UNIVERSIDAD NACIONAL DE LA RIOJA DEPARTAMENTO ACADMICO DE CIENCIAS APLICADAS A LA PRODUCCIN AL AMBIENTE Y EL URBANISMO.

CARRERA: INGENIERA AGRO INDUSTRIAL INGENIERIA EN ALIMENTOS CTEDRA: MICROBIOLOGIA INDUSTRIAL PROF. TITULAR : ING. SERGIO MANUEL MORENO PROF. ADJ. : ING. VIVIANA NOEMI MALDONADO AO 2010 2 CUATRIMESTRE TRABAJO PRACTICO N 1 PREPARACION DE MATERIAL DE LABORATORIO DE MICROBIOLOGIA Objetivo principal: Que el alumno tome contacto con el material y aprenda las tcnicas bsicas de preparacin del mismo, as como tambin del medio de cultivo y esterilizacin. Objetivos secundarios. Adquirir experiencia en el manejo de equipos de esterilizacin y aplicar mtodos de desinfeccin y esterilizacin empleando distintos agentes fsicos Preparacin y fraccionamiento de caldo y agar comnmente utilizados en un laboratorio de microbiologa. Esterilizacin de caldo y agar por autoclave. Preparacin y esterilizacin de material de vidrio por estufa.

Materiales: Autoclave Estufa Algodn Probetas Vaso de Precipitados Tijera Hilo Lonero Papel de envolver blanco Mechero Erlenmeyers Pipetas Pipetero Tubo de cultivo Cajas de Petry Marcador indeleble Agua destilada Medios de cultivo liquido y slido. Preparacin de pipetas: - Tomar al menos 15 pipetas limpias (10 de 1 2 ml y 5 de 10 5 ml). - Colocares un trozo de algodn en el extremo superior con la ayuda de un alambre de forma tal que no quede muy apretado ni tampoco suelto. - Colocarlas en un pipetero vaco. - Rotular el pipetero indicando volumen de las pipetas y fecha. - Colocar la tapa del pipetero dejando los orificios abiertos 3

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Preparacin de Cajas de Petry - Tomar una caja de petry y colocarla sobre el papel para envolver - Envolver segn la tcnica que el docente explicar - Llevar a estufa de esterilizacin Preparacin de frascos - Tomar un frascos y envolver con la ayuda de un hilo la boca con la tapa puesta - Envolver el frasco as tapado segn la tcnica que el docente explicar - Llevar a estufa de esterilizacin. Preparacin de medios de cultivo. - Leer atentamente la formula de los medios y calcular la cantidad de medio necesario para preparar 250 ml. - Pesar en balanza digital en un baso de precipitado - Agregar la cantidad de agua necesaria - Si es necesario llevar a mechero hasta disolucin - Medir pH. - Fraccionar en tubos de cultivo 10 ml de medio liquido y 10 ml de medio slido. - Acondicionar para su esterilizacin en auto clave (20min. 121 C) - Guardar en heladera hasta su utilizacin. MTODOS DE ESTERILIZACIN Calor hmedo (autoclave) Procedimiento Verificar el nivel de agua del autoclave asegurando que el mismo se encuentre a la altura de la tapa de la base. Si fuera necesario reponer el agua con agua destilada. Verificar que la junta est en buenas condiciones, sin roturas ni grietas. Ante la posibilidad de un mal cierre de la misma proceder a su reemplazo. Colocar la carga a esterilizar o descontaminar dentro del autoclave en forma ordenada y en recipientes de forma tal que ningn objeto quede suelto dentro de la misma y dejando un espacio no menor a 5 centmetros entre dichos elementos y el borde superior del autoclave. Colocar en el interior de la carga un control trmico de esterilizacin (ya sea qumico y/o biolgico). Ubicar los controles en aquellos lugares donde considere ms difcil el acceso al vapor. Cerrar la tapa superior del autoclave y ajustar las mancuernas con las manos y de a pares enfrentados. Nota: No ajustar las mancuernas del autoclave empleando objetos como palos, caos, etc. La tapa est diseada para ser cerrada con la fuerza de las manos. Verificar que la espita est abierta. En caso contrario abrirla.

TRABAJO PRACTICO N 1

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Abrir la llave de paso de gas y encender el mechero. Regular la entrada de aire para que la llama del mechero sea mxima controlando que la totalidad del mismo est encendido. Cuando de la boca de la espita se observe la salida de vapor en forma continua, proceder a cerrar la espita. Una vez alcanzada la presin de trabajo (1,2atm, 121C) regular la llave de gas de manera tal que la presin se mantenga en dicho valor. Mantener a temperatura y presin constantes durante 15 minutos si se trata de medios de cultivo y 30 minutos si se trata de material de vidrio o decontaminacin. Verificar peridicamente que se mantengan dichas condiciones. Transcurridos los el tiempo indicado proceder a cerrar la llave de gas. Una vez que la presin halla alcanzado el valor 0 atm. proceder a abrir la espita permitiendo que se igualen las presiones interior y exterior. Colocarse los guantes de amianto. Liberar las mancuernas y proceder a abrir la tapa del autoclave, cuidando alejar el rostro de la boca del autoclave. Verificar se disponga de lugar para descargar el contenido del autoclave. Retirar los elementos del interior del autoclave. Si se hubieran derramado elementos en el interior del autoclave, proceder a su vaciado y limpieza utilizando agua, detergente y esponja. Colocar la tapa de manera tal que cubra la boca del autoclave. Calor seco (Estufa de esterilizacin) 1- Preparacin del material a hornear. 2- Carga del horno. 3- Control hasta llegar a la temperatura de esterilizacin. 4- Control del tiempo de esterilizacin. 5- Apagado, enfriado y apertura del horno. Se esterilizarn materiales que no puedan ser autoclavados y/o que resistan altas temperaturas. Incineracin por llama Flameado de la boca de botellas, frascos y tubos y en la esterilizacin y decontaminacin del ansa que se emplea para transferir cultivos bacterianos.

TRABAJO PRACTICO N 1