Cromatografa.

La cromatografa es un mtodo fsico o de separacin para la caracterizacin de mezclas c omplejas, la cual tiene aplicacin en todas las ramas de la ciencia y la fsica. Es un conjunto de tcnicas basadas en el principio de retencin selectiva, cuyo objetiv o es separar los distintos componentes de una mezcla, permitiendo identificar y determinar las cantidades de dichos componentes. Cromatografa en papel La cromatografa en papel es un proceso muy utilizado en los laboratorios para rea lizar unos anlisis cualitativos ya que pese a no ser una tcnica muy potente no req uiere de ningn tipo de equipamiento. La fase estacionaria est constituida simplemente por una tira de papel filtro. La muestra se deposita en un extremo colocando pequeas gotas de la solucin y evapora ndo el disolvente. Luego el disolvente empleado como fase mvil se hace ascender p or capilaridad. Esto es, se coloca la tira de papel verticalmente y con la muest ra del lado de abajo dentro de un recipiente que contiene fase mvil en el fondo. Despus de unos minutos cuando el disolvente deja de ascender o ha llegado al extr emo se retira el papel y seca. Si el disolvente elegido fue adecuado y las susta ncias tienen color propio se vern las manchas de distinto color separadas. Cuando los componentes no tienen color propio el papel se somete a procesos de revelad o. Hay varios factores de los cuales depende una cromatografa eficaz: la eleccin del disolvente y la del papel de filtro.

Cromatografa en capa fina La cromatografia en capa fina (CCF) ,TLC (Thin layer chromatography) es unatcnica cromatogrfica. La fase estacionaria es una capa uniforme de un absorbente manten ido sobre una placa, la cual puede ser de vidrio, aluminio u otro soporte. En cromatografa en capa fina se utiliza una placa cromarogrfica inmersa verticalme te en un eluyente apolar; La placa cromatogrfica consiste en una fase estacionari a polar (comunmente se utiliza slica gel) adherida a una superficie solida con al gun agente cementante. El eluyente debe ser un compuesto liquido apolar, general mente orgnico. Para realizar la CCF, se debe apoyar la placa cromatografica sobre algun recipiente o camara que contenga la fase lquida a aproximadamente 1 cm (la distancia entre el principio de la placa y la muestra que se desea analizar). l a cromatografa en capa fina es la combinacion de todos los colores en un papel. Tinta negra siendo separada en una placa de CCF

Cromatografa de gases La cromatografa de gases es una tcnica cromatogrfica en la que la muestra se volati liza y se inyecta en la cabeza de una columna cromatogrfica. La elucin se produce

por el flujo de una fase mvil de gas inerte. A diferencia de los otros tipos decr omatografa, la fase mvil no interacta con las molculas del analito; su nica funcin es la de transportar el analito a travs de la columna. Existen dos tipos de cromatografa de gases (GC): la cromatografa gas-slido (GSC) y la cromatografa gas-lquido (GLC), siendo esta ltima la que se utiliza ms ampliamente , y que se puede llamar simplemente cromatografa de gases (GC). En la GSC la fase estacionaria es slida y la retencin de los analitos en ella se produce mediante e l proceso de adsorcin. Precisamente este proceso de adsorcin, que no es lineal, es el que ha provocado que este tipo de cromatografa tenga aplicacin limitada, ya qu e la retencin del analito sobre la superficie es semipermanente y se obtienen pic os de elucin con colas. Su nica aplicacin es la separacin de especies gaseosas de ba jo peso molecular. La GLC utiliza como fase estacionaria molculas de lquido inmovi lizadas sobre la superficie de un slido inerte. La GC se lleva a cabo en un cromatgrafo de gases. ste consta de diversos component es como el gas portador, el sistema de inyeccin de muestra, la columna (generalme nte dentro de un horno), y el detector.

Cromatografa lquida La Cromatografa lquida, tambin conocida como Cromatografa de lquidos, es una tcnica de separacin y no debe confundirse con una tcnica cuantitativa o cualitativa de anlis is. Es una de las tcnicas analticas ampliamente utilizadas, la cual permite separa r fsicamente los distintos componentes de una solucin por la absorcin selectiva de los constituyentes de una mezcla. En todacromatografa existe un contacto entre do s fases, una fija que suele llamarse fase estacionaria, y una mvil (fase mvil) que fluye permanente durante el anlisis, y que en este caso es un lquido o mezcla de varios lquidos. La fase estacionaria por su parte puede ser almina, slice o resinas de intercambio inico que se encuentran disponibles en el mercado. Los intercambi adores inicos son matrices slidas que contienen sitios activos (tambin llamados gru pos ionognicos) con carga electrosttica (positiva o negativa). De esta forma, la m uestra queda retenida sobre el soporte slido por afinidad electrosttica. Dependien do de la relacin carga/tamao unos constituyentes de la mezcla sern retenidos con ma yor fuerza sobre el soporte slido que otros, lo que provocar su separacin. Las sust ancias que permanecen ms tiempo libres en la fase mvil, avanzan ms rpidamente con el fluir de la misma y las que quedan ms unidas a la fase estacionaria o retenidas avanzan menos y por tanto tardarn ms en salir o fluir. ste es el principio fundamen tal de la cromatografa. Un ejemplo notable es la cromatografa de intercambio inico. Las columnas ms utilizadas son las de slice.

Cromatografa de intercambio inico La cromatografa de intercambio inico (o cromatografa inica) es un proceso que permit e la separacin de iones y molculas polares basado en las propiedades de carga de l as molculas. Puede ser usada en casi cualquier tipo de molcula cargada, incluyendo

grandes protenas, pequeos nucletidos y aminocidos. La solucin que debe inyectarse es usualmente llamada "muestra" y los componentes separados individualmente son ll amados analitos. Es usada a menudo en purificacin de protenas, anlisis de agua o co ntrol de calidad. Cromatografa de fluidos supercrticos La cromatografa de fluidos supercrticos (SFC) es una tcnica hbrida entre la cromatog rafa de gases (GC) y la HPLC, que combina lo mejor de ambas tcnicas. Esta tcnica es importante porque permite la separacin de mezclas en las que no es adecuada la a plicacin de la GC ni de la HPLC. En concreto, se aplica a compuestos no voltiles o trmicamente inestables que no pueden ser separados mediante GC, o aquellos que c ontienen grupos funcionales que imposibilitan su deteccin en HPLC.

Las distintas tcnicas cromatogrficas2 se pueden dividir segn cmo est dispuesta la fas e estacionaria: Cromatografa plana. La fase estacionaria se sita sobre una placa plana o sobre un papel. Las principales tcnicas son: Cromatografa en papel Cromatografa en capa fina Cromatografa en columna. La fase estacionaria se sita dentro de una columna. Segn l fluido empleado como fase mvil se distinguen: Cromatografa de lquidos Cromatografa de gases Cromatografa de fluidos supercrticos La cromatografa de gases es til para gases o para compuestos relativamente voltiles , lo que incluye a numerosos compuestos orgnicos. En el caso de compuestos no volt iles se recurre a procesos denominados de "derivatizacin", a fin de convertirlos en otros compuestos que se volatilizen en las condiciones de anlisis. Dentro de la cromatografa lquida destaca la cromatografa lquida de alta resolucin (HP LC, del ingls High Performance Liquid Chromatography), que es la tcnica cromatogrfi ca ms empleada en la actualidad, normalmente en su modalidad de fase reversa, en la que la fase estacionaria tiene carcter no polar, y la fase mvil posee carcter po lar (generalmente agua o mezclas con elevada proporcin de la misma, o de otros di solvente polares, como por ejemplo metanol). El nombre de "reversa" viene dado p orque tradicionalmente la fase estacionaria estaba compuesta de slice o almina, de carcter polar, y por tanto la fase mvil era un disolvente orgnico poco polar. Una serie eluotrpica, es un rango de sustancias de diferentes polaridades que actan co mo fase mvil y que permiten observar un mejor desplazamiento sobre una fase estac ionaria.