RESSONNCIA MAGNTICA NUCLEAR (RMN)

Aplicaes RMN
- Medicina: diagnstico atravs de imagens do corpo; - Qumica: elucidao de estruturas moleculares; - Bioqumica: determinao da estrutura tridimensional de protenas; - Petrleo: avaliao de locais que contm hidrocarbonetos;
-Aplicao em alimentos: teor de gorduras slidas em leos comestveis; teor de umidade em biscoitos; teor de flor em cremes dentais; anlise de gros e sementes.

Ressonncia Magntica Nuclear (RMN) de 1H e 13C

-RMN estuda a estrutura e as interaes moleculares atravs de medidas da interao de campo eletromagntico oscilante (de RADIOFREQUNCIA - RF) com os ncleos presentes num campo magntico esttico. - espectro de RMN mostra informaes, difceis de serem obtidas por outros mtodos espectroscpicos, sobre a estrutura e dinmica molecular. -Mtodo que mais se desenvolveu nos ltimos anos.

Dcada
1940s 1950s 1960s 1970s 1980s 1990s

Descoberta / Avano de RMN

Primeira observao de RMN em slidos e lquidos (1945) Uso dos (deslocamento) e J (acoplamento) como ferramentas de determinao estrutural Introduo da RMN de FT; para determinao estrutural Emprego de ims supercondutores; controle total do equipamento pelo computador Introduo de pulsos mltiplos, e espectroscopia em 2-D Acoplamento da RMN com outras tcnicas, ex: Cromatografia-RMN

SPIN NUCLEAR
O ncleo de alguns tomos possuem uma propriedade denominada SPIN.
Uma vez que o ncleo atmico uma partcula eletricamente carregada, deste movimento de rotao origina-se um momento magntico nuclear Este conceito est relacionado propriedade de spin de um eltron, o qual tem dois spins: +1/2 e -1/2 . Cada ncleo de spin ativo possui um nmero de spin definido pelo seu nmero quntico de spin, I.

Nmeros Qunticos de Spin de Alguns Elementos

Os istopos mais abundantes de C e O no tem spin.
1H 2H 12C 13C 14N 16O 19F

Elemento
N Quntico de Spin Nuclear

(I)

1/2

N de Estado de Spin
2I + 1(orientaes)

1 3

0 0

1/2

1 3

0 0

1/2

Elementos com qualquer nmero de massa ou nmero atmico mpar tem a propriedade de spin nuclear spin.

O tomo de Hidrognio
N
A carga atribuda ao prton (+) tambm se movimenta ao redor do prprio eixo

O movimento de cargas eltricas gera uma corrente eltrica, e... Uma corrente eltrica cria um campo magntico ao seu redor Com um polo norte, um polo sul e um momento magntico ( )

+
i

Ou seja, os ncleos dos tomos de hidrognio podem ser vistos como pequenos ms !

DIPOLO MAGNTICO
Cargas eltricas que giram em torno de seu eixo criam um dipolo magntico nuclear denominado momento magntico (SPIN). SPIN uma propriedade da natureza, assim como, a carga eltrica . Todas as partculas possuem. - Um campo magntico sempre bipolar; - Um diminuto im criado pela movimentao orbital de uma partcula se denomina dipolo magntico.

O PRTON
Apesar do crescente interesse em outros ncleos, particularmente C-13, o ncleo de hidrognio (prton) o mais estudado, e nos dedicaremos nosso estudo a ele em primeiro lugar.

ESTADOS DE SPIN NUCLEAR NCLEOS DE H

O giro do ncleo carregado positivamente gera um vetor de momento magntico, .

+ 1/2 - 1/2
DOIS ESTADOS DE SPIN

Os dois estados so equivalentes em energia na ausncia de um campo eltrico ou magntico.

O FENMENO RESSONNCIA
Absoro de energia por um ncleo

- Ncleos giratrios carregados geram um campo magntico como uma pequena barra de im;

Na ausncia de um campo magntico aplicado os spins nucleares so orientados randomicamente.

Na presena de um campo magntico B0, o ncleo gira e tende a alinhar-se a favor (menor energia) ou contra o campo.

-Um maior nmero de ncleos encontra-se alinhados ao campo e a diferena de populaes muito pequena (20 em 1 milho de prtons) mas suficiente para formar a base da espectroscopia de RMN.

Nveis de Energia Nuclear de Spin

N

-1/2
Em um forte campo magntico (Bo) os dois estados de spin diferem em energia. desalinhado

+1/2

Bo

alinhado

Absoro de Energia
Oposto

-1/2

-1/2

E E = h
Radiofrequncia

+1/2
Campo Aplicado

Alinhado

Bo

Diferenas de energia aumentam quanto maior campo aplicado

+1/2

Ressonncia Magntica Nuclear

-Duas orientaes no campo: no tem a mesma energia, no so igualmente provveis; -Se os ncleos orientados so irradiados com radiao eletromagntica igual a sua frequncia: - Quando a energia exercida sobre o ncleo iguala a diferena de energia entre os estados de spin, atingida uma condio dita de

ressonncia;

- A absoro e a emisso subseqente de energia associada com esta inverso de spin detectada pelo receptor de radiofrequncia e em seguida registrada na forma de pico no espectro de RMN.

A VARIAO DE ENERIA DEPENDE DE Bo

- 1/2

= kBo = h

+ 1/2 Bo

aumento da intensidade do campo magntico

A Equao de Larmor !!!

E = kBo = h pode ser transformado em

- razo
frequncia da radiao que causa uma transio

= =

B 0 2 2

giromagntica

Bo

(campo magntico gerado por cada ncleo)

fora do campo magntico

uma constante especfica para

cada ncleo atmico (H, C, N, etc)

Frequncia de Ressonnica de Alguns Ncleos

Istopo Abundncia
1H

Bo (Tesla)

Frequncia(MHz)

razo giromagntica

(Tesla)

99.98%

1.00 1.41 2.35 7.05 1.00 7.05 1.00 2.35 7.05 1.00

42.6 60.0 100.0 300.0 6.5 45.8 10.7 25.0 75.0 40.0

267.53

2H

0.0156% 1.108%

41.1 67.28

4:1

13C

19F

100.0%

251.7

POPULAO E INTENSIDADE DO SINAL

A intensidade do sinal de RMN depende da Diferena de Populao dos dois estados de spin Radiao induz a ambas transies alto-baixo baixo-alto.

ressonncia

emisso induzida

Para um sinal positivo deve existir um excesso de spins no estado de baixa energia.

populao em excesso

Saturao = populao igual = nenhum sinal

INSTRUMENTAO CLSSICA
anterior a 1960 (varredura)

Um Espectrmetro de RMN de 60 MHz

pulso de radiao
RF (60 MHz) Oscilador Transmissor
h absoro do sinal

RF Detector Receptor

Registrador

MAGNETO

MAGNETO

N
B0

Amostra

O Espectrmetro
- Aparelhos antigos tinham campos de 1,41; 1,87; 2,20 ou 2,35 Tesla, correspondentes a freqncias de 60, 80, 90 ou 100 MHz respectiva/te (1H). -Usavam im permanente ou eltrico refrigerado. -O espectro era obtido pelo mtodo de VC (varredura contnua), onde a amostra irradiada, uma freqncia por vez. Tempo de anlise de cada amostra variava entre 2-10 minutos. -Os ncleos mais estudados eram 1H e
19F.

O estudo de outros ncleos era,

na prtica, fora do alcance de muitos pesquisadores.

Diferentes tipos de prtons possuem diferentes frequncias de absoro no campo magntico N

EXEMPLO: 59.999995 MHz
O CH2 C CH3

Bo = 1.41 Tesla

59.999700 MHz

h
60 MHz 59.999820 MHz

S
Diferenas so muito pequenas, em partes por milho.

Para absoro de 60 MHz a fora do campo magntico Bo , deve ser elevada a um valor diferente para cada tipo de prton.

EM RMN CLSSICA O INSTRUMENTO VARRE A PARTIR DE CAMPO BAIXO AT CAMPO ALTO CAMPO BAIXO CAMPO ALTO

n me au

B0 de to

varredura

Espectro RMN da Fenilacetona

O CH2 C CH3

NOTE QUE CADA TIPO DE PRTON EST LOCALIZADO EM UM LOCAL ESPECFICO - VOC PODE CONTAR QUANTOS TIPOS DE PRTONS EXISTEM NA MOLCULA

MODERNA INSTRUMENTAO
RMN COM TRANSFORMADA DE FOURIER FT-NMR requer um computador

Avanos Importantes na Instrumentao

- Modo pulsado ou FT para a aquisio do espectro. -RMN-FT : espectro pode ser registrado em poucos segundos utilizando 5 mg de amostra. -E = h Bo / 2, quanto maior Bo, maior a diferena entre os estados de spin nuclear, e mais forte o sinal. - Para campo alto necessrio ims eltricos especiais - problemtico (necessrio refrigerao eficiente). - Soluo contempornea: uso de ims supercondutores, refrigerados com nitrognio/Hlio (resistncia de metais diminui com a diminuio da temperatura).

EXCITAO PULSADA
N

o campo magntico constante

2
O CH2 C CH3

PULSO RF DE CURTA DURAO

contm um intervalo de frequncias

(1 ..... n)
S
Todos os tipos de hidrognio absorvem a frequncia necessria para entrarem em ressonncia simultaneamente com um simples pulso de RF.

FREE INDUCTION DECAY (FID)

DECAIMENTO DE INDUO LIVRE
( sinal relaxao retornam ao equilbrio )

1
O CH2 C CH3

2 3
1, 2, 3 tem diferentes meias vidas

TRANFORMADA DE FOURIER
Uma tcnica matemtica que resolve um sinal complexo de FID para frequncias individuais que se adicionaram.
( detalhes no sero vistos aqui. )

Intensidade x Tempo FID

Converte a

Intensidade x Frequncia ESPECTRO DE RMN

SINAL COMPLEXO

FT-RMN computador
Transformada de Fourier

1 + 2 + 3 + ......
frequncias individuais convertidas a um espectro

uma mistura de frequncias decaindo (com o tempo)

ESPECTRMETRO DE RMN
espectro RMN amostra em tubo

detector e amplificador gerador de radiofrequncia magneto condutor

A combinao FID transformada em um clssico espectro de RMN :

O CH2 C CH3

frequncia espectro

INTEGRAO

Espectro RMN da Fenilacetona

O CH2 C CH3

NOTE QUE CADA TIPO DE PRTON EST LOCALIZADO EM UM LOCAL ESPECFICO - VOC PODE CONTAR QUANTOS TIPOS DE PRTONS EXISTEM NA MOLCULA

INTEGRAO DE UM PICO
No fornece somente informaes sobre os diferentes tipos de hidrognio como tambm apresenta informaes dos nmeros relativos de cada tipo de hidrognio por um processo chamado de Integrao.

Integrao = determinao da rea de um pico A rea de um pico proporcional ao nmero de hidrognios que geram o pico.

A linha da integral sinaliza uma quantidade proporcional de nmero de H em cada pico

Acetato de Benzila

MTODO 1 integral linha integral

Erro = 10 %

55 : 22 : 33 =

5:2:3

Razo entre as alturas

Acetato de Benzila (FT-NMR)

Atualmente: 58.117 / 11.3 = 5.14 5 2 21.215 / 11.3 = 1.90 3 33.929 / 11.3 = 3.00

O CH2 O C CH3

MTODO 2 integrao digital

assumindo CH3 33.929 / 3 = 11.3

Instrumentao moderna reportam a integral como um nmero

Quantos hidrognios?
Quando a frmula molecular conhecida, cada integral pode ser atribuda a um nmero de hidrognios.

=>

ANISOTROPIA DIAMAGNTICA
DESLOCAMENTO POR ELTRONS DE VALNCIA

Anisotropia Diamagntica
O campo aplicado induz a circulao de eltrons de valncia - isto gera um campo magntico que se ope (ou no) ao campo aplicado.

eltrons de valncia blindam os ncleos devido ao efeito do campo aplicado.

linhas do campo magntico

Bo aplicado

B induzido (oposto a Bo)

PRTONS DIFEREM EM SUAS BLINDAGENS

Todos os diferentes tipos de prtons em uma molcula possuem diferentes blindagens.
Todos respondem de modo singular ao campo magntico aplicado e aparecem em diferentes localizaes no espectro porque encontram-se em diferentes ambientes eletrnicos. Espectro de RMN contm informaes teis (diferentes tipos de prtons aparecem em locais previsveis
CAMPO BAIXO
Prtons menos blindados aparecem aqui.

ESPECTRO

CAMPO ALTO
Prtons blindados aparecem aqui.
necessrio maior campo para causar ressonncia.

DESLOCAMENTO QUMICO

PICOS SO MEDIDOS COM RELAO A TMS

Ao invs de medir a posio exata de ressonncia de um pico, as posies dos sinais dos picos so definidas de acordo com suas distncias em relao ao sinal de uma substncia referncia TMS.

CH3 CH3 Si CH3 CH3

composto de referncia tetrametilsilano TMS

Altamente blindado prtons aparecem em campo alto.

TMS
deslocamento em Hz
campo

Si menos eletrone gativo que o C.

RECORDANDO NOSSA DISCUSSO ANTERIOR

Mais forte o campo (Bo) necessrio que o instrumento opere em maiores frequnicas ().

intensidade do campo frequncia

h = Bo 2
constantes

RMN B0 1.41 T 2.35 T 7.05 T

1H

Frequncia de Operao 60 Mhz 100 MHz 300 MHz

= ( K) Bo

ALTAS FREQUNCIAS LEVAM A MAIORES DESLOCAMENTOS

O deslocamento observado para um prton em Hz tambm depende da frequncia do instrumento usado. maiores frequncias = maiores deslocamentos em Hz. TMS deslocamento em Hz
Campo

O DESLOCAMENTO QUMICO
Os deslocamentos a partir do TMS em Hz so maiores em instrumentos que utilizam campos maiores (300 MHz, 500 MHz) que aqueles que usam campos menores (100 MHz, 60 MHz).

possvel ajustar o deslocamento usando uma medida de campo independente da frequncia operacional do equipamento denominada deslocamento qumico:
deslocamento qumico =

partes por milho

deslocamento em Hz frequncia do espectrmetro em MHz

= ppm

Esta medida fornece um nmero independente do instrumento usado.

Um prton especfico em uma certa molcula sempre apresentar o mesmo deslocamento qumico (valor constante).

HERTZ EQUIVALE A 1 PPM

O que representa ppm?
1H

Frequncia Operacional 60 MHz 100 MHz 300 MHz

Hz Equivalente 1 ppm 60 Hz 100 Hz 300 Hz

ppm

Cada unidade ppm representa uma alterao de 1 ppm em Bo (intensidade do campo magntico, Tesla) ou uma alterao de 1 ppm na frequncia (MHz).

O deslocamento qumico independente da freqncia operacional do espectrmetro.

Estes prtons percebem um campo magntico efetivo maior, logo entram em ressonncia em frequncias mais altas.

ESPECTRO

Estes prtons percebem um campo magntico efetivo menor, logo entram em ressonncia em frequncias mais baixas.
Campo Alto conceito usado nos espectrmetros de onda contnua, variao do campo e frequncia constante

Befetivo = Baplicado - Blocal

Esquema de Correlao para RMN

CAMPO BAIXO DESBLINDADO -OH -NH CHCl3 , H CAMPO ALTO BLINDADO TMS

12

11

10

(ppm)

RCOOH

RCHO

H C=C

CH2F CH2Cl CH2Br CH2I CH2O CH2NO2

CH2Ar C-CH-C CH2NR2 C CH2S C-CH2-C C C-H C=C-CH2 C-CH3 CH2-CO

Intervalos podem ser bem definidos para diferentes tipos de prtons.

INTERVALOS DE DESLOCAMENTO QUMICO (ppm) PARA ALGUNS TIPOS DE PRTONS

R-CH3 R-CH2-R R3CH R-C=C-C-H O R-C-C-H O RO-C-C-H O HO-C-C-H N C-C-H R-C C-C-H C-H R-C C-H

0.7 - 1.3 1.2 - 1.4 1.4 - 1.7 1.6 - 2.6 2.1 - 2.4 2.1 - 2.5 2.1 - 2.5 2.1 - 3.0 2.1 - 3.0 2.3 - 2.7 1.7 - 2.7

R-N-C-H R-S-C-H I-C-H Br-C-H Cl-C-H RO-C-H HO-C-H O R-C-O-C-H O2N-C-H F-C-H

2.2 - 2.9 2.0 - 3.0 2.0 - 4.0 2.7 - 4.1 3.1 - 4.1 3.2 - 3.8 3.2 - 3.8 3.5 - 4.8 4.1 - 4.3 4.2 - 4.8

R-C=C-H 4.5 - 6.5 H 6.5 - 8.0 O R-C-N-H 5.0 - 9.0 O R-C-H 9.0 - 10.0 O R-C-O-H 11.0 - 12.0 3.0 - 5.0 R-S-H 4.0 - 7.0 1.0 - 4.0

R-N-H 0.5 - 4.0 Ar-N-H R-O-H 0.5 - 5.0 Ar-O-H

VOC NO PRECISA MEMORIZAR A TABELA DO SLIDE ANTERIOR

SUFICIENTE CONHECER QUAIS OS TIPOS DE HIDROGNIOS ESTO NAS REAS SELECIONADAS DO ESQUEMA DE RMN

cido aldedo COOH CHO

C-H onde C benzeno alceno est ligado a CH =C-H um tomo eletronegativo X-C-H 9 7 6 4

CH de C prximo aliftico a ligao C-H pi X=C-C-H 2 0

12

10

A MAIOR PARTE DO ESPECTRO PODE SER INTERPRETADA APENAS COM AS INFORMAES CITADAS AQUI

DESBLINDAGEM E EFEITO ANISOTRPICO

Trs fatores so importantes para determinar as posies de ressonncia (escala ppm) da maioria dos prtons. 1. Desblindagem por elementos eletronegativos. 2. Campos anisotrpicos devido a eltrons da ligao pi na molcula. 3. Desblindagem devido pontes de hidrognio. Discutiremos esses fatores nas prximas sees. Befetivo = Baplicado - Blocal

DESBLINDAGEM POR ELEMENTOS ELETRONEGATIVOS

DESBLINDAGEM POR ELEMENTOS ELETRONEGATIVOS

Cl

elemento eletronegativo

Cloro deblinda o prton, atraindo eltrons da camada de valncia do Carbono, o qual retira do prton.

ESQUEMA RMN

desblindado prtons aparecem em campo baixo

altamente blindado prtons aparecem em campo alto

desblindagem desloca a ressonncia do prton para campos menores

Dependncia do Deslocamento Qumico com Relao a Eletronegatividade

Dependncia do deslocamento qumico de CH3X com relao a X
Composto CH3X Elemento X Eletronegatividade de X Deslocamento qumico CH3F CH3OH CH3Cl F 4.0 O 3.5 3.40 Cl 3.1 3.05 CH3Br CH3I Br 2.8 2.68 I 2.5 2.16 CH4 (CH3)4Si H 2.1 0.23 Si 1.8 0

4.26

mais desblindado

TMS desblindagem aumenta com o aumento da eletronegatividade do tomo X

Efeito da Substituio sobre o Deslocamento Qumico

mais desblindado

CHCl3 CH2Cl2 CH3Cl 7.27 5.30 3.05 ppm

O efeito aumenta com maior quantidade de tomos eletronegativos.

mais desblindado

-CH2-Br 3.30

-CH2-CH2Br 1.69

-CH2-CH2CH2Br 1.25 ppm

O efeito diminui com o aumento da distncia.

O Espectro de RMN

=>

Anisotrpico: do grego diferente em diferentes direes

CAMPOS ANISOTRPICOS
DEVIDO A PRESENA DE LIGAES PI

A presena de ligaes pi ou sistemas pi prximo afeta o deslocamento qumico. Benzeno possui o maior efeito.

Correntes no Benzeno

Eltrons circulam

Desblindado

campos se adicionam

Bo

Campo magntico secundrio gerados pela circulao de eltrons que desblindam os prtons do anel aromtico. protons

CAMPO ANISOTRPICO EM UM ALCENO

Prtons so desblindados
Desblindados

Campos se adicionam

H C=C H

H H

deslocado para campos baixos

Bo

campo magntico secundrio (anisotrpico) linhas

CAMPO ANISOTRPICO PARA UM ALCINO

H C C H
Bo
Blindado

campo magntico secundrio (anisotrpico) hidrognios so blindados

campos so subtrados

PONTES DE HIDROGNIO

PONTES DE HIDROGNIO DESBLINDAM OS PRTONS

O deslocamento qumico depende quantas ligaes H esto sendo feitas. lcoois variam o deslocamento de 0.5 ppm (OH livre) a cerca de 5.0 ppm (com pontes de H).

R O H O R H H O R

Pontes de H estendem as ligao O-H reduzindo a densidade eletrnica de valncia ao redor do prton -ele desblindado e deslocado a campos mais baixos no espectro RMN.

ALGUNS CASOS EXTREMOS

O R C O H H O C R O
cidos Carboxlicos fazem fortes pontes de H - formam dmeros.

Com cidos carboxlicos as absores O-H so encontradas entre 10 e 12 ppm em campos baixos

H3C O

H O
Em salicilato de metila, o qual faz uma forte ponte de H interna, a absoro em RMN para O-H cerca de 14 ppm, deslocada a campos baixos. Note a formao de um anel de 6 membros.

Prtons quimicamente equivalentes: prtons em um mesmo ambiente qumico.

Cada grupo de prtons quimicamente equivalentes em uma substncia d origem a um sinal no espectro de RMN1H da substncia.

Nmero de Sinais
Hidrognios equivalentes possuem o mesmo deslocamento qumico.

=>

EXERCCIOS

Exerccio 1
Em cada uma das substncias a seguir, quais dos prtons marcados (*) possuem o maior deslocamento qumico (isto , o sinal em campo mais baixo ou o sinal em maior frequncia)?

* * a) CH3CHCHBr Br Br

* * b) CH3CH2CHCH3 Cl O

* * c) CH3CH2CH=CH2

* * d) CH3CHOCH3 CH3

* * e) CH3CHCCH2CH3 CH3

Exerccio 2
(a) Calcule as propores dos diferentes tipos de prtons em uma substncia com uma razo de integrao de 6 : 4 : 18,4 (indo da esquerda para a direita atravs do espectro). (b) Determine a estrutura de uma substncia que forneceria essas integrais relativas na ordem observada. (a)Divida cada valor pelo menor nmero: 6/4 = 1,5 4/4 = 1,0 18,4/4 = 4,6 Multiplique por um n que far com que todos os nmeros fiquem prximos de nmeros inteiros- 1,5 x 2 = 3,0 ; 1,0 x 2,0 = 2,0 ;4,6 x 2 = 9,2 A proporo fica: 3 : 2 : 9 ou 6 : 4 : 18. (b) O 3 sugere um grupo metila, o 2 um metileno e o 9 o terc-butila .O grupo metila est prximo de um grupo metila que promove desblindagem e o grupo terc-butila est + afastado do grupo que promove desblindagem. A seguinte substncia se encaixa nesses requisitos:
CH3 O CH3CCH2COCH3 CH3