Preparacin de rplicas para Microscopia Electrnica de Barrido (SEM)

Inga Caqui, Marvyn William

UNIVERSIDAD NACIONAL DE INGENIERA Facultad de Ciencias, Laboratorio de Microscopia

E-mail: marvyn_16@hotmail.com

Resumen
En el presente informe, describimos el mtodo de rplicas de muestras que ya sea por su gran tamao o por alguna otra dificultad son difciles de colocarlos en la cmara porta-muestras del SEM. La preparacin comprende de hacer una copia muy detallada de la superficie de la muestra de inters usando una cinta de celulosa con un poco de acetona, posteriormente esta capa se recubre en oro, y se le lleva al SEM. PALABRAS CLAVES: Rplicas con celulosa, SEM, Sputtering.

Abstract
In this report, we describe the method of replicas of samples either by its size or some other difficulties are difficult to place them in the specimen chamber of the SEM. The preparation comprises making a very detailed copy of the surface of the sample of interest using a cellulose ribbon with a little acetone, and then this layer is coated with gold, and is taken to the SEM. KEY WORDS: Cellulose replicas, SEM, Sputtering.

I. Introduccin
La preparacin de muestras por el mtodo de rplicas es, en general, sencilla y til, esta nos permite hacer varios estudios a una sola muestra, que ya sea por su gran tamao, por su dificultad de desplazar o simplemente porque no deseamos daarlo durante el proceso de estudio no podemos hacerle el estudio de su superficie directamente, vindonos obligados a desarrollar tcnicas que nos permitan hacer copias muy fieles de tales superficies. Los requisitos indispensables que se deben cumplir, para la tcnica de rplicas, son la ausencia de lquidos, es decir, la muestra tiene que estar seca y adems debe ser conductora de la corriente elctrica. Este ltimo requisito no se cumple, pues estamos trabajando con celulosa, por lo que se le recubre de una capa de algn material conductor tal como el carbn o el oro. Este recubrimiento ha de ser suficientemente grueso como para que circule la corriente elctrica que se deposita en la muestra y suficientemente delgado para que no enmascare o tape las caractersticas superficiales de inters.

Celulosa purificada. La celulosa es un carbohidrato natural, insoluble en agua. Su alta rigidez e insolubilidad en la mayora de los solventes es debido a los grupos hidroxilos de la anhidroglucosa, los cuales forman fuertes enlaces de hidrgeno que provocan su cristalinidad. Para solubilizar la celulosa es necesario incorporar varios sustituyentes en la estructura de la anhidroglucosa para disminuir su cristalinidad. Es quizs el compuesto orgnico ms difundido en la naturaleza; es componente principal de las paredes celulares vegetales (por ejemplo en las maderas, en las fibras de algodn, etc).

II. Desarrollo Experimental

A. Materiales:
Acetona. La acetona es Lquido incoloro, oloroso, miscible en agua de excelente capacidad, disolvente de gran nmero de sustancias orgnicas. Punto de ebullicin: Frmula qumica:
FIG.N1. Materiales para la preparacin de
rplicas para SEM.

Cinta de carbn para ultra vaco. Es una cinta adhesiva de doble cara, estas estn hechas especialmente para montar muestras que se van a examinar por SEM y/o EDS. La cinta con base de carbn es recomendado para el trabajo en EDS, ya que permite eliminar rayos X que van al detector desde el substrato. Las cintas de carbn, adems de ser conductivas y adhesivas, prcticamente no muestran una estructura discernible y proveen un fondo ideal contra el que puede observarse el espcimen. El uso de estas cintas reduce considerablemente la cuenta de rayos X, generando gran especificidad y bajos lmites de deteccin al trabajar con EDS. Ya sea que se est capturando imagen o analizando una muestra, el efecto es igual al trabajo con microscopa de campo oscuro. Sputtering. El sputtering consiste de una fuente de alimentacin de corriente continua regulable de 1-3kV conectada por una parte a una placa de oro u oro paladio y por otra al porta muestras. El conjunto va acoplado a una bomba de vaco. La introduccin de un gas tal como el argn en la cmara de vaco provoca que los tomos de argn impacten en la placa de oro y se desprendan tomos de dicha placa que son atrados hacia la muestra en la cual quedan depositadas proporcionando un espesor de recubrimiento que depende del tiempo de exposicin. En nuestro caso se uso el aire con su componente el nitrgeno en reemplazo del argn. Hisopos. Un hisopo es un instrumento utilizado para recoger muestras, para su posterior estudio, normalmente en medicina se usa para saber que germen afecta a una infeccin, tambin se usa en cosmticos y en la limpieza del conducto auditivo. Tiene forma de bastoncillo acabado en una punta de algodn. Pinza mediana. Tijeras. Lmpara.

FIG.N2. Limpieza de la superficie de inters.

Una vez limpia la superficie, de la cual haremos una rplica, echamos sobre ella unas gotas de acetona y colocamos encima un pedazo de celulosa, vemos que cuando la acetona cuando entra en contacto con la celulosa se comporta como una gelatina.

FIG.N3. Cortamos un pedazo de celulosa del tamao de la superficie de inters.

La celulosa se coloca cuidadosamente, tratando de evitar la formacin de burbujas, para esto hacemos presin en todo momento con la ayuda del hisopo. Moldeamos la superficie y dejamos secar la celulosa por aproximadamente 5 minutos sobre una superficie cercana a la lmpara.

FIG.N4. La celulosa se coloca sobre la superficie

de inters.

B. Preparacin de rplicas. Conseguimos un lugar en donde preparar nuestras muestras, un lugar que en lo posible est libre de polvo y bien iluminado. Empezamos limpiando la superficie del rea de inters con la ayuda de un hisopo y acetona.

Cortamos un pedazo de cinta de carbn y lo pegamos en una zona muy prxima a la superficie en estudio. Una vez seca la celulosa lo desprendemos cuidadosamente y lo colocamos volteada sobre la cinta de carbn (la cinta de carbn tiene pegamento en sus dos caras).

Hacemos el reconocimiento de las superficies, la copia y el original, para esto los exponemos a la luz.

FIG.N8. FIG.N5. Reconocemos la fidelidad de la rplica,

los detalles ms finos los veremos en el SEM.

Cmara para recubrimientos muestras con oro por sputtering.

de

Despus de aproximadamente unos 5 minutos sacamos las muestras de la cmara del sputtering.

FIG.N6. Rplicas en celulosa de las superficies en

estudio.

Colocamos las muestras sobre el portamuestras del SEM, los fijamos con la ayuda de la cinta de carbn.

FIG.N9. Rplicas de celulosa despus de salir de

la cmara de sputtering.

Llevamos las rplicas a la cmara portamuestras del SEM para su visualizacin.

FIG.N7. Fijamos las muestras, junto con las

rplicas sobre el porta-muestras del SEM.

Llevamos el porta-muestras del SEM junto con las muestras originales y sus rplicas a la cmara de sputtering, esto con la finalidad de hacer un recubrimiento de oro sobre la celulosa.

FIG.N10. Cmara porta-muestras del SEM con

las rplicas de celulosa.

Manipulamos el SEM con la intencin de obtener imgenes ntidas.

V. Anexos.
A. Fotos obtenidas de rplicas con celulosa.

FIG.N11. Manipulando el SEM.

III. Observaciones y discusiones:

La tcnica es En reemplazo de la cinta de celulosa se pudo usar una pelcula fotogrfica, sin embargo el proceso demorara un poco ms. Evitamos en todo momento las burbujas que se pueden formar entre la celulosa y la moneda. Dado que nuestro propsito no era el de analizar el espectro de rayos-X, sino slo de observacin, entonces usamos oro para recubrir la rplica de celulosa. Si nuestro propsito es analizar el espectro de rayos-X, entonces necesitamos recubrir la celulosa de un material conductor y transparente a estos, el material que mejor se adecua a estas caractersticas es el carbono. No olvidar limpiar muy bien la superficie en estudio, usar la acetona como desengrasante para este proceso. El proceso de laminado por Sputtering se basa en que los tomos del gas que se encuentra dentro de la cmara de vaco, en este caso los del aire (hidrgeno), se ionicen debido a una diferencia de potencial, provocando que impacten en el target de oro y se desprendan tomos de dicho target que a su vez son atrados hacia la muestra en la cual quedan depositados producindose as el recubrimiento.
FIG.N12. Vista en un Microscopio ptico de la rplica
en celulosa.

FIG.N13. Vista en un SEM de la rplica en celulosa.

VI. Bibliografa.
[1]. La informacin con respecto a las cintas

conductoras lo obtuvimos de la pgina: http://www.2spi.es/catalog/spec_prep/cond_a dhes-tapes.shtml

[2]. Roco Zumaya Quiones, Roco Antonio Cruz, Jos L. Rivera Armenta, Mara Y. Chvez Cinco, Ana Mara Mendoza Martnez, Roberto Ramrez Mesaz, Issa Katime. Revista Iberoamericana de Polmeros. Volumen 10(6), Noviembre de 2009

IV. Conclusin.
La tcnica de preparacin de rplicas es muy conveniente si se quiere analizar la estructura superficial de muestras que por algn tipo de limitacin no caben en la cmara porta-muestras del SEM. Vimos que la tcnica es muy buena ya que fue capaz de mostrarnos detalles muy finos de la muestra original.