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Manual de Prcticas de Fisiologa Vegetal

Xicotncatl Sahagn Arcila

Curso: Fisiologa Vegetal Grupo: VI Semestre de la Carrera de Biologa

Manual de Prcticas de Fisiologa Vegetal P T A RCI 1 C

DISTRIBUCION DE ESTOMAS E INDICE ESTOMATICO. TECNICA DE IMPRESIN. Introduccin


Los estomas son poros formados por un par de clulas especializadas llamadas clulas guarda. Se encuentran en la epidermis de las partes areas de la mayora de las plantas terrestres. Convencionalmente, un estoma se acepta como el poro y las dos clulas que las rodea (clulas guarda). Un complejo estomtico se refiere alas clulas guarda y a las clulas vecinas (clulas subsidiarias). El estudio de los estomas es uno de los campos mas activos en la fisiologa vegetal y una de las razones de este gran inters se debe a que los estomas intervienen en el control de dos de los mas importantes procesos fisiolgicos en las plantas: fotosntesis y transpiracin. Usualmente, los estomas estn distribuidos al azar en la epidermis de las plantas. Sin embargo, en las mayoras de las monocotiledneas y en gimnospermas los estomas estn distribuidos en hileras. Factores genticos y ambientales como disponibilidad de agua, intensidad de luz, temperatura, y concentracin de CO2 influyen en la distribucin, frecuencia y morfologa de los estomas. Debido a que todos estos factores influyen en la frecuencia, Salisbury introdujo en 1928, el termino ndice estomatico, que relaciona el numero de estomas por unidad de rea con el numero de clulas epidrmicas por unidad de rea: NE x 100 NE + NCE IE = Indice estomatico. IE = NE = Nmero de estomas por unidad de area. NCE = Nmero de celulas epidermicas por unidad de area. Al parecer este ndice permanece constante dentro de las hojas de una misma planta. 4

Manual de Prcticas de Fisiologa Vegetal El estudio de los estomas se puede realizar mediante dos mtodos: los directos y los indirectos. Los directos incluyen las observaciones directas en las hojas en el microscopio o mediante replicas de la superficie de las hojas. Los mtodos indirectos incluyen las estimaciones de la apertura de los estomas mediante porometros de flujo de masas, porometros de resistencia a la difusin, etc.

Objetivo
Dominar la tcnica de impresin de estomas y determinar el ndice estomatico en diferentes especies de plantas.

Materiales
Plantas de la especie que se desee Cinta Scotch Pegamento de Contacto Kola Loca

Equipo y Reactivos
Porta objeto Pinzas Agujas de Diseccin Microscopio.

Procedimiento
1. En la superficie de las hojas a las cuales se quiere tomar impresiones, coloque una pelcula delgada del pegamento de contacto de aproximadamente 1 cm2. 2. Espere unos segundos para que la pelcula seque. 3. Con pinzas, desprenda la pelcula plstica que se formo y colquela sobre el portaobjetos cuidando que la superficie que estuvo en contacto con la epidermis de la hoja quede hacia arriba. 4. Coloque una pelcula de cinta scotch. 5. Proceda a observar la pelcula en el microscopio.

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Cuestionario
1. Calcule el ndice estomtico de las especies que observo.

Bibliografa
Azcon-Bieto , Joaqun, M., Taln. 2000. Fundamentos de Fisiologa Vegetal. Edit. Mac GrawHill Interamericana. Espaa. 522 pp. Armas-Urquiza, Roberto, E. Ortega Delgado y R. Rods Garca. 1988. Fisiologa Vegetal. Editorial Pueblo y Educacin. Cuba. 325 pp. Bidwell, R.G.S. 1979. Fisiologa Vegetal. AGT Editor. Mxico. 784pp

Manual de Prcticas de Fisiologa Vegetal P T A RCI 2 C

DETERMINACIN DEL CONTENIDO RELATIVO DE AGUA (CRA) Y DEL DEFICIT DE SATURACIN HDRICA (DSH) EN TEJIDO FOLIAR. Introduccin.
Una forma de conocer el estado hdrico de las plantas es a travs de la determinacin del contenido de agua en los tejidos. De una manera superficial, la determinacin del contenido de agua en los tejidos vegetales pueden parecer un asunto sencillo. Por analoga de la determinacin de agua del suelo, pareciera adecuado determinar (1) el peso fresco de la muestra y (2) el peso seco despus de calentarla en una estufa a 85 C hasta peso constante. La diferencia entre estos dos pesos es le contenido de agua. Sin embargo, la cantidad, as obtenida es til solo si puede ser comparada con otras, pudiendo requerirse la comparacin entre especies o cultivares diferentes o entre diferentes momentos del da o a lo largo del ciclo del crecimiento de la misma planta o especie. Por esta razn debe adoptarse alguna base para la expresin del contenido del agua, y es precisamente aqu donde surge las dificultades. De nuevo por analoga del suelo, la base ms obvia podra ser el peso seco, expresndose el contenido del agua como porciento del peso seco. Valores tpicos sobre esta bases son alrededor de 400% para las hojas y 800% para las races. Sin embargo, el peso seco no es una base de calculo adecuada, ya que no se mantiene constante, lo que es particularmente valido para las hojas, el rgano de la planta al cual se le mide mas frecuentemente el contenido hdrico.

Manual de Prcticas de Fisiologa Vegetal Tambin se ha utilizado el peso fresco como base de calculo para el contenido de agua. Valores tpicos para caa de azcar son de alrededor de 55% para laminas, 80% para vainas, 85% para entrenudos jvenes y 80% para races. Estas bases para expresar el contenido de agua, sin embargo tiene dos desventajas: 1. Los errores debidos al cambio de peso seco se mantienen, 2. La amplitud de los cambios en el contenido de agua, especialmente los grandes, tienden a ser reducidos. Por lo tanto, el pese fresco es la base que no es mas satisfactoria que el peso fresco. El rea foliar, aunque no tan popular como el peso seco y el peso fresco, ha sido tambin usada como base para expresar el contenido de agua en las hijas. Pero esta forma de expresin tiene la desventaja de que el rea foliar no se mantiene constante cuando hay grandes cambios en el contenido de agua, disminuyendo con el decrecimiento de este, lo que puede provocar subestacin de la disminucin del contenido de agua en la hojas. Hasta el momento la base de calculo mas adecuada para expresar el contenido de agua de los tejidos de las plantas es el contenido de agua a la turgencia completa de estos. Este mtodo consiste simplemente en comparar el contenido de agua de una muestra inmediatamente despus del muestreo con la que tendra despus que la misma haya alcanzado la turgencia completa. Este procedimiento es esualgo mas trabajoso que las tcnicas previamente analizadas, ya que se requieren un numero de tres determinaciones; el peso fresco de campo, el peso fresco turgente y el peso seco. Stocker en 1928 fue el primero en usar esta base para expresar el contenido de agua. Su mtodo consisti en cortar una hoja completa, o una ramita cuando trabajaba con confieras, pesarla inmediatamente (peso freso), ponerla en un poco de agua dentro de un recipiente cerrado y dejarlo 48 horas, pesarla (peso completamente turgente) y finalmente pasarla despus de secarla en estufa 8 una

Manual de Prcticas de Fisiologa Vegetal (peso seco). Estos tres pesos se usan entonces para determinar el dficit Hdrico por la ecuacin (peso completamente turgente peso fresco) (peso completamente turgente peso seco)

DSH =

x 100

El DSH es as el agua absorbida por la hoja como porciento del contenido de agua en condiciones de turgencia completa. Fjese que en esta expresin el numerador representa la cantidad de agua de la falta al tejido foliar para estar turgente. En 1950 Weatherley hizo una importante modificacin a las tcnicas de Stocker al usar, discos de las hojas en lugar de las hojas completas que son puestas a flotar sobre aguador 24 horas a la luz difusa para que obtenga la turgencia completa. Este procedimiento en ms ventajoso ya que usa menos tejidos foliar, permite la estandarizacin del procedimiento del muestreo y permite muestrear la misma hoja en ms de una ocasin. La expresin de Weatherley para el contenido de agua difiere de la de Stocker y fue llamada turgencia relativa (TR) como se muestra en la ecuacin 2. (peso fresco peso seco) (peso completamente turgente peso seco)

CRA =

x 100

En la dcada del 60 el termino TR fue sustituido pro el Contenido Relativo del Agua (CRA). El Contenido Relativo del Agua (CRA) y el dficit de saturacin hdrica (DSH) se relaciona por la ecuacin: DSH = 100 - CRA Aunque los mtodos de los discos ha sido mas ampliamente evaluado, tanto, este como el uso de las hojas completas tiene posibles fuentes de errores. Dos errores les son comunes: 1) la absorcin desagua puede continuar aun despus que la turgencia completa se haya obtenido aparentemente y 2) el peso seco puede cambiar mientras ocurre la absorcin del agua.

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Objetivo
Determinar el Contenido relativo de agua y el dficit de saturacin hdrica en diferentes especies vegetales.

Materiales
Hojas de diferentes especies vegetales Papel aluminio Caja de cartn

Equipo y Reactivos
Balanza Analtica Perforador de papel Agua destilada Horno de Secado Cajas petri

Procedimiento
1. Debe tomar precauciones para que su muestra uniforma y representativa. Debe adems evitar que ni las hojas ni los discos tengan perdidas adicionales de agua durante el proceso inicial. Para ello en en una pequea la petri, as como conveniente antener las dentro de una bolsa de polietileno cuando no se este usando, poner los discos manipularlos lo menos posible y con la mayor celeridad. 2. Utilizando el perforador de aproximadamente de 8 mm de dimetro, obtenga 45 discos de las hojas a las que se desean determinar el CAR y el DSH. 3. Ponga cada conjunto de 15 discos en frascos de pesada limpios, secos y previamente tratados. Tpelos. 4. Determine el peso de los discos con una precisin de 0,001 g. antelo como peso fresco. 5. Pase cada conjunto de disco a una placa de petri, que contiene agua destilada y permita que estos floten libremente.

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Manual de Prcticas de Fisiologa Vegetal 6. Tape las placas y colquelas en un lugar de pobre iluminacin, preferiblemente con temperatura estable. 7. Al cabo de 4 horas extraiga los discos, colquelos sobre dos hojas de papel de fieltro y con atrs dos piezas de papel presinelos ligeramente para eliminar toda el agua superficialmente adherida. 8. Pase los discos en un frasco pesada limpio, seco y tarado y determine su peso con precisin de 0,001g. anote ese peso como peso completamente turgente 9. Coloque inmediatamente el frasco de pesada con los discos abiertos en una estufa de 85 C y squelos hasta peso obtener peso constante.

Cuestionario
1. Calcule el Dficit de Saturacin Hdrica 2. Calcule el Contenido relativo de Agua 3. Obtenga el promedio de la tres replicas 4. Compare y discuta los resultados obtenidos para las diferentes especies analizadas

Bibliografa
Azcon-Bieto , Joaqun, M., Taln. 2000. Fundamentos de Fisiologa Vegetal. Edit. Mac GrawHill Interamericana. Espaa. 522 pp. Armas-Urquiza, Roberto, E. Ortega Delgado y R. Rods Garca. 1988. Fisiologa Vegetal. Editorial Pueblo y Educacin. Cuba. 325 pp. Bidwell, R.G.S. 1979. Fisiologa Vegetal. AGT Editor. Mxico. 784pp

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MEDICION DE LA INTENSIDA DE LA TRANSPIRACIN POR EL METODO GRAVIMENTRICO. Introduccin


La perdida de agua de una planta por sus partes areas, en forma de vapor, se denomina transpiracin, la cual debe ser cuticular, lenticelar y estomtica. Esta ltima es al mas importante ya que presenta el 97% del total del agua que pierde las plantas, por ello es que al hablar de transpiracin en general se sobreentiende que es anatmica. La intensidad de la transpiracin es la cantidad de agua superficie foliar disminucin del peso de una planta completa o de sus partes. La transpiracin relativa es la relacin entre la intensidad de la transpiracin y la intensidad de evaporacin de una superficie acuosa libre similar y en las mismas condiciones. Este ndice caracteriza la capacidad de las plantas para regular la transpiracin. evaporada de la por la en un tiempo determinado y puede determinarse

Objetivo
Determinar la transpiracin vegetal bajo condiciones de ciento fuerte y sin viento.

Materiales
Ramas de difenresntes especies vegetales con 3 a 5 hojas cada una Cutter

Equipo y Reactivos
Balanza Analtica Agua destilada Cajas petri Ventilador 1 2

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Procedimiento.
Determinacin de la intensidad de la transpiracin. 1. Corte seis ramas de una planta que tenga 3 a 5 hojas. Nota: En caso de plantas con hojas muy grande, caa de azcar, maz, tabaco, etc. es posible tomar solo 1 o 2 hojas. 2. Pese cada rama hasta centsima del gramo 3. Ponga tres de los brotes en un lugar con condiciones de aire quieto y las otras donde haya una corriente proporcionada por un ventilador. 4. Al mismo tiempo ponga en las condiciones descritas en 3, sendas cajas de petri que contenga 20 ml de agua, previamente pesadas. 5. Despus de transcurridos 5 minutos, pese los brotes, as como las cajas de petri. de aire fuerte, que puede ser

Cuestionario
1. Calcule al rea foliar. 2. calcule la intensidad de la transpiracin de acuerdo a la siguiente expresin en las dos variable utilizadas: IT = Donde: IT= intensidad de la transpiracin Pi=peso inicial del brote (G) Pf= peso foliar (cm2 ) 12 =es el factor para expresar la transpiracin en el tiempo de 1 hora. Nota: en este experimento el tiempo que transcurra entre el corte de la rama y su pesada inicial, as como el tiempo que transcurra despus de su exposicin a las condiciones orientadas y su pesada final debe ser mnimo Determinacin de la transpiracin relativa. 3 Mida el dimetro de las placas de petri empleadas en a y calcule sus reas. Nota: recuerde que el rea de un circulo es: 1 3 Pi - Pf A x 12

Manual de Prcticas de Fisiologa Vegetal = Donde D es su dimetro. 4 Calcule la intensidad de vapor del agua en esta superficie libre segn la expresin; IT = Donde: IE= intensidad de evaporacin. Pi= peso de la placa inicial de la placa de petri (g) Pf= peso final de la placa de petri (g) A= area de la superficie libre de agua calculada en B-1 (cm2) 12= es el factor para expresar la transpiracin en el tiempo de 1 hora. 5.Calcule la transpiracin relativa dividiendo la intensidad de transpiracin entre la intensidad de evaporacin de la superficie libre. IxT TxE La traspiracin relativa nos expresa la delacin entre cantidad de agua TR = transpirada por una superficie foliar determinada y la cantidad que se evapora en el mismo tiempo por una superficie similar de agua libre. 6.Compare los valores de intensidad transpiratoria y transpiracin relativa obtenidas en las condiciones conclusiones. de corriente de aire fuerte y haga sus Pi - Pf A x 12 D2 4

Bibliografa
Azcon-Bieto , Joaqun, M., Taln. 2000. Fundamentos de Fisiologa Vegetal. Edit. Mac GrawHill Interamericana. Espaa. 522 pp. Armas-Urquiza, Roberto, E. Ortega Delgado y R. Rods Garca. 1988. Fisiologa Vegetal. Editorial Pueblo y Educacin. Cuba. 325 pp. Bidwell, R.G.S. 1979. Fisiologa Vegetal. AGT Editor. Mxico. 784pp

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EL ASCENSO DEL AGUA A LAS PLANTAS Introduccin


Desde que se inicia el procesos de germinacin de las semillas, se establece un continuo de agua entre el suelo, el sistema capilar de las plantas (tejido vascular) y atmsfera. Este continuo es dinmico y sigue un patrn parecido al de fuente y demanda , en donde el suelo es la fuente principal y la atmsfera, la demanda de agua El movimiento de agua a travs de estos tres sistemas (suelo-plantaatmsfera), obedece a los planteamientos de la segunda ley de la termodinmica, la cual establece que el agua siempre se desplazara hacia debajo de las colinas, es decir, de una regin en donde tiene una gran energa potencial a otra regin de menor energa potencial, provocando una disminucin de energa potencial. Por tanto, la energa potencial de agua en el suelo y alrededor de las races, es mayor que la energa potencial en las hojas y en el aire. Para evitar hablar de energa potencial, los fisilogos vegetales hacen referencia al concepto de potencial de agua expresado con la letra griega psi (). De tal manera que ahora el flujo de agua se llevara a cabo hacia debajo de un gradiente de potencial de agua. Es importante aclarar que un gradiente de potencial de agua existe siempre y cuando el potencial de agua en un punto es diferente del potencial de agua de potro punto. El potencial de agua es un concepto termodinmico relacionado al potencial qumico del agua y, a su vez, este relacionado ala energa libre del agua. Las diferencias de potencial de agua (A) determinan el movimiento del agua en el sentido: suelo-planta-atmsfera, aunado a las fuerzas de cohesin de las molculas de agua, las cuales pueden soportar una fuerza de tensin hasta de 350 barias provocada por la continua evaporacin del agua en las hojas y permiten que las columnas de agua en el sistema vascular no se rompan.

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Objetivo
Demostrar que el ascensos de agua en las plantas de puede explicar en la misma manera que el movimiento de agua en un sistema fsico.

Materiales
Manguera capilar de 0.1mm de dimetro Copa porosa (esta puede ser de barro o parecida a las que se usan en las peceras). Regla graduada Plumn para vidrio

Equipo y Reactivos
Soporte universal Probeta Agua destilada

Procedimiento
1. Arme su dispositivo como se indica en la figura 1. Pegue la copa porosa a la manguera capilar del largo que desee. Compruebe que forma un continuo, sumergiendo la parte libre de la manguera en agua y succionando por la copa porosa. 2. Despus, coloque la parte libre dentro de la probeta graduada y la parte libre de la copa porosa sostngala tan alto como sea posible con las pinzas del soporte. 3. Llene la probeta con agua, la columna de la manguera y la copa porosa por succin. Una vez logrado esto, marque el nivel del agua en diferentes intervalos (por ejemplo, cada dos o tres horas). 4. Si desea, cree condiciones extremas para favorecer el desprendimiento mas rpido de molculas de agua de la copa porosa, sea mediante un ventilador o incrementando la temperatura del lugar. 5. Anote la velocidad con que el agua es absorbida y desprenda. Fije condiciones extremas con el fije saber si es posible romper la columna de agua. 1 6

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Figura 1.- Dispositivo para demostrar el ascenso del agua en las plantas

Cuestionario
1. Elabore grficos con datos que muestren la perdida de agua por la copa porosa, debido a los diferentes tratamientos que haya establecido. 2. Discuta los resultados obtenidos en estos graficos

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Bibliografa
Azcon-Bieto , Joaqun, M., Taln. 2000. Fundamentos de Fisiologa Vegetal. Edit. Mac GrawHill Interamericana. Espaa. 522 pp. Armas-Urquiza, Roberto, E. Ortega Delgado y R. Rods Garca. 1988. Fisiologa Vegetal. Editorial Pueblo y Educacin. Cuba. 325 pp. Bidwell, R.G.S. 1979. Fisiologa Vegetal. AGT Editor. Mxico. 784

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