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ARTCULOS DE REVISIN

De las nanopartculas a los nanodispositivos

Dianney Clavijo G. MD* Gregory Garca M. MD** Dianney Melisssa Clavijo G.*** Ciro A. Casadiego T. MD**** Rafael Zamora BCH.B***** Julio R. Alarcn MD****** ngela Rodrguez*******

RESUMEN Es evidente el impacto de la nanotecnologa en la medicina. El desarrollo de nuevas herramientas para combatir microorganismos muestra lo prometedor de los avances en este campo. La fabricacin de nanodispositivos inteligentes permitira el diagnstico temprano de lesiones celulares as como acceder a teraputicas de alta efectividad y especificidad, que incluyen el control y reparacin del DNA. A la par de estos avances es necesario profundizar en la reflexin biotica de la comunidad cientfica. Palabras clave: nanotecnologa, dendrmero, nanoemulsin nanodispositivos.

nentes a escalas del orden de una milsima de millonsima de metro (10 -9 m), tamao en el cual las propiedades de los materiales cambian de manera drstica[1]. Los avances cientficos y la aplicacin en diversas reas la han convertido en una de las disciplinas donde se realiza una mayor inversin econmica. Uno de los campos ms prometedores en medicina es el referente a la investigacin en nanodispositivos, los cuales permitiran no slo un entendimiento mayor de la enfermedad como lesin a nivel celular y molecular, sino que abriran un campo novedoso en el diagnstico y la teraputica. Un nanodispositivo biolgico es una nanopartcula que colocada en el interior de una clula es capaz de emitir una

ABSTRACT It is evident the impact of the nanotechnology in the Medicine. The development of the new tools to combat microorganisms shows the promising of the advances in this field. The production of intelligent nanodevices would allow the early diagnose of the cellular lesions, as well as to consent to therapeutic of effectiveness and specificity, that include the control and repair of the DNA. At the same time of these advances it is necessary to deepen in the reflection bioethical of the scientific community. Key words: nanotecchnology, dendrimer, nanoemulsion, nanodevices.

Profesora distinguida. Coordinadora rea de Morfologa. Instituto de Ciencias Bsicas. Facultad de Medicina. Universidad del Rosario. Profesora asistente. Departamento de Morfologa. Universidad Nacional de Colombia. Instructor asistente. rea de Morfologa. Instituto de Ciencias Bsicas. Facultad de Medicina. Universidad del Rosario. Estudiante. Instituto Alberto Merani. Profesor distinguido. rea de Morfologa. Director Instituto de Ciencias Bsicas. Facultad de Medicina. Universidad del Rosario. Profesor (R) Departamento de Morfologa. Universidad Nacional de Colombia. Instructor asociado. rea de Bioqumica. Instituto de Ciencias Bsicas. Facultad de Medicina. Universidad del Rosario. Profesor distinguido. rea de Morfologa. Instituto de Ciencias Bsicas. Facultad de Medicina. Universidad del Rosario.

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La nanotecnologa trabaja modificando materiales orgnicos e inorgnicos por medio de la miniaturizacin de sus compo-

******* Educacin Continuada. Facultad de Medicina. Pontificia Universidad Javeriana.

CLAVIJO D., GARCA G., CLAVIJO D.M., CASADIEGO C.A., ZAMORA R., ALARCN J.R., RODRGUEZ A., DE LAS NANOPARTCULAS...

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seal ante cualquier cambio en el funcionamiento celular y/o ante la presencia de determinadas sustancias (partculas virales o marcadores tumorales, por ejemplo). Las nanopartculas en s mismas no son nada nuevo, su utilizacin en laboratorios se realiza desde hace aproximadamente seis aos. Las nanopartculas ms investigadas y de mayor inters en el campo mdico son los dendrmeros, similares en su tamao a muchas protenas pero ms pequeas que un virus, razn por la cual pueden adaptarse, a funcionar, adecuadamente en el interior de una clula, a diversos tipos celulares y a problemas especficos; siendo ya empleados de manera segura en animales de laboratorio[2]. Dendrmeros y tectodendrmeros La palabra dendrmero proviene de las palabras griegas dendron (rbol) y mer (segmento). Los dendrmeros son molculas polimricas esfricas compuestas por un ncleo central, por ejemplo de NH3, y capas alternantes de monmeros, generalmente cido acrlico y etilendiamina (figura 1.). La alternancia de cido acrlico y etilendiamina contina hasta que la ltima generacin deseada es construida. Las funciones tiles de la nanopartcula dependen de las molculas que se agregan a esta plataforma. Los extremos libres de las ramificaciones proveen muchos puntos de unin donde se pueden adjuntar ms molculas. Los dendrmeros ms estudiados son poliaminas hasta con 128 puntos de unin[3], sin embargo un gran nmero de molculas pueden ser usadas como ncleo central, al igual que numerosos monmeros se han usado para construir las capas. Los dendrmeros son similares a las molculas orgnicas comunes en las primeras tres generaciones de ramificaciones: pequeos, blandos, sin mucha consistencia ni estructura tridimensional especfica. Hacia la cuarta generacin de ramificaciones comienzan a ser esfricas y a adquirir una estructura tridimensional ms precisa. Hacia la quinta generacin son estructuras altamente esfricas. El Centro de Nanotecnologa Biolgica (Center for Biologic Nanotechnology -CBN-) realiz ensayos in vitro del funcionamiento de nanodispositivos basados en dendrmeros en clulas vivas y desde el ao 2000 se han llevado a cabo ensayos in vivo. Existe un archivo de componentes dendrmericos los cuales pueden utilizarse en la construccin de nanodispositivos denominados tectodendrmeros. Un tectodendrmero (figura 2) es un dispositivo cuyo ncleo central es un dendrmero, que puede o no contener un agente teraputico. Este ncleo est rodeado por dendrmeros de varios tipos, generalmente cuatro o cinco, cada uno diseado para cumplir con una funcin determinada: reconocimiento de la(s) clula(s) lesionada(s), diagnstico del estado patolgico celular, reporte de la localizacin de la clula enferma, entrega de medicamentos a la clula blanco y reporte del resultado de la teraputica administrada[2, 4-5]. Actualmente se han ensayado exitosamente cada uno de los compo-

nentes de manera individual y se est trabajando en la manera de conectar los dendrmeros para hacer del tectodendrmero un nanodispositivo teraputico inteligente. Incluso se est trabajando en aadirle un componente que pueda reconocer clulas en apoptosis. Sin embargo todava no es clara la mejor manera de ensamblar estos componentes (por medio fuerzas de Van Der Waals, inicas, covalentes o moleculares) y el radio ms conveniente de las ramificaciones a partir del ncleo central. Una vez sintetizado, un tectodendrmero tendr una superficie multifuncional que reaccionar con muchas molculas, favoreciendo la formacin de polmeros de dendrmeros bastantes largos. Suprimir la polimerizacin incontrolada es bastante difcil y por tanto un obstculo por vencer[3].

NH3

Ncleo Central

Figura 1. Esquema simplificado de un dendrmero.

Dendrmetro como unidad bsica

Imagen Sensor para determinar causa de la lesin Sensor de apoptosis Acarreo de medicamentos

Ubicacin de clulas lesionadas

Figura 2. Componentes de un tectodendrmero (nanodispositivo inteligente).

UNIVERSITAS MDICA 2005 VOL. 46 N 4

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Nanoemulsiones e infeccin Estudios con bacilos que producen infecciones severas gracias a su capacidad para generar esporas estables aun en condiciones extremas, tal como ocurre con el Bacillus antharacis y el Bacillus cereus, ha llevado a los investigadores a producir nanoemulsiones antimicrobianas[6]. Estas nanoemulsiones son una mezcla de agua en aceite, que pueden ser producidas rpidamente y se conservan estables por varios meses a temperatura ambiental (el enfriamiento causa separacin de las interfases agua/aceite). Sus componentes se encuentran en la lista de ingredientes de alimentos seguros de la FDA. Pueden ser utilizadas sobre superficies, por ejemplo, en plantas procesadoras de alimentos (teniendo la ventaja de que no son txicas ni corrosivas), en seres vivos por va tpica (descontaminacin de piel de pollo), intramuscular, subcutnea e inhalada (el aerosol puede, por ejemplo, interactuar con las esporas antes de que stas ingresen a las vas areas). A la fecha se han ensayado experimentalmente ms de cien formulaciones diferentes, ya que se requieren unas caractersticas especficas de acuerdo a un uso particular, por ejemplo, destruccin de Salmonella en alimentos contaminados. Son necesarios ms estudios para establecer los mecanismos por los cuales las nanoemulsiones son altamente bactericidas. Conociendo estos mecanismos se pueden mejorar enormemente las formulaciones. Sin embargo, la inactivacin de un rango amplio de patgenos, incluyendo bacterias, virus, esporas bacterianas y micticas, combinado con su baja toxicidad, hace que se plantee su uso como agentes descontaminantes generales antes de que el agente patgeno especfico haya sido identificado[7]. Teniendo en cuenta el avance en nanopartculas y que las clulas infectadas por un virus pueden ser identificadas por la expresin sobre su superficie de protenas virales especficas, se est trabajando en la fabricacin de dendrmeros que puedan reconocer dichas protenas y de esta manera acoplarse con la clula infectada para su adecuado manejo teraputico. La misma estrategia se aplicara a parsitos circulantes (por medio de la identificacin de protenas de superficie no humanas), as como aqullos de localizacin intracelular, como es el caso de la malaria(8,10). Se piensa que las investigaciones podrn dirigirse hacia el diseo de nanopartculas robticas que rastreen y controlen virus, bacterias y parsitos letales. Nanodispositivos y cncer Se viene trabajando desde hace cuatro aos en un nanodispositivo inteligente capaz de: Reconocer una clula cancerosa en etapa temprana (utilizando puntos cunticos y ferrofluidos como medios de contraste o seales fluorescentes).

Identificar la causa del cncer (con nanosensores utilizados como detectores de mutaciones genticas y/o alteraciones celulares especficas). Administrar una droga slo en la clula cancerosa, sin afectar las clulas vecinas sanas (magnetofluidos o ferrofluidos). Indicar el nivel del medicamento en las clulas tumorales. Reportar la tasa de clulas cancerosas destruidas.

Los avances genticos han permitido la identificacin de protenas especficas producidas por las clulas cancerosas de tal manera que es posible encontrar al menos una nica protena que pueda ser reconocida por un dendrmero en particular. Tambin han sido ensayados dendrmeros capaces de realizar las otras funciones, tanto in vitro como in vivo, incluso en clulas cancerosas humanas provenientes de tumores epidermoides de orofaringe en los cuales se aprovechado la sobreexpresin de folatos en la superficie de las clulas cancerosas, para crear dendrmeros con los receptores correspondientes[10,11]. La meta an no lograda, como ya se mencion, es ensamblar los dendrmeros en un nanodispositivo tectadendrimrico, proceso bastante complejo y lento. Avances recientes, en los cuales el dendrmero es unido a una cadena simple de DNA de 34 a 36 nucletidos, parecen facilitar la fabricacin de estos dispositivos, pues los dendrmeros tienden a autoensamblarse con dendrmeros cuyas cadenas de DNA son complementarias. Cmo funcionara un nanodispositivo? Investigaciones del CBN para la NASA, tratan de buscar la manera de monitorizar, prevenir y reparar los efectos dainos de la radiacin, propios de los viajes espaciales. Estos nanodispositivos permitiran medir el impacto biolgico de la radiacin en las clulas, lo cual es mucho ms significativo que simplemente medir la radiacin en s. Los astronautas recibiran una dosis de tectodendrmeros inertes por va intravenosa y se les colocara un pequeo dispositivo en su odo. Los tectodendrmeros estaran diseados para encajar con receptores especficos de la superficie de los linfocitos, clulas especialmente sensibles a la radiacin. Una vez en su interior, uno de los dendrmeros del nanodispositivo sera capaz de detectar las sustancias caractersticamente producidas durante la apoptosis (tales como la Caspasa tipo 3), fenmeno frecuente despus de que el linfocito ha recibido dosis altas de radiacin. Las nanopartculas estaran adicionadas con molculas que emiten una seal fluorescente al reaccionar con las sustancias producidas durante el suicidio celular: los linfocitos que comienzan a autodestruirse por altas dosis de radiacin comenzaran a brillar. El dispositivo colocado en el odo del astronauta, tendra un pequeo lser para con-

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tar las clulas que brillan segn fluye la sangre en los capilares del tmpano. Un enlace inalmbrico transmitira esta informacin al computador central de la nave para ser procesada, de tal manera que se tendra una monitorizacin continua y en tiempo real del dao causado por la radiacin. De manera similar las nanopartculas podran, en caso de que las lesiones celulares no sean muy graves, liberar las enzimas reparadoras (e incluso replicadoras) de DNA para intentar arreglar la clula y hacer que sta vuelva a funcionar normalmente, o en caso de una lesin celular muy severa, liberar enzimas que inicien la secuencia apopttica. Ya ha sido diseado un audfono con un sistema de microlser que puede contar el nmero de clulas en el torrente sanguneo, cuando pasan

por los capilares de un odo de ratn y el avance en nanodispositivos hace prever que en cinco a diez aos se contara con esta posibilidad[2,12]. Ante la perspectiva de llegar al control de la informacin gentica y por tanto a la manipulacin de las funciones y procesos celulares, es necesario profundizar en torno a los principios ticos que guiarn a los avances cientficos. Es muy fcil pasar de la noble intencin de brindar a la humanidad herramientas para combatir infecciones letales y enfermedades incurables a la idea de utilizar la nanotecnologa con fines polticos, militares y de bioterrorismo.

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