsicos, qumicos, mecnicos, etc). 3. Posterior a la comprobacin de la presencia de mastitis de cada animal, se colectarn las muestras de leche durante el ordeo de la vaca. La coleccin se har en tubos estriles y dentro de las primeras 24 horas; stos se irn guardando en un contenedor tipo cooler a baja temperatura (4-5C), de manera asptica para disminuir el riesgo de contaminacin y de esta forma proveer de un diagnstico vlido y correcto para el tratamiento y pronstico de la mastitis bovina. 4. Los tubos colectados en el cooler se trasladarn al laboratorio de Biologa Molecular del Instituto de Agroindustria de la Universidad de La Frontera; en donde para determinar y confirmar la presencia de agentes patgenos productores de mastitis subclnica se realizar el mtodo de anlisis bacteriolgico de la leche. 5. Para la deteccin de las colonias de agentes patgenos se utilizarn placas de agar sangre al 7% (estriles), stas se sembrarn con 0,2 ml de muestra de leche de cada animal, trabajando bajo campana de flujo laminar, utilizando guantes, mascarillas, gorros y el delantal para evitar contaminar las muestras y de esta forma no obtener falsos positivos en los resultados. Las placas sern incubadas en aerobiosis durante 48 horas. En caso de ser necesario se identificarn las bacterias en base a las caractersticas morfolgicas y hemolticas de las colonias que se observen. Cabe destacar que las pruebas microbiolgicas no son 100% exactas y los resultados dependen de algunas variables. Ya que una muestra de leche podra contaminarse debido a una tcnica inadecuada de recoleccin o puede ser negativa a pesar de los signos clnicos de mastitis. 6. Desarrolladas las colonias, se tabularn sus resultados, se harn sus correspondientes anlisis y se compararn los resultados con los ya obtenidos del kit Mastitest CMT. As podrn descartarse los casos de mastitis producidos por otros factores. Estos procedimientos se repetirn posteriormente en un intervalo de dos meses durante el semestre (7-8 meses). 7. Terminado el procedo de investigacin y recoleccin de datos se har un anlisis estadstico final de los resultados obtenidos a travs de una tabla de correlacin. Los datos que se obtengan de sta sern tabulados en una hoja electrnica de Excel. Luego, para elaborar una estadstica descriptiva se utilizarn las herramientas de anlisis de datos de este programa. Las variables a utilizar sern: origen de las muestras (localidad), la cantidad total de la poblacin en estudio (bovina) en cada centro de produccin lechera de cada localidad y su respectivo porcentaje, la cantidad de casos positivos (presencia de mastitis) y negativos (ausencia o producto de otros factores) y su respectivos porcentajes. A travs de stos se determinar cul fue la prevalencia e incidencia de esta enfermedad a lo largo del semestre en los centros de produccin lechera bovina para posteriormente comenzar a desarrollar nuevas estrategias de control que permitan disminuir o eliminar los ganados que se vean ms afectados. 8. Los resultados que se obtengan se trasladarn al programa estadstico SPSS, para el anlisis de la significancia de las diferencias encontradas en los diferentes tipos de muestras comparadas. Para calcular el tamao de la muestra (en relacin al lugar de obtencin) se tomarn los parmetros de: frecuencia esperada de la enfermedad y el nivel de confianza, utilizando un muestreo no probabilstico, conformado por el total de muestras obtenidas en las diferentes localidades. Cabe destacar que los animales que mueran o sean sacrificados durante el semestre no se considerarn
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al momento de hacer los todos los anlisis.

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III.5

PLAN DE TRABAJO: En relacin a los objetivos planteados, seale las etapas y actividades para cada uno de los aos de ejecucin del proyecto. La extensin mxima de esta seccin es de 1 pgina. (letra tamao 10, se sugiere Arial o Verdana). Si es pertinente, utilice una carta Gantt.

Tiempo 1ra SemanaMes 1.

1ra SemanaMes 3.

1ra SemanaMes 5.

Actividades - Deteccin para mastitis utilizando el kit MastitestCMT. - Recoleccin Muestras de leche. - Realizar anlisis bacteriolgico de la leche. - Realizar anlisis estadsticos - Deteccin de mastitis utilizando el kit MastitestCMT. - Recoleccin Muestras de leche. - Realizar anlisis bacteriolgico de la leche. - Realizar anlisis estadsticos - Deteccin de mastitis utilizando el kit MastitestCMT. - Recoleccin Muestra de leche. - Realizar anlisis bacteriolgico de la leche. - Realizar anlisis estadsticos - Deteccin de mastitis utilizando el kit MastitestCMT. - Recoleccin Muestra de leche. - Realizar anlisis bacteriolgico de la leche. - Realizar anlisis estadsticos Anlisis de resultados finales

Muestras Control centro localidad Loncoche. Control centro localidad Pitrufqun. Control centro localidad Temuco.

1 Ronda centro localidad Loncoche. 1 Ronda centro localidad Pitrufqun. 1 Ronda centro localidad Temuco.

2 Ronda centro localidad Loncoche. 2 Ronda centro localidad Pitrufqun. 2 Ronda centro localidad Temuco.

1ra SemanaMes 7. 2da SemanaMes 7.

3 Ronda centro localidad Loncoche. 3 Ronda centro localidad Pitrufqun. 3 Ronda centro localidad Temuco.

Controles + Rondas 1, 2 y 3 de cada localidad.

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III.6

Difusin del Proyecto a la Sociedad La extensin mxima de esta seccin es de 1 pginas (letra tamao 10, se sugiere Arial o Verdana).

Para difundir este proyecto se realizarn charlas en los centros de produccin lechera bovina de las localidades de Pitrufqun, Loncoche y Temuco pertenecientes a la IX regin, con las que se informar a los principales trabajadores las ventajas y futuros beneficios de realizar anticipadamente esta investigacin, y como esta influir en el desarrollo de su trabajo durante los momentos de produccin. A la vez, se realizarn charlas en otras sedes de la regin como universidades, conferencias cientficas, sedes municipales, etc, para que de esta manera la gente emprendedora tambin pueda informarse de estos procedimientos de monitoreo y as pueda aplicarlos en sus propios ganados, generando nuevos controles de calidad en la produccin lechera y minimizando los riesgos de la prdida de su produccin. Se crear un pagina web en donde podr verse en detalle como se debe realizar la metodologa, cuales son los costos, sus requisitos, los pros y los contras del procedimiento, y los contactos con las empresas que ya lo estn utilizando para servir como gua para aquellas personas que deseen iniciar esta metodologa.

CONCURSO NACIONAL DE PROYECTOS FONDECYT REGULAR 2008

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