INFORME DE INDUSTRIA DE EXTRACTOS

TEMA: REPORTE DEL SCREENING FITOQUIMICO ESPECIES VEGETALES UTILZADAS: CHOCHO CLASIFICACION CIENTIFICA: Reino: Plantae Divisin: Magnoliophyta Clase: Magnoliopsida Orden: Fabales Familia: Fabaceae Gnero: Lupinus Especie: L. mutabilis El tarwi, chocho o lupino (Lupinus mutabilis) es una leguminosa originaria de los Andes de Bolivia, Ecuador y del Per. Tiene relevancia en la gastronoma de estos pases desde la poca preincaica. Su alto contenido de protenas, mayor que el de la soja, lo hacen una planta de inters para la nutricin humana y animal. Los alcaloides (espartena, lupinina, lupanidina, etc) se emplean para controlar ectoparsitos y parsitos intestinales de los animales. En estado de floracin, la planta se incorpora a la tierra como abono verde, con buenos resultados mejorando la cantidad de materia orgnica, estructura y retencin de humedad del suelo. Los residuos de la cosecha (tallos secos) se usan como combustible por su gran cantidad de celulosa que proporciona un buen poder calorfico. SBILA CLASIFICACION CIENTIFICA Reino: Plantae Subreino: Tracheobionta Divisin: Magnoliophyta Clase: Liliopsida Subclase: Liliidae Orden: Asparagales

Familia: Asphodelaceae Gnero: Aloe Conocida como Aloe en otras partes del mundo, la sbila es una planta de cultivo fcil y de crecimiento rpido. El gel de la sbila se obtiene de la parte de adentro de las hojas a la que hay que retirara la cascara o piel de la hoja para que se desprenda un tejido gelatinoso de grandes propiedades medicinales. Algunas especies, Aloe maculata, Aloe arborescens y en especial Aloe vera, se utilizan en medicina alternativa y como botiqun domstico de primeros auxilios. Tanto la pulpa transparente interior como la resina amarilla exudada al cortar una hoja se usa externamente para aliviar dolencias de piel. El gel que se encuentra en las hojas se usa para calmar quemaduras menores, heridas y diversas afecciones cutneas. Su efecto calmante es casi inmediato, adems de aplicar sobre las heridas una capa que se supone reduce los cambios producidos por cualquier infeccin. CIPRS

CLASIFICACION CIENTIFICA Reino: Plantae Divisin: Pinophyta Clase: Pinopsida Orden: Pinales Familia: Cupressaceae Gnero: Cupressus

El ciprs, nombre comn del gnero Cupressus, es un rbol de zonas clidas o templadas, de crecimiento rpido, que puede alcanzar los 20 m de altura con un dimetro aproximado de unos 60 cm. Es una confera de hojas perennes, de la familia de las cupresceas y pertenece al grupo de las gimnospermas. Crece naturalmente en cualquier parte del mundo, con las temperaturas y suelos adecuados, pero es cultivado comercialmente en frica oriental, Sudfrica y Nueva Zelanda. Muchas de las especies se cultivan como rbol ornamental en parques y jardines. Su madera es de color pardo amarillento claro, de textura fina y, generalmente, de grano recto; no es resinosa y suele desprenderse de ella un aroma similar al del cedro. Se la

suele utilizar para la construccin de cajas, y las mejores selecciones de ella pueden utilizarse tambin en tablas decorativas, pilotes, tornera, chapas de guitarras. MATERIALES Y EQUIPOS Embudo Buchner Baln aforado de 500 ml Capsula de porcelana Tubos de ensayo Pipeta Probeta Matraz Erlenmeyer de 500 ml Vaso de precipitacin Soporte universal Pinzas Cocineta elctrica Olla Embudo Papel filtro Balanza Tijeras Centrifuga Embudo de separacin Agitador de vidrio

REACTIVOS Agua destilada Alcohol industrial al 80% HCL 2N

NaCl Solucin Reactivo de Mayer Solucin Reactivo de Wagner NH4OH al 1% Cloroformo Droga saponnica (sbila) Solucin fisiolgica Sangre fresca ter de petrleo n-propanol Solucin de gelatina al 1% Reactivo gelatina-cloruro Solucin Reactivo FeCl3 Benceno Solucin Reactivo amoniaco KOH O,5N H2O2 diluido Acido actico glacial

PROCEDIMIENTO PREPARACION DEL EXTRACTO TOTAL 1. Coloque 100 gr de material vegetal o droga cruda, desecado y molido, en un baln de 500ml. 2. 3. Aada 300 ml, de etanol al 80% o metanol al 80% Caliente por una hora, al bdm o en camisa elctrica.

4. Deje reposar a temperatura ambiente. Filtre a travs de embudo buchner, recibiendo el filtrado en una fiola de 500 ml.

5. Al baln original, agregue unos 50 ml del solvente usado, rtelo para mezclar bien y extraer los restos del extracto y pase su contenido de nuevo por el buchner. 6. Mida el volumen total obtenido. Calcule la concentracin, esto es, los gramos de droga cruda por cada mililitro de extracto.

SCREENING PARA ALCALOIDES MUESTRA: CHOCHO 1. Preparacin de la muestra:

Coloque un volumen de 25 ml del extracto total equivalente a 50 gr de material vegetal, en una cpsula de porcelana y evapore bajo campana, hasta una consistencia viscosa. 2. Test Preliminar:

2a) Aada 5 ml de HCL 2N al residuo de la evaporacin anterior. Caliente agitando, al bdm por 5 min. 2b) Retire la cpsula del bdm. Enfrela a temperatura ambiente.

2c) Aada cerca de 0,5 gr de cloruro de sodio en polvo; agite y filtre; divida el filtrado en dos tubos diferentes. 2d) i. ii. iii. A cada tubo aada gotas de S.R. de Mayer. Observe y califique de esta manera: Opacidad o suave turbidez: (+) Turbidez definida, pero sin floculacin: (++) Precipitado coposo o floculacin coposa: (+++)

2e) Al segundo tubo aada gotas de S.R. de Wagner y observe los resultados. Si no hay precipitado, floculacin o turbidez en cualquiera de los tubos, se asume la ausencia de alcaloides. Si el resultado de la reaccin puede traducirse en escaso (+), moderado (++) o abundante (+++), se concluye afirmativamente la presencia de alcaloides. 3. 3a) En una segunda porcin del extracto alcohlico entero: Repita los pasos desde 2a hasta 2c.

3b) Al filtrado aada suficiente NH4OH al 28%, hasta alcalinidad evidente; o tambin solucin de NaOH al 1% hasta alcanzar pH 8-9. 3c) Transfiera la solucin alcalina a un embudo de separacin pequeo y extraiga dos veces con porciones de cloroformo de 5ml c/u. Combine ambos extractos clorofrmicos y remueva el cloroformo al bdm bajo campana.

3d) Al residuo aada 2,5 ml de HCL 2N y agite al bdm por unos minutos. Filtre y divida el contenido en dos tubos pequeos, permitiendo que se enfren a temperatura ambiente. 3e) Repita los pasos 2d y 2e como se han descrito. Si se estima en cualquiera de los tubos resultados (++), (+++), la presencia de alcaloides con nitrgeno primario, secundario o terciario es positiva. 4. Test para Alcaloides Cuaternarios y/o Amino-xidos Bases:

Las bases cuaternarias y/o amino-xidos presentes, se encontraran en el extracto acuoso alcalino que permanece en el embudo de separacin utilizado en el paso 3c. 4a) Transfiera esta solucin a un beaker pequeo y acidifique suficientemente con HCL 2N gota a gota, con agitacin. Filtre o si la solucin no es clara, centrifguela por 15 minutos. 4b) El extracto clarificado obtenido en el paso anterior, divdalo en dos porciones iguales en sendos tubos de ensayo y agregue S.R. de Mayer a uno y S.R. de Wagner al otro. Observe los resultados tal como lo hizo en los pasos 2d y 2e. 4c) Para considerar si estamos en presencia de bases cuaternarias o bases aminoxidos, debe observarse la reaccin en ambos tubos y ver si se puede calificar el test como (++) o (+++). Debe despreciarse un resultado de (+), ya que puede provenir de una extraccin incompleta de bases primarias, secundarias o terciarias en el paso 3c.

SAPONINAS MUESTRA: CHOCHO 1. El Test de la Espuma:

1a) 100 mg de la muestra seca se colocan en un tubo de ensayo seco y limpio. En otro tubo se coloca un control de 1 ml de una solucin de preparado con 100 mg de droga saponnica conocida (por ejemplo Quillaja saponaria). 1b) Aada 10 ml de agua destilada a cada tubo, tpelos y agtelos vigorosamente por 0,5 min; permita que los tubos reposen en posicin vertical por media hora.

1c) Observe si se ha formado espuma en una zona de 3 cm por encima de la superficie del liquido. Si persiste despus de 30 minutos se presume la presencia de saponinas. 2. 2a) 2b) 2c) ml. 2d) Test de la Hemolisis: Se prepararan 600 ml de solucin fisiolgica. Se toman 20 ml de sangre fresca y se lavan con 100 ml de la solucin fisiolgica. Centrifugue por 5 minutos, deseche el sobrenadante y vuelva a lavar con otros 100 Suspenda los glbulos rojos en los 400 ml restantes.

2e) 1 ml del extracto alcohlico total obtenido anteriormente, se mezcla con 10 ml de la suspensin preparada en 2d. Djese en reposo por 5 min y luego centrifugue por igual periodo de tiempo. Si el lquido sobrenadante queda rojo, indica reaccin positiva.

FLAVONOIDES Y LEUCOANTOCIANINAS MUESTRA: CIPRES 1. Preparacin del Extracto:

1a) Evapore unos 30 ml del extracto alcohlico entero, hasta sequedad, al bdm bajo campana. 1b) Retire la cpsula y permita que se enfre.

1c) Extraiga el residuo con 15 ml de ter de petrleo y filtre. Repita con volmenes adicionales de solvente, hasta que las ltimas porciones sean incoloras; deseche los extractos etreos contentivos de esteroles e impurezas (resinas, alquitranes, clorofilas, etc.). 1d) Disuelva el residuo en 30 ml de etanol al 80% y filtre. Ponga 2 ml del filtrado en cada uno de tres tubos de ensayo. El tubo No 1 sirve de control. 2. Test de las Leucoantocianinas:

2a) Al tubo No 3, aada 0,5 ml de HCl concentrado y caliente al bdm por 5 min. Un color rojo violceo es indicador de la presencia de leucoantocianinas. Si ste no aparece inmediatamente (su formacin puede ser lenta) deje reposar la solucin hasta por una hora. 3. 4a) Otra Tcnica: Ponga 100 mg de droga cruda en un tubo de ensayo.

4b) Cubra la muestra con suficiente HCl 2N en n-propanol, permitiendo que se digiera por unos 30 minutos. 4c) observe los cambios de color. Un intenso rojo o violeta indican positividad de la reaccin.

TANINOS Y POLIFENOLES MUESTRA: CIPRES 1. Procedimiento:

1a) Evapore un volumen de extracto etanlico total equivalente a 10 gr del material vegetal, hasta sequedad al bdm. 1b) agregue 25 ml de agua destilada, calentando el residuo y mezclando bien; deje luego que se enfre espontneamente. Aada 4 gotas de solucin de NaCl al 10% de modo de salificar cualquier compuesto no tnico, y por consiguiente eliminar la posibilidad de test falso-positivo. 1c) Filtre la solucin o suspensin resultante y coloque 3 ml de filtrado en cada uno de 4 tubos de ensayo. 1d) i. A cada tubo agregue el reactivo como se especifica: El tubo No 1 sirve de control.

ii. Al tubo No 2 agregue 5 gotas de solucin de gelatina al 1%, observe la posible formacin de precipitado. iii. Al tubo No 3, aada 5 gotas del reactivo gelatina-cloruro (gelatina al 1% + NaCl al 10%); observe si hay precipitacin. iv. Al tubo No 4, aada 4 gotas de S.R. FeCl3 y observe el color o precipitado producido en la solucin. 2. Interpretacin de los Resultados:

2a) Si no hay reaccin con cloruro frrico, los compuestos fenlicos y taninos estn ausentes. 2b) Si no hay precipitacin (test de la gelatina-cloruro, negativo) pero se producen coloraciones despus de la adicin de cloruro frrico, se concluye que no hay taninos presentes y que los cambios de color se deben a la presencia de otros tipos de constituyentes de naturaleza fenlica.

2c) si despus de aadido el cloruro frrico, se producen coloraciones verde-azulada o verde-negruzco (asumiendo que se noto precipitacin despus de hacerse el test de la gelatina-cloruro), indica presencia de taninos de tipo catecol. 2d) Si despus de la adicin de cloruro frrico (asumiendo que se not precipitacin posteriormente al test de la gelatina-cloruro) aparece un color azul-oscuro, denota la presencia de taninos tipo pirogalol.

ANTRAQUINONAS MUESTRA: CIPRES 1. Test de Borntrger:

1a) Evapore el equivalente de 1 gr del extracto total, hasta sequedad utilizando bdm, bajo campana. 1b) El residuo se retoma con 30 ml de agua destilada y se filtra.

1c) Agite el filtrado con 10 ml de benceno en un embudo de separacin y permita la separacin de las capas. 1d) transfiera la capa bencnica a un tubo de ensayo y agregue 5 ml de S.R. amonaco y agite. 1e) observe en la capa alcalina el color rojo, indicador de la presencia de antraquinonas. 2. Test de Borntrger modificado:

2a) caliente 0,3 gr del material vegetal con 10 ml de KOH 0,5N y 1 ml de perxido de hidrgeno diluido, por 10 minutos. 2b) enfre la mezcla y filtre, aada unas 10 gotas de acido actico glacial, suficiente para acidificar. 2c) Esta solucin se extrae con 10 ml de benceno en un embudo de separacin.

2d) A una porcin de la capa bencnica se le aaden 2 a 3 ml de S.R. de amonaco y se mezcla. 2e) Un color rojo o rosado en la capa orgnica indica, la presencia de antraquinonas.

REGISTRO DE RESULTADOS OBTENIDOS: Los resultados obtenidos con el screening fitoqumico son tabulados de acuerdo a la siguiente tabla: REPORTE DEL SCREENING FITOQUMICO

NOMBRE DE LA ENSAYO MUESTRA Chocho Alcaloides

EXTRACTO ALCOHOLICO (++)

RESULTADOS S.R. Mayer: Turbidez definida, pero sin floculacin. S.R. Wagner: moderado (++) Presencia de bases cuaternarias Reaccin positiva No hay presencia Presencia de taninos tipo catecol Presencia de antraquinonas

Chocho Chocho Ciprs Ciprs Sbila

Alcaloides cuaternarios Saponinas Leucoantocianinas Taninos y polifenoles Antraquinonas

(++) (+++) ----Verde-negruzco Color rosado