ENTEROB ACTRIAS

Famlia Enterobacteria ceae So constituintes da microbiota

(ou flora) intestinal. Distribuio mundial: gua, solo, ar, microbiota intestinal humana e

animal, insetos, frutas, vegetais, gros,plantas, rvores. Caractersticas :

1. So Bacilos (forma de basto) gramnegativo, retos, oxidasenegativos, no formam

esporos, no so lcoolcido resistentes.Reao da oxidase: produo da enzima

citocromooxidase, que atua na respirao aerbica transferindoel trons para o citocromo C

(oxidao). Usa-se uma fita, na qual coloca-se um pouco da cultura (raspado?) e emseguida

coloca-se um reagente. Se houver reao (mudar de cor) o resultado positivo a bactria

possui aenzima. 2 . Reduzem nitratos a nitritos (com raras excees).

3. So anaerbios facultativos (fermentadore s). Isto geralmente quer dizer que

o microorganis mo capaz defermentar no mnimo a glicose e talvez outros aucares.OBS:

As caractersticas mais importantes para a caracterizao das enterobactria

s so ser oxidasenegativa efermentadora s. 4 .Produzem um antgeno

comum de enterobactrias : AgOBactrias Gram - : membrana externa

LPS: lipdio A + Polissacardeo (antgeno O) Parte central (conservada Ag especfico

das enterobactrias ) + Parte perifrica (menos conservada O antgeno O (AgO) usado

como umamaneirad esubdividir lin hagensdifere ntes dentro d e umam e s m a espcie d

e enterobactr ia. Composio Antignica: Antgeno O polissacardeo ligado ao

lipdio AAntgeno K polissacardeo capsular Antg eno H flagelo

Sorogrupo: AgOSorotipo : AgO e AgH Escherichia coli - Em 1907 foi reconhecida como um

patgeno diarria em neonatos.Existem outras espcies do gnero Escherichia

, mas sua importncia para a microbiologia mdica irrelevante(mu ito raro serem a causa de

doenas).- A maioria das amostras parte da microbiota residente.Agentes de infeces em

humanos e animais. Espcime Clnico : material coletado no ser humano para anlise em

laboratrio. Ex: sangue, urina. - Patgenos especializado s:

Infeces intestinais E. coli dierreiognica s

Infeces urinrias E.

coli uropatognicas (em geral, estas no pertencem a microbiota residente)

- Patgenos oportunistas: septicemias, abscessos, meningites.Oc orre quando uma via de entrada para o

patgeno aberta, como por exemplo em cirurgias, transplantes, traumas,etc. - Isolamento

Meios de cultura no seletivos: espcime clnico de stios extraintestinais, normalmente

estreis (sangue,urina). agar sangue, CLED (cysteinelactose

electrolyte deficient agar)

Meios de cultura seletivosindicadores: especialmente

para a pesquisa de E. coli diarreiognica s (espcimescln icos noestreis). So

chamados indicadores por estarem associados a algum outro teste que evidencieuma caracterstica

bioqumica ou fisiolgica de microorganis mo de interes se (ex: fermen tao decarboi dratos

lactose, sorbitol). agar MacConekey, agar EMB (eosinmethylene

blue), agar MacConk ey-sorbitol

Fermentao de Carboidratos

lactose: CLED, EMB, MacConkey ausncia de fermentao de sorbitol: MacConkey-

sorbitolObserv aes:1.O sorbitol um carboidrato que produto da reduo da glicose. Neste caso, ele

utilizado para selecionar as bactrias E.coli das demais entero bactrias. CONFIRMAR .

2.
O meio de cultura CLED um meio diferencial, onde a lactose inibe a motilidade

das enterobactria s dognero Proteus (muito mvel que pode contaminar toda a

cultura), que pode fazer parte da microbiotanor mal. Este meio muito utilizado quando o

espcime clnico a urina (comum no TGU). VIROTIPOS, VARIANTES PATOLGI CAS

Caracterizao Sorolgica:Determina o dos Sorogrupos (AgO) e Sorotipos

(AgO e AgH): com o advento da biologia molecular ( mais precisa) observou-se que isso nem sempre

correto.EX: Sorogrupo O6, O111, O157 // Sorotipos O111:H2, O111:H9,

O111:H- (no tem o AgH)Aplicaes da Sorotipagem :

Valor histrico

Estudo epidemiolgic o

Interesse Diagnstico: caracterizao das cepas

diarreiognica sOBS: Exemplo de estudo epidemiolgic o- Muitos casos de diarria em

uma UTINEO. Seria um surto? Realiza-se a coleta de espcimes clnicas (fezes,sangue

 risco de bacteremia). No resultado do isolamento observa-se que em um percentual ainda grande

deneonatos a mesma bactria a causadora da diarria. A avaliao por sorotipagem nos diz se

essas bactrias so damesma linhagem (infeco hospitalar) ou no.-

Pesquisa de Marcadores de Virulncia

Toxinas, adesinas, efeitos sobre

clulas cultivadas in vitro (invaso, alteraes no citoesqueleto), efeitossobre

modelos anomais

Pesquisa direta dos genes de virulncia: sondas

de DNA ou PCR E. coli Diarreiognic asEPEC Enteropatog nica

-Causam diarria infant il e persistente (principalment e at 2 anos; pico d e0a 6 meses)-

Esto associadas desnutrio .-A infeco geralmente ocorre nas clulas do

clon e/ou leo terminal.

Virulncia: produz a leso AE (attaching and affacing)

que se processa da seguinte forma: Protenas da superfcie bacteriana:

Bfp : adeso, agregao e colonizao

Adesina timina : adeso

EspA: filamentos de superfcie A aderncia bacteriana s clulas epiteliais ocorre via

Bfp e EspA. H ento a injeo do receptor deintimina (Tir) para dentro do entercito

pela EspA, juntamente com outras molculas que promovem a despolimeriza o da actina,

o que resulta em perda das microvilosida des.As conseqncia s so: reduo da superfcie de

absoro (que se associa desnutrio), pode haverperda de eletrlitos pelo

entercito e at morte celular. -No adianta dar antibiticos porque esta bactria no

 invasiva. O uso de antibiticos pode inclusive ser nocivo por atacar a microbiota

natural, que seria um mecanismo de defesa do organismo (competio).Ocorre reduo

importante na absoro de eletrlitos e de nutrientes, e diarria moderada (2 a 3x ao dia, pouco

intensa mas PERSISTENT E). O tratamento uma reposio hidroeletroltic a.

ETEC Enterotoxig nicas -diarria aguda, aquosa e severa, sem muco ou sang

ue.-Dores abdominais e vmitos; febre ausente ou discreta.Crianas (desmame) e adultos (do

ena dos viajantes ).Doena end mica e surtos.Virulncia:

No alteram a estrutura da mucosa do intestino delgado. Genes em plasmdios:

adesinas (fatores de coloniza o) hospedeiroespecficas e

enterotoxinas termo-lbil LT e/ou termo-estvel STMecanism oToxina LT: possui 2 subunidades

Ae B1.Internaliz ada na mucosa do Intestino Delgado (fagocitose)2. A

subunidade A translocada para o citoplasma. 3.Ocorre ativao da adenilato-

ciclase: AMPc e ativao de transportado res de membrana.C onseqncias: secreo de

eletrlitos e gua para fora do entercito.To xina ST

1.
Ligao ao receptor

na membran a (agonista endgeno: guanilina mantm a homeostase intestinal).

2.

Ativao de guanilatociclase: GMPc e secreo de Cl

-

.EHEC Enterohemor rgica - Uma nova doena em 1983 dor abdominal intensa,

diarria aquosa seguida de diarria sanguinolenta (HC colite hemorrgica) surto aps a

ingesto de hambrgeres mal cozidos (carne bovina moda = maior chance decontamina o).- Cultura de

fezes: encontrou-se um sorotipo raro de E coli ( O157H7)Diarria seguida as vezes de

sndrome hemolticourmica (SHU): insuficincia renal aguda, trombocitopen ia,anemia

hemoltica, microangiopati a.- Presena de citotoxina (Shiga-like toxin: Stx) nas fezes.- STEC: E.coli

produtora de Stx- EHEC: um subgrupo de STEC que inclui conotao clnica (algumas

cepas STEC podem no ser patognicas)

Causa colite hemorrgica e SHU

Expressa Stx (codificada em um fago) inibio da sntese protica

Causa leso AEMecanismo: leso AE (aderncia ntima - perda das microvilosidad

es) e lanamento da toxina Stx no entercito.Esta toxina atinge a corrente sangunea promovendo

os efeitos sistmicos.Histopatologi a: hemorragia e edema da l mina prpria, necrose focal, infiltrado neu

troflico -colite pseudo membranosa. Tratamento: suporte renal, transfuso, nutrio

parenteral, etc = suporte geral ao doente. O uso deantibiticos ainda controverso.mais de 100

sorotipos de E. coli- surtos ou casos espordicostransmisso zoontica

o

Alimentos de origem animal (bovina)

o

Legumes e vegetais
o

Sucos de frutas
o

gua
o

Contaminao cruzadatransmisso interpessoalBo vinos so o principal reservatrio

animal de STEC/ EHEC. EIEC Enteroinvasiv a -Diarria aguda, com

muco, sangue e pus disenteriaCrianas aci ma de 2 anos e adultosBitipo: imveis,

lisinadescarboxilas e negativasVirulncia: Infectam o leo terminal e invadem

entercitos: inflamao local e necrose da mucosa Plasmdeo com genes

associados invaso Internalizao, escape do vacolo, passagem clula-clula

EAEC Enteroagrega tivaE. coli Extraintestinal incluindo uropatognic a

Amostras de cistite, pielonefrite, prostetite, bacteremia, meningite, peritonite vs

amostras isoladas decolonizao : fatores de virulncia observados com freqncia

significativam ente maior em amostras dadoena invasiva.

Adesinas e invasinas:

habilidade para aderir e invadir clulas fora do trato intestinalSideroforos: obter ferroToxinas e

proteases: destruio tecidual, estmulo resposta inflamatria. Tratamento

Apenas infeces invasivas: sepse, infeco urinria, EIEC, (EHEC??).

Gramnegativo emergente nos hospitais nos anos 1970 uso intenso de antimicrobian os

emergncia de cepas que produzem vrias betalactamases. E. coli uropatognic a (UPEC)

As infeces do trato urinrio esto entre as mais freqentes em todo mundo(aproxi madamente

150 milhes de casos anuais), sendo a Escherichia coli o principal agente

etiolgico.Dife rentes regies do trato urinrio podem ser acometidas, como a uretra, a bexiga

(cistite) e os rins (pielonefrite). _Contamina o por via ascendente ou por via descendente. _

Diferenas anatmicas normais - e . _Diferenas anatmicas durante a gestao. _Pro

blemas relacionados a formao do trato urinrio. FATORES DE VIRULNCI A EM UPEC

ADESINASA desinas fimbriaisFmbr ia tipo I O seu receptor a manose,presen te em

glicoproteinas secretadas pelo epitlio da bexiga.Fmbri a P O seu receptor a globobiose (a-

DGal (1-4) a D-Gal) que encontrado ligado a ceramida damembrana da clula epitelial

renal.TOXIN ASHEMOLISI NA A ahemolisina uma citotoxina capaz de formar poros na membrana

de diferentes clulas doorganismo, resultante em morte celular.Endoto xina (LPS-Ag O) Uma

das principais aes desta endotoxina ocorre ao estimular a produo decitocinas pr-

inflamatrias MECANISM OS DE INVASO E EVASOFmbria tipo I Atividade de invasina ?-

ANTGENO K Ao recobrir a superfcie bacteriana por uma cpsula espessa, este confere uma

proteo contraatividad e fagoctica e impede a ligao de anticorpos. PROTEINAS

FIXADORAS DE FERRO Do aUPEC a capacidade de seqestrar o ferro complexado slactoferrinas

e outras protenas (a baixa concentrao de ferro um limitador para o

desenvolvimen to bacteriano). Salmonella Infeco intestinal: diarria, febre,

dor abdominal (1 semana) Origem: freqentement e a partir de alimentos de origem animal,

gua, outro ser humano.-Ovo contaminao extrnseca e intrnseca: transmisso trans-

ovarianaAnimais de estimao (rpteis tartarugas) Surtos: carne defumada,

chocolate, contaminao posterior de le ite pasteurizad o,sorvete, maconha

Incubao: 6 a 24hs. Aps desapare cimento de sintomas, o indivduo pode permane cer como

portador por mais 3 meses. Pequena proporo de pacientes: Salmonella invade correntesangu

nea choque sptico, principalmente indivduo imunocompro metidos.

Classificao atual:

Baseado no sequenciament o de RNAr 2 espcies

S. entrica 6 subespcies e 2501 sorotipos

S. bongori (anteriormente subespcie V)

Nomenclatur a Salmonella entrica supsp. entrica

sorovar Typhimurium ou Salmonella Typhimurium Salmonella Typhi febre tifide:

infeco da corrente sangunea, em pases em desenvolvime nto febrecontnua, cefalia, sem

diarria.Trans misso: contato pessoal ou alimentos ou gua contaminados com fezes

dose infectante muito baixa (<10

3

ufc). Perodo de incubao: 1-6 semanas invaso ,

multiplicao no fgado e bao, bacteremia intensa, MOexcretado pela bile volta ao tubo

gastrointestina lSndrome semelhante: Salmonella Paratyphi A, Salmonella Paratyphi B e Salmonella

Paratyphi C.Portadores crnicos colonizao da bile.

Manifesta es clnicas:

_ Gastroenterite mais freqente. _ Bacteremia ou septicemia. _

Febre entrica. Febre tifoide _ Febre tifoide (e paratifoide) so causadas

pela S. Typhi, S. Paratyphi e mais raramente por alguns outrossorotip

os. _ Curso da doena bimodal: _ 1a fase hemocultura (+) e coprocultura

(-) com febre e constipao . _ 2a fase hemocultura (-) e coprocultura (+). _ Ocorre

mais freqentemen te em crianas do que em adultos. _ Febre

prolongada (10-14 dias). _ Dor de cabea. _ Desconforto abdominal. _ Letargia

generalizada. _ Calafrios, tontura e dor muscular so freqentemen te observados antes do

incio da febre. _ Cerca de 10% dos pacientes podem evoluir

para um quadro mais severo, inclusive com perfurao

dointestino delgado Perodo de incubao 1 a 6 semanas. _ Pode ocasionar

bacteremia intensa, com localizao do MO no fgado e bao, com (re-)ciclos

deexcreo (via bile) para o trato intestinal. _ Salmonella est comumente

presente no trato intestina l de rpteis (tartarugas, iguanas e cobras) eanfbios

(sapos, rs e salamandras). _A transmisso de Salmonelas por rpteis e

anfbios (Pet) responsvei s por algo em torno de 74.000casos/ ano deinfeco

nos EUA. _ Os alimentos mais freqentemen te implicados na disseminao

de Salmonella so os de origem animal,taisco mo ovos, leite e carnes

(frangos e bovinos). _ Estima-se que 0,01% dos ovos de galinha estejam

naturalmente contaminados por Salmonela,ori ginrios dasovotecas e

de ovodutos em galinhas de criao comercial. _ Contamina o de origem fecal

pode ocorrer tambm em decorrnc ia de rachaduras, microfissuras ouaumento da

porosidade da casca, contaminado internamente o ovo ou simplesmente permanecend

oexternament e a casca. _ Pode ainda ser fonte de contaminao primria

para outros alimentos (base para diferentes produtosalim entcios como massas,

maioneses, sorvetes, etc). Fatores de virulncia _ Adesinas _ Fimbria tipo I _ Fimbria

tipo curli (Agf = aggregative fimbrial) _ Long polar fimbriae (Lpf) _

Fmbria tipo IV _ SSPE (Sintema de secreo de proteinas efetoras) Aparato

secretor de transferncia de protenasefet oras da bactria para a clula

eucaritica hospedeira. _ ShdA (Shedding) Protena de superfcie que se liga a

fibronectina (atividade de adesina), parece estar envolvi da com a capacidade

de manter-se colonizando o ceco por longos perodos, mantendo a excreoda

bactria para o ambiente mesmo aps a fase clnica da doena (estado de portador

assintomtico ). _ Rck (Resistence to compleme nt killing) Protena de membrana

externa que interfere na formao deMAC (Membrane attack complex)

fazendo com que a salmonela resista a ao do sistema complemento . _ LPS

Pode conferir impedimento estrico a ao de defensinas e do sistema complemento

, emdecorrnci a das longas cadeias laterais. Apresenta atividade

pirognica. _ Antgeno Vi (capsula) Impede a opsonizao mediada por anticorpos,

aumentando a resistncia da bactria a ao do sistema complemento (atua como

uma evasina). _ Flagelina Estimula a secreo de IL-8

Condies ambientais afetam a capacidade invasiva dasSalmonel as

_ Nvel de O2. _ Osmol aridade. _ Estado de cresciment o bacteriano. _

pH.S. Typhimurium mais invasiva em condies de baixa concentrao

de O2 do que em situao deaerobiose.S . Typhi em baixa osmolaridade aumenta

a produo de antgeno Vi (cpsula polissacardic a), promoven do a exacerbao

do fentipo aderente e invasor. Sensibiliade a antimicrob ianos

_ Amostras de Salmonela multiresistent es tem sido observadas. _ Uso

indiscriminad oe inadequado de antimicrobian os (prescritos ou

automedica o). _ Emprego de antimicrob ianos como promotores de cresciment

o em criaes animais. _ Tratamento Emprego reservado para casos de complicao

sistmica ou em casos de febre tifide(fase aguda e de portador). _ Primeira

opo Cloranfenico l, SFM+T, ampicilina ou amoxilina. _ Segunda opo

Cefalosporin as de terceira gerao e fluoroquino nas (tambm j tem se observadoem

ergncia de cepas resistentes).

Peste Bubnica:

Yersinia pestis (enterobactria ) Vias de aquisio:

o

Penetrao pela pele

(penetrao da bactria por microfissuras e solues de continuidade)

o

Respiratria (inalao)

Hospedeiros naturais: carnvoros e roedores. Podem ser sintomticos ou no.

Vetor pulga Ciclo urbano: ces e gatos; ratos e camundongos picados por pulgas do

ciclo silvestre passam a ser hospedeiro s urbanos da bactria. Transmisso:

o

Pela pulga: penetrao na pele

o

Homem a homem (respiratria)

o

Animal doente homem (respiratria)

Shigella
Escherichia eo Shigella. Apa rentemente

parecem dois gneros bem distintos. As E. coli so caracteristica mente maisativas

bioquimicame nte, quando comparadas as shigellas, que so mais inertes. Entretanto, os

dois gneros esto estreitamente relacionadas geneticament e. Com base em estudos de

hibridao de DNA- DNA, na verdade, no representam gneros distintos.So

bacilos imveis, no fermentadore s da lactose muito parecidos com EIEC. A

manutenod esta distino ocorre alm das caracterstica s filogenticas,

devendo-se principalment ea certas peculia ridades, tais como patologias

causadas (desinteira bacilar), diferentes tipos sorolgicos, etc.

_ O gnero dividido e quatro espcies (que possuem diferentes sorotipos). _

S. dysenteriae (sorogrupo A13 sorotipos) _ S. flexneri

(sorogrupo B 6 sorotipos) _ Infecta principalment e o homem e alguns outros

primatas, entre eles o chipanz, e raramente ocorre emoutros animais. _

S. dysenteriae, S. flexneri e S. boydii so fisiologicame

nte muito prximas, j a S. sonnei soornitina descarboxilas e e b-D-

galactosidase. _ S. boydii (sorogrupo C 18 sorotipos) _

S. sonnei (sorogrupo D 1 sorotipo) Mecansmo de virulncia _ Invaso

 Protenas associadas a invaso, aparato secretor e regulao

esto codificadose m um plasmdio ( pInv) de alto peso molecular

(~220kb). _ Citotoxina STx S. dysenteriae tipo I =

Bacilo de Shiga Produz uma toxina (STx), similar a de EHEC,

com atividade citotoxica , enterotxica e neurotxica

. Esta toxina est codificada no cromossomo bacteriano. _ Enterotoxina SheT1 e

SheT2 (Shigella enterotoxin) _ So enterotox inas que apresentam capacidade

de causar acmulo de liquido, em modelo animal (alaligada de coelho), bem

como positivo para tecido ileal isolado em cmaras de Ushen. _ O locus

shet 1 est presente principalment e em S. flexneri

2a, mas pode ocorrer em outras espcies deShigella e de E. coli.

_A capacidade de produzir shet pode explicar o aparecimento

de diarria aquosa (com caracterstica stoxignicas) precedendo alguns casos

de disenteria bacilar. Patognese _ Estudos em voluntrios demonstrara m que

Shigella altamente infecciosa, bastando uma dose de 101 a102 ufc via oral

(aparentemen te apresenta grande resistncia ao suco gstrico). _ Perodo de

incubao de 12-48 horas _ Infeco de leo terminal e especialmente do clon. _

Leso histopatolgic a - Invaso e destruio da camada epitelial, com formao de

infiltradoinfla matrio e lceras. A regio do retosigmoide a mais afetada.

 Fagocitada por macrfagos, posteriorment e degradado, e a bactria, no

citoplasma, estimula a liberaode IL-1, determinando o influxo de polimorfonuc

leares (PMN). Macrfagos sofrem apoptose, bactrias so liberadas para

a superfcie basolateral dos entercitosadj acentes do colon, podendo

infectar as clulas colunares endocitose baolateral. PMN atravs do epitlio

pode causar o rompimento das tight junctions possibilidade da bactriatrans

migrar do lmem para o espao subepitelial. Mobilizar uma srie de protenas do

citoesqueleto celular principalment e actina movimento parainfectar

clulas laterais. Doena _ Formas de infeco por Shigella: _ assintomtica

ou subclnica (at 50% dos casos); _ episdios de diarria aquosa; _ disenteria

bacilar formas severas e txicas. _ Estas variaes podem

ocorrer na dependncia de: _ Natureza e tamanho do inoculo. _ Estado imune

do hospedeir o. _ Arsenal gentico da bactria. _ A disenteria bacilar causada por

S. dysenteriae caracterizada por uma diarria aquosa, febre, clicasabdom

inais e tenesmo, com emisso de fezes mucopurulent as e sanguinolenta

s. _ Outras manifestaes clnicas tambm podem estar associadas: anorexia,

nuseas, vmito, cefalia,calafr ios, convulses (associado ao quadro

febril). _ Encefalopatia , letargia, alucinaes, confuso mental podem

ocorrer e esto associados a produo deSTx que uma toxina com atividade

neurotxica (alm de citotxica e enterotxica). _ Sndrome Hemoltica Urmica pode

ocorrer como uma das complicaes extraintestinai s provocados