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UNIVERSIDAD FRANCISCO DE PAULA SANTANDER FACULTAD DE EDUCACION, ARTES Y HUMANIDADES LICENCIATURA EN BIOLOGIA Y QUIMICA Realizado por: AIDA LUZ

TAPIAS RODRIGUEZ MARLY PAOLA CACERES HERRERA

PRCTICA N 11: EXTRACION DEL ADN

DIGNOSTICO EVALUATIVO

Los estudiantes al ingresar al laboratorio de Biologa deben realizar un consulta previa de los conceptos bsicos e importancia del ADN en las clulas vegetales y con anterioridad deben leer la gua correspondiente a la prctica de laboratorio.

TEN EN CUENTA: Para realizar la prctica de extraccin del ADN del laboratorio de biologa general se debe llevar los materiales correspondientes para obtener buenos resultados en la observacin.

ANIMO MANTENGA EL INTERS EN SU ESTUDIO.

UNIVERSIDAD FRANCISCO DE PAULA SANTANDER FACULTAD DE EDUCACION, ARTES Y HUMANIDADES LICENCIATURA EN BIOLOGIA Y QUIMICA Realizado por: AIDA LUZ TAPIAS RODRIGUEZ MARLY PAOLA CACERES HERRERA

INTRODUCCIN La extraccin del ADN en las clulas vegetales, en las clulas de lenteja (Lens esculenta) requiere una serie de etapas bsicas: en primer lugar tiene que romperse la pared celular y la membrana plasmtica para poder acceder al ncleo de la clula. A continuacin debe romperse tambin la membrana nuclear para dejar libre el ADN. Los jabones utilizados como lavavajillas emulsionan los lpidos de las membranas celulares y las rompen. La sal evita la unin de las protenas al ADN. Para aislar el ADN hay que hacer que precipite en alcohol etlico de 95% (isopropilico), refrigerado. El ADN es soluble en agua, pero cuando se encuentra en alcohol se desenrolla y precipita en la interface entre el alcohol y el agua. Adems de permitirnos ver el ADN, el alcohol separa el ADN de otros componentes celulares, los cuales son dejados en la solucin acuosa.

OBJETIVOS Extraer el ADN de muestras vegetales Determinar la presencia del cido desoxirribonucleico (ADN) en algunas especies vegetales. Observar en forma directa las fibras del ADN que componen las clulas vegetales.

MATERIALES Y REACTIVOS ESTUDIANTES Hojas de espinaca o en su defecto semillas (trigo, frijol o lentejas) Sal (10 gramos) Detergente lquido (50ml) Ablandador de carnes (jugo de papaya o de pia espeso);o solucin para lentes de contacto) LABORATORIO 1 vaso de precipitado 600ml

1 vaso de precipitado 1000ml 4 tubos de ensayo Gradilla y varilla de vidrio

Licuadora bolsa para colar caf Un palo de madera (tamao de chuzo)

Pipeta de 10ml, mortero Alcohol etlico de 95% (isopropilico), refrigerado. Esteroscopio, caja de petri

PROCEDIMIENTO

1. Medir media taza de lentejas(o una cantidad equivalente a 20gr aproximadamente); una pizca de sal y 200ml de agua. Todo esto se coloca en el vaso de la licuadora y se procesa durante 60 segundos.

2. Finalmente, la mezcla resultante se filtra o se cuela con el colador de tela, para eliminar cualquier partcula de gran tamao. Este procedimiento se realiza para obtener un jugo viscoso. Este procedimiento tambin se puede realizar manualmente con el mortero, si no se cuenta con una licuadora para realizar este paso.

3. A la mezcla que obtuviste agrgale 30 ml de ablandador de carnes (jugo de pia o de lechoza); agrega 30 ml de detergente liquido y revuelva sin formar espuma. (si lo haces muy rpidamente NO LOGRAS VER NADA AL FINAL DE LA EXPERIENCIA).

4. Luego deja reposar la mezcla obtenida anteriormente por 10 minutos. Finalmente coloca la mezcla en 4 tubos de ensayo y aproximadamente 1/3 del tubo de la muestra.

Resultados obtenidos de la muestra vegetal 5. Inclina el tubo de la mezcla y vierte por las paredes del tubo muy lentamente el alcohol etlico al 95% refrigerado de modo que se forme una capa sobre la mezcla anterior de la lenteja. Por medio de un palillo tome la masa blancuzca sobrenadante y el ADN asciende hasta llegar al alcohol.

El ADN es una molcula muy larga y tiende agruparse, de ah la facilidad para retirarla. El agua con pizca de sal es una mezcla isotnica.

fibras de ADN

Fibras de ADN de color blanco en las lentejas (Lens esculenta) observadas al estereoscopio en el aumneto de 35 X. MARCO TEORICO El ADN es la receta de la vida que se transmite de generacin en generacin. El gen es la unidad de la herencia y est compuesto de ADN. Si bien se saba que las caractersticas se podan transmitir de una generacin a otra, Darwin desconoca los mecanismos de la herencia.

El ADN tiene ciertas propiedades por las que es importante en la evolucin: I) almacena informacin, II) es una molcula estable, por lo que no cambia (muta) con mucha frecuencia y III) de vez en cuando ocurren pequeos cambios en el ADN que dan lugar a la variacin necesaria para que se produzca la seleccin natural.

En las plantas, los animales y los hongos, el ADN se encuentra mayormente en el ncleo de las clulas. Para extraer el ADN de las clulas vegetales hay que romper la fuerte pared celular exterior y emulsionar los lpidos de la membrana plasmtica y la envoltura nuclear. El detergente rompe las uniones entre lpidos. Los iones de sodio de la sal neutralizan el ADN, que sale de la clula.

El producto filamentoso obtenido de la extraccin no es ADN puro ya que, entremezclado con l, hay fragmentos de ARN. Una extraccin "profesional" se realiza aadiendo enzimas que fragmentan las molculas de ARN e impiden que se unan al ADN.

Para realizar una extraccin pura ocurrir que el detergente contiene lauril sulfato de sodio, el cual limpia los trastes removiendo grasas y protenas. ste acta de la misma manera en el protocolo de extraccin de ADN, separando las grasas (lpidos) y las protenas que constituyen las membranas que rodean la clula y el ncleo. Una vez que estas membranas se han roto, el ADN es liberado de la clula

El calor suaviza los fosfolpidos (grasas) en las membranas que rodean la clula y el ncleo. Tambin desactiva (desnaturaliza) a las enzimas desoxirribonucleicas (ADNasas) las cuales, si estn presentes, pueden cortar el ADN en pedazos tan pequeos que lo hara imposible de ver. Si las enzimas se desnaturalizan y el ADN se desenrolla, ste pierde su forma y se vuelve inactivo. Las enzimas se desnaturalizan a 60 Celsius y el ADN se desnaturaliza a 80 Celsius.

Los zumos de pia y papaya contienen un enzima, la papana, la solucin ablandadora de carne tambin acta como una enzima, que contribuye a eliminar las protenas que puedan contaminar el ADN. La solucin ablandadora de carne acta como una enzima.

El ADN se precipita en el alcohol fuera de la solucin, donde puede ser visto. Adems de permitirnos ver el ADN, el alcohol separa el ADN de otros componentes celulares, los cuales son dejados en la solucin acuosa.

Los cientficos deben ser capaces de separar suavemente el ADN de sustancias no deseadas que se encuentran en las clulas, evitando que el ADN se desnature (que se rompa).

El material que se necesita para ello es fcil de encontrar y el procedimiento es sencillo .Cada uno de los ingredientes tiene su propia funcin. La solucin de sal y jabn sirve para romper la membrana plasmtica y nuclear e incluso la pared celular. El lquido de lentejas elimina las protenas que degradan el ADN. El alcohol etlico sirve para precipitar el ADN.

El ADN constituye el material hereditario de un individuo. En l estn escritas las instrucciones que deben seguir las clulas para construir un organismo y mantenerlo vivo. Todas las clulas que forman un individuo contienen una copia idntica de ADN. Cada una de ellas, sin embargo, lee una parte de estas instrucciones y por eso hay clulas con diferentes formas y funciones.

El ADN est presente en los indicios biolgicos como sangre, semen, saliva, hueso, pelo, etc.

El Salting- out es uno de los mtodos de extraccin de ADN ms utilizados por su fcil implementacin, baja toxicidad de los reactivos y permite la visualizacin del ADN.

ACTIVIDAD PEDGOGICA 1. Por qu es importante la sal en el proceso de la extraccin de ADN?

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_________________________________________________________________ 3. Con sus propias palabras diga la importancia que tiene la extraccin del ADN.

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5. Realizar el apareamiento de la columna (A) con la columna (B). COLUMNA A Se forman entre las bases nitrogenadas de adenia, guanina, citosina y timina por enlaces covalentes de tipo fosfodiester. Es la abreviatura del cido desoxirribonucleico. Constituye el material gentico de los organismos. Y es una molcula que se encuentra en todas las clulas de los seres vivos y se encarga de codificar todo lo que nosotros formamos o somos, desde nuestro color del pelo hasta las protenas que tenemos en nuestra sangre. Es uno de los mtodos de extraccin de ADN ms utilizados por su fcil implementacin, baja toxicidad de los reactivos y permite la visualizacin del ADN. Son bases nitrogenadas que estn formadas por -D desoxirribosa y un ion fosfato. Se utiliza para romper la membrana plasmtica y nuclear e incluso la pared celular. COLUMNA B A, G, C, T

POLINUCLETIDOS

SAL Y JABON

SALTING-OUT

ADN

PAGINAS WEB EXTRACCIN DE ADN. (En lnea). Disponible en internet en: http://www.educa.madrid.org/web/ies.antoniogala.mostoles/dep_bio_archivos/EXTRACCION_DE_ ADN.pdf