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Arquivos Microbiologia Faculdade de Medicina Veterinria Notas do Departamento de Microbiologia e Imunologia

Microbiologia I - Conceito e diviso - Distribuio dos Microorganismos - Natureza e suas relaes com os seres vivos superiores - Mtodos de estudo

Microbiologia: a expresso de origem grega que significa estudo dos seres microscpicos. Estes so designados micrbios, germes ou mais corretamente microorganismos. As expresses micrbio e germe foram inseridos pelos franceses e gera muita discusso nos meios acadmicos. Sustentam alguns que micrbio significa ser de vida curta e no ser pequeno. Aceita-las, ficaria invalidada a definio de Microbiologia, uma vez que microorganismos existem capazes de se manterem vivos por mais de cem anos (formas esporuladas de bactrias e cogumelos). Portanto sempre prefervel dizer microorganismo. Divide-se a Microbiologia em vrios ramos de estudos: A Bacteriologia que estuda as bactrias A Micologia que estuda os fungos e cogumelos Virologia que estuda os Vrus Entre as primeiras e os vrus, situa-se um grupo de alto interesse mdico, representado pelas riquetsias e com a evoluo constante da cincia deveremos ter tambm uma requitisiologia. A Microbiologia ainda cuida de reaes especiais que se passam nos hospedeiros parasitados por microorganismos e que constituem talvez o seu mais empolgante ramo a IMUNOLOGIA que estuda os antgenos, anticorpos e a imunidade. difcil estabelecer uma diferena rgida que limite os citados grupos de microrganismos. Sensu latu, agrupam-se como bactrias, os vegetais talfitos, desprovidos de clorofila, de vida auto ou heterotrficos, que se reproduzem normalmente, por diviso simples (cissiparidade) ou por esporulao. Os cogumelos so tambm talfitos no clorofilados, auto ou heterotrficos, cuja reproduo envolve sempre a esporulao, reconhecendo-lhes ainda a propriedade de reproduo sexuada.

Os vrus so conceituados como agentes de infeco, mais conhecidos pelo que produzem que pela sua natureza, e se caracterizam pelo alto grau de parasitismo que os obriga a viver no interior da clula vivas. As riquetsias assemelham-se as bactrias na sua morfologia e inclinam-se para os vrus na sua biologia, pois necessitam de clulas vivas tambm, para a sua perpetuao. Em face da imensidade do mundo microbiolgico e participao dos microrganismos nos mais variados campos da atividade biolgica a Microbiologia dia a dia acrescida de mais setores de estudo. Assim, podemos falar em: Microbiologia Mdica Agrcola Alimentcia Veterinria Industrial Hidrogrfica Microbiologia espacial Cada um destes setores complexo exaustivo e altamente especializado. Este o motivo pelo qual aqui estudamos apenas Microbiologia Mdica. A biologia dos microorganismos em relao ao meio inclui os mais variados tipos de atividades que vo desde o saprofitismo ao parasitismo estrito, passando pelo comensalismo e pela simbiose. natural conceber que na evoluo da Terra, as primeiras formas de microscpicas fossem puramente autotrficas isto , capazes de sintetizar sua prpria estrutura a partir de substncias simples; mas a partir que foram surgindo os seres mais organizados, vegetais e animais, algumas daquelas formas foram se adaptando a novos tipos e vida porque podiam ento usufruir de matria orgnica, substrato mais fcil e mais propcio a sua manuteno. Da atingir o estgio de vida parasita parece lgico ter sido fcil. E, como todo o parasitismo, pela prpria conceituao, acarreta distrbios na economia do hospedeiro, surgiram s molstias infecciosas que nada mais so que o resultado da atividade metablica do microorganismo na intimidade dos tecidos dos seres organizados.

Mtodos de Estudo Em sntese, os microorganismos so estudados atravs de tcnicas que visam demonstrar num primeiro passo sua morfologia e suas relaes com corantes que permitem melhor visualiz-los. Em seguida procura-se adapt-los a ambiente artificial, empregando-se os meios de cultura, nos quais se consegue mant-los em estado de pureza ( cultura pura ). Passa-se a estudar suas propriedades bioqumicas isto , sua atividade sobre os mais diferentes substratos tais como hidratos de carbono, protenas, lipdios, alm de sua atividade respiratria e o modo pelo qual se reproduzem. Se originrios de processos

infectuosos, estuda-se sua patogenicidade ( capacidade de produzir molstias ) em animais de laboratrio e, finalmente, neste procura-se estudar as leses produzidas bem co as reaes ditas defensivas. O desenvolvimento dessas etapas exige pacincia, perseverana e tcnica, que so afinal, os atributos do microbiologista.

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Microbiologia I Morfologia dos Microorganismos O estudo da clula microbiana, por si s representativa do complexo vida dos microorganismos, despertou o interesse dos pesquisadores desde os primeiros passos dados no vasto campo dos seres microscpios. Todavia, a natural dificuldade em lidar com esses seres, atrasou de muito a definio de sua estrutura, daquela maneira precisa com que j haviam sido definidas as estruturas das clulas componentes dos seres organizados. Deve-se ao grande desenvolvimento aos aparelhos de microscopia, ao microscpio eletrnico e bioqumica, e ao inicio do estudo das nanoestruturas, o impulso gigantesco dos estudos nestas ltimas cinco dcadas. Entre os microorganismos, as bactrias prestam-se melhor a indagaes desta natureza porque seus caracteres morfolgicos, culturais e bioqumicos so menos variveis que os dos fungos e cogumelos. As riquetsias e os vrus, pela sua particular biologia no serviriam com base. Essa a razo de estudarmos morfologia celular apoiando-nos nas clulas das bactrias. A clula bacteriana uma entidade morfolgica constituda por substncias protoplasmticas ( citoplasma ) envolvidas por uma membrana de natureza protoplasmtica ( parede celular ). O citoplasma limitado por uma delgada membrana ( membrana citoplasmtica ) e contem formaes estruturais mais ou menos diferenciadas, tais como vacolos, incluses ou granulaes, mitocndrias e um sistema nuclear. Algumas bactrias albergam ainda, formaes especiais denominadas esporos. Na sua superfcie externa da clula podemos encontrar uma camada mucosa pouvo espessa ( capa mucosa ) ou muito espessa cpsula e ainda formaes filamentosas chamada flagelos. A seguir analisaremos cada uma dessas estruturas. Parede Celular A microscopia eletrnica mostra parede celular formada pela justaposio de pequenas partculas entre as quais h um espao virtual.

Em sua composio encontram-se protenas, hidratos de carbono, lipdeos, e substncias nitrogenadas. Sua funo manter a forma do microorganismos, controlar trocas metablicas e intervir na reproduo celular pois da parede que partem os tabiques transversais que vo dividir a clula.

Membrana Citoplasmtica uma condensao do citoplasma. Atua como filtro, a semelhana de uma membrana osmtica. Sua composio a mesma do citoplasma com predominncia de lipdeos que parece serem ali sintetizados. nesta estrutura que se observa a implantao dos flagelos. Citoplasma uma estrutura coloidal, de composio qumica extremamente varivel onde encontramos protenas, polissacardeos, lipdeos, cido ribonuclico (importante), substncias derivadas do meio de cultura ainda no metabolizadas e enzimas. Sua funo manter o estado fsico-qumico da clula propcio a integridade de seus constituintes, ao equilbrio dos processos metablicos e ao processo das outras estruturas celulares. Vacolos e Incluses H autores que no estabelecem diferena entre estas estruturas encontradas no citoplasma. Outros h, porm, que consideram como vacolos, condensaes de material em soluo, reservando o conceito de incluso a partculas formadas por substncias puras. Os vacolos so reservas nutritivas, um suco, uma seiva celular. So mais freqentes nas bactrias em fase intensa de reproduo, desaparecendo nas bactrias em repouso vital. So limitados por uma membrana semelhante membrana citoplasmtica denominada tonoplasto. Sua composio qumica inclui protenas e lipdeos. Quanto sua funo, em que pesem as mais opostas opinies, parece que lhes cabe, alm de reserva, um papel fisiolgico regulador ( Knaysi, 1951) verificou que quando a

Escherichia Coli

cultivada

em caldo glicosado, seus vacolos so pequenos e pouco numerosos. O mesmo caldo adicionado de sulfato de magnsio 0,2 a 0,5M mostra a bactria referida, com vacolos maiores e em maior nmero. Parece, no caso, que os vacolos, para conservar o equilbrio fsico-qumico da clula, recolherem o sulfato, aumentando sua prpria concentrao em

benefcio da estabilidade citoplasmtica. Seu aumento de volume decorreia de maior quantidade de gua requerida para dissolver o sulfato. As incluses citoplasmticas que ocorrem nas bactrias so de natureza orgnica ou inorgnica. Dentre as orgnicas encontramos: Hidratos de Carbono Lipdeos Uma substncia nitrogenada chamada volutina (por ter sido observada no Spirillum

volutans).
Dentre as substncia inorgnicas encontramos: Enxofre Carbonato de Clcio Aparecem geralmente nas bactrias maduras e no nas jovens ou em fase ativa de reproduo. So em geral insolveis ou pouco solveis, e podem ser utilizados pela clula quando o meio se enfraquece. Da aceitar as incluses como reserva nutritiva. Algumas incluses foram descritas particularmente em determinadas bactrias receberam

denominaes especiais como: Grnulos metacromticos de Babes Ernest = bacilo da difteria Grnulos de Much = bacilo da tuberculose Grnulos de volutina = Spirillum

volutans Corynebacterium,

Algumas bactrias, tais como as pertencentes aos gneros

Mycobacterium e os espirilos contem abundantes incluses granulares.


Mitocondrias Constituem pea importante da estrutura bacteriana porque lhes cabe o papel de condensadores ou baterias fisiolgicas. Alm de fornecerem energia para sntese ainda funcionam como coordenadores da funo enzimtica. A microscopia eletrnica mostra as mitocndrias como a justaposio de placas que lembra mesmo uma bateria ou uma pilha. A anlise qumica revela a presena de um sistema enzimtico xidoredutor, fosfolpides e alguns metafosfatos. Ncleo

Muito se discutiu a respeito da existncia ou no do ncleo nas bactrias, porque os mtodos de colorao usuais no o revelam. Os empregos de reaes reveladoras do DNA e tcnicas mais especializadas comprovam sua existncia: Colorao de GIEMSA aps hidrlise cida Tratamento da clula com ribonuclease para retirar o RNA, prprio do citoplasma Reao de Foulgen Observao no microscpio eletrnico Algumas bactrias mostram ncleo bem individualizado, outras o exibem em forma dispersa, granular (ncleo cromidal, isto cromidal). Ao que tudo indica a tcnica empregada influi muito no resultado da observao.

Esporos So estruturas caractersticas de determinados grupos bacterianos ( gnero

Bacillus e

Clostridium ). Podem estar localizados no centro do corpo bacteriano ou em posio


subterminal. So formas de resistncia que se desenvolvem sempre que a bactria enfrenta um ambiente hostil. Contudo, pode haver esporulao mesmo nas condies ambientais mais propcias, fato que tem desafiado os pesquisadores na elucidao da verdadeira natureza do esporo. Podem permanecer viveis por longos anos. Sua composio qumica semelhante das bactrias, mostrando, entretanto maior concentrao de lipdeos e pequena quantidade de gua. Podem ser considerados mesmos como uma condensao da bactria embora as maiorias dos autores admitam que, alm disso, os esporos sejam formas de reproduo bacteriana. Cpsula e camada mucosa revestimento celular. Quando delgado chamado de Camada Mucosa e quando espesso denominado Cpsula. Esta particularmente desenvolvida nas formas virulentas de algumas bactrias, tais como: Bacilo do Carbnculo Hemtico Os pneumococos As Klebsiellas uma substncia mucide, semelhante a gelatina, rica em hidratos de carbono contendo tambm polipeptdios, formando uma cadeia de elevado peso molecular o que lhe confere alto grau de elasticidade. Sua funo proteo. As bactrias capsuladas so dificilmente fagocitadas. Possui a cpsula extraordinria importncia em alguns mtodos especiais de classificao de bactrias ( diferenciao entre pneumococos). Flagelos So formaes filamentosas que tem origem na membrana citoplasmtica em grnulos basais semelhantes ao blefaroplasto dos protozorios. H bactrias que no os possuem (bactrias atrqueas). As que os possuem

podem apresent-los em nmero e distribuio variveis, recebendo denominao, a saber: Monotrquias: um s flagelo localizado em um dos plos Lofotrquias: tufos de flagelos localizados em um dos plos Anfitrquias: um ou mais flagelos localizados nos dois plos Peritrquias: flagelos distribudos por toda a superfcie O movimento dos flagelos helicoidais e a custa de estmulos contrteis do corpo bacteriano. A composio qumica essencialmente protica. O movimento das bactrias facilmente apreciado em clulas jovens ( seis a oito horas) atravs de preparaes a fresco, em gota pendente. A visualizao dos flagelos requer mtodos delicados e colorao, destacando-se a impregnao argntrica.

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Microbiologia I Microscopia

Quando examinadas ao microscpio, as bactrias se apresentam segundo trs formas fundamentais: Cocos Bacilos Espirilos Tipos de Coco A.1 cocos

Pneumococos A.2 diplococos Neissrias

A.3 Ttrades A.4 Estafilococos A.5 Estreptococos

B. Tipos de |Bacilos

B1. Bacilo B2. Bacterium

(Bastonete)

C. Tipos de Espirilos

C1. Espirilo

C2. Vibrio

Certas bactrias costumam apresentar-se sob formas variveis, como: Clavas Peras Formas Filamentosas

Quando se trata de fenmeno natural chama-se a isso de Pleomorfismo ou Formas Pleomrficas. Mesmo aspecto se pode obter em culturas envelhecidas ou em meios de cultura no adequadamente preparados. Neste caso, porm trata-se de formas de involuo.

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Microbiologia I Fisiologia Bacteriana

I.

Respirao..Bacteriana sabido que todo ser vivo nutre-se com substancias vrias, quer de natureza animal.ou.mineral. Suponhamos um vertebrado alimentando-se com certo hidrato, no caso a glicose. Esta, chegando ao tubo digestivo, ser assimilada, ganhando a corrente circulatria e por intermdio desse veculo depositada na intimidade do tecido. Ao mesmo tempo em que a glicose adentrou ao tubo digestivo,.ele,.o.vertebrado,.respira. O oxignio, ao nvel dos alvolos pulmonares, capturado pelas hemcias, no. fenmeno .da .hematose, .formando. oxihemoglobina. Esta estrutura qumica assim formada carregada, da mesma maneira que a glicose, at a intimidade dos tecidos. Do confronto oxignio liberado das hemcias e glicose, ocorre uma reao de oxidao, com liberao de 686.000 C, segundo a reao:

2. essa energia cintica que favorece ao vertebrado suas manifestaes 60 C6H12O6 2 6O2 + gerado na reao biolgicas. O dixido de carbono6H2 + 686.000C adentra as hemceas formando a carbo-hemoglobina, sendo eliminado ao nvel dos alvolos, pelo trato respiratrio, para o exterior. No inicio da fisiologia os pesquisadores admitiam que respirao nada mais fosse que uma perceptvel inalao e exalao do ar, isto porque o oxignio era consumido numa reao de oxidao ocorrendo liberao de energia e dixido de carbono. Graas aos magistrais trabalhos de PASTEUR sobre anaerobiose e fermentao, ficou demonstrado que energia pode ser gerada sem o concurso do oxignio, sendo este tipo de reao denominado

FERMENTAO. Em termos relativos aplicamos o nome respirao aerbia a toda a reao que toma o concurso do oxignio e cujos os produtos de degradao dos hidratos de carbono sejam CO2 e H2O reservando a palavra Fermentao para uma reao que ocorre em meio anaerbio, sendo o produto final de degradao dos hidratos de carbono diferente de CO2 e H2O. H2O2 + O2 H2O + O2 Durante muito tempo, a respirao dos germes anaerbicos desafiou os pesquisadores. Hoje, admite-se que o referido fenmeno ocorra da mesma maneira que nos germes aerbicos at a flavina nucleotdeo reduzido (F+H+H), isto porque a bactria anaerbia no dispe do citocromo e do citocromo oxidase. Neste caso, ao que parece a flavina nucletido, reduzida (F+H+H) que lana o hidrognio para o exterior. Este deve entrar em reao com um substrato do meio, quando o ambiente for estritamente anaerbio, o hidrognio fixado pelo cido pirvico, resultando da reao a formao de cido ltico. Por outro lado, quando existirem traos de oxignio no meio o hidrognio em combinao com este ltimo,gera gua ou agia oxigenada. Como vimos, a gua oxigenada txica a estrutura bacteriana. Ocorre, todavia, que a bactria anaerbia no dispe de enzimas degradantes da gua oxigenada, ou seja, a catalase. Em tais condies, ou a bactria cessa o seu desenvolvimento ou esporula. ESQUEMA DO TEXTO 1) Respirao aerbia CO.I 1 fase Alimento H F+N H 2 fase: H2 + O2 H2 + O2 Citocromo CO .I A R + S R.S H F+H

Citoc H Citocromo oxidase H2O H2O2

Meio externo H

esporula

3 fase:

meio exterior H2 + cido pirvico

cido lctico

Vemos portanto, que o hidrognio de tombos em tombos, passou do interior para o exterior da clula, isto , para o meio ambiente. A cada queda do hidrognio ocorre uma liberao de energia, que utilizada na gnese de outros catalisadores intracelulares, como Adenosina Trifosfato e Adenosina Difosfato.

FERMENTAO A energia necessria para a sntese das nucleoprotenas e do protoplasma bacteriano, derivada da transformao glicoltica dos vrios acares, de acordo com o clssico esquema de Embdeu Myerhof. , com efeito, essencial que a base bioqumica da vida exista mesmo nas inferiores formas de microorganismos. Os bioqumicos tm demonstrado que o complexo ciclo do cido tricarboxlico de Krebs, pelo qual as clulas dos vertebrados metabolizam o cido pirvico em dixido de carbono e gua, por uma srie de reaes enzimticas, verifica-se tambm nos microorganismos bacterianos. A energia fornecida por essas reaes enzimticas no utilizada como calor, mas sim convertida em Adenosina Trifosfato ( ATP). Estes constituem acumuladores biolgicos semelhantes aos encontrados nas clulas dos vertebrados. Quando a bactria necessita de energia para sintetizar a nucleoprotena, a protena citoplasmtica ou energia para diviso celular, estes acumuladores (ATP) funcionam e desprendem a energia precisa para estes objetivos biolgicos. A energia liberada por reaes oxidativas biolgicas conservada e transferida por um sistema de enzimas que tem como co-enzimas o difosfato de adenosina e o trifosfato de adenosina. Os dois compostos caracterizam-se por serem ricos em energia nos seus enlaces de fosfatos. Na fase inicial do metabolismo da glicose, o acar convertido, atravs da hexoquinase, em glicose 6=fosfato ( tambm chamado de ster de Robinson), por combinao com ATP, tendo ainda como catalizador o magnsio. Nesta reao quando o ATP cede seu fosfato glicose, a desintegrao do enlace rico em energia produzindo esta para vrios fins da clula. O ATP pobre em energia transformado em ADP e, mais tarde, regenerado em ATP. A glicose 6-fosfato formada, sob a ao da hexose isomerase, enzima que age sobre o substrato dando um seu ismero, d a frutose 6-fosfato ( ou ster de Neuberg ). O ster de Neuberg, pela ao de uma fosfo hexoquinase e tendo como co-enzima o ATP, leva o fosfato da co-enzima a integrar a molcula de frutose-6-fosfato, gerando frutose 1,6-difosfato ( ou ster de Harden-Young), ADP ou energia que utilizada pela clula. A frutose 1,6-fosfato logo decomposta por uma aldolase, formando duas molecular de triose, que so convertidas em sua maior parte em glcer aldedofosfato ( ster de Fischer ). Este ltimo composto formado, sob a ao da glcero aldedo-3-fosfato desidrogenase, cido fosfrico e CO.I, oxidado e transformado em cido 1,3difosfoglicrico ( ster de Wanburg Nagelin ) e formando CO.I H. O ster de Wanburg Nagelin, sob a ao da quinasa difosfoglicrica mais ADP, transformado em cido glicrico-3-fosfrico, ( ster de Wilsson) mais ATP e energia recperada. O ster de Wilsson, catalizado agora pela fosfoglicero frutasa e cido glicrico 2,3 difosfrico, forma cido glicrico 2-fosfato que, pela ao de uma enolasa mais

magnsio, provoca a sada de gua com formao de cido enol pirvico 2-fosfrico. Este, sob a ao de uma fosfoquinase pirvica e ADP d como resultado de reao o ATP mais cido pirvico que pela ao de uma lacticodesidrogenase e CO. I gera cido lctico. Desse modo, comprovamos que a energia produzida pela respirao incorporada nos enlaces de fosfatos do sistema ADP-ATP. O ATP cede sua energia para a clula por sua participao em reaes endotrmicas. Destas, sai pobre em energia, sendo posteriormente recuperado por paticipaes em vrias reaes respiratrias. O sistema ADP-ATP , portanto, o agente mediador para a energia entre respirao e sntese. ESQUEMA DO TEXTO
Glicose +
HEXOQUINASE
Mg ++ ATP

Glicose-6-Fosfato ( Ester de Robinson) + ADP

ATATP
hexosaisomerase

Glicose-6-Fosfato ( Ester de Robinson) +


hexosaisomerase

+ Frutose 6-fosfato ( Ester de Neuber)

Mg ++

ATP

Mg ++

ATP

Mg ++

ATP

ATATP

ATATP ATATP Fosfohexoquinase


ATP

Frutose,6-fosfato+

Frutose 1,6-Difosfato + ADP + ENERGIA

aldolase

Frutose 1,6-Difosfato +
Gliceraldeido 6-fosfato desidrogenase cido fosfrico + CO I+

+ 2 molculas de Triose + ..................+Gliceroaldeido 3 fosfato + ..............................+ cido-1,3 fosfoglicerdeco + CO.IH

cido Glicrico-3-Fosfrico +

Fosfoglicrico mutase 2,3-difosfrico

cido Glicrico 2-fosfato +

enolase Mg
++

cido enol pirvico -2-Fosfrico

lacticodeidrogenas e CO.I

+ cido Ltico.

cido ltico e o cido pirvico, gerados como produtos da fermentao, so agora, transformados em gs carbnico, hidrognio, substncias cidas e alclicas.

Existem , microorganismos, nos quais o pH final do meio extremametne cido ecujo coeficiente respiratrio igual a um. Representaremos este tipo de MICRORGANISMO A. Outros, por sua vez, apresentam um pH bsico ou prximo a basicidade; nestes, a quantidade de CO2 formada superior a quantidade de hidrognio gerado na reao: representaremos este tipo por MICRORGANISMO B. ESQUEMA DO MICRORGANISMO A Reao I
Descarboxilase

cido Pirvico

Aldedo Actico + condeno + Acetil Metil Carbonil + 2,3 Butileno Glicol + Composto insolvel + Diacetila

Reao II
cido Ltico lacticodeidrogenase CO.I CIDO PIRVICO descarboxilase ALDEDO ACTICO + HIDRATO DE ALDEDO COMPOSTO INSTVEL

LCOOL ETLICO + CIDO ACTICO

Furtamo-nos de exemplificar nomes de bactrias que tenham este ou aquele tipo de respirao porque, em aulas prticas, os senhores alunos entraro em contato mais direto com dezenas delas. Cumpre, porm, aqui esclarecer que a respirao micro aerfila atribuda a Brucella abortus era particularmente favorecida pela presena de 10% de gs carbnico, enquanto esta mesma quantidade inibia o crescimento de Brucella suis e Brucella melitensis. Baseados nisto certos autores classificaram a Brucella abortus como microaerfila, porque a quantidade de 10% de gs carbnico produz um baixo teor de oxignio do meio. Essa exigncia especial de algumas amostras de brucellas parece diferente, quantitativa e qualitativamente, da exigncia normal do gs carbnico de alguns germes, em que o dixido de carbono pode ser substitudo por cidos dicarboxlicos. Este fato e outros levaram MARR & WIRSON a hiptese de que as reaes bioqumicas relacionadas com a exigncia de gs carbnico por parte da Brucella abortus fosse mais de natureza sinttica do que reaes de desassimilao. Para comprovar essa hiptese, utilizaram um gs carbnico com istopo radioativo de carbono ( C14O2). Investigaram a fixao desse carbono marcado nos diversos componentes da Brucella abortus e puderam verificar sua maior concentrao nas pirimidina, sendo insignificante sua fixao nas purinas. Sendo tais bases pirimidmicas fundamentais sntese dos cidos nuclicos, parece lgico concluir que a bactria utiliza o carbono do gs carbnico para a funo fundamental de sntese. II Nutrio Bacteriana

O princpio fundamental da natureza a sobrevivncia. Para que o microorganismo possa desenvolver-se e propagar sua ao, ele necessita de energia. Esta energia conseguida pela degradao bacteriana dos elementos do meio em que se encontra. Antes que o microorganismo possa absorver os materiais biolgicos para construo de seu citoplasma e sua ncleo protena, deve em primeiro lugar decompor as complexas substncias em seus elementos. Isto conseguido pelos vrios sistemas enzimticos. Estas enzimas passam atravs da membrana citoplasmtica e terminam a digesto fora da clula. So portanto exo enzimas hidrolizantes, porque agem sobre o substrato, hidrolizando-o. Entre os vrios sistemas enzimticos, temos: 1. 2. 3. 4. Carboidrases Proteinases Peptidases Estearases

1) Carboidrases agem sobre os carboidratos a) b) c) d) e) Alfa-amilase + amido = dextrina + alfa-maltose Beta-amilase + amido = alfa-maltose Celulase + celulose = Beto celobiose Inulase + inulina = di-frutose Maltase + alfa-maltose = alfa-d-glicose

2) Proteinases agem sobre as protenas verdadeiras a) Pepsina + protenas naturais = proteoses + peptonas b) Renina + casena = paracasena c) Papana + protenas naturais = polipeptdios + aminocidos 3) Peptidases agem sobre polipeptdios e dipeptdeos a) Aminopolipeptdase + leucilalanilglicina = leucina + alanilglicina b) Dipeptidase + alanilglicina = alanina + glicina 4) Estearases agem sobre lipdeos a) Colinesterases + acetilcolina = colina + cido actico b) Lecitinase + lecitina = lisolecitina + cido olico c) Lecitinase B + lisolecitina = ster glicero-fosfrico + cido esterico Agora essas substncias formadas na hidrlise enzimtica passam para o interior da clula bacteriana por processo de difuso para que os catalisadores intracelulares possam agir sobre elas, aceitando-as como alimento. Toda a energia liberada nos processos de hidrlise nenhum valor biolgico energticos traz bactria, pois essa liberao ocorreu no meio externo.

Embora existam muitos microrganismos no quais os requerimentos nutricionais so aproximadamente iguais, outros h em que essas exigncias variam grandemente. Assim necessitam: tecidos animais e vegetais ou complexos orgnicos e derivados desses; fatores complexos encontrados o sangue (fatores X e V); vitaminas fundamentais, como tiamina (B1), riboflavina (B2), vitamina fundamental na formao da flavina nucleotdeo, que faz parte integrante do processo respiratrio, piridoxina (B6), que integra os sistemas enzimticos, atuando no transporte do grupo amino de um aminocido como coenzima. Sua concentrao no tecido animal pequena, sendo abundante nas bactrias, principalmente nas sintetizantes do rmen dos bovinos; cianocobalamina (B12), tambm chamada de fator de crescimento do Lactobacillus lactis, pois essa bactria exige para o seu crescimento, isto , para seu desenvolvimento; cido nicotnico (fator PP), que faz parte integrante da CO. I; carbono na forma molecular, isto , na forma orgnica. A este tipo de metabolismo damos o nome de Metabolismo Heterotrfico (Hetero = outro; trfico= alimentado por) Por outro lado, as plantas, bactrias sintetizantes e certos fungos, tm a capacidade de, utilizando somente dixido de carbono e gua e sais minerais, construrem seus patrimnios nutricionais; esta forma de metabolismo rotulada com o nome de Metabolismo Autotrfico ( Auto= um; trfico= nutrido por). Todavia, com isso no queremos dizer que o ser heterotrfico dispense o dixido de carbono para o seu desenvolvimento, pois o mesmo exigido em determinadas condies para integrar as molculas dos cidos desoxirribonuclicos e ribonuclicos (ADN e ARN ).

Requerimentos Nutricionais Encontramos microrganismos que necessitam para seu desenvolvimento, meios de cultura muito simples como o caldo simples. Outros, alm dessem exigem estruturas qumicas selecionadas a saber, 1. Mono aminocidos a) Alanina b) Leucina c) Cistina d) Triptofano e) Valina f) Isoleucina g) Cistena h) Histidina

2. Monoamino dicidos a) cido asprtico b) cido glutmico

3. Bases pirimdicas: as bases pirimdicas (timina e citosina) e as bases pricas ( adenina e guanina), integram as molculas dos cidos desoxirribonuclico e ribonuclico. a) Pirimidina b) Timina c) Citosina d) Uracila 4. Bases pricas a) Adenina b) Guanina c) Xantina 5. Um tripeptdeo de mxima importncia na respirao celular, que o GLUTATION Um dos problemas de maior importncia em nutrio bacteriana a contaminao qumica do meio de cultura. Foi verificado inicialmente que quando a Brucella abortus era semeada em caldo triptose, esta no respondia satisfatoriamente em crescimento para a riqueza do meio. A explicao para esse fenmeno foi fornecida em trabalhos sucessivos de SCHUHARDT & COL., do Laboratrio de Pesquisa de Brucella da Fundao Clayton, no Texas, EUA. O autor evidenciou inicialmente que certos lotes de triptose apresentavam-se inibidores para Brucella abortus e com atividade varivel para as outras espcies ( Brucellas suis e Brucella melintenses). A principio, foi sugerida a possibilidade de serem certos aminocidos oxidados presentes nas peptonas, os responsveis por essa inibio. Testaram a toxidade de certos cidos aminados para as espcies de brucellas acima referidas, verificando que a cistina era altamente txica para Brucella abortus. Em trabalhos posteriores, SCHUHARDT & COL. Verificaram que o aparecimento da toxicidade dependia da formao de enxofre elementar que durante a autoclavao era liberado da molcula de cistina devido ao aquecimento. Isto no ocorria quando o caldo triptose era submetido esterilizao pela filtrao.

Fatores X e V
Certas bactrias exigem para o seu isolamento e repique posteriores, dois fatores encontrados no sangue; Fator X, hoje identificado como uma catalase, sendo termoestvel, pois resiste a uma breve autoclavao Fator V, que a CO. I seno termo lbil.

O Staphylococcus aureus, Lactobacillus arabinosus e certas raas de Salmonelllas, podem sintetizar parte da CO.I, necessitando, porm de uma amina nicotnica ( Fator PP), para completar a referida substncia. O gnero Haemophylus carece da sntese da CO.I, pois mesmo sendo cedida a amina nicotnica, no completa a referida estrutura.

Semeando-se bactrias hemfilas em placa de Agar sangue, previamente aquecida, portanto com destruio do fator V, esses microrganismos no conseguem reproduzir-se. Se houver uma contaminao do meio por estafilococos, verifica-se que ao redor destes ltimos aparecem colnias menores, crescendo progressivamente com o tempo e sendo identificadas como colnias de hemfilos. Esse fenmeno explicado da seguinte maneira: o estafilococo, ao se multiplicar-se na placa de Agar sangue, sintetiza a C.O Fator V, que por difuso passa para o meio sendo aproveitado pelo hemfilo. A esse fenmeno damos o nome de satelitismo, isto , formao de satlites. Colocando-se agora em um dos extremos de uma linha metablica um ser auttrofo, no outro figurar o hetertrofo. De permeio a essas duas estruturas, encontramos enormes variaes de vidas, escalonadas segundo seu grau de metabolismo, passando por plantas, bactrias sintetizantes, fungos, bactrias patognicas e culminando com o parasita intracelular obrigatrio que para o seu desenvolvimento exige clulas vivas ou em multiplicao. Entre estas ltimas entidades esto as riqutsias e os vrus.