FISIOLOGIA BACTERIANA

Nutrio, Reproduo e Nutrio, Reproduo e Crescimento Bacteriano Crescimento Bacteriano

Instituto Federal de Educao, Cincia e Tecnologia do Par Instituto Federal de Educao, Cincia e Tecnologia do Par Microbiologia e Imunologia Microbiologia e Imunologia
Profa. Jedna Kato Dantas de Almeida Profa. Jedna Kato Dantas de Almeida

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Introduo
Microorganismo Nutrientes Microorganismos
Carboidratos Aminocidos cidos nuclicos

Funes essenciais Crescimento populacional Microambientes

Nutrientes adequados Temperatura Atmosfera

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Nutrio Bacteriana Classificao Metablica de acordo com o Padro Nutricional: Fonte de Energia: Fototrficos (luz) Quimiotrficos (xido-reduo)

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Nutrio Bacteriana Fonte de Carbono:
Autotrficos (Nutrio Prpria) Litotrficos (compostos inorgnicos ou minerais) Heterotrficos (dependente de outros seres) Organotrficos (utilizam compostos orgnicos) Saprfitas: Matria orgnica morta Parasitas: Hospedeiro vivo

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Nutrio Bacteriana
Microorganismos Fonte de carbono Fonte de energia

Fotoautotrficos CO2 Luz Fotoheterotrficos Compostos orgnicos Luz Compostos inorgnicos Quimioautotrficos CO2 Quimioheterotrficas Compostos orgnicos Compostos orgnicos

Importncia Mdica: Quimioheterotrficos

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Fatores Qumicos de Crescimento gua: Indispensvel (80 a 90% da clula) Fonte de Carbono: CO2, carboidratos, aminocidos, cidos monocarboxlicos, lipdeos, lcoois ou outros Fonte de Nitrognio: Atmosfrico: Azitrobacter, Rhizobium Orgnico: Aminocidos e Sais de amnio Inorgnico: Nitratos e Amnia

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Fatores Qumicos de Crescimento Fonte de Enxofre: Sulfatos (sntese de vitaminas) Fonte de Fsforo: Fosfatos (sntese de ATP, DNA, RNA) Outros Macronutrientes: K, Mg (enzimas); Fe (citocromos) Micronutrientes:Cu, Co, Zn, Mn Mo, Na, Ca, etc

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Fatores Qumicos de Crescimento Oxignio Atmosfrico: (receptor final de H)
Aerbias: crescem na presena de O2 Obrigatrias ou estritas Microarfilas Anaerbias: crescem na ausncia de O2 Obrigatrias ou estritas Facultativas Capnoflicas

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Fatores Orgnicos de Crescimento
Meios de cultura: conter os compostos essenciais ao metabolismo Composto Doadores e receptores de H Fontes de Carbono Fontes de Nitrognio Minerais Vitaminas Aminocidos Concentrao 2,0 g/l 1,0 g/l 1,0 g/l 50 mg/l 0,1 a 1,0 mg/l 50 mg/l

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Fatores Fsicos de Crescimento Condies de Cultivo Temperatura Baixa (0 a 20C) Psicrfilas Moderadas (25 a 40C) Mesfilas Altas (50 a 80C) Termfilas Temperatura mnima Temperatura tima Temperatura mxima

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Fatores Fsicos de Crescimento Condies de Cultivo
Temperatura (oC)
Pseudomonas fluorescens Staphilococus aureus Termoactinomyces vulgaris Neisseria gonorreae Thermus aquaticus

Mnimo
4 6,5 27-30 30 40

timo
25-30 30-37 60 35-36 70-72

Mximo
40 46 45-70 38,5 79

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Fatores Fsicos de Crescimento Condies de Cultivo pH (Potencial de Hidrognio Inico)
Baixo (4 ou menor) Acidfilas Neutro (6,5 a 8,5) Neutrfilas Elevado (mais de 10) Alcalfilas ou Basfilas Substncia Tampo: impede alteraes drsticas de pH Indicadores de pH: indicam quando ocorrem variaes de pH

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Fatores Fsicos de Crescimento Condies de Cultivo
pH Staphylococus aureus Acetobacter aceti Vibrio cholerae Mnimo 4,2 4,0-4,5 7,5 timo 7,0-7,5 5,4-6,3 8,0-9,0 Mximo 9,3 7,0-8,0 9,5

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Fatores Fsicos de Crescimento Condies de Cultivo Presso osmtica:
Meios Hipotnicos / Hipertnicos Efeito Bactericida ou Bacteriosttico Bactrias Osmoflicas: suportam grandes presses Osmticas Bactrias Haloflicas: vivem em altas concentraes de sais Bactrias Sacarfilas: sobrevivem em meios com altas concentraes de acares

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Reproduo Bacteriana
Com troca de material gentico: Conjugao, Transformao, Transduo. Sem troca de material gentico: Fisso Binria

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Fisso binria novo ciclo a cada 20 ou 30 minutos (Progresso Geomtrica)

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Crescimento Bacteriano
Sntese de Nutrientes Condies timas de cultivo Aumento da massa celular Diviso binria Populao bacteriana aumenta Tempo de Gerao: Maioria da bactrias: 1 a 3 horas E. coli: 20 minutos M. tuberculosis: 12 horas Meio lquido Turvao do meio Meio slido Unidades formadoras de Colnia (UFC)

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Fases do Crescimento Bacteriano
Fase Lag ou Latncia: Adaptao das condies fsicas e dos nutrientes, sntese de DNA e enzimas, aumento da massa celular, incio da diviso celular. Fase Log ou Crescimento Exponencial: Intensa atividade metablica, incio da limitao de nutrientes e acmulo de produtos txicos. Fase Estacionria: Nmero de organismos constante, fase de divises equivalente a taxa de mortes, depledao de nutrientes essenciais (N e C) Fase de Declnio ou morte: Taxa de morte superior fase de diviso, nmero de microorganismos cai bruscamente.

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Fases do Crescimento Bacteriano

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Mtodos de Medida de Crescimento Bacteriano
Centrifugao:
Amostra de cultura lquida e bem homogeneizada Centrifugao em um tubo capilar A altura do sedimento a medida da massa protoplasmtica Com tamanho do microorganismo conhecido o nmero poder ser calculado A medida de massa mida gera medidas pouco sensveis do crescimento bacteriano, sendo mais indicado para medida de crescimento de leveduras devido seu maior volume corporal.

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Mtodos de Medida de Crescimento Bacteriano
Peso Seco: Determinado por unidade de volume de cultura Ignora o volume aquoso e sua variao durante o crescimento do microorganismo a medida mais precisa que o mtodo anterior A principal limitao deste mtodo refere-se grande quantidade de cultura necessria, a fim de evitar erros nas medidas.

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Mtodos de Medida de Crescimento Bacteriano
Medida de Nitrognio: Ocorre a lavagem das clulas para a retirada dos constituintes nitrogenados do meio O nitrognio da clula medido por um mtodo de teor de amnia por titulao (micro-kjeldahl)

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Mtodos de Medida de Crescimento Bacteriano
Colorimetria: Estimativas colorimtricas ou espectrofotomtricas Um volume apropriado de cultura lavado e tratado de maneira que determinado componente reage com uma substncia gerando compostos coloridos A luz transmitida e absorvida pode ser medida, determinando o concentrao da substncia e estimando os componentes bacterianos

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Mtodos de Medida de Crescimento Bacteriano
Atividade Metablica: Utilizado para medir o consumo de um metablito ou o acmulo de um produto do metabolismo Consumo de O2 e a produo de cidos orgnicos so exemplos de substncias que podem ser medidas

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Mtodos de Medida de Crescimento Bacteriano
Turbidimetria: Bactrias em suspenso exibem o efeito Tyndall (turvao do meio) A quantidade de massa bacteriana pode ser medida tanto por absorbncia (luz absorvida) quanto por transmitncia (luz dispersa).

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Mtodos de Medida de Crescimento Bacteriano
Aparelhos Contadores de Partcula: Uso de aparelhos como o citmetro de fluxo Permite a contagem de bactrias em meio aquoso, devido utilizar desvios pticos e eletrnicos Ocorre medindo as mudanas na condutividade eltrica quando as partculas em suspenso so impelidas a passar por um pequeno canal onde percorre uma corrente eltrica

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Mtodos de Medida de Crescimento Bacteriano
Cmaras de Contagem: Determina-se o nmero de bactrias em um volume fixo de cultura Utiliza-se cmaras com reas perfeitamente delimitadas O nmero total representa uma projeo do nmero contado no interior da cmara (ex: cmara de Newbauer)

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Mtodos de Medida de Crescimento Bacteriano
Cmaras de Contagem:

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Mtodos de Medida de Crescimento Bacteriano
Esfregaos Corados: Um volume conhecido de cultura esfregado sobre determinada rea de uma lmina O esfregao fixado e corado Com base no conhecimento da rea da objetiva, o nmero de microorganismos estimado a partir da contagem de partculas em vrios campos

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Mtodos de Medida de Crescimento Bacteriano
Diluies Seriadas ou Nmero Mais Provvel (NMP):

A cultura diluda at o ponto em que amostras da diluio quando semeadas no apresentem mais crescimento A densidade populacional original ser estimada pela aplicao da teoria das probabilidades A preciso do mtodo diretamente dependente do nmero de amostras tomadas para diluio.

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Mtodos de Medida de Crescimento Bacteriano
Diluies Seriadas ou Nmero Mais Provvel (NMP):

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Mtodos de Medida de Crescimento Bacteriano
Contagem em Placa:

Amostras de diluies seriadas da cultura so semeadas em meios de cultura slidos adequados e incubados de maneira a permitir o desenvolvimento de colnias (UFCs) isoladas As UFCs so contadas e considerando a diluio, obtm-se o nmero de bactrias por ml da suspenso original.

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Metabolismo Bacteriano o conjunto de todas as reaes qumicas que acontecem no organismo Catabolismo: Reaes que liberam energia Compostos complexos em molculas simples Anabolismo: Reaes que requerem energia Molculas simples em compostos complexos

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Processos Metablicos: Respirao aerbia; Energia a partir de compostos qumicos Aceptor final de eltrons O2 Glicose 38 molculas de ATP Respirao anaerbia: Energia a partir de compostos qumicos Aceptor final de eltrons (NO2, N2O, N2, SO42-) Glicose 2 molculas de ATP Fermentao: Energia a partir de compostos qumicos Aceptor final de eltrons mol. orgnica Fotossntese: Energia da luz