Prevalencia de anticuerpos contra Trypanosoma cruzi en perros de la comunidad de Dzidzilch, Yucatn.

TESIS

PRESENTADA COMO REQUISITO PARCIAL PARA OBTENER EL TTULO DE:

MDICO VETERINARIO Y ZOOTECNISTA

POR: Denisse Marn Vzquez

Asesores: Dr. Enrique Reyes Novelo M. en C. Carlos Sauri Arceo

Mrida Yucatn a Junio de 2012.

DECLARACIN

"Este trabajo no ha sido aceptado para el otorgamiento de ttulo o grado alguno. La tesis es resultado de las investigaciones del autor excepto donde se indican las fuentes de informacin consultadas. El autor otorga su consentimiento a la FMVZ-UADY para la reproduccin del documento con el fin de intercambio bibliotecario".

El presente trabajo de tesis se realiz con el patrocinio del proyecto Estudio de la distribucin y abundancia de Triatoma dimidiata en ambientes silvestres y su importancia epidemiolgica en la infestacin de viviendas de Dzidzilch Yucatn financiado por el PROMEP con clave de registro SISTPROY CIRB-2011-0003 a cargo del Dr. Enrique Reyes Novelo en el Centro de Investigaciones Regionales Dr. Hideyo Noguchi de la Universidad Autnoma de Yucatn

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DEDICATORIA

El presente trabajo va dedicado a mi familia, porque siempre se han preocupado y han puesto de su parte para que yo pueda alcanzar mis objetivos, gracias a mi padre el seor Marco Marn Vega, porque siempre has tratado de estar all para ayudarme, pero en especial le estar infinitamente agradecida a mi madre, la seora Isabel Vzquez Flota, porque de no ser por ti, no estara en donde me encuentro, es un paso ms en mi vida, pero tambin es un logro tuyo, ya vamos por menos, esta va por ti. Tambin se la dedico a mis amigos, porque adems de los momentos divertidos, algunas veces me ayudaron a orientar mis dudas y a tomar decisiones. Otra persona a la cual tambin le dedico con mucho cario el presente trabajo es a Francisco Javier Snchez Snchez, porque t tambin has formado parte de esto. De igual manera est dedicado con mucho cario a mis asesores Dr. Carlos Humberto Sauri Arceo y Dr. Enrique Alberto Reyes Novelo, porque este documento tambin forma parte de su trabajo y dedicacin.

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AGRADECIMIENTOS

Le quiero agradecer al Dr. Manuel Bolio Gonzlez por permitirme realizar el servicio social en la Clnica de Perros y Gatos de la FMVZ, a los integrantes de esta, les agradezco las experiencias profesionales otorgadas y la amistad. Gracias al Dr. Carlos Humberto Sauri Arceo por haber sido mi asesor de tesis y ayudarme en este proceso de mi formacin profesional, por la paciencia, dedicacin y apoyo, as como tambin por presentarme el proyectoEstudio de la distribucin y abundancia de Triatoma dimidiata en ambientes silvestres y su importancia epidemiolgica en la infestacin de viviendas de Dzidzilch Yucatn (SISTPROY CIRB-2011-0003) a cargo del Dr. Enrique Alberto Reyes Novelo, al cual tambin le estoy muy agradecida por la oportunidad de formar parte de este y del cual obtuve como resultado mi tesis, tambin te agradezco tu tiempo y tus esfuerzos para orientarme y finalizar este trabajo. De igual manera quiero agradecer al Laboratorio de Zoonosis y otras Enfermedades Transmitidas por Vector del Centro de Investigaciones Regionales Hideyo Noguchi, de la Universidad Autnoma de Yucatn, por permitirme el acceso a sus instalaciones. De igual manera agradezco al Departamento de Parasitologa de la Facultad de Ciencias de la Universidad de Granada, Espaa por su trabajo con las muestras colectadas. As como tambin agradezco a la comunidad de Dzidzilch, Yucatn, por permitirnos muestrear a sus animales.

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RESUMEN El objetivo del presente estudio fue determinar la seroprevalencia de Trypanosoma cruzi en perros de la comunidad de Dzidzilch, Yucatn, Mxico. Estudios previos y actuales han mostrado la presencia poblaciones del vector con aproximadamente el 30% de sus individuos infectados con el parsito en la localidad. Se realiz un censo poblacional de los animales de la localidad, el cual mostr que la poblacin est conformada por 61 perros, los cuales fueron incluidos en su totalidad para el estudio. Se colectaron muestras de sangre de cada uno de los animales. Utilizando como mtodo diagnstico la tcnica ELISA empleando como antgeno la fraccin total del parsito y la extraccin de la enzima Superxido dismutasa (SOD) y confirmando los resultados con la tcnica de Western Blot, se obtuvo con la ELISASOD una prevalencia aparente es de 29.5% de perros seroreactores a T. cruzi, la prevalencia verdadera no pudo ser calculada debido a la baja Especificidad (44.8%) de la prueba, indicando una alta probabilidad de Falsos positivos. Se concluye de acuerdo a la prevalencia aparente observada que los perros seroreactores son un indicador de la circulacin del patgeno en mamferos asociados a la vivienda y sus alrededores, lo que representa un riesgo potencial de transmisin para los moradores de las casas. PALABRAS CLAVES: T. cruzi, Enfermedad de Chagas, Dzidzilch, ELISA-SOD, seroprevalencia.

NDICE
1. 2. INTRODUCCIN. ........................................................................................................................... 1 REVISIN DE LITERATURA........................................................................................................ 2 2.1. La enfermedad de Chagas. ............................................................................................................. 2 2.2. Epidemiologa de la enfermedad............................................................................................... 3 Caractersticas del agente etiolgico. ................................................................................ 6 Formas de transmisin. ..................................................................................................... 6 Ciclo biolgico .................................................................................................................. 8 Patogenia ........................................................................................................................... 9 Signos clnicos ................................................................................................................10 Mtodos diagnsticos......................................................................................................12 Tratamiento .....................................................................................................................16 Control y prevencin.......................................................................................................16

2.2.1. 2.2.2. 2.2.3. 2.2.4. 2.2.5. 2.2.6. 2.2.7. 2.2.8. 3.

MATERIALES Y MTODOS. ......................................................................................................18 3.1. 3.2. 3.3. 3.4. Lugar de estudio. .....................................................................................................................18 Poblacin a estudiar. ..............................................................................................................18 Toma de muestras. ..................................................................................................................18 Prueba diagnstica. .................................................................................................................19 Cultivo de la cepa del parsito. .......................................................................................19 Extracto total del parsito (Fraccin H). .........................................................................19 Extraccin y purificacin de la SOD excretada (Fe-SODe) ...........................................20 Prueba serolgica (ELISA). ............................................................................................20

3.4.1. 3.4.2. 3.4.3. 3.4.4.

3.5. Anlisis de datos. .........................................................................................................................21 4. RESULTADOS...............................................................................................................................22 4.1. 4.2. 5. 6. Resultados generales. ..............................................................................................................22 Resultados del diagnstico serolgico de Trypanosoma cruzi................................................22

DISCUSIN. ..................................................................................................................................23 CONCLUSIN. ..............................................................................................................................25

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7. 8.

REFERENCIAS. .............................................................................................................................26 ANEXO...........................................................................................................................................34

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Lista de Cuadros Cuadro 1. Prevalencia de anticuerpos contra T. cruzi de Amrica, Mxico y Yucatn. ............ 5

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Lista de Figuras Figura 1. Triatoma dimidiata. ................................................................................................... 7 Figura 2. Ciclo de vida del T. cruzi, hospederos, reservoros y vector. .................................... 8

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1. INTRODUCCIN. La enfermedad de Chagas (EDC), tambin denominada Trypanosomiasis Americana, se debe a la infeccin por el parsito Trypanosoma cruzi (OMS, 2009; Schmunis et al., 2010). Esta enfermedad zoontica, es considerada en el ser humano como la cuarta causa de mortalidad en Amrica Latina, debido a la cardiomiopata que ocasiona el parsito cuando se anida en las fibras cardacas (Guhl, 2009). T. cruzi es un parsito que tiene dos tipos de hospedadores: 1) Hospederos invertebrados (vectores) varias especies de hempteros hematfagos (Reduviidae: Triatominae), y 2) Mamferos de diferentes especies (Vargas, 2005; Schmunis et al., 2010). Debido a su cercana con el ser humano, los perros se han convertido en una de las fuentes de alimentacin ms comunes para los triatominos en el ambiente peridomstico y domstico (Zavala, 2003). De esta manera estos mamferos entran a formar parte activa en la cadena epidemiolgica de esta parasitosis, por lo que un perro infectado que habite el ecotopo humano es considerado como un factor de riesgo para la transmisin (Annimo, 2009; CruzChan, 2009; Guhl, 2009). Esta especie, desarrolla patologas crnicas semejantes a las encontradas en el humano y el hallazgo de animales infectados por T. cruzi en muchas reas geogrficas se ha documentado recientemente (Rosado, 2005; Estrada-Franco et al., 2006; Pacheco, 2009). Es por esto que el monitoreo de la infeccin por T. cruzi en perros es importante para el estudio de su ciclo de transmisin en el ambiente domstico y por tanto la presente investigacin, tiene como objetivo documentar mediante un estudio transversal, la prevalencia de la seroreaccin al antgeno contra T. cruzi en muestras sanguneas de perros de la comunidad de Dzidzilch, comunidad que se encuentra en el Norte de la Pennsula de Yucatn, dentro de la zona sealada por Dumonteil et al. (2002), de alto riesgo epidemiolgico para la Trypanosomiasis Americana, debido a que ah se han detectado abundantes poblaciones de Triatoma dimidiata, as como altos ndices de infeccin natural en el vector y otros reservorios naturales del parsito (Ruz-Pia y Cruz-Reyes, 2002).

2. REVISIN DE LITERATURA. 2.1. La enfermedad de Chagas. Barbosa en el 2009 seal que aproximadamente 18 millones de personas a nivel mundial se podran encontrar infectados con T. cruzi y que el 25% de la poblacin estara en riesgo, produciendo ms de 50,000 muertes al ao debido a esta patologa. La EDC es endmica de Amrica Latina y es considerada un problema de salud pblica importante, principalmente en Sudamrica y Centroamrica, cobrando cada vez mayor importancia en Mxico (Barr, 2000; WHO, 2005). La existencia de EDC en los humanos es un hecho considerado accidental, en la medida en que stos fueron entrando en contacto con los focos enzoticos, provocando desequilibrios ecolgicos que a su vez favorecieron su contacto con la enfermedad (OMS, 2007; Guhl, 2009; Briceo, 2009; Reyes-Novelo et al., 2011); generando que los triatominos infectados invadan sus viviendas, (proceso de domiciliacin), estos insectos encontraron refugio y cambiaron su preferencia alimentaria con un comportamiento antropoflico y zooflico (animales domsticos) cada vez ms frecuente (Catal et al., 2004; OMS, 2007; Guhl, 2009). Esta parasitosis es eminentemente rural y de transmisin vectorial a travs del contacto con las heces fecales de insectos triatominos (Hemiptera: Reduviidae) los cuales son hematfagos obligados y de hbitos nocturnos, sin embargo cada vez son ms los reportes de ciclos urbanos o suburbanos (Alarcn, 2009; Guhl, 2009; Schmunis et al., 2010). Se considera que uno de los factores ms importantes asociados a la transmisin de esta zoonosis es la pobreza, ya que las personas que viven en dicha condicin se encuentran en mayor riesgo de adquirir una enfermedad zoontica, por convivir con animales reservorios (domsticos o sinantrpicos), el constante contacto con los triatominos vectores y por el poco o nulo desarrollo de infraestructura pblica y de salud en las comunidades que procure aminorar la exposicin de riesgo (Cruz-Reyes y Pickering-Lpez, 2006; OMS, 2007; Reyes-Novelo et al., 2011).

El perro es uno de los principales reservorios y posee una participacin importante para la transmisin de la enfermedad en el ser humano y otros mamferos domsticos, ya que comparten el mismo hbitat (Guzmn-Tapia et al., 2007; OMS, 2007). La relacin de la Trypanosomiasis Americana entre animales domsticos, salvajes y la seropositividad en humanos ha sido documentada pues Mott et al., 1978 (citado por Quijano, 2007), demostr que la seropositividad en humanos es 5 veces mayor en aquellos que convivan con animales seropositivos que los de animales seronegativos. Estudios en Argentina han demostrado la relacin existente entre las mascotas seropositivas y sus propietarios (Grtler et al., 1998), esto indica que los animales domsticos juegan un papel importante en el ciclo domiciliar de la EDC (Cardinal et al., 2006). 2.2.Epidemiologa de la enfermedad. La EDC es una zoonosis compleja debido a que en su cadena de transmisin intervienen gran nmero de reservorios vertebrados y de insectos triatominos vectores que hacen imposible su erradicacin. Esta enfermedad se encuentra presente en todo el territorio de Sudamrica, Centroamrica y Mxico; el parsito de dicha enfermedad se presenta en una gran variedad de cepas e infecta al menos 150 especies de 24 familias de mamferos domsticos y silvestres, entre las principales familias se encuentran: Didelphidae con las zarigeyas (Didelphis virginiana), Canidae con el perro (Canis familiaris), la Felidae con el gato (Felis familiaris), la Muridae los ratones (Mus musculus) y las ratas (Ratus ratus), Bovidae con los caprinos (Capra hircus), ovinos (Ovis aries) y bovinos (Bos taurus), de Leporidae se encuentran los conejos (Oryctolagus cuniculus), y Dasypodidae los armadillos (Dasypus novemcintus) (Catal et al., 2004; OMS, 2007; Vargas, 2005; Guhl, 2009). Desde el descubrimiento del parsito se han realizado diversas investigaciones sobre la enfermedad de Chagas, en el 2007 la OMS realiz una Estimacin Cuantitativa de la Enfermedad de Chagas en las Amricas, entre los 21 pases endmicos, considerando una tasa de prevalencia de 1.448% (siendo esta cifra 50% menor a las estimaciones realizadas en los primeros aos de la dcada de 1990), reportndose 41,200 casos nuevos anuales de infeccin debido a la transmisin vectorial y 14,358 casos nuevos anuales de Chagas

congnito. En Mxico se estima que al menos 5.8 millones de personas podran estar infectadas con T. cruzi (Barbosa et al., 2009). Esta enfermedad se ha convertido en una de las ms estudiadas en la Pennsula de Yucatn (de acuerdo al nmero de trabajos publicados). Un trabajo realizado por ZavalaVelzquez (2003), document la situacin de la zoonosis durante el perodo 1940-2002 en Yucatn. Desde ese trabajo, se han seguido publicando diferentes estudios principalmente sobre la epidemiologa, el vector y los reservorios. Existen diversos estudios enfocados a la teraputica de la enfermedad y a los factores de riesgo asociados a la transmisin (ReyesNovelo et al., 2011). Al ser el vector la principal fuente de transmisin es de vital importancia su control, sin embargo algunos factores que facilitan la infestacin y permanencia de los triatominos en las viviendas y por lo tanto la interaccin husped-vector, es la convivencia y alimentacin de animales domsticos y peridomsticos, como es el caso del perro (Segura y Escobar-Mesa, 2005). Debido a que ste es un reservorio-hospedero de la enfermedad y al continuo contacto de ste con el ser humano, su hbitat y el vector transmisor de la patologa (Barr, 2000; Ettinger y Feldman, 2007), se han realizado diferentes estudios en Amrica, Mxico y en Yucatn, en los cuales se ha analizado la prevalencia de los perros reactores a T. cruzi, como una base para el estudio de la importancia epidemiolgica del mismo en el ciclo de transmisin de la Enfermedad de Chagas (cuadro 1).

Cuadro 1: Prevalencia de anticuerpos contra T. cruzi en perros de Amrica, Mxico y Yucatn, segn varios autores.

Localidad Amrica: 4 villas rurales de Santiago del Estero, Argentina (n= 182) Oklahoma, USA (n= 306) 47 villas rurales de 8 estados de Venezuela (n= 565) Mxico: Tejupilco, estado de Mxico (n= 114) Tlalnepantla (n= 487) Yucatn: Mrida (n= 260) Tunks (n=102)

Prevalencia

Mtodo Diagnstico

Referencia

96.2% 18.6% 3.4% De 62%100%

ELISA y Xenodiagnstico PCR DAT, IFI y ELISA

Lauricella et al., 1998.

Bradley et al., 2000. Crisante et al., 2006.

21% 1.2%

IFI ELISA

Estrada-Franco et al., 2006. Campos-Valdz et al., 2001.

16.15% 17.3%

IFI IFI, WB y PCR. ELISA, WB e IFI

Rosado, 2005. Jimnez-Coello et al., 2008. Jimnez-Coello et al., 2010. Longoni et al., 2011.

Mrida (n=243) Mrida (n= 35) 34%

Celestn (n=55) 10.9% ELISA Fe-SOD Nota: ELISA= Inmunoabsorment Enzyme Liked Assay. IFI= Inmunofluorescencia Indirecta. WB= Western Blot. PCR= Reaccin en Cadena de Polimerasa. DAT= Test de Aglutinacin Indirecta. SOD= Superxido dismutasa.

2.2.1. Caractersticas del agente etiolgico. Trypatiosoma cruzi es un protozoario hemoflagelado de la clase Zoomastigophorea perteneciente a la familia Trypanosomatidae. El microorganismo existe en tres formas morfolgicas (Barr, 2000; Catal et al., 2004; Dumontiel, 2004; Ettinger y Feldman, 2007; Medrano-Mercado et al., 2008): 1. Tripomastigote o forma sangunea: que tiene de 15 a 20 m de largo, con un cuerpo en forma de huso aplanado y un ncleo vesicular colocado centralmente. Un flagelo libre surge de un cuerpo basal cerca del cinetoplasto subterminal grande (que se halla posterior al ncleo) y pasa a lo largo del cuerpo para proyectarse hacia la parte anterior (Barr, 2000; Ettinger & Feldman, 2007).

2. Amastigote o forma intracelular: mide alrededor de 1.5 a 4 m de dimetro, es ovoide y contiene un ncleo grande, redondo y cinetoplasto similar a un bastoncillo. El flagelo es pequeo y no siempre es obvio en la microscopia de luz (Barr, 2000; Ettinger & Feldman, 2007).

3. Epimastigotes o forma intravectorial: esta tercera forma, como su nombre lo dice se encuentran en el vector (Triatomino) en estado de divisin binaria longitudinal. Esta forma flagelada en huso tiene un cinetoplasto situado adelante del ncleo y mide de 20 a 25 m (Barr, 2000; Ettinger y Feldman, 2007). 2.2.2. Formas de transmisin. 2.2.2.1 Transmisin vectorial. La principal va de transmisin es la vectorial por medio de artrpodos hematfagos. Los vectores involucrados en la epidemiologa de la Enfermedad de Chagas son los artrpodos de la familia Reduviidae, (entre los ms representativos epidemiolgicamente estn Triatoma, Panstrogylus, Rhodnius). Los artrpodos implicados con mayor frecuencia en Sudamrica son el Triatoma infestans, Rhodnius prolixus y Rodnius pallecens, entre los principales de

Centroamrica se encuentran Rhodnius prolixus y Triatoma dimidiata, sin embargo, en Mxico los principales vectores son los triatominos, especialmente el Triatoma dimidiata (Tay y Snchez, 2003; Vargas, 2005; Alarcn, 2009; Guhl, 2009; Schmunis et al., 2010). Estos vectores son eficientes para la transmisin de la enfermedad debido a que se alimentan de sangre tanto de personas como de mamferos reservorios domsticos, se reproducen prolficamente en tanto cohabitan cerca de personas y defecan poco despus de alimentarse (Laurecialla, 1998; Barr, 2000; OMS, 2007). La distribucin de dichos vectores es muy amplia, desde el sur de Argentina, hasta el sur de los Estados Unidos de Amrica (OMS, 2009), siendo reconocida Triatoma dimidiata (Figura 1) como una de las especies con mayor importancia epidemiolgica en Amrica Central y en el Sur de Mxico, y como el principal vector en Yucatn (Dumontiel, 2004; OMS, 2009; Guzmn-Tapia et al., 2007; Barbu et al., 2009).

Figura 1. Triatoma dimidiata (tomado de JICA 2011). 2.2.2.2. Otras formas de transmisin La transmisin en los perros tambin se puede producir por la ingestin del vector o por la alimentacin con tejidos de los reservorios en los cuales se encuentre T. cruzi, tales como la zarigeya. Otro mtodo de transmisin poco probable en perros es mediante las transfusiones sanguneas (Gascon et al., 2010; Barr, 2000; Ettinger y Feldman, 2007). Barr (2000) menciona que la ingestin de leche infectada o por va transplasentara son casos que se han ido presentando recientemente, un claro ejemplo es una camada de

sabuesos Walker en Virginia, en el cul, la madre se encontraba infectada con T. cruzi y de igual forma la mayora de sus cachorros, lo que sugiri una infeccin por esas vas. 2.2.3. Ciclo biolgico Los tripomastigotes sanguneos son ingeridos por el vector cuando este se alimenta de un hospedero infectado (Fig. 2 inciso a), posteriormente cada tripomastigote se convierte en epimastigote dividindose y multiplicndose repetidas veces en el tracto intestinal del vector para transformarse nuevamente en tripomastigotes infectantes en la parte terminal del intestino (Fig. 2 inciso b), los cuales son eliminados junto con las heces del vector en su siguiente alimentacin y penetrar mecnicamente al hospedero (Fig. 2 inciso c) (OMS, 2005). Una vez adentro pueden ser fagocitados por macrfagos o penetrar a clulas somticas adyacentes (Fig. 2 inciso d), en las cuales se transforman en amastigotes y se continan dividiendo. Los macrfagos infectados, continan su circulacin en el torrente sanguneo y una vez que los amastigotes se convierten en tripomastigotes por lisis celular se liberan al torrente sanguneo infectando clulas cercanas (Fig. 2 inciso e) o bien pueden ser ingeridos por otro vector, comenzando de nuevo el ciclo (Fig. 2 inciso a) (OMS, 2005).

Figura 2. Ciclo de vida del T. cruzi, hospederos, reservoros y vector (Tomado de OMS, 2005).

2.2.4. Patogenia La enfermedad se desarrolla en tres fases en las que se presentan varias manifestaciones y corresponden al tipo de dao ocasionado en el hospedero; la primera fase se presenta de forma aguda, posteriormente s el perro sobrevive se presentan las dos ltimas, las cuales son la indeterminada y la crnica (Barr, 2000). a) Fase aguda: Los tripomastigotes de T. cruzi se introducen en clulas cercanas al sitio de penetracin en el hospedero despus de la infeccin, reproducindose dentro de ellas y posteriormente liberadas ya sea para entrar a otras clulas adyacentes o pasar al torrente sanguneo en donde son fagocitadas por los macrfagos circulantes, en los cuales continan su multiplicacin, una vez que se transforman de nuevo en tripomastigotes provocan lisis celular y son liberados infectando nuevas clulas, y debido a que los macrfagos infectados continan en la circulacin sangunea facilitan el transporte de los tripomastigotes por todo el organismo del husped, infectando as a diversos rganos, pero con mayor frecuencia el tejido cardiaco. En el sitio en donde el triatomino se aliment se desarrolla inflamacin, la cual se disemina de forma excntrica y se produce una linfadenopata regional, los perros adems al lamerse pueden ingerir tripomastigotes y estos penetrar por las clulas del tracto digestivo (Andrade, 1999; Annimo, 2009; Barr, 2000). La parasitemia ocurre en el transcurso de unos cuantos das y llega al mximo en dos a tres semanas despus de la inoculacin, coincidiendo con la enfermedad clnica aguda. Se ha descrito que la patogenia de la fase aguda es el resultado del dao celular a medida que los tripomastigotes rompen las clulas husped para salir de ella, en especial de miocitos cardiacos y en algunos casos tejido neurolgico (Ettinger y Feldman, 2007). El periodo desde la infeccin hasta la presentacin de la enfermedad aguda es variable, en los cachorros, suele mostrarse una enfermedad grave dos semanas despus de la inoculacin, en cambio, en los perros que se infectan despus de los seis meses de edad, la mayora no muestran signos de enfermedad aguda, pueden

presentar una depresin ligera y parasitemia creciente baja (Barr, 2000; Ettinger y Feldman, 2007). Las parasitemias disminuyen hasta valores no detectables alrededor de cuatro semanas tras la inoculacin quizs a causa de una respuesta inmunitaria especfica creciente contra el parsito y los signos de la enfermedad aguda disminuyen (Machado et al., 2001). b) Fase intermedia o indeterminada: En esta fase los parsitos se reproducen lentamente, algunos son liberados al torrente sanguneo o son eliminados por el sistema inmune. Los perros tienden a permanecer asintomticos durante meses o aos. En este tiempo se presenta de manera progresiva una degeneracin miocrdica que por ltimo conduce a cardiomiopata dilatada biventricular de patogenia desconocida (Gascon et al., 2002; Ettinger y Feldman, 2007).

c) Fase crnica: T. cruzi generalmente se aloja en tejido muscular cardiaco y esqueltico, una vez que el parsito penetra las fibras musculares causa la destruccin de las clulas resultando en una severa miocarditis establecindose as dicha degeneracin miocrdica progresiva. Sin embargo existen muchas teoras respecto a la causa de la cardiomiopata e incluyen dao por productos txicos del parsito y mecanismos de mediacin autoinmunitaria que conducen a una alteracin del sistema nervioso autnomo. Estudios ms amplios sugieren un espasmo local de la microvasculatura coronaria, que termina por ocasionar isquemia del miocardio dando lugar a la destruccin progresiva del miocito cardiaco. La dilatacin del corazn ocurre cuando la fibrosis ya no permite la hipertrofia compensadora eficiente (Annimo, 2009; Barr, 2000; Ettinger y Feldman, 2007). 2.2.5. Signos clnicos Los signos clnicos que se pueden observar en el perro durante las tres fases de esta enfermedad son:

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a) Fase aguda: Cuando la fase aguda ocurre en perros menores de un ao de edad se inicia en forma sbita, con signos causados por insuficiencia cardiaca derecha, con posible linfadenomegalia generalizada. Se pueden presentar signos referibles a miocarditis aguda, como colapso sbito y muerte de un perro joven antes normal. Es comn observar palidez de las mucosas, lentitud del tiempo de llenado capilar, pulso dbil o con dficit, taquiarritmia, hipotermia e insuficiencia respiratoria terminales. La mayora de los perros infectados que no mueren de modo sbito presentan ascitis, hepatomegalia y esplenomegalia por la insuficiencia cardiaca derecha, gran parte de los individuos slo presenta signos y sntomas inespecficos como nusea, vmito, diarrea, anorexia y hasta meningitis (Barr, 2000; Ettinger y Feldman, 2007). En perros con la infeccin natural y experimental pueden encontrarse signos neurolgicos referibles a meningoencefalitis, que incluyen ataxia de los miembros plvicos, debilidad profunda y reflejos espinales hiperactivos pudindose confundir con Distemper canino. Las alteraciones del Electrocardiograma (ECG) son muy variables y abarcan cambios en los segmentos ST-T, inversin de la onda T, complejos QRS de amplitud baja, contracciones ventriculares prematuras polifsicas positivas y bloqueo cardiaco de primer y segundo grado (Barr, 2000; Ettinger y Feldman, 2007). b) Fase intermedia: La parasitemia y los sntomas desaparecen en los pacientes que sobreviven a la miocarditis aguda. Durante el periodo asintomtico prolongado entre la enfermedad aguda y la crnica en el perro, el ECG puede ser normal excepto por la ocurrencia intermitente de arritmias ventriculares que suelen relacionarse con el ejercicio o excitacin. Durante esta etapa es posible que ocurra muerte sbita y se piensa que se debe a arritmias cardiacas mortales (Barr, 2000; Ettinger et al., 2007). c) Fase crnica: Conforme la dilatacin del corazn se presenta, las anormalidades del ECG se tornan ms prevalentes y ocurren signos clnicos referibles a insuficiencia de las cmaras del lado derecho y por ltimo del izquierdo. En la fase crnica se produce principalmente una degeneracin miocrdica progresiva derecha en la que se observa

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ascitis, efusin pleural, hepatomegalia as como distensin yugular, la degeneracin miocrdica termina en una cardiomiopata dilatada biventricular. Durante esta fase se puede detectar arritmias ventriculares las cuales pueden exacerbarse por ejercicio y excitacin en la que puede ocurrir muerte sbita (Barr, 2000; Meurs, 2005; Ettinger y Feldman, 2007). 2.2.6. Mtodos diagnsticos Existen diferentes mtodos para diagnosticar la Trypanosomiasis Americana, entre las cuales se encuentran: a) Observacin directa: se puede identificar el agente en sangre utilizando una tincin de Giemsa para encontrar los tripomastigotes. Sin embargo, slo hay probabilidades de hallarlos antes o durante la etapa aguda de la enfermedad (alta parasitemia). Rara vez el agente suele ser hallado en la fase crnica, por lo que un resultado negativo no necesariamente descarta la posibilidad de la enfermedad (Crisante et al., 2006). Cuando no se detecta el organismo por medio de tinciones de sangre, se puede realizar inoculaciones en ratones por va intraperitoneal o subcutnea. Cuando se realiza esta tcnica se puede encontrar el Trypanosoma en la sangre del ratn despus de 10 das de la inoculacin (Tay y Snchez, 2003). En la tcnica del microhematocrito fluorescente la muestra se introduce en un tubo capilar el cual contiene un flotador cilndrico, anticoagulante y anaranjado de acridina. Despus de la centrifugacin, la capa de leucocitos y plaquetas se expande y al observarla en el microscopio con una fuente de luz ultravioleta, entre la capa de plaquetas y plasma se observan los protozoarios flagelados mviles. Es frecuente observar cinetoplastos libres (INDRE, 2012). b) Citologa: por medio de aspirados de ganglios as como en lquidos de derrame abdominal (Barr, 2000) para poder observar los tripanosomas.

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c) Hemocultivo: se pueden realizar en diversos medios de cultivos especiales como son el Novy, Nicolle y McNeal, el Nakamura u otros que son para el desarrollo de tripanosomas (Tay y Snchez, 2003). d) Xenodiagnstico: consiste en utilizar triatomas no infectados, los cuales se les deja alimentarse del paciente sospechoso y posteriormente se observan las deyecciones del artrpodo a los 10, 20 y 30 das posteriores para identificar tripomastigotes. Para asegurar que los triatomas utilizados en la prueba no estn infectados, stos son cultivados y alimentados con sangre de ave debido a que esta especie no puede ser infectada por T. cruzi (Cohen y Grtler, 2001). e) Histopatologa: se puede encontrar amastigotes en tejido cardiaco. En estudios de los casos agudos generalmente se encuentra una inflamacin granulomatosa difusa, degeneracin hidrpica y necrosis de miofibrillas as como infiltrado mononuclear, tambin es posible encontrar miositis granulomatosa y los amastigotes en rganos como msculo liso del estmago, intestino delgado y vejiga as como en msculo esqueltico, tambin puede haber encefalitis no supurativa (Barr, 2000). f) Diagnstico molecular: la Reaccin en Cadena de la Polimerasa (PCR) es una tcnica utilizada para detectar fracciones de DNA del parsito en sangre y tejidos, se emplean oligonucletidos iniciadores especficos de T. cruzi. Un resultado positivo indica la presencia del agente. El PCR es altamente especfico y funcional para la deteccin del parsito causante de la enfermedad, sin embargo, slo es eficiente durante la fase aguda o durante la infeccin temprana de esta patologa, debido a que es cuando se puede detectar con mayor facilidad el parsito en la sangre y la posibilidad de ser detectado por serologa es baja (Araujo et al., 2002; Crisante et al., 2006; Jimnez-Coello et al., 2008). g) Serologa: se basa en la deteccin de anticuerpos en contra de T. cruzi, en la que se puede realizar tcnicas como la Fijacin del Complemento, Hemoaglutinacin

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Directa (HD), Inmunofluorescencia Indirecta (IFI), Inmunoensayo Ligado a Enzimas (ELISA) o Western Blot (Barr, 2000; Crisante et al., 2006). En general, los ensayos serolgicos para el diagnstico de la enfermedad permiten la deteccin de anticuerpos (principalmente IgG) durante la fase indeterminada o crnica de esta patologa, es por esta razn que durante la fase aguda se puede dar la presencia de falsos-negativos, debido a que durante esta fase la huella inmunolgica no se ha conformado, pues en perros experimentalmente infectados se ha demostrado que los ttulos suelen hacerse positivos alrededor de tres semanas despus de la inoculacin, en la poca que la parasitemia estn en declinacin. El hecho de usar dos pruebas serolgicas disminuye la posibilidad de falsos negativos (Crisante et al., 2006; Marn et al., 2009; Annimo, 2009; Jimnez-Coello et al., 2010). La tcnica de fijacin del complemento se basa en la observacin de lisis de eritrocitos, dado por la reaccin del sistema del complemento, el cual, es activado por la unin del antgeno con el anticuerpo presente en el suero a analizar (Tizard, 2002). En la HD se utiliza eritrocitos de camero a los cuales se tratan con cido tnico y se sensibilizan con un extracto total soluble de T. cruzi, al aadirle el suero los anticuerpos anti T. cruzi aglutinaran los eritrocitos (INDRE, 2012). La IFI se basa en la demostracin de la unin de los anticuerpos de los sueros problema con los antgenos, en la que se emplea un marcador fluorescente ligado a un anti-anticuerpo especfico, este conjugado se unir a los complejos antgenoanticuerpo, por lo que se puede visualizar la fluorescencia por medio de un microscopio de fluorescencia (Tizard, 2002; INDRE, 2003; Jimnez-Coello et al., 2008). La tcnica ELISA (Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay) se basa en la unin del antgeno a los anticuerpos presentes en el suero problema, a los cuales se les agrega una antiglobulina ligada a una enzima, posteriormente se agrega un sustrato que har

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reaccionar dicha enzima con el sustrato, dando una coloracin en los resultados positivos (Tizard, 2002; Crisante et al., 2006; Marn et al., 2009) En la actualidad para el diagnstico certero de T. cruzi se est utilizando la ELISA en combinacin con la Superxido dismutasa (SOD), la cual es una metaloenzima presente en todos los organismos que respiran por la formacin de radicales superxido. Es una enzima que cataliza la reduccin de los radicales superxido en oxgeno molecular y perxido de hidrgeno. Existen tres clases de SOD, cada una con diferentes cofactores metlicos (hierro, manganeso, cobre y zinc), tambin difieren en su localizacin en la clula (organelos, citoplasma, clulas y secreciones clulares) Marn et al., 2007; Marn et al., 2009; Longoni et al., 2011; Arjona-Jimnez et al., 2012). Todos los protozoos parsitos estudiados hasta la fecha tienen SODs slo con cofactores de hierro. En algunos protozoos parsitos se ha demostrado que algunas SOD involucradas en el ataque oxidativo son altamente inmunognicas, aumentando la posibilidad de utilizarlos en el diagnstico de la Enfermedad de Chagas (Villagrn et al., 2005; Marn et al., 2007; Marn et al., 2009; Longoni et al., 2011; Arjona-Jimnez et al., 2012). La ELISA-SOD es una prueba con una elevada sensibilidad (98,6%), pero con mu baja especificidad (44.8%) (Marn, et al., 2009), debido a que es una prueba reciente se emplea como prueba confirmatoria el Western Blot el cual tiene una alta sensibilidad (90.4%) y es una prueba muy especfica (100%) (Martins, et al., 2002). En el Western Blot se preparan extractos totales de las protenas de T. cruzi en tiras, y estas posteriormente se ponen en contacto con el suero problema y se comprueba la unin de las protenas del antgeno con los anticuerpos mediante el uso de un marcador ligado a un anti- anticuerpo (Tizard, 2002; Crisante et al., 2006).

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2.2.7. Tratamiento Las principales drogas utilizadas son los Nitrofuranos como el Nifurtimox (NFx) y Nitroimidazoles como el Benznidazole (Bz) (Barr, 2000; Castro et al., 2006) ambos medicamentos no son del todo efectivos y tienen muchos efectos secundarios, por esto en EE.UU. y Europa no estn autorizados como agentes teraputicos. Su efectividad est limitada a la fase aguda (cuando esta es detectada) y sus respuestas son sumamente variables, por lo que an es controversial su utilizacin en pacientes; se sabe tambin de la aparicin de cepas de T. cruzi resistentes a uno o ambos medicamentos (Garca et al., 2005). Entre los efectos adversos que tiene la terapia con NFx se encuentran las relacionadas al sistema nervioso (anorexia, dolor de cabeza, excitacin, insomnio, polineuropata, vmito y prdida de peso) y con Bz existen alteraciones de mdula sea, como agranulocitosis, trombocitopenia, fiebre y septicemia (Castro et al., 2006). Tambin se han usado opciones como la combinacin Bz con Ketoconazol u Ofloxacina para reducir las dosis y mejorar la respuesta (Arajo et al., 2000), o con Alopurinol e Itraconazole con resultados moderados (Werner et al., 1998). 2.2.8. Control y prevencin La prevencin se logra evitando el contacto entre perros y vectores infectados, esto mediante las mejoras del alojamiento de los perros influye mucho para limitar la infeccin. La principal forma de controlar la enfermedad es mediante la eliminacin del vector (Ettinger y Feldman, 2007; Barbu et al., 2009), por lo cual, se recomienda rociar, al menos una vez al mes insecticidas residuales en las estructuras circundantes a la casa, como son las pilas de lea, gallineros y las perreras (OMS, 2009). Barr (2000) recomienda usar en perros que viven en exteriores el citioato por va oral (3 mg/kg cada tercer da) con la finalidad de reducir el nmero de vectores; una vez que disminuyen, la dosis puede administrarse dos veces a la semana. En zonas rurales, es casi imposible limitar el contacto entre caninos y huspedes reservorio infectados (zarigeyas, mapaches, armadillos) y sus vectores, sin embargo, es

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necesario evitar que los perros se alimenten con carne cruda de huspedes reservorios y limitar el contacto con los vectores (Barr, 2000; Ettinger y Feldman, 2007).

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3. MATERIALES Y MTODOS. 3.1. Lugar de estudio. El estudio fue el realizado en la comunidad de Dzidzilch, ubicado en el Norte del estado de Yucatn, aproximadamente a 30 Km de la ciudad de Mrida, (2108N, 8941W) a 10 metros sobre el nivel del mar. Esta poblacin cuenta con 285 habitantes (INEGI, 2011). La vegetacin original en la regin es de selva baja caducifolia espinosa, el clima es clido subhmedo con rgimen de lluvias en verano, con una temperatura media anual de 25.4 C. La precipitacin promedio al ao es de 940 milmetros. Adicionalmente el paisaje est compuesto por plantaciones abandonadas de henequn, reas agrcolas pequeas y vegetacin secundaria (Ruz-Pia y Cruz-Reyes, 2002). 3.2. Poblacin a estudiar. Debido al tamao de la poblacin y a la factibilidad de recursos y personal se procedi a hacer un censo de los perros de la comunidad, completando un total de 61 animales al momento del estudio. 3.3.Toma de muestras. Como estrategia de sensibilizacin a la comunidad, se realiz una visita previa a la toma de muestras, con la finalidad de dar a conocer la actividad que se pretenda realizar y que al momento del muestreo, la poblacin coopere y participe, y a cambio de su colaboracin, sus animales fueron desparasitados con Ivermectina (Iverplus al 1% 200300 g/kg va Subcutnea) y vacunados contra la rabia (Rabiffa 1ml por individuo va Intramuscular) otorgado por la Secretara de Salud. El da del muestreo, se aplic un cuestionario a los propietarios de los animales (ANEXO 1) con el fin de asiganarle un nmero de identificacin a la casa del propietario del animal y al perro para poder llevar un registro y una relacin adecuada de las muestras y los cuestionarios al momento de construir la base de datos.

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Cada animal fue sometido a una toma de muestra sangunea de al menos 3ml de sangre por veno-puncin ceflica o yugular. La muestra colectada fue depositada en un tubo de ensayo al vaco sin anticoagulante. Los tubos fueron conservados en una nevera con geles refrigerantes y remitidos al Laboratorio de Zoonosis y otras Enfermedades Transmitidas por Vector del Centro de Investigaciones Regionales Hideyo Noguchi, de la Universidad Autnoma de Yucatn. Una vez en el laboratorio los tubos fueron sometidos a centrifugacin y se separ el suero del cogulo por decantacin, posteriormente los sueros sanguneos fueron remitidos al Departamento de Parasitologa de la Facultad de Ciencias de la Universidad de Granada, Espaa para determinar la frecuencia de anticuerpos especficos contra T. cruzi mediante serologa, con la metodologa descrita por el Dr. Manuel Snchez Moreno y que se describe a continuacin: 3.4. Prueba diagnstica. Se emple un procedimiento de ELISA y la confirmacin del resultado con Western Blot usando la fraccin total del parsito y la enzima Superxido dismutasa (SOD). 3.4.1. Cultivo de la cepa del parsito. Epimastigotes de T. cruzi cepa SN3 de (IRHOD/CO/2008/SN3) aisladas de Rhodnius prolixus con origen biolgico Guajira (Colombia) (Tllez-Meneses, 2008), se cultivaron in vitro en medio lquido para tripanosomas (MTL) con 10% de suero fetal bovino inactivo y se mantuvieron a 28 C, en frascos de Roux (Corning, EE.UU.) con una superficie de 75 cm2, de acuerdo con la metodologa descrita por Gonzlez (2004). 3.4.2. Extracto total del parsito (Fraccin H). El cultivo de parsitos (en la fase de crecimiento exponencial), se concentr por centrifugacin a 1500 rpm durante 10 minutos. El pellet de las clulas se lav dos veces y se resuspendi en buffer STE helada (0.25 M de sacarosa, 25 mM Tris-HCl, 1 mM EDTA, pH 7.8) (buffer 1). Posteriormente, el sedimento se suspendi (0.5 a 0.6 g de peso hmedo ml-1) en 3 ml de buffer 1 y perturbado por tres ciclos de desintegracin snica, 30

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segundos cada uno a 60 V. El homogeneizado sonicado se centrifug a 1500 rpm durante 10 minutos a 4C, y el precipitado se lava tres veces con el buffer 1 para un total de fraccin sobrenadante de 9 ml. Esta fraccin se centrifuga (2500 rpm durante 10 min a 4 C) y el sobrenadante (fraccin H) es colectado (Marn, 2009). 3.4.3. Extraccin y purificacin de la SOD excretada (Fe-SODe) El parsito en la fase de crecimiento exponencial, obtenido como se describi anteriormente, se concentra por centrifugacin a 1500 rpm durante 10 minutos, el sedimento de las clulas se lav dos veces en medio MTL sin suero, el nmero de clulas se cuentan en una cmara haemocitomtrica y se distribuye en alcuotas de 5 109 parsitos/ml. Luego, los parsitos se cultivan de nuevo en un medio MTL sin suero durante 24 horas, el sobrenadante se recolecta por centrifugacin a 1500 rpm durante 10 minutos y luego se pasa por un filtro con tamao de poro de 0.45 micras, y se aade sulfato de amonio slido. La fraccin de protena, lo que se precipita a una concentracin de entre el 35 y el 85% de sal, se centrifuga (9000 rpm durante 20 min a 4 C), se vuelve a disolver en 2.5 ml de 20 mM de buffer de fosfato de potasio (pH 7.8) que contiene 1 mM EDTA (buffer 2) y dializados en una columna de Sephadex G-25 (Pharmacia, PD 10), previamente equilibrada con el buffer 2, llevndola a un volumen final de 2.5 ml (fraccin de Fe-SODe). Ambas fracciones, H y SODe Fe, fueron utilizadas como fracciones del antgeno en ELISA y Western-Blot. El contenido de protena se determina mediante el test de Bio-Rad, con base en el mtodo de Bradford (inmunoqumica Sigma, St. Louis), con albmina de suero bovino como estndar (Marn, 2007). 3.4.4. Prueba serolgica (ELISA). Para el ensayo de ELISA, con la fraccin H y Fe-SODe de los parsitos, cultivados y procesados como se describi anteriormente, fueron utilizados como la fraccin de antgeno en todos los casos. El homogenizado total (fraccin H) y la fraccin de protena purificada (Fe-SODe) a una concentracin de 5 y 1.5 g respectivamente, se colect en placas de microtitulacin de poliestireno (Nunc, Dinamark) en buffer de carbonato (pH 8.2) durante 2 horas a 37C. El antgeno que qued en la placa es eliminado

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por lavado en tres tiempos con PBS-Tween 20 0.05% (buffer de lavado). Los sitios de adsorcin libre son tomadas para la incubacin (2 horas a 37C) con buffer de bloqueo (PBS-Tween 20 0.2%, BSA 1%). Los anticuerpos se mantuvieron en una dilucin de suero de 1:200 en PBS se desarrollan con peroxidasa de marcaje con anticuerpos de inmunoglobulina de oveja anti-total-perro en una dilucin de 1:1000 utilizado como un conjugado. La reaccin enzimtica es desarrollada con el sustrato cromognico OPD (ofenilendiaminadihidrocloruro, Sigma Madrid, Espaa), y 10 l de H2O2 al 30% por cada 25 ml durante 20 minutos en la oscuridad. La reaccin se detiene con la adicin de 50 l de HCl 3N. La absorbancia se lee a 492nm en un lector de microplacas (Sunrise TM, TECAN). Todas las muestras son analizadas por triplicado en placas de microtitulacin de poliestireno. Medias y desviaciones estndar (DE) de la densidad ptica de los sueros negativos control (10 de los perros sanos) son utilizados para calcular el valor de corte (media + 3 x SD) (Longoni et al., 2011). 3.5. Anlisis de datos. La Prevalencia (P), fue estimada segn la frmula de Thrusfield (2007): Nmero de animales que presentan anticuerpos P= contra T. cruzi en un perodo de tiempo determinado Nmero de individuos muestreados de la poblacin en ese mismo perodo de tiempo.

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4. RESULTADOS. 4.1. Resultados generales. En total se estudiaron muestras provenientes de 61 perros de la comunidad de Dzidzilch, los cuales se encontraron distribuidos en 49 casas. De stos animales, el 57% (35/61) fueron machos y 43% (26/61) hembras, con edad oscilante entre los 4 meses hasta los 10 aos. 4.2.Resultados del diagnstico serolgico de Trypanosoma cruzi. De acuerdo a la prueba ELISA Fe-SOD se obtuvieron 18 animales seroreactores a T. cruzi, los cuales representan al 29.5% de los animales muestreados. De los 18 animales positivos a la prueba ELISA Fe-SODe, 17 fueron confirmados con la prueba de Western Blot.

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5. DISCUSIN. Para el desarrollo de esta investigacin se utilizaron ELISA Fe-SOD como prueba diagnstica y se emple la tcnica de Western Blot como mtodo confirmatorio de los resultados positivos, de los 18 perros positivos a ELISA-SOD, 17 fueron confirmados con Western Blot obteniendo una prevalencia aparente de 29.5%. Los 61 perros analizados pertenecen a la comunidad de Dzidzilch, Yucatn. Esta comunidad ubicada en la Pennsula de Yucatn, se encuentra dentro de la zona sealada como endmica de la enfermedad y del vector (Triatoma dimidiata), posee caractersticas socioeconmicas y medio ambientales adecuadas, para el desarrollo y transmisin del Trypanosoma cruzi. En el estado de Yucatn se han desarrollado diferentes estudios sobre Trypanosomiasis Americana en perros, como el de Jimnez-Coello et al. (2008) el cual por medio de la deteccin de anticuerpos de IgG contra T. cruzi por IFI, WB y PCR encontr una prevalencia de 9.8% en Tunkas y de 14.4 % en Mrida. En otra investigacin realizada en perros de la ciudad de Mrida por el mismo autor publicada en 2010 revel una prevalencia a T. cruzi del 34%, con las pruebas diagnsticas ELISA, WB e IFI. En otro estudio ms reciente realizado en Celestn, Yucatn y Tulum, Quintana Roo por Longoni, et al. (2011) con la prueba diagnstica ELISA Fe-SOD, se obtuvo una prevalencia de 10.9% y 0%, respectivamente. Debido a la baja Especificidad (44.8%) de la ELISA Fe-SOD no se puedo determinar la prevalencia verdadera de la enfermedad, indicando una elevada probabilidad de Falsos Positivos, lo que implica que la prevalencia verdadera en nuestro estudio, puede variar de 0 a 27%. A pesar de lo anterior, la ELISA-Fe SOD es un mtodo diagnstico reciente y que ha demostrado ser efectivo para la deteccin de anticuerpos contra T. cruzi ya que diferentes trabajos han mostrado su utilidad en el diagnstico de dicho parsito, tanto en animales como en seres humanos (Marn et al., 2009; Arjona-Jimnez et al., 2012; Longoni et al., 2012) no obstante, la limitante en cuanto a su especificidad debe seguir investigandose y mejorandose para estandarizar su uso como mtodo diagnstico.

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En comparacin con el trabajo de Longoni et al. (2011) en el que se utiliz el mismo mtodo diagnstico, se aprecia una diferencia entre sus resultados y los obtenidos en este estudio, lo que probablemente se relacione con las condiciones ecolgicas de las localidades estudiadas pues tanto Tulum, Quintana Roo, como Celestn, Yucatn, se encuentran en zonas costeras en donde no existen trabajos que documenten la prevalencia del vector y por tanto, es probable que la transmisin sea menos frecuente que en las reas con selva tropical caducifolia, lo que puede explicar la diferencia obtenida en los dos estudios y justificar el elevado resultado de serorectores obtenido en el presente estudio, ya que Dzidzilch es un sitio ubicado en la zona de alto riesgo epidemiolgico para la EDC, puesto que se ha documentado ampliamente que las viviendas son invadidas por T. dimidiata y la existencia de altos ndices de infeccin natural en el vector y otros reservorios naturales del parsito (Ruz-Pia y CruzReyes, 2002; Dumonteil et al., 2002; Reyes-Novelo et al., en prensa). La relevancia del estudio y diagnstico de la Trypanosomiasis Americana en perros domiciliados de un rea endmica, radica en que estos animales son considerados por diferentes autores como buenos centinelas para suponer el riesgo de transmisin potencial a los seres humanos.

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6. CONCLUSIN. La prevalencia aparente observada en el presente trabajo en relacin con otros estudios realizados en la regin es alta. Los presencia de perros seroreactores indica que dichos animales estuvieron expuestos al agente, implicando un riesgo potencial de transmisin del parsito haca los habitantes de la comunidad por la presencia de los diferentes componentes del ciclo de transmisin interactuando en y alrededor de las viviendas.

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8. ANEXO. Universidad Autnoma de Yucatn Centro de Investigaciones Regionales Dr. Hideyo Noguchi Facultad de Medicina Veterinaria y Zootecnia Hoja control Trypanosomiasis Americana en perros de Dzidzilch, Yucatn. Primera etapa: Estudio de la poblacin canina mediante un censo. Fecha: _____________________ Nombre del propietario: ________________________________________ ID_ CASA: _____ Perros?: S ( ) No ( ) Cuntos?:____

Permanencia del animal fuera de casa: Todo el tiempo: S ( ) No ( )Toda la noche:S ( ) No( ) Todo el da: S ( ) No ( ) Parte del da: S ( ) No ( )

Datos de los perros y los gatos. ID_mascota Nombre Edad Sexo Raza Vacunas Rabia Otras Si No Esterilizado Desparasitado

H M

Si

No

Si

No

Acepto vacunacin y desparasitacin para las mascotas descritas y autorizo la toma de muestras biolgicas para estudios de Salud Animal ____________________________________ Nombre y Firma o huella digital

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Informacin del paciente ID_Paciente____________________

Condicin Corporal: 1

5 RD__________ RT___________ Preescapulares Poplteos

Mucosas: _________________ TLlC_____seg. Linfonodos aumentados de tamao: Retrofarngeos FC_____lat./min Arritmia Si No

FR_____ Resp./ min CP_________ Tem ________

Tipo de resp.__________________________PA:____________________________________ Pulso:_________ Secreciones:_____________________ Otros hallazgos:_________________________________________ Observaciones: ____________________________________________________________________________ ____________________________________________________________________________ ____________________________________________________________________________ ____________________________________________________________________________ ____________________________________________________________________________ ____________________________________________________________________________ ____________________________________________________________________________ ____________________________________________________________________________ ____________________________________________________________________________

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