MICROBIOLOGIA CLNICA/ BIOMEDICINA/ FAG/IESC Profa: Jislia Regina Ribeiro Alexandre NORMAS DE SEGURANA NO TRABALHO NO LABORATRIO DE MICROBIOLOGIA

As aulas prticas de Microbiologia tm como objetivo ensinar ao acadmico os princpios gerais e mtodos utilizados no estudo de microbiologia. Nestas aulas utilizaremos uma variedade de bactrias, sendo algumas patognicas para o homem, portanto essencial que as normas sejam seguidas, a fim de se evitar contaminaes acidentais. 01- O uso do guarda-p (jaleco) obrigatrio. 02- Cabelos longos devem ser amarrados de forma a no interferir com reagentes e equipamentos. 03- Limpar e desinfetar a superfcie das bancadas antes e depois de cada aula prtica. 04- Lavar e sanificar as mos ao iniciar a anlise, ao sair do laboratrio e sempre que for necessrio. Se for portador de algum ferimento nas mos, procurar no tocar no material. 05- Identificar as amostras, bem como o material a ser utilizado antes de iniciar a anlise. 06- Utilizar exclusivamente material estril para a anlise. 07- No caso de derramamento do material contaminado, proceder imediatamente a desinfeco e esterilizao. O mesmo procedimento dever ser repetido se ocorrer ferimentos ou cortes. 08- No comer, beber ou fumar no laboratrio. 09- Manter canetas, dedos e outros longe da boca. 10- No utilizar material de uso pessoal para limpar os objetos de trabalho. 11- Avisar ao professor em caso de contaminao acidental. 12- Depositar todo o material utilizado em recipiente adequado, jamais deixando-os sobre a bancada. 13- Flambar as alas, agulhas e pinas antes e aps o uso. 14- Os cultivos aps a leitura devem ser esterilizados, portanto no os colocar na estufa ou despejar na pia. 15- Ao acender o Bico de Bunsen, verificar se no h vazamento de gs ou substncias inflamveis por perto. 16- Trabalhe sempre prximo ao fogo.

OBS: A utilizao do Bico de Bunsen essencial pois visa a diminuio de microrganismos no campo de trabalho atravs do calor. Para isso ele apresenta uma regulagem que torna possvel selecionar o tipo de chama ideal para o trabalho. No caso da Microbiologia deve ser utilizada a chama azul porque esta atinge maior temperatura e no forma fuligem. importante ressaltar que a chama apresenta diferentes zonas, e tal fato importante para que o processo de Flambagem seja executado adequadamente, j que certas zonas da chama devem ser evitadas. As zonas da chama so: Zona Neutra ( uma zona fria e, portanto, no deve ser utilizada para Flambagem), Zona Redutora e Zona Oxidante (so zonas onde j ocorre a combusto e, portanto, j podem ser usadas para a Flambagem). (fig. 1).

Figura 1 1

PRINCPIOS BSICOS DE MICROSCOPIA PTICA Constituio Do M.O.C.

Atualmente, o microscpio ptico composto (M.O.C.) constitudo por duas partes uma parte mecnica e uma parte ptica. Cada parte engloba uma srie de componentes constituintes do microscpio. A parte mecnica serve para dar estabilidade e suportar a parte ptica. Esta parte constituda por: P ou Base suporta o microscpio, assegurando a sua estabilidade. Brao ou Coluna pea fixa base, na qual esto aplicadas todas as outras partes constituintes do microscpio. Tubo ou Canho cilindro que suporta os sistemas de lentes, localizando-se na extremidade superior a ocular e na inferior o revlver com objectivas. Platina pea circular, quadrada ou retangular, paralela base, onde se coloca a preparao a observar, possuindo no centro um orifcio circular ou alongado que possibilita a passagem dos raios luminosos concentrados pelo condensador. Parafuso Macromtrico engrenagem que suporta o tubo e permite a sua deslocao a da platina. indispensvel para fazer a focagem. Parafuso Micromtrico imprime ao tubo ou platina movimentos de amplitude muito reduzida, completando a focagem. Permite explorar a profundidade de campo do microscpio. Revlver disco adaptado zona inferior do tubo, que suporta duas a quatro objetivas de diferentes ampliaes: por rotao possvel trocar rpida e comodamente de objectiva. A parte ptica constituda por: Sistema de Oculares e Sistema de Objetivas o conjunto de lentes que permitem a ampliao do objeto. A ampliao dada ao microscpio igual ao produto da ampliao da objetiva pela ampliao da ocular. Fonte Luminosa existem vrios tipos de fontes luminosas, podendo ser uma lmpada (iluminao artificial), ou um espelho que reflita a luz solar (iluminao natural). Condensador distribui regularmente, no campo visual do microscpio, a luz refletida pelo espelho. Diafragma regula a intensidade luminosa no campo visual do microscpio. Devido a estes componentes serem de alta preciso e porque o microscpio um instrumento caro, requer cuidados especiais de transporte, utilizao e manuteno. Posio do Observador - O observador deve estar sentado. - Se o M.O.C. possuir uma ocular, deve olhar por ela com o olho esquerdo, mantendo os dois olhos abertos. Se o M.O.C. tiver duas oculares, deve olhar por ambas. - Os parafusos de comando devem ser manuseados com a mo esquerda, deixando a mo direita livre para desenhar as observaes. Focalizao - Colocar a ocular desejada; - Acender a fonte de luz acoplada; - Posicionar o condensador o mais prximo possvel da platina; - Verificar se o diafragma est completamente aberto; - Colocar em foco a objetiva de menor aumento; - Fixar a lmina preparada para observao na platina, atravs das presilhas; - Observar o campo microscpico; - Ajustar o foco utilizando o parafuso macromtrico. - Para maior aumento trocar as objetivas e ajustando o foco com o parafuso macromtrico e se necessrio o micromtrico;

- Para observar a lmina corada com a objetiva de imerso, colocar uma gota de leo de imerso sobre a rea corada da lmina; - Girar o revolver colocando a objetiva de imerso (maior aumento) em foco; - Olhando pelo lado, descer o canho (ou subir a mesa de platina) utilizando o parafuso macromtrico at que a lente da objetiva de imerso encoste no leo de imerso. NUNCA focalizar a imagem pela objetiva de imerso olhando pela ocular e sim sempre pelo lado; - Olhando pela ocular, girar o parafuso macromtrico LENTAMENTE, at conseguir focalizar de formar grosseira a preparao; - Mover o parafuso micromtrico at conseguir uma focalizao ideal; - Para mudar o campo microscpico a ser observado, mover o charriot ; Cuidados a ter com o M.O.C. - Deve-se pegar no M.O.C. pelo brao, com a mo direita, enquanto se suporta a base com a mo esquerda; - No se deve tocar no sistema ptico com os dedos; - A lente das objetivas no deve tocar na lamela; - O M.O.C. deve estar completamente pousado numa mesa desocupado, e afastado da borda da mesa.

Desinfeco e Esterilizao
ESTERILIZAO: Processo que visa a destruio total de todas as formas de vida de um material ou ambiente, atravs de mtodos fsicos ou qumicos. DESINFECO: Consiste na destruio, remoo ou reduo dos microrganismos presentes num material inanimado. Visa eliminar a potencialidade infecciosa do objeto, superfcie ou local. ASSEPSIA: Procedimentos que visam evitar o retorno da contaminao a um superfcie ou local. objeto,

ANTI-SEPSSIA: Desinfeco de tecidos vivos, como pele e mucosas. Pode ser feita, por exemplo, atravs do Clorexidine a 0,12% , lcool iodado a 10%. LIMPEZA: Remoo de sujidades que indispensavelmente antecede os procedimentos de desinfeco ou esterilizao.

I- ESTERILIZAO:
A esterilizao o processo que inativa todos os microrganismos presentes em determinado material ou ambiente, portanto o mtodo indicado para uso em itens que de forma alguma podem ser usados quando houver qualquer tipo de contaminao, classificados como crticos. A melhor maneira de garantirmos a destruio de microrganismos presentes em instrumentos e equipamentos mediante o uso do calor. A maioria dos microrganismos que causam infeces em seres humanos desenvolvem-se em temperaturas prximas a do corpo, ou seja, 37C. Assim, ao serem expostos a altas temperaturas, so destrudos; o que no acontece quando os colocamos em contato com baixas temperaturas, pois nesse caso o microrganismo fica apenas inibido, e no destrudo. Alguns microrganismos produzem esporos, que so formas de resistncia, podendo permanecer inativos por longos perodos e depois voltar ao estgio inicial de infectividade. Portanto as tcnicas de esterilizao devem destruir tanto a clula bacteriana, como os esporos. Existem diversos mtodos de esterilizao: Fsicos ou Qumicos. Mas definitivamente os mtodos de esterilizao mais empregados em odontologia so os que utilizam o calor, seja este mido (autoclave) ou seco (estufa, ou forno de Pasteur), sendo que o desempenho do calor mido (autoclave) melhor. I.1- Esterilizao por calor seco (Estufa ou forno de Pasteur) Este tipo de esterilizao realizado a temperaturas de 140C a 180C, com tempo de exposio de 60 a 120 minutos em estufas eltricas equipadas com termostatos. O calor seco ou ar quente em temperatura suficientemente alta levam a desnaturao e oxidao das protenas, que resultam na morte dos microrganismos. A utilizao do calor seco leva mais tempo que o calor mido, mas como existem materiais que no podem ser esterilizados no calor mido, o calor seco o preferido. indicado para esterilizar vidrarias, instrumentos de corte ou de ponta, os quais podem oxidar na presena do vapor da autoclave, e materiais impermeveis como ceras, pomadas e leos. Para ser eficiente, este processo depende de:

- Aquecimento da estufa at a temperatura desejada antes da colocao do material. - Os materiais devem estar rigorosamente limpos e adequadamente embalados. - A colocao do material deve permitir a circulao do ar, portanto a estufa no pode estar abarrotada de material. Deve ser mantida uma distncia de 2 cm entre as caixas. - O tempo de esterilizao deve ser contado apenas aps a colocao do material na estufa, e a partir do momento em que a temperatura foi atingida novamente. I.2- Esterilizao pelo Calor mido O calor mido pode ser utilizado para destruir microrganismos presentes em materiais atravs das formas de: vapor dgua, gua fervente e gua aquecida abaixo de seu ponto de ebulio. gua fervente a gua levada ao ponto de ebulio: 100C, este procedimento destri os microrganismos vegetativos presentes no meio lquido. Entretanto, os materiais ou objetos contaminados no so esterilizados com segurana pois alguns esporos bacterianos podem resistir a 100C por mais de 1 hora. Vapor dgua 1- O vapor dgua sob presso a mais prtica e segura aplicao do calor mido. O aparelho destinado a este a autoclave 121C. um processo mais eficiente para destruir os microrganismos E esporos, que o calor seco. A autoclavao feita a 121 C com tempo de exposio de 15 a 30 minutos. A penetrao do vapor no material garante maior nvel de destruio dos microrganismos, e por este motivo mais rpido. Funcionamento da autoclave: 2- A cmara de parede dupla da autoclave lavada com vapor fluente para remover todo o ar; 3- ento preenchida com vapor puro e mantida a uma determinada temperatura e presso por um perodo especfico de tempo. essencial que todo o ar residual inicialmente presente na cmara seja completamente substitudo por vapor dgua, porque se o ar estiver presente reduzir a temperatura interna da autoclave; 4- A autoclave usualmente operada a uma presso de 15 lb./pol , na qual a temperatura do vapor de Os materiais devem ser limpos antes do processo, sendo adequadamente embalados. O tempo deve ser contado a partir do momento em que a temperatura de 121C atingida. A distribuio do material no interior da autoclave deve garantir que o vapor atinja todo o material por igual. Se o material sair mido da autoclave indica falhas no processo, neste caso deve ser novamente esterilizado.

Controle da Esterilizao
imprescindvel o controle de qualidade nos processos de esterilizao. Como se trata de um processo que inclui diversas variveis (tempo, temperatura, limpeza prvia, conhecimento da pessoa responsvel pelo processo, etc), se qualquer destas variveis for negligenciada, o processo no ser efetivo e o risco de contaminao eminente. O controle deve ser realizado atravs de mtodos qumicos e bacteriolgicos. Os mtodos qumicos utilizam uma fita especial que mostra, atravs da mudana de cor, se a temperatura desejada foi atingida. Os mtodos bacteriolgicos utilizam a bactria chamada Bacillus subtilis, que por ser produtora de esporos, uma eficiente indicadora da qualidade do processo.

Este controle deve fazer parte da rotina do consultrio para garantir a sade dos pacientes e de toda a equipe.

Consideraes importantes
1. importante lembrar que necessria uma limpeza perfeita dos instrumentais antes de serem submetidos esterilizao. A presena de matria orgnica (leo, gordura, pus, sangue, e outras secrees) protege o microrganismo da ao esterilizante. adequado lavar manualmente os instrumentos com detergente e gua antes da esterilizao. 2. Depois de esterilizados, os equipamentos devem ser conservados em embalagens apropriadas, caso contrrio voltam a se recontaminar com microrganismos presentes no ambiente.

II- DESINFECO
Este processo pode ser realizado de forma fsica (Pasteurizao) e qumica (Desinfectantes), II.1- Desinfeco por agentes fsicos: Temperaturas abaixo de seu ponto de ebulio (100 C) Pasteurizao: o aquecimento lento a baixas temperaturas, suficiente para eliminar as clulas vegetativas de microrganismos, mas no os esporos, portanto, um mtodo de desinfeco de alto nvel. indicado o uso de temperatura de 77C por 30 minutos.

II.2- Desinfeco por agentes qumicos: 11.2.a) Mtodo de Desinfeco de alto nvel:
Glutaraldedo: indicado qualquer objeto sensvel ao calor, e para rpida desinfeco de itens reutilizados. utilizado em soluo a 2% com pH alcalino (7,5-8,5) por 30 minutos. Formaldedo: Pode ser encontrado na forma slida (pastilhas formalina) ou como soluo aquosa 37-40% (diludo em lcool ou gua). A soluo deve ser usada por 30 minutos sendo a concentrao de 8% em soluo alcolica e 10% em soluo aquosa. Perxido de Hidrognio: Age em presena de matria orgnica e deve-se fazer a imerso do material em soluo com concentrao de 3-6% por 15-30 minutos. cido Peractico: A concentrao de uso varivel para a desinfeco, sendo que o tempo de exposio deve ser no mnimo de 20 minutos.

11.2.b) Mtodo de Desinfeco de nvel intermedirio:

Compostos Clorados: Causam a inibio de reaes enzimticas intracelulares, desnaturao de protenas, e inativao de cidos nuclicos.Apresentam atividade antimicrobiana de amplo espectro, tem baixo custo e ao rpida, entretanto seu uso limitado, pois irritante, instvel por 24 horas, fotossensvel e voltil, alm de ser corrosivo para metais. Seu uso indicado para artigos de vidro e borracha, sendo contra-indicado para metais ( corrosivo). Apresenta-se na forma lquida (ex: Hipoclorito de sdio) e na forma slida (ex: Hipoclorito de Clcio), e o tempo de exposio dos artigos a estes compostos de aproximadamente 10 minutos. lcoois(Etlicos e Isoproplicos): Seu mecanismo de ao atravs da desnaturao de protenas. So usados em concentrao de 70% peso por 10 minutos, para a desinfeco

de superfcies. O uso destas substncias contra-indicado para materiais mdicocirrgicos, borracha, plsticos e acrlico. Fenlicos: Seu mecanismo de ao atravs do rompimento da parede celular, precipitando protenas, quando usado em alta concentrao, e alterao dos sistemas enzimticos fundamentais, quando utilizado em baixa concentrao. Sua concentrao para uso de 0,4-5% sendo que o tempo de exposio deve ser menor ou igual a 10 minutos. Seu uso indicado para descontaminao de ambiente hospitalar, itens cirrgicos e mdicos no-crticos, sendo que devem ser consideradas as limitaes devido a toxicidade (hiperbilirrubinemia crianas berrios), e ao residual em materiais porosos. Iodforos: Sua ao atravs de seu alto poder de penetrao na parede celular, levando a ruptura de protenas. So utilizados em concentrao de 30 a 50 ppm por um tempo menor ou igual a 10 minutos.

11.2.c) Mtodo de Desinfeco de baixo nvel

lcoois Compostos Clorados Fenlicos: em concentrao menor que 5% Iodforos: em concentrao menor que 30 ppm Compostos de Amnio Quaternrio: Age atravs da inativao de enzimas, desnaturao de protenas essenciais, ruptura da membrana celular. Sua concentrao para uso de 0,4 a 0,6% por um tempo de no mnimo 10 minutos. indicado para a limpeza de ambiente hospitalar (pisos, paredes e superfcies) Detergentes: So agentes tensoativos, com ao detergente, umectante e emulsionante. Podem ser classificados como Catinicos (p. ex. Quaternrios de Amnio), Aninicos (p. ex. sabes, detergentes sulfatados ou sulfonados), e Enzimticos. Este ltimo tem como princpio ativo enzimas proteinases, amilase e lpases, e,portanto, causam transformaes em protenas, polissacardeos e gorduras (ex: Endozime)

Principais Compostos Utilizados em Desinfeco e Assepsia Agente lcoois (7080%) Espectro de Uso ao* Gram-positivas Antisspticos Gram-negativas Desinfectantes BAAR** Modo de ao Desnaturao protica dissoluo de lipdeos Desnaturao protica Alterao da membrana celular bacteriana Tempo de exposio Curto (10-15 min) Desvantagens Pouco ativo contra esporos

Fenis

Gram-positivas Desinfectantes Gram-negativas BAAR Compostos Gram-positivas Antisspticos Quaternrios de Gram-negativas Sanitizantes amnio Desinfectantes (instrumentos cirrgicos) Cloro Gram-positivas Tratamento da Gram-negativas gua BAAR Iodo Gram-positivas Antisspticos Gram-negativas Desinfectantes BAAR Iodforos Gram-positivas Antisspticos

Efeito imediato Fenol puro corrosivo e de odor desagradvel Curto (10-30 No age sobre min) BAAR e esporos

Inativao Efeito imediato Odor irritante enzimtica pouco ativo contra agente oxidante esporos Inativao Efeito imediato Odor irritante enzimtica pouco ativo contra esporos Inativao Efeito imediato Pouco ativo contra

Desinfectantes Desnaturao Curto (formas (instrumentos e protica agente vegetativas) superfcies) alquilante Prolongado (esporos) Metais pesados Gram-positivas Antisspticos Inativao S agem Gram-negativas enzimtica enquanto em contato *- Formas vegetativas; Fonte: Trabulsi, L.R., Microbiologia. Livraria Atheneu, R.J., 1991. **- Bacilos lcool-cido resistentes; ***- Ativos contra esporos

Aldedos***

Gram-negativas BAAR Gram-positivas Gram-negativas BAAR

Desinfectantes

enzimtica

esporos Tempo de exposio longo

No atuam sobre BAAR e esporos

PROCEDIMENTO PARA COLETA E TRANSPORTE DE AMOSTRAS CLNICAS

A amostra deve ser identificada com o nome do paciente, nmero de registro Laboratorial ou Hospitalar(quando for o caso), tipo de amostra e data da coleta. A requisio mdica que acompanha a amostra deve conter, sempre que possvel, as hipteses diagnsticas que auxiliaro o microbiologista na escolha da colorao e do meio de cultura mais adequado para o isolamento do agente etiolgico. O tipo e a qualidade da amostra biolgica, submetida ao laboratrio de Microbiologia, so fatores importantes no sucesso do isolamento e identificao do verdadeiro agente etiolgico de infeces bacterianas. A assepsia na coleta e o volume da amostra so fatores bsicos para o sucesso do diagnstico da infeco. RECOMENDAES GERAIS DE COLETA E TRANSPORTE DE AMOSTRAS Sempre que possvel, coletar amostras antes do incio da terapia (antibioterapia) Coletar a amostra biolgica com assepsia (lcool 70) e coloc-la em recipiente estril e vedado, sempre em quantidade suficiente (>2 ml ou 0,5 cm3) para permitir todos os procedimentos laboratoriais necessrios. Os swabs, usados para coleta de material de ouvido, nasofaringe e orofaringe, secreo vaginal e leses abertas, devem ser colocados em tubos contendo salina estril para o transporte, de modo a evitar a dessecao da amostra. Os materiais ditos contaminados, tais como urina, fezes, pus, secrees de feridas ou trato respiratrio, devem ser enviados, sob gelo, ao laboratrio, o mais rpido possvel (<2 h). Liquor e lquidos cavitrios devem ser mantidos temperatura ambiente e encaminhados com urgncia ao laboratrio para processamento imediato. Sangue e material de puno de medula ssea so os nicos materiais biolgicos que devem ser semeados diretamente, em frascos contendo meio de cultura lquido ou bifsico (lquido sobre slido), de modo a evitar coagulao e conseqente diminuio da sensibilidade do exame. PROCEDIMENTOS PARA COLETA DE AMOSTRAS

Escarro: Recolher, de preferncia, a primeira expectorao da manh, aps gargarejo com gua limpa, em frasco de boca larga, esterilizado. No deve conter saliva. Aspirado gstrico: Aspirar cerca de 5 a 10 ml de suco gstrico, atravs de sonda nasogstrica, pela manh, em jejum. Aspirado traqueal e secreo obtida por broncoscopia: Procedimento realizado por mdico treinado. O material colhido deve ser colocado em recipiente estril. Sangue e aspirado de medula ssea: Fazer assepsia rigorosa no local da puno e coletar cerca de 5 a 6 ml de sangue venoso, que dever ser injetado diretamente, em frasco contendo meio de cultura . Lquor: Fazer assepsia rigorosa no local da puno. Coletar 2 ml ou mais, para exame microscpico e cultura. Os tubos na rotina hospitalar devem ser usados na seguinte seqncia: 1 exame bioqumico, 2 exame de celularidade, 3 microbiolgico, reduzindo assim a possibilidade de isolamento de contaminantes da pele Tecido obtido por bipsia, necropsia e peas operatrias: Colher assepticamente, utilizando instrumentos estreis e colocar o material em recipiente estril, com salina. No adicionar nenhum lquido fixador. Urina:. Quando no for possvel, e para evitar contaminao com microrganismos presentes nas reas vizinhas, fazer limpeza prvia da regio perineal com gua e sabo, desprezar o primeiro jato de urina da manh, e colher 3 a 5 ml de urina em tubo de ensaio estril. Fezes: Fazer lavagem prvia da regio anal com gua e sabo, coletar pores de fezes em recipiente estril com tampa ou swab anal, mergulhar o swab em salina estril e enviar o tubo ao laboratrio. Ou quando se tratar de fezes, coletar em frasco estril. Secreo conduto auditivo externo e material ocular: Colher material da leso com swab estril. Mergulhar o swab umedecido em salina estril e enviar o tubo ao laboratrio. A coleta, com auxlio de swab, no indicada em local de drenagem. Mucosa oral e orofaringe: Coletar com swab estril o material de leso de mucosa jugal, papilas linguais ou regio tonsilar. No tocar nas bochechas e lngua. Mergulhar o swab umedecido em salina estril e enviar o tubo ao laboratrio. Secreo vaginal: Na posio ginecolgica, coletar material da leso, da vagina ou do fundo de saco vaginal com swab estril. Mergulhar o swab umedecido em salina estril e enviar o tubo ao laboratrio. Liqudos corporais (pleural, asctico, pericrdico, sinovial): Fazer assepsia rigorosa no local da puno. Coletar cerca de 5 a 10mL de lquido em tubo de ensaio estril. Pus e material de abscesso: Devem ser colhidos de preferncia, por aspirao de abscessos fechados, com seringa e agulha estril. Se a leso for aberta, limpar o local, com gaze esterilizada embebida em salina estril, para eliminar os exsudatos superficiais que so altamente, contaminados com bactrias. Se haver crostas, retirar usando gazes e soro fisiolgico e a coletar com seringa e agulha estril, ou colher o material com swab. Mergulhar o swab umedecido em salina estril e enviar o tubo ao laboratrio.

Meios de Cultivo
Os meios de cultivo, tambm chamados meios de cultura, so complexos que se destinam ao cultivo artificial de microrganismos. As tcnicas de semeadura permitem que o cultivo destes microrganismos nos meios de cultura seja eficiente e que as seguintes finalidades sejam atingidas: crescimento bacteriano; isolamento bacteriano; estudo da morfologia colonial; pesquisa de patogenicidade; pesquisa das caractersticas bioqumicas.

Os meios de cultivo devem conter as substncias exigidas pelas bactrias para o seu crescimento e multiplicao. Para que possam fazer a sntese de sua prpria matria nutritiva devem dispor de fontes de carbono (protenas, acares), fontes de nitrognio (peptonas) e fontes de energia. So tambm necessrios alguns sais inorgnicos, vitaminas e outras substncias favorecedoras do crescimento. Classificao dos meios de cultivo: - Quanto consistncia: Meios lquidos: so aqueles em que os nutrientes esto dissolvidos em uma soluo aquosa. O crescimento bacteriano nesse meio muda seu aspecto, ou seja o meio sofre uma turvao. Meios semi-slidos: so aqueles que possuem na sua composio, alm dos nutrientes, uma pequena porcentagem de um polissacardeo proveniente de algas marinhas, chamado gar. So geralmente utilizados em tubos e a partir desse tipo de cultura possvel observar a motilidade bacteriana. Meios slidos: so aqueles que possuem uma porcentagem maior de gar (cerca de 15 g/litro de gua destilada), alm dos nutrientes. Podem ser dispostos em tubos ou em Placas de Petri, dependendo da finalidade. Atravs do meio slido em placas de Petri possvel, utilizando-se a tcnica do esgotamento, conseguir o isolamento de colnias bacterianas e, portanto, o meio ideal para que seja feito o estudo da morfologia colonial. J a cultura em gar inclinado fornece somente o crescimento bacteriano com a obteno de uma biomassa de microrganismos. - Quanto funo: Meios simples: possuem os componentes essenciais para o crescimento de microrganismos pouco exigentes. Ex: caldo simples. Meios de enriquecimento: so adicionadas ao meio simples substncias enriquecedoras como sangue, soro, ovo, extrato de leveduras, etc. Ex: gar sangue. Meios seletivos: aqueles que favorecem o desenvolvimento de determinados microrganismos em detrimento de outros, geralmente pela adio de substncias inibidoras. Ex: gar Salmonella-Shigella. Meios diferenciais: permitem o desenvolvimento de grupos de microrganismos com caractersticas relativamente definidas, o que permite diferenciar um grupo ou uma espcie de microrganismo. Ex: gar Mac Conkey. Meios de manuteno: so aqueles destinados a manter a viabilidade de uma cultura bacteriana. Ex: gar Nutriente. -Quanto natureza:

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 Meios animados: so constitudos de clulas vivas, como animais de laboratrio, tecidos vivos ou ovo embrionado. Meios inanimados: no possuem clulas vivas. Podem ser naturais ou sintticos. Naturais so aqueles que possuem substncias provenientes da natureza, e o sinttico contm substncias obtidas em laboratrio. Ainda podemos obter meios de cultivo semisintticos, que so resultantes da unio dos dois anteriores.

AGAR CLED: um meio de cultura nutritivo e diferencial destinado a urocultura e contagem de colnias na urina. O gar CLED (Cistina Lactose Eletrlito Deficiente) um meio enriquecido desenvolvido especialmente para uso em uroculturas (em particular a contagem de colnias), possibilitando um crescimento bom da maioria dos microrganismos causadores de infeces do trato urinrio. Por conter lactose, assume um papel diferencial ao possibilitar a leitura da fermentao deste acar. AGAR MAC CONKEY: Utilizado para o isolamento de bacilos Gram negativos. Permite tambm visualizar a fermentao ou no da lactose. O cristal violeta inibe o crescimento de microrganismos Gram positivos especialmente enterococos e estafilococos. Meio de baixa seletividade e diferencial, pois impede o desenvolvimento de bactrias Gram positivas. Cor original do meio: rosa avermelhado. Colnias cor de rosa: fermentadoras de lactose. Colnias incolores: no fermentadoras de lactose. No h crescimento de cocos Gram positivos GAR SAL MANITOL: um meio de cultura em placas destinado ao isolamento de Staphilococcus aureus de amostras biolgicas como urina, secrees, feridas e exudatos. Tambm usado na indstria alimentcia para o isolamento e identificao de Estafilococos em lquidos e produtos lcteos, carnes e derivados, incluindo conservas e pescados. A degradao do manitol com a produo de cido muda a cor do meio de rosado a amarelo. Devido a alta concentrao de NaCl h inibio de crescimento de bastonetes Gram negativos. MEIO STUART: A carncia de uma fonte de nitrognio impede consideravelmente a multiplicao de microorganismos e a composio nutritiva garante a sobrevivncia deles. Transporte de diversos materiais e conseqente conservao dos microorganismos. Conservao de microorganismos patognicos como: Haemophilus spp., Pneumococcus,Salmonella spp., Shigella spp. entre outros. GAR NUTRIENTE:O Nutriente gar um meio relativamente simples, de fcil preparao e barato, muito usado nos procedimentos do laboratrio de Microbiologia. O nutriente gar tem vrias aplicaes no laboratrio de Microbiologia, e pode ser utilizado para anlise de gua, alimentos e leite como meio para cultivo preliminar das amostras submetidas exames bacteriolgicos e isolamento de organismos para culturas puras. Ouso mais freqente para a conservao e manuteno de culturas em temperatura ambiente neste gar, como mtodo opcional para os laboratrios que no dispem do mtodo da crioconservao (congelamento das cepas em freezer - 70C). Usado para observar esporulao de espcies de bacilos Gram positivos.

GAR CHOCOLATE: amplamente utilizado para o cultivo de microrganismos exigentes, embora cresam neste meio quase todos os tipos de microrganismos. base do meio, adicionado sangue de cavalo, carneiro ou coelho em temperatura alta, o que faz com que as hemcias lisem, liberando hemina e hematina, compostos fundamentais para o crescimento dos microrganismos exigentes. Observao: se utilizar sangue de carneiro ou coelho no lugar do sangue de cavalo, adicionar os suplementos a base de NAD (coenzima I) e cistena aps resfriar a base achocolatada aproximadamente 50C. Crescimento de microrganismos exigentes Haemophilus spp., Neisseria spp., Branhamella catarrhalis e Moraxella spp.

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GAR SALMONELLA-SHIGELLA (SS): gar SS possue componentes (sais de bile, verde brilhante e citrato de sdio) que inibem microrganismos Gram positivos. A incorporao de lactose ao meio permite diferenciar se o microrganismo lactose positiva (bactrias que fermentam a lactose produzem cido que na presena do indicador vermelho neutro resultando na formao de colnias de cor rosa), e bactrias que no fermentam a lactose formam colnias transparentes. Tissulfato de sdio e o citrato frrico permitem a deteco de HS evidenciado por formao de colnias de cor negra no centro. Selecionar e isolar espcies de Salmonella e Shigella, em amostras de fezes, alimentos e gua. CALDO SELENITO: Tem propriedades que inibem coliformes e outras espcies da flora intestinal como estreptococos. Utilizado para o enriquecimento e isolamento de Salmonella spp. e Shigella spp. em amostras de fezes, urina e alimentos. CALDO TETRATIONATO: Os sais de bile contidos no meio de tetrationato inibem microrganismos Gram positivos e a adio da soluo de iodo inibe a flora intestinal normal de espcies fecais. Meio de enriquecimento para Salmonella spp. GAR SANGUE: O meio de gar sangue, usando uma base rica como abaixo descrita, oferece timas condies de crescimento a maioria dos microrganismos. A conservao dos eritrcitos ntegros favorecem a formao de halos de hemlise ntidos, teis para a diferenciao de Streptococcus spp. E Staphylococcus spp. Usado para o isolamento de microrganismos no fastidiosos. Verificao de hemlise dos Streptococcus spp. e Staphylococcus spp. Usado na prova de satelitismo (para identificao presuntiva de Haemophilus spp.). CALDO BHI BRAIN HEART INFUSION: um meio derivado de nutrientes de crebro e corao, peptona e dextrose. A peptona e a infuso so fontes de nitrognio, carbono, enxofre e vitaminas. A dextose um carboidrato que os microrganismos utilizam para fermentao. Meio para cultivo de estreptococcos, pneumococos, meningococos, enterobactrias, no fermentadores, leveduras e fungos. Pode ser utilizado na preparao do inculo para teste de susceptibilidade aos antimicrobianos, para realizao de teste de coagulase em tubo, para teste de crescimento bacteriano a 42 e 44C e para teste de motilidade em lmina.

LWENSTEIN JENSEN: A base do meio constituda por ovos integrais, o que permite amplo crescimento das micobactrias e o crescimento satisfatrio para o teste de niacina (que positivo para Mycobacterium tuberculosis).Isolamento primrio das micobactrias.

GAR MYCOSEL: A Cicloheximida, um dos componentes do meio, serve para selecionar dermatfitos o cloranfenicol inibe o crescimento de bactrias e alguns fungos filamentosos. Isolamento de fungos patognicos, principalmente dermatfitos, a partir de material de investigao contaminado.

GAR SABOURAUD: Meio com nutrientes que favorece o crescimento de diversos fungos leve duriformes e filamentosos.Cultivo e crescimento de espcies de Candidas e fungos filamentosos, particularmente associados a infeces superficiais. Caracterizao macroscpica do fungo filamentoso (colnia gigante).

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