Академический Документы
Профессиональный Документы
Культура Документы
.
Copyright 2012, Instituto Brasileiro de Petrleo, Gs e Biocombustveis - IBP Este Trabalho Tcnico foi preparado para apresentao na Rio Oil & Gas Expo and Conference 2012, realizado no perodo de 17 a 20 de setembro de 2012, no Rio de Janeiro. Este Trabalho Tcnico foi selecionado para apresentao pelo Comit Tcnico do evento, seguindo as informaes contidas no trabalho completo submetido pelo(s) autor(es). Os organizadores no iro traduzir ou corr igir os textos recebidos. O material conforme, apresentado, no necessariamente reflete as opinies do Instituto Brasileiro de Petrleo, Gs e Biocombustveis, Scios e Representantes. de conhecimento e aprovao do(s) autor(es) que este Trabalho Tcnico seja publicado nos Anais da Rio Oil & Gas Expo and Conference 2012.
Resumo
Excelente fonte de biomassa, apresentando ciclo de cultivo curtssimo, as microalgas, independe de solos frteis, pois demandam de pouca gua para seu plantio. As prerrogativas supracitadas tornam o emprego da biomassa microalgal bastante vivel para produo de biodiesel. No entanto, o rompimento da parede celular da microalga essencialmente importante, pois desta maneira possvel aumentar a eficincia na extrao dos lipdeos. O referido trabalho descreve os resultados da extrao do material lipdico (ML) da microalga Monoraphidium sp, utilizando diferentes mtodos de rompimento celular, alm disso, caracterizou-se o material extrado por tcnicas espectroscpicas (FTIR e UV/Vs). A biomassa seca foi macerada com auxilio de um almofariz e pistilo, homogeneizada com uma peneira granulomtrica de 32 mesh. A extrao do ML foi realizada utilizando trs diferentes sistemas de rompimento celular. O cisalhamento foi avaliado observando a influncia da rotao sobre o valor de ML extrado, assim como, o uso acoplado do ultrassom com agitao mecnica. O fator tempo foi analisado nos seguintes intervalos: 0.5, 1, 2 e 4 horas. Os resultados evidenciaram que o aumento da rotao durante as extraes gerou maior eficincia no rompimento da parede celular da microalga, que ratificado com o aumento do ML extrado, sendo que o tempo ideal para extrao de 2 horas (14000 rpm/agitador mecnico). O uso acoplado da agitao mecnica com o ultrassom possibilitou bons rendimentos na extrao sem o uso de altas rotaes. Os dados espectroscpicos mostraram que os materiais obtidos nas extraes so basicamente cidos graxos, triacilglicerdeos e carotenoides.
Abstract
Excellent fonts of biomass have presented a very short cultivation cycle, the microalgae, without fertile soil; demand not much water for its cultivation. The prerogatives above make the use of microalgal biomass sufficiently viable for biodiesel production. However, the disruption of the cell wall of microalgae is vitally important because this is possible to increase the efficiency lipids extraction. This paper describes the results of the lipid material (LM) extraction of the microalgae Monoraphidium sp, using different methods of cell disruption, moreover, characterized the extracted material by spectroscopic techniques (FTIR and UV/Vis). The dried biomass was macerated with the aid of a mortar and pistil, homogenized with a particle size of 32 mesh sieve. The LM extraction was performed using three different systems for cell disruption. The shear strength was evaluated by observing the influence of rotation in the yield of extracted lipid fraction, as well as the use of ultrasound coupled with mechanical stirring. The factor time was analyzed at the following intervals: 0.5, 1, 2 and 4 hours. The results showed that increasing the rotation during the extraction, increase efficiency in tearing the microalgae cell walls, which is ratified with the increase of LM extracted, and optimal time for extraction is 2 hours (14000 rpm /mechanical strirrer). The use of mechanical agitation coupled with ultrasound allowed good yields in the extraction, without the use of high rotation. Spectroscopic data showed that the materials obtained in extractions are mainly fatty acids, triglycerides and carotenoids.
1. INTRODUO
Os problemas relacionados ao aquecimento global repercutem em todo planeta, aliado a est preocupao esto o uso assaz dos combustveis fosseis, pois a literatura reporta que os gases provenientes da queima destes combustveis tm relevante contribuio no agravamento do efeito estufa (AMIN, 2009). Desta maneira, a produo de biodiesel usando diferente s matrias-primas, tais como microalgas, gordura animal e leos vegetais, tem sido tentada como fontes de energia alternativa (VASUDEVAN; BRIGGS, 2008). Contudo, as microalgas aparecem atualmente como uma fonte promissora, pois apresenta grandes vantagens em relao cultura de outras oleaginosas, incluindo o crescimento de maneira exponencial, necessidade de menor rea para o cultivo e considervel percentual lipdico (AHMAD et al., 2011; LEE et al., 2010). Devido ao seu alto teor de lipdios, as microalgas constituem uma das mais promissoras fontes de biomassa. Em laboratrio, superam a produtividade dos gros de oleaginosas, produzindo leo dez vezes mais que o dend, considerada uma das oleaginosas mais ricas, com produo de 4.400 quilos por hectare. Seu cultivo no depende de solo frtil e pode ser realizado sobre reas secas, pois demandam menos gua para manuteno do que as irrigaes das lavouras (REYNOL, 2008). No entanto, o rompimento da parede celular da microalga essencialmente importante, pois desta maneira possvel aumentar a eficincia na extrao dos lipdeos. Diferentes mtodos, tais como microondas, incubadora e ultrassom so algumas das tcnicas empregadas para rompimento de parede celular (CRAVOTTO et al., 2008; VIROT et al., 2008). Diante dos aspectos ressaltados, o referido trabalho descreve os resultados da extrao do material lipdico (ML) da microalga Monoraphidium sp, utilizando diferentes mtodos de rompimento celular (agitao mecnica e cavitao), alm disso, caracterizou-se o material extrado por FTIR e UV/Vs.
2. MATERIAIS E MTODOS
2.1 Obteno das Microalgas As amostras da Monoraphidium sp foram cedidas atravs do projeto: Implementao de um planta piloto para produo de biomassa de microalgas, visando obteno de biodiesel, parceria Petrobras/CENPES-UFRN. A espcie de microalgas foi cultivada em garrafes de 20 L, durante um perodo de 4 dias, salinidade de 15% e percentual de 85% de N2 indicado no meio de cultura. 2.2 Determinao da Umidade da Biomassa O teor de umidade foi determinado por analise gravimtrica (SKOOG et al., 2009) aquecendo-se a biomassa (Synechosystis sp2), em estufa, a 100 110C, at que seu peso se mantenha inalterado. 2.3 Mtodos de Extrao do Material Lipdicos da Monoraphium sp A biomassa seca foi macerada com auxilio de um almofariz e pistilo, homogeneizada com uma peneira granulomtrica de 32 mesh. A extrao do material lipdico foi realizada com trs diferentes sistema de rompimento celular, empregando-se 300 mg de biomassa, 100 mL de n-hexano e 4 intervalos de tempo (0.5, 1, 2 e 4 horas). 2.3.1 Extrao com Agitao Mecnica O sistema de rompimento celular utilizando agitao mecnica consiste no cisalhamento proporcionado por lminas acopladas aos equipamentos. Diferentes agitaes foram utilizadas, 2000 e 14000 rpm, para o emprego das rotaes supracitadas foram utilizados um agitador mecnico e o dipersor ME-147 (Figuras 1 e 2 respectivamente).
2.3.2 Extrao com Agitao Mecnica Acoplada ao Ultrassom O agitador mecnico foi conectado ao ultrassom (freqncia 40 kHz, temporizador digital de 0-30 min, potncia de 120 Watts, modelo USC 1600, da UNIQUE) como indicado na Figura 3. Posteriormente, sulfato de sdio anidro (agente secante) foi adicionado ao material resultante. Aps filtrao, o filtrado foi levado ao evaporador rotativo, 68C, para remoo do solvente.
Figura 3. Sistema agitador mecnico acoplado ao ultrassom utilizado nas extraes do ML da Monoraphidium sp. 2.4 Clculo do Teor Lipdico e Tratamento Estatstico dos Dados As anlises foram realizadas em triplicata, com determinao de desvio padro e o teor lipdico obtido foi considerado como a mdia aritmtica e calculado de acordo com a Equao 1:
Onde: MML a massa do material lipdico extrado; MB a massa da microalga e U a umidade da amostra. As mdias dos MLs extrados por cada mtodo foram comparadas, quando necessrio, atravs do teste t segundo SKOOG et al (2009), de acordo com a Equao 2:
As condies adotadas para comparao das mdias foram 4 graus de liberdade e 95% de confiabilidade. 2.5 Caracterizao Espectroscpica do Material Lipdico da Monoraphidium sp A caracterizao espectroscpica na regio do UV/Vs foi realizada em um espectrofotmetro Evolution 60 da Thermo Scientific, atravs da dissoluo de aproximadamente 0,05 mL de leo em 3 mL no solvente (usado como extrator e tambm como branco na anlise). Foi realizada uma varredura de 200 800 nm, com intervalos de 1 nm e medidas de absorbncia de 0-10A, de 0,1A. A anlise por FTIR foi realizada em um espectrofotmetro JASCO, modelo FT/IR- 4200, empregando faixa espectral de 600 4000 cm-1, com resoluo mxima 0,5 cm-1 e 32 varreduras. A amostra foi preparada atravs da dissoluo do leo em diclorometano e, posterior, deposio do filme fino em pastilhas de KBr.
3. RESULTADOS E DISCUSSO
Os resultados evidenciaram que as extraes (vide Tabela 1) realizadas com rotao de 14000 rpm e durao de 4 horas foram as condies que possibilitaram maior obteno de material lipdico com 12,51+0,84%, no entanto importante salientar, que o teste t mostrou inexistncia, quanto a diferenas estatsticas entre os valores mdios das fraes lipdicas extradas, durante o perodo de 2 horas (11,95+0,46 %) sobre as mesmas condies, pois t obtido na comparao entre as mdias (1,02) menor que tcrtico (2,78) na situao estatsticas proposta no estudo. Em relao influncia da rotao sobre o percentual lipdico, observou-se uma variao significativa, pois os melhores resultados empregando 2000 rpm (Tabela 2) foram 5,78+0,34 % isso com 4 horas de extrao, consequentemente possvel inferir 3
Rio Oil & Gas Expo and Conference 2012 que o aumento da rotao implicou em um rompimento mais efetivo da parede celular da microalga, e que h uma relao de proporcionalidade entre a taxa de cisalhamento e a rotao aplicada pelo agitador. Tabela 1. Material lipdico (ML) extrado da microalga Monoraphidium sp empregando agitao mecnica e 14000 rpm. Tempo (h) 0,5 1 2 4 ML Extrado (%) 6,03+0,14 7,62+0,42 11,95+0,46 12,51+0,84
Tabela 2. Material lipdico (ML) extrado da microalga Monoraphidium sp utilizando agitao mecnica e 2000 rpm. Tempo (h) 0,5 1 2 4 ML Extrado (%) 4,08+0,08 4,24+0,06 5,34+0,11 5,78+0,34
O sistema de extrao utilizando o agitador mecnico (2000 rpm) acoplado ao ultrassom durante 4 horas forneceu resultado significativo (ver Tabela 3) em relao ao material lipdico obtido (11,46+0,32%), tal comportamento pode ser atribudo ao fato de existirem dois efeitos simultneos que contribuem para o rompimento da parede celular, a cavitao gerada pelas ondas sonoras do ultrassom, bem como, o cisalhamento proporcionado pelas lminas do agitador mecnico. Quando comparados estatisticamente pelo teste t, as mdias obtidas pelo sistema acoplado e o mtodo empregando 14000 rpm, apresentam t(1,98)< tcrtico (2,78), logo os resultados ratificam que no h diferena estatstica entre os valores mdios de ML extrado pelos sistemas. Tabela 3. Material lipdico (ML) extrado da microalga Monoraphidium sp empregando agitao mecnica e (2000 rpm) acoplado ao ultrassom. Tempo (h) 0,5 1 2 4 ML Extrado (%) 8.62+0,16 9,56+0,31 10,89+0,09 11,46+0,36
O comportamento quanto aos valores mdios de ML extrados da Monoraphidium sp em cada sistema de rompimento celular esto descritos no grfico abaixo:
Grfico 1. Material lipdico (ML) extrado da microalga Monoraphidium sp empregando diferentes sistemas de rompimento celular..
Rio Oil & Gas Expo and Conference 2012 Os resultados de FTIR, indicados na Figura 4, evidenciam deformao axial em 1743 cm -1 referente ao estiramento C=O (5), caracterstico de carbonila de steres. A banda na regio 3000-3600 cm-1 (2) ratifica presena de gua na amostra. Os estiramentos (3) C-H em alquenos (sp2-s) verificado em 3012 cm-1, corroborando a existncia de material insaturado. O sinal (4) em 2922 cm -1 referente banda de deformao axial C-H (sp3-s), evidenciando a presena de cadeia carbnica saturada comumente encontrada em lipdios. A regio do espectro representado por (1) mostra um overtone da carbonila de ster. Na regio digital (finger printer) do espectro ocorre absoro em 723 cm -1(6), referente deformao assimtrica de grupos metilnicos. O comportamento supracitado caracterstico de cadeias longas de hidrocarbonetos contendo interligados (-CH2-) n (SILVERSTAIN; et al .,1991).
Grfico 2. Espectro de FTIR do ML extrado da microalga. A anlise espectrofotomtrica na regio do ultravioleta fornece informaes sobre a qualidade do leo e revela seu perfil graxo. De acordo com a literatura, devido s ligaes duplas isoladas carbono-carbono presentes nos cidos graxos, os triglicerdeos foram observados em 210 nm (REDA, 2004). cidos graxos conjugados (dienos e trienos conjugados) mostraram intensa absoro na regio de 232 nm (TOLENTINO, 2008) enquanto que os pigmentos (carotenoides) apresentaram bandas de absoro em 477 nm (OGAWA et al.,2007; MORETTO; FETT, 1998).
4. CONCLUSES
Diante dos procedidos possvel inferir que o aumento da rotao nas extraes gerou maior eficincia no rompimento da parede celular da microalga, que ratificado com o aumento do material lipdico extrado, sendo que o tempo ideal para extrao de 2 horas (14000 rpm/agitador mecnico), como mostrado pelo teste t. O uso acoplado da agitao mecnica com o ultrassom possibilitou bons rendimentos na extrao sem o uso de altas rotaes. Os dados espectroscpicos mostraram que os materiais obtidos nas extraes so basicamente cidos graxos, triacilglicerdeos e carotenides.
5. AGRADECIMENTOS Ao CNPq pela bolsa de mestrado e ao CENPES/PETROBRAS pelas amostras de microalgas cedidas. 6. REFERNCIAS
AMIN S. Review on biofuel oil and gas production processes from microalgae.Energy Convers Manage 2009;50:1834 40. VASUDEVAN, P.T., Briggs, M., 2008. Biodiesel production current state of the art andchallenges. J. Ind. Microbiol. Biotechnol. 35, 421430. AHMAD, A.L; YASIN N.H. M; C.J.C. Derek, J.K. Lim, Microalgae as a sustainable energy source for biodiesel production: A review. Renewable and Sustainable Energy Reviews 15 (2011) 584593. LEE, J. Y; YOO, Chan; JUN, S. Y;AHN ,C. Y; , Hee-Mock OH; Comparison of several methods for effective lipid extraction from microalgae. Bioresource Technology 101 (2010) 575577 5
Rio Oil & Gas Expo and Conference 2012 CRAVOTTO, G., BOFFA, L., MANTEGNA, S., PEREGO, P., AVOGADRO, M., CINTAS, P., 2008. Improved extraction of vegetable oils under high-intensity ultrasound and/ormicrowaves. Ultrason. Sonochem. 15, 898902. VIROT, M., TOMAO, V., GINIES, C., VISINONI, F., CHEMAT, F., 2008. Microwave-integrated extraction of total fats and oils. J. Chromatography. A 11961197, 5764. SKOOG, D. A.; WEST, D. M.; HOLLER, F. J.; CROUCH, S. R. Umidade em amostras p. 987. In: Skoog, D. A.; West, D. M.; Holler, F. J.; Crouch, S. R. Fundamentos de Qumica Analtica. 8a ed. So Paulo: Cengage Learning, 2009.
SILVERSTEIN R. M, BASSLER G. C, MORRILL T. Spectrometric identification of organic compounds. New York: Wiley; 1991.
RENDA, S. Y. Estudo comparativo de leos vegetais submetidos a estresse trmico. 2004, Dissertao (Mestrado)Universidade Estadual de Ponta Grossa, Ponta Grossa, 2004. OGAWA, M.; MAIA, E. L.; FERNANDES, A. C.; NUNES, M. L.; OLIVEIRA, M. E. B.; FREITAS, S. T. Resduos do beneficiamento do camaro cultivado: obteno de pigmentos carotenides. Cinc. Tecnol. Aliment., Campinas, 27(2): 333-337, abr.-jun. 2007. MORETTO, E.; FETT, R. Tecnologia de leos e gorduras vegetais na indstria de alimentos. So Paulo: Livraria Varela, 1998. TOLENTINO, M. C. Avaliao da qualidade de leos vegetais sob estresse fotoxidativo e termoxidativo por espectroscopia de UV e RMN de 1H. Dissertao (Mestrado)- Universidade Estadual de Ponta Grossa, Ponta Grossa, 2004.