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MTODOS INMUNOLGICOS

Los mtodos inmunolgicos o inmunoensayos son mtodos analticos basado en la reaccin Antgeno- Anticuerpo (Ag-Ac). Se entiende como antgeno (Ag) cualquier molcula que puede ser reconocida especficamente por cualquiera de los componentes sistema inmunitario (SI) que protege al organismo de una amplia variedad de agentes infecciosos. En un sentido ms restrictivo un Ag es cualquier molcula capaz de inducir la produccin de anticuerpos (Ac) especficos. Los anticuerpos como (Ac), tambin

conocidos

inmunoglobulinas,

son un grupo de molculas sricas que producen los linfocitos B. Los diferentes tipos de Ac tienen una estructura bsica comn a todos

ellos, siendo especfico de cada uno el sitio por el que se unen al Ag. La zona de la molcula del Ag a la que se une el Ac se denomina eptopo. Un

antgeno puede presentar un nmero variable de eptopos de estructura nica o repetitiva. La complejidad estructural de las protenas favorece que stas presenten por lo general un nmero elevado de eptopos. Los reactivos para anticuerpo se desarrollan a partir de anticuerpos policlonales y monoclonales. Los inmunoesayos se pueden clasificar en: 1) Inmunoensayos Directos. Medida directa del complejo Ag-Ac.

2) Inmunoensayos con Reactivos Marcados o Indirectos. Requieren el uso de material marcado para medir la concentracin de antgeno o anticuerpo presente. Estos a su vez se clasifican: A) Segn el TIPO DE MARCADOR Radioinmunoensayos La reaccin Ag-Ac se pone de manifiesto por la competicin entre el Antgeno o el Anticuerpo que estemos estudiando y una concentracin conocida del mismo compuesto marcado radiactivamente. Fluoroinmunoensayos Para la realizacin de estas tcnicas el

anticuerpo se marca con un fluorocromo detectndose la formacin del complejo Ag-Ac por la fluorescencia emitida. Enzimoinmunoensayos Utilizan una enzima como marcador para amplificar la seal obtenida de la reaccin entre un antgeno y un anticuerpo. Dentro de los enzimoinmunoensayos hay que destacar los Quimioinmunoensayos, oxidacin de un sustratio. B) Segn el MTODO DE SEPARACIN Heterogneos. El Ag marcado unido al Ac (Ac-Ag*) debe de ser fsicamente separado del Ag marcado que permanece libre en la disolucin (Ag*). El procedimiento de separacin puede llevarse a cabo por precipitacin de los Ac o por la adicin de un segundo Ac que atrapa y precipita el Ac original. Homogneos. No requieren la separacin de la unin anti Ac-Ag* del Ag* libre. C) Segn el DISEO DEL ENSAYO Competitivos. En los formatos competitivos, el analito sin marcar (generalmente antgeno) en la muestra se mide por su capacidad para competir con un antgeno marcado en el inmunoensayo. El antgeno sin marcar bloquea la capacidad del antgeno marcado de unirse puesto que ese punto de unin en el anticuerpo ya se encuentra ocupado. En el formato competitivo de un solo paso tanto en los cuales la enzima cataliza la

el reactivo del antgeno marcado (Ag*) como la muestra sin marcar (o analito de la muestra) compiten por una cantidad limitada de anticuerpo. La concentracin de antgeno es inversamente

proporcional a la concentracin de la seal. No competitivos o sandwich. El analito est unido (como un

sandwich) entre dos reactivos de anticuerpo muy especficos. En los ensayos no competitivos, la medicin del analito marcado,

generalmente un anticuerpo, es directamente proporcional a la concentracin de antgeno presente en la muestra, lo que puede representarse por medio de una curva de respuesta a la

concentracin. El eje X traza la concentracin de un antgeno. El eje Y traza la respuesta, que en este caso se trata de la seal. As, cuanto mayor sea la cantidad de antgeno presente, ms anticuerpos marcados se unirn. En el Laboratorio de control de dopaje de la AEA, los mtodos inmunolgicos se utilizan para la deteccin y confirmacin de las hormonas peptdicas que se encuentran prohibidas en la Lista de Sustancias y mtodos prohibidos publicada por la Agencia Mundial Antidopaje (AMA), dichas sustancias son; La Hormona gonadotropina corionica (hCG) que promueve el mantenimiento del cuerpo luteo durante el inicio del embarazo, la Hormona Luteneizante (LH) puede inducir tambin la ovulacin y la produccin de testicular de testosterona. Ambas hormonas presentan una gran similitud estructural y La Hormona del crecimiento (GH) tambin se le llama somatotropina, es un compuesto de naturaleza polipeptdica constituida por una solo cadena que se produce en las clulas somattrofas y en la glndula pituitaria.