Caractersticas de las radiaciones UV Llamamos radiaciones ultravioleta (UV) al conjunto de radiaciones del espectro electromagntico con longitudes de onda

menores que la radiacin visible (luz), desde los 400 hasta los 150 nm. Se suelen diferenciar tres bandas de radiacin UV: UV-A, UV-B y UV-C. UV-A.- Banda de los 320 a los 400 nm. Es la ms cercana al espectro visible y no es absorbida por el ozono. UV-B.- Banda de los 280 a los 320 nm. Es absorbida casi totalmente por el ozono, aunque algunos rayos de este tipo llegan a la superficie de la Tierra. Es un tipo de radiacin daina, especialmente para el ADN. Provoca melanoma y otros tipos de cncer de piel. Tambin puede estar relacionada, aunque esto no es tan seguro, con daos en algunos materiales, cosechas y formas de vida marinas. UV-C.- Banda de las radiaciones UV menores de 280 nm.. Este tipo de radiacin es extremdamente peligroso, pero es absorbido completamente por el ozono y el oxgeno.Subir al comienzo de la pgina Radiacin que llega a la superficie El oxgeno y el ozono estratosfricos absorben entre el 97 y el 99% de la radiaciones UV de entre 150 y 300 nm, procedentes del sol. Efectos para la salud y los seres vivos de las radiaciones UV-B Daos genticos.- La radiacin UV-B interfiere con los enlaces del ADN daando la molcula. Muchos de estos errores son reparados por los sistemas enzimticos de la clula pero algunas mutaciones perviven y pueden producir cnceres, especialmente de piel. El 90% de los cnceres de piel se atribuyen a los rayos UV-B y se supone que una disminucin en la capa de ozono de un 1% podra incidir en aumentos de un 4 a un 6% de distintos tipos de cncer de piel, aunque esto no est tan claro en el ms maligno de todos: el melanoma, cuya relacin con exposiciones cortas pero intensas a los rayos UV parece notoria, aunque poco comprendida y puede llegar a manifestarse hasta 20 aos despus de la sobreexposicin al sol!. Daos en los ojos.- La exposicin a dosis altas de rayos UV puede daar los ojos, especialmente la crnea que absorbe muy fcil estas radiaciones. A veces se producen cegueras temporales y la exposicin crnica se asocia con mayor facilidad de desarrollar cataratas. Daos a la vida marina.- Una de las mayores preocupaciones derivadas de la formacin del agujero de ozono de la Antrtida ha sido ver la influencia en el plancton marino del incremento de rayos UV en los mares de la zona. Los organismos del plancton se concentran en la capa de unos 2 metros prxima a la superficie ocenica y son fundamentales en la cadena trfica. Algunos estudios han encontrado descensos en su productividad de entre el 6 y el 12% en las 10 a 12 semanas que coinciden con el agujero de ozono, lo que supone un descenso medio del 2 o 4%, cantidad detectable, aunque no catastrfica todava. Subir al comienzo de la pgina Los fotoproductos generados por la luz UV en el ADN derivan principalmente de alteraciones en las bases pirimidnicas (citosina, timina): a) dmeros de pirimidina (anillo ciclobutano)

b) c)

fotoproducto de la endospora (5-timinil-5,6-dihidrotimina) hidratos de pirimidina

Los dmeros de pirimidina son los fotoproductos ms importantes en las clulas vegetativas bacterianas. El principal es el dmero de timina (T-T), aunque tambin se producen T-C y C-C. Como se puede observar, se trata de aductos (uniones) entre dos pirimidinas adyacentes en la misma hebra de ADN, mediante la creacin de un anillo de ciclobutano. Su efecto principal es la distorsin local de la configuracin de la doble hlice, que interfiere en el normal emparejamiento de bases complementarias; ello, a su vez, provoca una interferencia en los procesos de replicacin y transcripcin, y secundariamente en el crecimiento y la respiracin. A dosis muy altas de rayos UV se forman tambin dmeros entre pirimidinas de las dos cadenas, es decir, se provocan entrecruzamientos de las dos hebras que igualmente afectan a la replicacin y a la transcripcin, aunque este tipo de daos reviste menos significacin biolgica. El fotoproducto de la espora es la 5-timinil-5,6-dihidrotimina. Como vimos en el captulo 9, se forma en la endospora bacteriana debido al alto grado de deshidratacin, pudiendo ejercer igualmente efectos inactivantes. Los hidratos de pirimidina (como la 6-hidroxi-5,6-dihidrotimina) se forman a altas dosis de luz UV. Tienen efecto mutagnico (no letal), favoreciendo la aparicin de transiciones T=A a CG. 5.3.2 MECANISMOS DE REPARACION DE LOS FOTOPRODUCTOS Debido al carcter esencial del ADN como molcula central informativa de los seres vivos, la evolucin ha desarrollado una serie de mecanismos capacitados para enfrentarse con los posibles daos ocasionados por la luz ultravioleta. Los principales mecanismos hallados en bacterias se pueden agrupar as: 1) a) b) 2) a) b) Mecanismos prerreplicativos: reparacin fotoenzimtica o fotorreactivacin, que permite la reparacin directa del dao en s reparacin por escisin y resntesis Mecanismos posreplicativos: reparacin por recombinacin reparacin inducible de emergencia (SOS)

A) Reparacin fotoenzimtica Se debe a la actuacin de una enzima denominada fotoliasa o enzima fotorreactivante, que muchas bacterias sintetizan de manera constitutiva. Las fotoliasas reparan directamente los dmeros de

pirimidina, en una reaccin que requiere luz visible de 300-500 nm de longitud de onda (luz azul). Estas enzimas poseen dos grupos prostticos coloreados (cromforos): bullet flavina reducida (FADH2) bullet una pterina. Mecanismo 1) La primera fase del mecanismo es independiente de la luz. La fotoliasa reconoce el dmero de pirimidina, y se une a l, formando un complejo enzima-sustrato [E-S]. 2) La flavina reducida (FADH2) de la fotoliasa, en presencia de luz (l=300-500), se excita, y dona electrones al anillo de ciclobutano del dmero de pirimidina, rompindolo, y regenerando las dos pirimidinas sin alterar. Aunque se sabe que el segundo cromforo (la pterina) favorece la reparacin, no est claro cul es su papel exacto. No todas las bacterias tienen enzimas fotorreactivantes, pero en cambio la fotorreparacin est muy extendida entre eucariotas. B) Reparacin por escisin-resntesis La distorsin en la doble hlice provocada por el dmero es reconocida por un complejo proteico con actividad de endonucleasa correctora, conocido como correndonucleasa o escinucleasa. El dao se repara indirectamente (es decir, no se acta sobre el propio fotoproducto), sino que las bases daadas se eliminan (se escinden) formando parte de un oligonucletido, y el hueco resultante se rellena por resntesis reparadora de ADN. Mecanismo: 1) Un complejo formado por dos subunidades de la protena UvrA y una de la UvrB (Uvr[A2B]) se une cerca del dmero de pirimidina, usando la energa de la hidrlisis del ATP, y merced a su actividad helicasa, desenrolla localmente la doble hlice. 2) Se une la protena UvrC, con lo que se completa el complejo Uvr[A2BC], es decir, la correndonucleasa, unido a la cadena daada del ADN, cerca del dmero. 3) La correndonucleasa realiza dos cortes en la cadena afectada por el dmero: corta el 8 enlace fosfodister a la izquierda del dmero (o sea, hacia el lado 5') respecto de la localizacin del dmero y corta el 4 o 5 enlace fosfodister a la derecha (en direccin 3' del dmero). Por lo tanto, se produce y libera un fragmento de unos 12 nucletidos de longitud, que incluye al dmero de pirimidina, al mismo tiempo que se retira la escinucleasa, que se separa en sus polipptidos constituyentes.

4) Queda, pues, un hueco de cadena sencilla en el ADN. Este hueco es ocupado ahora por la ADNpolimerasa-I y por la ADN-helicasa-II (codificada por el gen uvrD), que llevan a la sntesis de nuevo ADN para rellenar el hueco (por supuesto, en sentido 5' 3'), tomando como molde la cadena intacta, y usando como cebador (primer) el extremo 3'-OH que se haba generado en la fase anterior. 5) Finalmente, la actuacin de la ADN-ligasa sella la cadena (regeneracin del enlace fosfodister del lado 5'). C) Reparacin por recombinacin Cuando la ADN-polimerasa-III bacteriana (que es la enzima que normalmente replica el cromosoma) se encuentra, en la cadena que est usando como molde, con un dmero de pirimidina, deja de replicar esa zona, y salta unos 1000 nucletidos ms adelante para seguir la replicacin. Por lo tanto, deja un gran hueco o mella de unos 1000 nucletidos. Esta discontinuidad (llamada mella postreplicativa) se puede rellenar por el mecanismo de reparacin por recombinacin general, recurriendo a la protena RecA, que verifica una recombinacin con la hebra parental homloga intacta. Mecanismo: 1) Numerosas unidades de protena RecA recubren la zona de cadena sencilla de la mella posreplicativa, formando estructuras helicoidales. 2) La protena RecA promueve emparejamiento homlogo de la cadena sencilla a la que recubre con la doble cadena hermana intacta. 3) Se produce un intercambio recproco de cadenas.

4) El extremo 3'-OH libre de la cadena daada (que merced al intercambio recproco est ahora emparejada con la cadena complementaria procedente de la doble hlice hermana) sirve de cebador a la ADN-polimerasa-I, que sintetiza ADN nuevo usando como molde la cadena complementaria intacta del dplex. 5) Ligacin e isomerizacin espontneas, que produce la llamada estructura de Holliday, una figura en X donde hay dos sobrecruzamientos (crossing-over) que mantienen unidos entre s a los dos duplex. 6) Resolucin de los dos sobrecruzamientos por sendas roturas y religaciones, lo cual genera dos dobles hlices ininterrumpidas. Como se ve en la figura, uno de estos dplex lleva el dmero de pirimidina, y el otro es una doble cadena intacta, aunque parte de ella contien ADN de nueva sntesis. Como se puede ver, el mecanismo de reparacin por recombinacin no repara por s mismo la lesin en el ADN, pero logra reparar la mella postreplicativa, evitando que se detenga la replicacin del cromosoma. Al final del proceso el dmero como tal sigue sin reparar, pero ahora tendr una oportunidad de ser reparado por algn otro mecanismo, como el de escisin-resntesis. D) Reparacin de emergencia (SOS) propensa a error

Cuando la bacteria se somete a dosis elevadas de luz UV o a determinados agentes qumicos que daan severamente el ADN, o que interfieren seriamente con la replicacin, puede ocurrir que los sistemas de reparacin que hemos visto hasta ahora no sean suficientes para reparar todos los daos; en estas circunstancias se pone en marcha un nuevo mecanismo, que es inducible y que calificamos como de emergencia, ya que tiende a salvaguardar la viabilidad de la clula, a costa de acumular mutaciones con frecuencia elevada (y por eso lo llamamos tambin propenso a error). Descripcin del sistema en una clula normal (no sometida a daos al ADN): El gen lexA posee un nivel basal de expresin, de modo que codifica la protena LexA, que acta como represor sobre su propio gen (represin autgena), as como sobre los genes recA, uvrA, B, C, umuDC. La represin no es total, sino que se da un nivel basal de produccin de los polipptidos correspondientes a estos genes. As, por ejemplo, el nivel de protena RecA es suficiente para efectuar los procesos normales de recombinacin, y los niveles de UvrABC son suficientes para reparar pequeos daos en el ADN. Descripcin del sistema en una clula severamente daada: Una clula seriamente afectada por un agente que daa el ADN o interfiere con su replicacin poseer zonas de cromosoma con ADN de cadena sencilla (c.s.) sin reparar. Pues bien, este ADN de c.s. constituye una seal de situacin de emergencia para la protena RecA: dicha protena se une a esas regiones de c.s., de modo que adquiere una actividad proteasa muy especfica (para distinguir esta actividad, usamos la nomenclatura RecA*). La protena RecA* (activada como proteasa) induce la proteolisis del represor LexA (rompindolo entre dos aminocidos concretos hacia la mitad de la molcula). Por lo tanto, ya no hay suficiente protena LexA intacta como para seguir reprimiendo a los genes citados (recA, uvrABC, umuDC). Dichos genes (llamados genricamente genes SOS) se pueden expresar ahora a altos niveles, de modo que: bullet Aumentan los niveles de RecA, lo que conlleva un aumento de la eficiencia de la reparacin por recombinacin; bullet Aumentan los niveles de la escinucleasa (Uvr[A2BC]), lo que supone mejorar la reparacin por escisinresntesis; bullet Se expresan los genes umuDC, lo que se traduce en un aumento de la mutagnesis. Pero por qu aumenta la mutagnesis? El mecanismo exacto no est claro. Se sabe que en esta situacin de emergencia algunos dmeros de pirimidina son procesados con la intervencin de los productos de recA y de umuD y umuC, de modo que hay una sntesis de emergencia de ADN que acarrea la frecuente introduccin de bases incorrectas (es decir, es un proceso de reparacin propenso a error). De esta manera, la clula salvara su integridad en esta situacin lmite, pero a costa de adquirir frecuentes mutaciones. (Es mejor sobrevivir aunque sea con unas cuantas mutaciones a morirse!).