ALEXANDRE AKIRA TAKAMATSU

AVALIAO DA BIOLIXIVIAO DE METAIS PESADOS POR BACTRIAS DO GNERO Thiobacillus EM LODOS BIOLGICOS PARA UTILIZAO AGRCOLA COMO FERTILIZANTE

Tese de Mestrado apresentada como requisito parcial obteno do Grau de Mestre. Curso de Mestrado em Cincia do Solo Subrea Microbiologia do Solo Setor de Cincias Agrrias Universidade Federal do Paran

Curitiba 1995

ALEXANDRE AKIRA TAKAMATSU

AVALIAO DA BIOLIXIVIAO DE METAIS PESADOS POR BACTRIAS DO GNERO Thiobacillus EM LODOS BIOLGICOS PARA UTILIZAO AGRCOLA COMO FERTILIZANTE

Tese de Mestrado apresentada como requisito parcial obteno do Grau de Mestre. Curso de Mestrado em Cincia do Solo Subrea Microbiologia do Solo Setor de Cincias Agrrias Universidade Federal do Paran Orientador: Prof. Dr. Antnio Slvio Mangrich

Curitiba 1995

ALEXANDRE AKIRA TAKAMATSU

AVALIAO DA BIOLIXIVIAO DE METAIS PESADOS POR BACTRIAS DO GNERO Thiobacillus EM LODOS BIOLGICOS PARA UTILIZAO AGRCOLA COMO FERTILIZANTE

Dissertao aprovada como requisito parcial para obteno do grau de Mestre no Curso de Ps-Graduao em Cincia do Solo Subrea Biologia do Solo da Universidade Federal do Paran, pela Comisso formada pelos professores:

Orientador:

Prof. Dr. Antonio Salvio Mangrich Setor de Cincias Exatas, UFPR

Prof. Dr. Oswaldo Garcia Jr. Departamento de Bioqumica - UNESP Araraquara

Profa. Beatriz Monserrat Prevedello Setor de Cincias Agrrias, UFPR

Curitiba, 02 de Abril de 1996

AGRADECIMENTOS

Pode a ponta de um iceberg dar idia do restante que se esconde por debaixo dgua ? Aqui vai uma tentativa

Bete, minha esposa e ao Lo, meu filho, que mais foram privados dos laos que constituem uma famlia no perodo de realizao deste trabalho. Ao Professor Mangrich, pela confiana a mim delegada, sem a qual este trabalho no seria possvel. Ao Instituto de Tecnologia do Paran - TECPAR, por ser o principal financiador deste trabalho de pesquisa, e pela confiana a mim depositada. Ao Fundo Bunka/Banco Sumitomo pelo reconhecimento da importncia deste trabalho e pelo auxlio financeiro. Aos meus pais, que contra vrios tabus, me educaram de forma a me preparar para trabalhar na rea que eu realmente gostasse minha irm Mnica, no mais presente neste mundo, mas que sempre tive a certeza, esteve ao meu lado, principalmente nos momentos difceis. Aos meus irmos Fbio e Minoru pela pacincia de terem me como irmo mais velho. Ao Corpo Docente da Universidade Federal do Paran por terem a difcil e explcita misso de formao de profissionais para a sociedade. Aos amigos, que independente de meu humor sempre estiveram ao meu lado.

SUMRIO

LISTA DE TABELAS................................................................................................. IV LISTA DE FIGURAS ..................................................................................................V RESUMO................................................................................................................... VI ABSTRACT ............................................................................................................. VII 1. INTRODUO ...................................................................................................... 1 2. REVISO BIBLIOGRFICA.................................................................................. 3 2.1 TRATAMENTO DE EFLUENTES ....................................................................... 6 2.1.1 COMPOSIO DO LODO DE ESGOTO DOMSTICO .................................. 6 2.1.1.1 Composio do esgoto ................................................................................. 7 2.1.1.1.1 Propriedades orgnicas ............................................................................. 9 2.2 MICROBIOLOGIA DE LODOS ......................................................................... 11 2.2.1 MICRORGANISMOS E O CONTROLE DA POLUIO ................................ 11 2.2.2 DOENAS DE TRANSMISSO HDRICA ..................................................... 14 2.2.2.1 Os patgenos originrios da gua .............................................................. 14 2.2.2.2 Organismos indicadores ............................................................................. 14 2.2.2.3 Escherichia coli e os coliformes ................................................................. 16 2.2.2.4 Estreptococos fecais ................................................................................... 17 2.2.2.5 Relao de coliformes fecais / estreptococos fecais .................................. 18 2.3 BIOHIDROMETALURGIA................................................................................. 18 2.3.1 MICRORGANISMOS UTILIZADOS NA BIOLIXIVIAO............................... 19 2.3.2 PROCESSOS COMERCIAIS ......................................................................... 20 2.3.3 LIXIVIAO DE MINRIOS DE COBRE ....................................................... 20 2.3.4 LIXIVIAO DE MINRIOS DE URNIO ...................................................... 21 2.4 METAIS PESADOS .......................................................................................... 22 2.4.1 DEFINIO DE METAIS PESADOS ............................................................. 22 2.4.1.1 Cdmio........................................................................................................ 22 2.4.1.1.1 Origem do cdmio nos solos.................................................................... 24 2.4.1.1.2 Concentrao de cdmio nos solos ......................................................... 24 2.4.1.1.3 Cdmio em lodos de esgoto..................................................................... 25 2.4.1.2 Cobre .......................................................................................................... 26 2.4.1.2.1 Cobre em lodos de esgoto ....................................................................... 28 2.4.1.3 Chumbo....................................................................................................... 28 2.4.1.3.1 Chumbo em lodos de esgoto ................................................................... 29 2.4.1.4 Zinco ........................................................................................................... 29 2.4.1.4.1 O Zinco em lodos de esgoto .................................................................... 30 2.4.2 PAPEL DOS ELEMENTOS INORGNICOS NA NUTRIO ANIMAL.......... 31 2.4.3 EFEITOS DOS METAIS PESADOS EM LODOS BIOLGICOS.................... 32

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2.5 APLICABILIDADE DAS TCNICAS BIOHIDROMETALRGICAS NA DESCONTAMINAO DE METAIS PESADOS EM LODOS BIOLGICOS ......... 32 2.5.1 MTODOS DE DESCONTAMINAO DE METAIS PESADOS EM LODOS BIOLGICOS.......................................................................................................... 33 2.5.1.1 Biolgicos.................................................................................................... 33 2.5.1.1.1 Acumulao de metais nas clulas de microrganismos........................... 33 2.5.1.2 Qumicos ..................................................................................................... 34 2.5.1.2.1 Lixiviao cida........................................................................................ 34 2.5.1.2.2 Tratamento com EDTA............................................................................. 34 2.5.1.3 Qumico-biolgicos ..................................................................................... 34 2.5.1.3.1 Bactrias oxidantes de ferro nativas e adaptadas do prprio lodo........... 34 2.5.1.3.2 Bactrias oxidantes de ferro exticas ao lodo.......................................... 34 2.6 DISPOSIO DO LODO EM SOLO................................................................. 34 2.7 MECANISMOS DE LIXIVIAO DE METAIS PESADOS POR THIOBACILLUS FERROOXIDANS ......................................................................................................... 35 2.7.1 DIRETO.......................................................................................................... 35 2.7.2 INDIRETO ...................................................................................................... 35 2.8 GNERO THIOBACILLUS .................................................................................... 37 2.9 THIOBACILLUS FERROOXIDANS ............................................................................. 38 2.10 TEORIA DE MONOD E SUA APLICAO NA CINTICA DO CRESCIMENTO DE CULTURAS DE THIOBACILLUS .......................................................................... 39 2.11 FIXAO DE CO2 EM MICRORGANISMOS .................................................. 40 3. MATERIAL E MTODOS .................................................................................... 42 3.1 - ESQUEMA DAS ATIVIDADES REALIZADAS NO TRABALHO DE TESE.... 42 3.2 AMOSTRA ........................................................................................................ 42 3.3 REAGENTES .................................................................................................... 43 3.4 SELEO DOS METAIS PESADOS ESTUDADOS ........................................ 43 3.5 SELEO DA CONCENTRAO DOS METAIS PESADOS ESTUDADOS... 44 3.6 EQUIPAMENTOS ............................................................................................. 45 3.7 MEIOS DE CULTIVOS...................................................................................... 45 3.7.1 MEIO 9K MODIFICADO EM CONCENTRAO SIMPLES PARA THIOBACILLUS FERROOXIDANS ................................................................................... 47 3.7.2 MEIO T&K ...................................................................................................... 48 3.7.3 MEIO T&K MODIFICADO .............................................................................. 49 3.8 MTODO DE ENRIQUECIMENTO DE THIOBACILLUS DE LODOS DE ESGOTOS .............................................................................................................. 50 3.8.1 MTODO MODIFICADO DE OBTENO DE UMA CULTURA ENRIQUECIDA DE THIOBACILLUS ........................................................................... 52 3.9 MTODO ELETROQUMICO COMO FORMA DE ACOMPANHAR A VELOCIDADE DE OXIDAO DO ON FERROSO A ON FRRICO NA PRESENA DE THIOBACILLUS FERROOXIDANS ........................................................ 53 3.10 MTODO DA 1,10 - FENANTROLINA PRA DETERMINAO DE FE (II)..... 54 3.11 MTODO DE SNTESE DOS SULFETOS DE METAIS PESADOS............... 55 3.12 MTODO DE ANLISE DE METAIS PESADOS ........................................... 55 3.13 CULTIVO DO LODO ARTIFICIAL .................................................................. 56

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3.13.1 CONTAMINAO ARTIFICIAL DO LODO .................................................. 56 3.14 LODO ARTIFICIAL ......................................................................................... 61 3.15 CONFIRMAO DE ESPCIE ....................................................................... 64 3.16 EXPERIMENTO DE BIO-LIXIVIAO............................................................ 65 3.17 DESCRIO................................................................................................... 65 3.17.1 TRATAMENTO 1 (T1) .................................................................................. 65 3.17.2 TRATAMENTO 2 (T2) .................................................................................. 65 3.17.3 TRATAMENTO 3 (T3) .................................................................................. 65 3.17.4 TRATAMENTO 4 (T4) .................................................................................. 65 3.17.5 VARIVEIS MONITORADAS....................................................................... 66 4. RESULTADOS E DISCUSSO........................................................................... 67 4.1 MTODO ELETROQUMICO ........................................................................... 67 4.2 MTODO ESPECTROFOTOMTRICO ........................................................... 68 4.3 LODO ARTIFICIAL ........................................................................................... 70 4.4 ENRIQUECIMENTO E CULTIVO DE THIOBACILLUS FERROOXIDANS ................. 70 4.4.1 MTODO MODIFICADO DE OBTENO DE UMA CULTURA ENRIQUECIDA DE THIOBACILLUS FERROOXIDANS.............................................................................. 70 4.4.2 MEIO DE CULTURA ...................................................................................... 75 4.5 SNTESE DOS SULFETOS DE METAIS PESADOS ....................................... 75 4.6 BIO-LIXIVIAO............................................................................................... 76 5. CONCLUSO ..................................................................................................... 82 6. GLOSSRIO ....................................................................................................... 83 7. REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS.................................................................... 87

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LISTA DE TABELAS TABELA 1 - VARIAES E MDIAS DAS CONCENTRAES DE CDMIO EM SOLOS (MG/KG) (ALLOWAY, 1993) .................................................................................................................. 25 TABELA 2 - CONCENTRAES DE CDMIO EM LODOS BIOLGICOS (ALLOWAY, 1993)..... 26 TABELA 3 - REAGENTES UTILIZADOS....................................................................................... 43 TABELA 4 - CONCENTRAO MXIMA PERMITIDA DE METAIS PESADOS (MG/KG PESO SECO) EM LODOS CONSIDERADOS ACEITVEIS PARA USO AGRCOLA (WEBBER ET AL., 1983)................................................................................................................................ 45 TABELA 5 - EQUIPAMENTOS UTILIZADOS ................................................................................ 45 TABELA 6 - REAGENTES PARA PREPARO DA SOLUO-PADRO 234 MV ........................... 53 TABELA 7 - REAGENTES PARA PREPARO DA SOLUO 300 MV ........................................... 54 TABELA 8 - VARIAO DA CONCENTRAO DE METAIS PESADOS NO LODO AERBIO DA ETE - BELM - SANEPAR (CURITIBA, 1995)......................................................................... 57 TABELA 9 - VARIAO DA CONCENTRAO DE MACROELEMENTOS (%) E PROPRIEDADES FSICO-QUMICAS DO LODO AERBIO DA ETE - BELM .................................................. 58 TABELA 10 - VARIAO DA CONCENTRAO DE METAIS PESADOS NO LODOANAERBIO DE RALFS (REATORES ANAERBIOS DE LEITO FLUIDIZADO)......................................... 59 TABELA 11 - VARIAO DA CONCENTRAO DE MACROELEMENTOS E PROPRIEDADES FSICO-QUMICAS DO LODO ANAERBIO DE RALFS (REATOR ANAERBIO DE LEITO FLUIDIZADO).......................................................................................................................... 60 TABELA 12 - LEITURAS ELETROQUMICAS DAS SOLUES-PADRO DE CALIBRAO ..... 68 TABELA 13 - CORRELAO ENTRE O MTODO ELETROQUMICO E O ESPECTROFOTOMTRICO - REPETIO ........................................................................... 70 TABELA 14 - PRIMEIRO REPIQUE DA CULTURA DE THIOBACILLUS FERROOXIDANS ENRIQUECIDA PARTIR DO LODO - LEITURAS ELETROQUMICAS ................................. 71 TABELA 15 - SEGUNDO REPIQUE DA CULTURA DE THIOBACILLUS FERROOXIDANS ENRIQUECIDA PARTIR DO LODO - LEITURAS ELETROQUMICAS ................................. 72 TABELA 16 - TERCEIRO REPIQUE DA CULTURA DE THIOBACILLUS FERROOXIDANS ENRIQUECIDA PARTIR DO LODO - LEITURAS ELETROQUMICAS ................................. 73 TABELA 17 - QUARTO REPIQUE DA CULTURA DE THIOBACILLUS FERROOXIDANS ENRIQUECIDA PARTIR DO LODO - LEITURAS ELETROQUMICAS ................................. 74 TABELA 18 - DETERMINAO DA PUREZA DOS SULFETOS DE METAIS SINTETIZADOS .... 75 TABELA 19 - VALORES DO POTENCIAL DE XIDO-REDUO (MV) MONITORADOS AO LONGO DO EXPERIMENTO DE BIOLIXIVIAO .................................................................. 76 TABELA 20 - VALORES DE PH MONITORADOS AO LONGO DO EXPERIMENTO DE BIOLIXIVIAO ...................................................................................................................... 76 TABELA 21 - DETERMINAES DA CONCENTRAO DE METAIS PESADOS NO EXPERIMENTO DE BIOLIXIVIAO - TRATAMENTO 1 (SOMENTE LODO) ........................ 77 TABELA 22 - DETERMINAES DA CONCENTRAO DE METAIS PESADOS NO EXPERIMENTO DE BIOLIXIVIAO - TRATAMENTO 2 (LODO + METAIS PESADOS) ....... 77 TABELA 23 - DETERMINAES DA CONCENTRAO DE METAIS PESADOS NO EXPERIMENTO DE BIOLIXIVIAO - TRATAMENTO 3 (LODO + METAIS PESADOS + CIDO SLFURICO (PH 4,0 + SULFATO FERROSO)........................................................... 78 TABELA 24 - DETERMINAES DA CONCENTRAO DE METAIS PESADOS NO EXPERIMENTO DE BIOLIXIVIAO - TRATAMENTO 4 (LODO + METAIS PESADOS + CIDO SULFRICO (PH 4,0) + SULFATO FERROSO + INCULO DE Thiobacillus ferrooxidans ) ........................................................................................................................ 78 TABELA 25 - DETERMINAES FSICO-QUMICAS DAS PROPRIEDADES FERTILIZANTES DO LODO...................................................................................................................................... 80 TABELA 26 - PRODUTOS DE SOLUBILIDADE (KPS) DOS SULFETOS UTILIZADOS NO EXPERIMENTO DE BIOLIXIVIAO DE METAIS PESADOS ................................................ 81

LISTA DE FIGURAS FIGURA 1 - CORRELAO ENTRE A CONCENTRAO DE METAIS PESADOS NOS SOLOS, E AS RESPECTIVAS CONCENTRAES NAS PLANTA (ALLOWAY, 1990).............................. 5 FIGURA 2 - MODELO DE CURVA DE CRESCIMENTO DE MICRORGANISMOS EM CULTURA PURA (CETESB, 1992) ........................................................................................................... 12 FIGURA 3 - SUCESSO ECOLGICA DE ORGANISMOS EM LODOS ATIVADOS .................... 13 FIGURA 4 - DIAGRAMA DE VENN-EULER MOSTRANDO AS INTERAES ENTRE AS VRIAS CINCIAS RELACIONADAS MICROBIOLOGIA E A BIOHIDROMETALURGIA (ROSSI, 1990)....................................................................................................................................... 19 FIGURA 5 - ESQUEMA DAS ATIVIDADES REALIZADAS DURANTE A TESE............................. 42 FIGURA 6 - ESQUEMA DA METODOLOGIA ORIGINAL DE ENRIQUECIMENTO DE THIOBACILLUS FERROOXIDANS DE LODOS BIOLGICOS................................................ 51 FIGURA 7 - VARIAO DA CONCENTRAO DE METAIS PESADOS NO LODO AERBIO DA ETE - BELM - SANEPAR (CURITIBA , 1995)........................................................................ 57 FIGURA 8 - SEQUNCIA DE GRFICOS MOSTRANDO A VARIAO NA CONCENTRAO DE MACROELEMENTOS E PROPRIEDADES FSICO-QUIMICAS DO LODO AERBIO DA ETE BELM.................................................................................................................................... 58 FIGURA 9 - VARIAO DA CONCENTRAO DE METAIS PESADOS NO LODO ANAERBIO DE RALFS (REATORES ANAERIOS DE LEITO FLUIDIZADO)........................................... 59 FIGURA 10 - SEQUNCIA DE GRFICOS MOSTRANDO A VARIAO NA CONCENTRAO DE MACROELEMENTOS E PROPRIEDADES FSICO-QUIMICAS DO LODO ANAERBIO DE RALFS (REATOR ANAERBIO DE LEITO FLUIDIZADO) ..................................................... 60 FIGURA 11 - ESQUEMA DE CULTIVO DO LODO ARTIFICIAL.................................................... 62 FIGURA 12 - LEITURAS ELETROQUMICAS DAS SOLUES-PADRO DE CALIBRAO ..... 68 FIGURA 13 - CORRELAO ENTRE O MTODO ELETROQUMICO E O ESPECTROFOTOMTRICO .................................................................................................. 69 FIGURA 14 - PRIMEIRO REPIQUE DA CULTURA DE THIOBACILLUS FERROOXIDANS ENRIQUECIDA PARTIR DO LODO - LEITURAS ELETROQUMICAS ................................. 71 FIGURA 15 - SEGUNDO REPIQUE DA CULTURA DE THIOBACILLUS FERROOXIDANS ENRIQUECIDA PARTIR DO LODO - LEITURAS ELETROQUMICAS ................................ 72 FIGURA 16 - TERCEIRO REPIQUE DA CULTURA DE THIOBACILLUS FERROOXIDANS ENRIQUECIDA PARTIR DO LODO - LEITURAS ELETROQUMICAS ................................. 73 FIGURA 17 - QUARTO REPIQUE DA CULTURA DE THIOBACILLUS FERROOXIDANS ENRIQUECIDA PARTIR DO LODO - LEITURAS ELETROQUMICAS ................................. 74 FIGURA 18 - PORCENTAGENS DE SOLUBILIZAO DO ZINCO NO EXPERIMENTO DE BIOLIXIVIAO DE METAIS PESADOS................................................................................. 81

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RESUMO A disposio em solos agrcolas e florestais de lodos resultantes de estaes de tratamento de esgoto vem sendo amplamente revisada e questionada nos pases que se utilizam desta prtica. Embora isto venha a resolver um problema srio de falta de espao e alto custo de destinao do lodo, e ainda substituindo parcialmente as necessidades de adubao qumica, os problemas de acrscimo de metais pesados aos solos atravs do lodo e a presena de patgenos se constituem hoje no principais fatores de restrio de uso. Apesar deste mtodo de disposio no ser muito utilizado ainda, a tendncia de aumento, pois houve um crescimento expressivo no nmero de Estaes de Tratamento de Esgoto, criando uma demanda para destinao do lodo gerado. Com relao aos nveis de metais pesados, a preocupao tem sido quanto aos efeitos cumulativos destes metais, pois a legislao dos pases onde a disposio agrcola do lodo j utilizada tende a ficar cada vez mais rgida, baixando os limites aceitveis pela legislao. Este trabalho avaliou a eficincia de bio-lixiviao de metais pesados por bactrias do gnero Thiobacillus em lodos ativados, assim como caracterizou qumica e biologicamente o lodo antes e depois do processo de bio-lixiviao, e trabalhou nos isolamentos de microrganismos nativos do lodo capazes de lixiviar metais pesados. As eficincias de bio-lixiviao alcanadas para os quatro elementos considerados neste estudo foram: Cd (95%); Pb (95%); Cu (95%); Zn (50%). As propriedades fertilizantes no foram afetadas pelo processo.

Palavras-chave: Thiobacillus, metais-pesados, biohidrometalurgia, biolixiviao, lodos aerbios, disposio agrcola

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ABSTRACT

The sludge disposal in agricultural and forest soils resulting from sewage treatment plants has been widely revised and questioned in countries that use this practice. Therefore solving a serious lack of space and high cost destination problem and partially substituting the chemical fertilizers necessity, the problem of heavy metals loading in soils through sludge and the presence of pathogens are the main reasons of use restriction. In spite of this disposal method has not been used in Brazil, the tendency is to increase, because there was an expressive growing in the number of sewage treatment plants, creating a demand for the sludge generated. The heavy metal level preocupation is related with cumulative effects, because the countries laws, where the agricultural disposal of sludge was adopted, are becoming more rigid, lowering the acceptable levels. This work evaluated the heavy metals bioleaching efficiency by Thiobacillus bacteria genera in activated sludges and characterized biologically and chemically the sludge after and before the bioleaching proccess and worked in native microorganisms isolation that is able to leach heavy metals. The bioleaching efficiency reached for the 4 elements considered in this study were: Cd (95%); Pb (95%); Cu (95%); Zn (50%). The fertilizer properties were not affected by this proccess

Keywords: Thiobacillus, heavy-metals, biohydrometallurgy, bioleaching, aerobic sludge, agricultural disposal

1. INTRODUO

O tratamento biolgico de resduos, cada vez mais utilizado como mtodo de diminuio da carga poluente nos rios emitida por indstrias e pela populao em geral, cria um outro problema, que a destinao do lodo biolgico originrio deste tratamento. Das vrias alternativas disponveis incinerao, descarte ocenico, o uso agrcola como fertilizante o mais promissor, pois ao

contrrio das outras opes, prope o seu reaproveitamento em benefcio da agricultura. Prtica relativamente recente a nvel nacional, mas utilizada a tempos em outros pases (JEWEL, W.J. 1975; KORENTAJER, L. 1991), o uso de lodos biolgicos de Estaes de Tratamento de Esgotos (ETEs) como fertilizante agrcola. A razo disto no se deve exatamente propriedades fertilizantes excepcionais, mas sobretudo porque vem dar um destino de baixo custo estes lodos, que de outra maneira, dependendo da sua classificao de acordo com a Associao Brasileira de Normas Tcnicas - ABNT1, teriam que ser realocados para aterros sanitrios, que normalmente contaminam lenis freticos e tem alto custo operacional. principalmente neste ponto que devemos atentar para que esta no seja mais uma panacia miraculosa que venha a dar uma soluo todos os segmentos da indstria e de esgotos domsticos, que gerem lodos biolgicos. Quando se trata da disposio agrcola do lodo de esgoto, dois aspectos principais devem ser levados em considerao: sanidade e metais pesados, sendo este ltimo, o principal fator de restrio na utilizao deste processo Este trabalho se prope avaliar em carter exploratrio, o mtodo de biolixiviao em lodos biolgicos, utilizando bactrias do gnero Thiobacillus, normalmente encontradas nos lodos, e que possuem metabolismo adequado em pH cido, objetivando: a) Isolar microrganismos do lodo capazes de lixiviar metais pesados;

ABNT - Associao Brasileira de Normas Tcnicas . NBR 10004 - Resduos Slidos. 63 p. 1987.

ABNT - Associao Brasileira de Normas Tcnicas . NBR 10005 - Lixiviao de Resduos. 10p. 1987. ABNT - Associao Brasileira de Normas Tcnicas . NBR 10006 - Solubilizao de Resduos. 2 p. 1987. ABNT - Associao Brasileira de Normas Tcnicas . NBR 10007 - Amostragem de Resduos. 25 p. 1987.

b) Avaliar a eficincia de lixiviao de metais pesados por microrganismos isolados do prprio lodo.

2. REVISO BIBLIOGRFICA

Um marco na histria da humanidade foi a transio da vida nmade para a vida fixa, e o fato que proporcionou isto foi o aprendizado das tcnicas bsicas de cultivo agrcola, pois a partir deste momento no era mais necessrio mudar de local devido a escassez de alimentos. Baseado principalmente nisto que se fundamentaram as bases da nossa sociedade e hoje a agricultura de valor econmico e estratgico em todas as naes do mundo. Aps uma srie de excessos e manejos incorretos que os solos agrcolas sofreram ao longo do tempo, estamos aos poucos, aprendendo a maneja-los com mais sabedoria para que possa ser utilizado permanentemente como matriz geradora de alimentos para a populao. A legislao que regulamenta a liberao e comercializao de pesticidas, fertilizantes e substncias qumicas tem ficado mais rgida ao se constatar inmeros casos de contaminaes em solos resultantes do uso abusivo ou disposio de resduos (MILLER & MILLER, 1991). Nenhum pas pode considerar sua legislao como a ideal ou definitiva, pois esta uma rea do conhecimento em constante evoluo, e novos conceitos vem tona a cada momento, e que afetam no seu uso. O efeito sinergstico existente entre os diversos poluentes, devido a sua dificuldade de avaliao, dificilmente considerado, provocando impacto ambiental. Um bom exemplo disto o efeito sinergstico entre o cobre e o zinco em lodo aerbio (CIMINO & CARISTI, 1990), e entre o cdmio e zinco (ATTAR & MALI, 1982) onde se observou uma potencializao do efeito txico destes metais quando estes pares de elementos se encontram disponveis. . O aspecto da sanidade do lodo visa averiguar a no existncia de fitopatgenos ou

zoopatgenos no lodo, que venham a prejudicar a produo agrcola, o solo , as pessoas que tenham contato direto (trabalhadores rurais) ou indireto (consumidor final). No trabalho que vem sendo desenvolvido pela Sanepar - Companhia de Saneamento do Paran (Curitiba - PR) de viabilizao agrcola do lodo biolgico, um dos aspectos mais preocupantes da sanidade a eliminao de ovos e cistos de helmintos (BARBIER et al., 1990). A problemtica de altos nveis de metais pesados no lodo o aspecto mais importante a ser levado em conta quando se visa o aproveitamento agrcola, pois a contaminao de metais

pesados nos solos causa problemas irreversveis, no existindo ainda mtodos economicamente viveis de descontaminao (CALVET et al., 1990), inutilizando o mesmo para produo de alimentos (BORDIGNON et al., 1987). Os efeitos da aplicao prolongada de lodos com nveis de metais pesados, ainda que abaixo dos limites permissveis pela legislao, no eliminam o problema cumulativo destes elementos no solo (AKHTER, 1990;. BERTHET et al., 1989; BALZER & AHRENS, 1990; CHANEY, 1989; GILLER & McGRATH, 1989; KELLER, 1989; PETRUZZELLI, 1989; REED et al., 1991), alm de se terem algumas evidncias de que a flora microbiana adaptada altas concentraes de metais no solo, tem sua capacidade de degradao de compostos aromticos sensivelmente reduzida (DOELMAN et al., 1994; WILD et al., 1991). Os metais adicionados ao solo atravs do lodo podem mudar sua espcie qumica (DUDKA & CHLOPECKA, 1990) mas tambm podem persistir no solo em uma forma extravel e disponvel absoro pelas plantas por vrios anos (BERROW & BURRIDGE, 1990; AMRHEIN et al., 1994; BARON et al., 1990), alm de poderem tambm migrar para os diversos horizontes do solo (DOWDY et al., 1991). O efeito de acumulao ao longo da cadeia trfica pode ser observado tanto em ambientes terrestres como aquticos (BOLDRINI et al., 1987; BROWN & OVERCAMP, 1992). Outro aspecto importante a ser considerado a interao entre os diversos metais e no metais, que podem resultar numa potencializao ou diminuio dos seus efeitos deletrios (DIVE et al., 1989; DIVE et al., 1983; DIVE et al., 1988; SPRAGUE & RAMSAY, 1965), alm da interao com as substncias hmicas, que acabam complexando alguns metais (DIVE et al., 1982). Embora existam vrios estudos que comprovem a eficcia do lodo biolgico no aumento da produo agrcola, estes consideram somente o perodo inicial de aplicao (GILLIES et al., 1989; GUIDI et al., 1990), e enquanto que os estudos que visam a avaliao a longo prazo, destacam o cuidado com a migrao dos metais e o seu acmulo no solo (GRUNEKLEE et al., 1989; HIEROLD, 1990; LANGENOHL, 1991; LEVINE et al., 1989; LIN, 1989; LINSTER & YOUNG, 1991; SMILDE, 1989; SRIKANTH & REDDY, 1991; STAHR, 1989). GRUN & PUSCH, (1989), destacaram em seu estudo de avaliao da aplicao de lodos com metais pesados ao longo de vrios anos, que a principal alterao observada se dava nas

razes das plantas, que apresentavam maior acumulao. HASSELBACH et al., (1990) e SHRIVASTAVA & SINGH, 1989 tambm reforam este dado em seus estudo onde envolveu vrias culturas, e mostrou que a cenoura, comparada com outros tubrculos, foi a que mais acumulou metais no seu desenvolvimento. FIGURA 1 - CORRELAO ENTRE A CONCENTRAO DE METAIS PESADOS NOS SOLOS, E AS RESPECTIVAS CONCENTRAES NAS PLANTA (ALLOWAY, 1990)

Os metais pesados tambm mostraram ter efeito deletrio na populao de rizbios do solo (HIRSCH et al., 1993), e micorrizas (KOOMEN & McGRATH, 1990; LAMBERT & WEIDENSAUL, 1991) No existem at o momento tecnologias viveis de descontaminao de lodos biolgicos quanto metais pesados, pois dos mtodos analisados at hoje, todos esbarram na limitao econmica.

J foram sugeridos vrios mtodos de solubilizao de metais pesados de lodos biolgicos (TYAGI et al., 1988) e dentre eles podemos citar os estudos de mtodos de extrao de metais pesados atravs do uso de EDTA, um forte quelante, e que mostrou altas taxas de remoo de Cd, Pb e Cu (JENKINS et al., 19812, citados por TYAGI et al., 1988). Apesar da boa lixiviao de metais alcanada com outro mtodo (tratamento cido), fatores como custo, dificuldades operacionais, grandes quantidades de cido (0.5 0.89 g de H2SO4 g-1 do peso seco do lodo) e grande quantidade de cal necessrio no final do tratamento, tem feito que as aplicaes prticas destes mtodos no se concretizem. Este trabalho visa estudar o processo de biolixiviao de metais pesados, estudo este iniciado por SCHONBORN & HARTMANN, (1978) e continuados em Quebec - Canad por TYAGI et al. (1988). Para que fosse possvel o desenvolvimento deste trabalho, foram utilizadas metodologias estabelecidas da Qumica, Microbiologia, Biohidrometalurgia e Engenharia Sanitria. Visando a estruturao do trabalho, quatro reas foram estudadas: a) Tratamento de efluentes b) Microbiologia de lodos c) Biohidrometalurgia d) Qumica dos metais pesados Como no so reas totalmente isoladas, sempre havero situaes onde esta distino no ser muito clara. Nestas situaes estaremos na interface desta s reas, que se interagem dinamicamente. Como imaginar o sanitarismo sem o envolvimento da microbiologia ? Qumica e Biohidrometalurgia ? E assim por diante ? Aps estas quatro primeiras sees, correspondentes as quatro reas mencionadas, as que se seguem trataro mais especificamente destas situaes-interface. 2.1 TRATAMENTO DE EFLUENTES

2.1.1 COMPOSIO DO LODO DE ESGOTO DOMSTICO

JENKINS, R.L.; BENJAMIN, J.S.; MARVIN, L.S.; RODGER, B.; LO, M.P.; HUANG, R.T. Metals removal and recovery from municipal sludge; J. Water Pollut. Control Fed. 53(1), 25-23. 1981

A quantidade mnima de gua de esgoto produzida por pessoa (per capita) de 4 litros por dia. Nos pases tecnologicamente mais avanados, onde a oferta de eletrodomsticos a nvel domstico como de processos e equipamentos a nvel industrial, faz com que esta quantidade tenha aumentado consideravelmente. O uso de banheiras, chuveiros, mquinas de lavagem automtica, lavadoras de loua, e unidades de disposio de lixo produzem grandes quantidades de gua suja diluda com baixo contedo de slidos, e todos necessitando tratamento antes de serem liberados para os rios. Por exemplo, um vaso sanitrio dilui pequenos volumes de resduos (< que 1 litro) para aproximadamente 10 ou 30 litros cada vez que usado. O esgoto domstico to diludo que composto essencialmente de 99,9% de gua com um contedo de matria slida seca de aproximadamente menos que 0,1%. O tratamento convencional do esgoto visa converter os slidos em suspenso e dissolvidos em um lodo manusevel (2% de slido secos) enquanto somente uma pequena proporo no efluente lquido final (0,003% de slidos secos). Em uma casa, a gua de esgoto vem de 3 fontes principais: - 1/3 do volume vem do banheiro (vaso sanitrio e lavatrio); - 1/3 do banho com chuveiro; - 1/3 de outras fontes, como lavagem de loua, roupas e preparao de alimentos e bebidas. 2.1.1.1 Composio do esgoto O esgoto classificado como domstico ou industrial. Domstico quando vem deixa

exclusivamente de residncias, construes comerciais, e instituies como escolas e hospitais, enquanto que o esgoto industrial vem de fbricas. Inevitavelmente, as grandes cidades tem uma mistura destes dois tipos de esgoto, que comumente referido como esgoto municipal, e normalmente inclui efluentes de indstrias, como lavanderias, padarias, assim como uma variedade de pequenas fbricas. pouco comum para estaes de tratamento de esgoto aceitarem esgoto de grandes complexos industriais, tais como manufatura de produtos qumicos, cervejaria, frigorficos, metalrgicas ou fbricas de papel, a menos que a estao de tratamento esteja equipada para isso. A prtica para autoridades dos pases europeus que a prpria empresa faa o tratamento e disposio do seu esgoto com estaes especialmente planejadas para tal.

O esgoto uma mistura complexa de compostos orgnicos e inorgnicos com uma pequena proporo de substncias sintetizadas pelo homem. A principal fonte de poluio no esgoto so as excrees humanas com pequenas contribuies de resduos da preparao da comida, higiene pessoal, lavagem de roupas e drenagem de superfcies. A natureza fsico-qumica das guas do esgoto municipal pode se tornar mais complexa pelo despejo de resduos industriais. As principais anlises realizadas para se avaliar a tratabilidade de um esgoto so: DBO5, slidos em suspenso e amnia, pois so estes os determinantes bsicos, pela qual a fora poluente, avaliada. A concentrao de nitrognio na gua de esgoto domstico diretamente relacionado DBO5 , com aproximadamente 40% do nitrognio total em soluo na forma de amnia. As protenas e a uria originam a desaminao liberando amnia medida que a gua flui para a estao de tratamento. Quanto mais tempo o esgoto permanece na rede coletora, maior a liberao de amnia. A produo de nitrognio per capita no Reino Unido de 5.9 g N por dia (PAINTER, 1958), que essencialmente a mesma nos EUA (BABBITT, 1947). A produo per capita de fsforo de aproximadamente um tero do peso do Nitrognio produzido aproximadamente 1,4 kg per capita por ano. Destes, 70% vem dos polifosfatos utilizados em detergentes sintticos O esgoto s pode ser tratado biologicamente se concentraes adequadas de nitrognio e fsforo estiverem presentes. Normalmente existe um excesso destes nutrientes no esgoto para as necessidades biolgicas, mas necessrio avaliar a tratabilidade do esgoto checando a relao de carbono para nitrognio e fsforo (C:N:P). A relao tima de C:N:P para tratamentos biolgicos 100:5:1 mg l-1 . A necessidade de nitrognio pelos microrganismos na unidade biolgica de uma estao de tratamento satisfeita se a relao de carbono, medida como DBO, para nitrognio igual ou menor que 18:1. At relaes C:N maiores que 22:1 a remoo ainda ocorre, mas com sua eficincia reduzida. Os microrganismos requerem nveis inferiores de fsforo, se comparados com os nveis necessrios de nitrognio. A relao exata de C:N:P para que ocorra o crescimento microbiano timo depende do processo biolgico e a forma na qual os nutrientes estejam disponveis no esgoto. Onde h desequilbrio na relao tima de C:N:P do esgoto, necessrio que se faa a adio de

nutrientes para garantir que a oxidao biolgica ocorra. Isto geralmente feito misturando-se esgoto deficiente com esgoto no deficiente nas propores corretas. Esgotos de indstrias de fermentao e enlatados so particularmente deficientes em nitrognio e fsforo, assim

necessria a complementao de nutrientes para que a oxidao carboncea tima seja alcanada.

2.1.1.1.1 Propriedades orgnicas

A matria orgnica compreende as substncias compostas pelos elementos carbono, hidrognio, oxignio, nitrognio, enxofre, fsforo . No esgoto tpico 75% dos slidos em suspenso e 40% dos slidos filtrveis so orgnicos. PAINTER (1983) estimou que no esgoto 50% do carbono orgnico e aproximadamente 35-50% do nitrognio orgnico estejam em soluo. 75% do carbono orgnico so atribudos ao principais grupos orgnicos de carboidratos, gorduras, protenas, aminocidos e cidos volteis. O restante compreende outras molculas orgnicas, tais como: cidos nucleicos, hormnios, vitaminas, surfactantes, antibiticos, contraceptivos hormonais, pesticidas, hidrocarbonetos e pigmentos. Vrias das molculas sintticas orgnicas no so biodegradveis, enquanto outras so decompostas lentamente por ao biolgica. Os constituintes orgnicos dos slidos em suspenso e a frao filtrvel do esgoto so muito diferentes. Os carboidratos compreendem o maior grupo no esgoto britnico, seguido dos cidos volteis e no volteis, aminocidos ligados e livres e detergentes aninicos. A uria o principal componente da urina, mas hidrolisada to rapidamente amnia, que encontrada somente no esgoto recente. A composio do esgoto muda rapidamente durante o armazenamento, devido ao das bactrias anaerbias, por exemplo, os carboidratos so rapidamente convertidos cidos volteis. As gorduras so os principais constituintes orgnicos que compem a escuma, e juntamente com os carboidratos e protenas contribuem para 60-80% do carbono orgnico presente. As gorduras esto entre os compostos orgnicos mais estveis e no so facilmente degradadas biologicamente. A principal fonte de gorduras vem da preparao de alimentos e em menor escala das excrees, sendo as principais fontes: a manteiga, margarina, toucinho, banhas, gorduras vegetais, leos, carne, cereais, nozes e certas frutas. As gorduras so pouco solveis em gua e desta forma so um componente importante da frao em suspenso do esgoto,

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contribuindo com cerca de 50% do carbono total presente. A concentrao normal bastante varivel nos esgotos domsticos, indo de 40 a 100 mg l-1,. O cido actico o principal cido voltil encontrado no esgoto, sendo registrado em concentraes entre 6-37 mg l-1 e, juntamente com os cido propinico, butrico, e valrico, constituem cerca de 90% do total da acidez voltil no esgoto. As protenas so uma fonte comparativamente importante de carbono no esgoto, no entanto elas so menos importantes que os carboidratos solveis ou gorduras. A protena o principal constituinte de todos os animais, e em menor extenso, do tecido vegetal. Assim, os resduos da preparao de alimentos e excrees so ricas em protenas como a casena do leite, albmen e gelatina do tecido animal e ossos. Alm de conterem carbono, hidrognio e oxignio, as protenas tambm contm uma proporo alta de nitrognio. A uria a principal fonte de nitrognio no esgoto e corresponde a mais de 80% do nitrognio orgnico total presente. As protenas so constitudas de longas cadeias de aminocidos ligados por ligaes peptdicas e so facilmente quebradas por ao bacteriana para a formao de aminocidos livres, cidos graxos, compostos nitrogenados, fosfatos e sulfetos. No esgoto, os aminocidos livres geralmente contribuem com menos de 5 mg N l-1. Alm dos aminocidos, a uria tambm uma fonte de nitrognio no esgoto, provendo entre 2-16 mg N l-1. A uria mais abundante no esgoto recente, pois rapidamente convertida para amnia. A taxa de converso para amnia tem sido estimada 3 mg N l-1 por hora 12C em amostras armazenadas (PAINTER, 1958). Nem toda a matria orgnica biodegradvel encontrada no esgoto pode ser classificada dentro de qualquer uma das principais categorias de compostos qumicos. Alguns componentes naturais so de fato combinaes de carboidratos, protenas e gorduras como as lipoprotenas e nucleoprotenas. A frao de material no biodegradvel normalmente muito pequena. Fraes como as ligninas e a celulose so degradadas muito superficialmente, devido ao tempo limitado para a decomposio dentro da estao de tratamento, e porque vrios organismos especficos para esta decomposio no esto presentes no esgoto.

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A frao orgnica do lodo exerce papel importante na especiao da frao inorgnica, principalmente atravs dos polmeros bacterianos extracelulares e dos cidos flvicos

(KARAPANAGIOTIS et al., 1990)

2.2 MICROBIOLOGIA DE LODOS

2.2.1 MICRORGANISMOS E O CONTROLE DA POLUIO

Para que o tratamento de esgotos, baseado em lodos ativados tenha sucesso, de fundamental importncia que ocorra a formao de flocos constitudos principalmente de bactrias filamentosas, que do estrutura, e de pequenos agregados das demais bactrias. A teoria da formao destes flocos de extrema importncia para o bom entendimento de como funciona este tratamento. Atravs do crescimento de microrganismos em culturas puras, MONOD (1941) estabeleceu um modelo de curva de crescimento, reproduzida na FIGURA 2, e que apresenta as seguintes fases:

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FIGURA 2 - MODELO DE CURVA DE CRESCIMENTO DE MICRORGANISMOS EM CULTURA PURA (CETESB, 1992)

a) Lag, ou de aclimatao: no ocorre aumento do nmero de microrganismos, na medida em que, nesta etapa, eles elaboram o arsenal enzimtico necessrio ao consumo dos substratos. A velocidade de crescimento nula; b) Acelerao: inicia-se o crescimento microbiano, face ao consumo de substrato. A velocidade de crescimento aumenta com o tempo; c) Log, ou Exponencial: frente s condies adequadas de vida (Substrato abundante, baixa concentrao de metablitos txicos etc.), o microrganismo cresce com velocidade mxima, que pode ser representada por uma funo exponencial; d) Desacelerao: a velocidade de crescimento, que era mxima na fase anterior, passa a diminuir, uma vez que o substrato disponvel comea a escassear e j existe o acmulo pondervel de excretas txicas; e) Estacionria: A velocidade de crescimento dos microrganismos volta a ser nula, devido ao esgotamento dos substratos ou ao acmulo de substncias txicas em nveis incompatveis com o desenvolvimento microbiano; f) Declnio: ocorre a diminuio do nmero de microrganismos (velocidade de crescimento negativa) causada pela sua morte ou lise.

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Nas duas ltimas fases os microrganismos consomem suas reservas (metabolismo endgeno), e a energia livre na forma de compostos orgnicos metabolizveis fica sensivelmente diminuda, desta forma os microrganismos no tem mais condies de evitar a fora das cargas opostas, que tende agrega-los e consequentemente forma-se o floco. Portanto, os flocos ocorrem principalmente no final da fase exponencial e comeo da fase de retardo. E o manejo da estao de tratamento biolgico deve ser sempre no sentido de manter o processo nesta regio (CETESB, 1992). A sucesso ecolgica dos microrganismos ao longo do tempo j est bem estabelecida, e pode ser observada na FIGURA 3.

FIGURA 3 - SUCESSO ECOLGICA DE ORGANISMOS EM LODOS ATIVADOS

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A reao total de tratamento biolgico do esgoto pode ser sumarizada como : M.O. + O2 + NH4+2 + P ----> Novas clulas + CO2 + H2O Onde: M.O. : Matria orgnica 2.2.2 DOENAS DE TRANSMISSO HDRICA

A gua de esgoto industrial raramente contm patgenos, mas quando presentes, esto diretamente relacionados matria-prima vegetal ou animal que est sendo processada. Por exemplo, no caso da industrializao da batata, o efluente pode conter patgenos vegetais especficos destas. Os patgenos do esgoto so capazes de infectar o homem e os animais por ingesto oral, pele ou pelas vias respiratrias. A via de infeco mais comum a oral, que geralmente causa desordens gastro-entricas. O patgeno multiplica-se e excretado com as fezes e subseqentemente ingerido pelo prximo hospedeiro via contaminao pelo esgoto, gua ou alimento.

2.2.2.1 Os patgenos originrios da gua Os mais importantes em termos de freqncia de isolamento em gua contaminada de esgoto, ou lodo so as espcies do gnero Salmonella, Shigella, Leptospira, Escherichia coli enteropatognica, Francisella, vibrio, Mycobacterium, virus entricos humanos, cistos de Entamoeba histolytica, ou outros protozorios patognicos e larvas de vrios vermes. Todos estes organismos so bem caracterizados e tem sido amplamente revistos. No entanto somente um breve resumo dos principais microrganismos dado a seguir:

2.2.2.2 Organismos indicadores A maioria dos pases requer por lei que a gua potvel seja regularmente examinada para assegurar que esteja livre de organismos que causem doenas. No entanto, os padres aceitveis variam de pas para pas. A grande diversidade de microrganismos patognicos encontrados em guas de esgoto esto normalmente presentes em nmeros baixos comparados com outros

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organismos no patgenos que tambm esto presentes. O isolamento e identificao de organismos patognicos individuais geralmente complexa, sendo diferente para cada espcie e com um gasto de tempo grande. Assim, torna-se impossvel examinar todas as amostras de gua de forma rotineira para a presena ou ausncia de tamanha variedade. Alm disso, a seleo de patgenos individuais pode ser errnea na medida que cada espcie pode tolerar condies ambientais diferentes e a presena de um pode no indicar a presena de outro. Assim para examinar amostras rotineiras de gua um nico teste, preferencialmente rpido necessrio. mais importante examinar uma amostra de gua freqentemente por um teste simples, que ocasionalmente por uma srie de testes mais complicados. Isto levou ao desenvolvimento do conceito do uso de organismos indicadores para verificar a probabilidade de contaminao por fezes. Os critrios para seleo de organismos indicadores so: a) Estejam presentes toda vez que os patgenos estiverem presentes e em nmero muito maior; b) Devem ser consistentemente e exclusivamente associados com a fonte dos patgenos; c) Devem ser resistentes ou at mais resistentes desinfetantes, sistemas de tratamento e ao ambiente aquoso que os organismos patognicos; d) Serem adequados para isolamento de rotina por crescerem em meios de cultura seletivos, alm de serem facilmente identificveis e contados com acurcia e preciso boa. Os organismos no patognicos que esto sempre presentes no intestino do homem e animais so excretados juntamente com os patgenos, mas em nmeros muito maiores, vrios deles so facilmente isolados e so ideais como indicadores de contaminao fecal. As mais amplamente utilizadas so as bactrias no-patognicas, em particular os coliformes, estreptococos fecais, e Clostridium perfringens. Existe um grande interesse em outros organismos indicadores e a habilidade de detectar rapidamente concentraes baixas de compostos associados s fezes, que no so afetadas por fatores ambientais. Isto coloca o uso dos organismos indicadores para testes de gua para contaminao fecal sob reviso. Trs grupos so normalmente usados para indicar contaminao fecal Escherichia coli ou coliforme fecal, estreptococos fecais e Clostridium perfringens. Os trs grupos so capazes de

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sobreviver por diferentes perodos de tempo no ambiente aqutico. Os estreptococos fecais morrem mais rapidamente fora do hospedeiro, e sua presena uma indicao de contaminao recente. E. coli pode sobreviver por vrias semanas sob condies ideais e so detectadas mais facilmente que outras bactrias indicadoras. Por causa disso, o teste mais utilizado para detectar poluio fecal. Clostridium perfringens um anaerbio esporulador que pode existir indefinidamente na gua. Quando E. coli e os estreptococos fecais estiverem ausentes, sua presena indica poluio remota ou intermitente. especialmente til para testar gua de lagos, no entanto os esporos se decantam em suspenso. Os esporos so mais resistentes poluio industrial que os outros indicadores e so especialmente teis em guas que recebem tanto esgoto domstico e gua de esgoto industrial. Para proteger com sucesso os reservatrios de gua, especialmente aqueles em reas rurais, necessrio ser capaz de rastrear a fonte da poluio fecal. As tcnicas bacteriolgicas tradicionalmente usadas falham em distinguir entre a poluio fecal humana e animal. Existem vrias modificaes nos mtodos tradicionais disponveis como estimar-se a relao de coliformes fecais com estreptococos fecais ou as relaes de tipos diferentes de estreptococos. No entanto o uso de bactrias indicadoras especficas so talvez as mais promissoras.

2.2.2.3 Escherichia coli e os coliformes O grupo coliforme incluem as bactrias aerbias e anaerbias facultativas, gram negativas, no formadoras de esporos que fermentam a lactose, formando cido e gs no perodo de 48 horas quando incubadas 35C (VANDERZANT & SPLITTSTOESSER, 1992). Microscopicamente, todas as espcies de Enterobacteriaceae aparentam-se como bastonetes entre 2-3 x 0.5 m, e so impossveis de se distinguir por exame visual. Somente E. coli exclusivamente de origem fecal, estando presente em fezes recentes em nmero maior que 108 ufc g , enquanto que os outros coliformes so habitantes normais do solo e gua. Assim a presena de coliformes no implica necessariamente em contaminao fecal at que se prove o contrrio.
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2.2.2.4 Estreptococos fecais

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Os estreptococos que ocorrem normalmente em fezes animais e humanas so do grupo enterococcus que incluem: S. faecalis (inclusive a variedade liquefaciens e Zymogenes), S. faecium, S. durans,, e do grupo viridans que compreende S. mitis, S. salivarus, S. bovis e S. equinus, todos eles encontrados comumente em guas contaminadas. S. Bovis e S. equinus no so encontrados no homem e podem ser utilizados como indicadores de restos animais ou de guas de esgoto provenientes de processamento de carnes. No entanto, por todas estas espcies serem indicativas de poluio fecal, no necessrio identifica-las individualmente. Um nico teste para todo o grupo suficiente. Os estreptococos fecais so cocos gram positivos de aproximadamente 1m de dimetro que ocorrem em cadeias de vrios tamanhos, no so mveis e no esporulam. Numericamente podem ser iguais ou mais abundantes que os coliformes.

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2.2.2.5 Relao de coliformes fecais / estreptococos fecais Diferentes animais excretam quantidades diferentes de coliformes fecais e estreptococos fecais, e esta relao permanece constante para fontes especficas. Assim a relao de coliformes fecais (FC) para estreptococos fecais (FS) pode ser usada para identificar a fonte de contaminao fecal em corpos de gua. A relao FC/CS em fezes recentes humanas > 4 enquanto que para animais < 0.6. Valores intermedirios so difceis de se interpretar, mas valores entre 2.0 e 4.0 indicam predominncia de resduos humanos em poluio mista, enquanto que 1.0 - 2.0 indicam nveis iguais de poluio animal e humana, e 0.7-1.0 uma predominncia de resduos animais. A relao especificamente til no rastreamento de fontes de poluio e relaes > 4.0 ou < 0.6 alertam do perigo em particular de transmisso de doenas humanas ou animais respectivamente. No entanto deve-se tomar cuidado na utilizao desta relao. Por exemplo, a variabilidade entre as amostras pode ser significante, fazendo com que as repeties sejam vitais. Tanto os estreptococos como os coliformes so mortos pH extremos, assim como com os poluentes industriais. Deve-se tomar cuidado tambm para se assegurar que as amostras estejam livres de contaminantes e que o pH esteja entre 4-9. A taxa de morte dos 2 grupos de microrganismos variam, logo a relao FC/FS se altera significativamente, se os microrganismos forem liberados no ambiente h mais que 24 horas. Isto pode ser evitado tomando-se as amostras perto da fonte poluidora suspeita e analisar-se as amostras rapidamente.

2.3 BIOHIDROMETALURGIA A Biohidrometalurgia o resultado da interao de vrias outras reas da cincia, e pode ser definida como Processo de dissoluo de rochas, concentrados produzidos por mtodos minerais metalrgicos ou componentes de produtos metalrgicos, catalisado por microrganismos adequados (ROSSI, 1990), se situando entre a geomicrobiologia, ecologia microbiana, hidrometalurgia, e a biogeoqumica microbiana (FIGURA 4).

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FIGURA 4 - DIAGRAMA DE VENN-EULER MOSTRANDO AS INTERAES ENTRE AS VRIAS CINCIAS RELACIONADAS MICROBIOLOGIA E A BIOHIDROMETALURGIA (ROSSI, 1990)

A extrao de metais partir de minrios com baixa concentrao uma das principais aplicaes da biohidrometalurgia. Geralmente este minrio com baixa concentrao obtido partir do processo pirometalrgico tradicional, no qual se extrai o metal desejado, restando contudo, resduos considerveis, mas no economicamente viveis de retornarem novamente ao incio do processo (HUTCHINS et al., 1986; TORMA, 1986). neste ponto que a biohidrometalurgia tem sua maior aplicabilidade, e dentro desta, a ao da bactria Thiobacillus ferrooxidans tem papel fundamental. Devido ao seu baixo custo de operao, se torna economicamente vivel sua aplicao para um maior aproveitamento do minrio (ROSSI, 1990).

2.3.1 MICRORGANISMOS UTILIZADOS NA BIOLIXIVIAO

Os dois microrganismos mais utilizados na lixiviao bacteriana so o Thiobacillus thiooxidans e o Thiobacillus ferrooxidans. Vrios outros podem ser tambm usados : Thiobacillus concretivorus, Pseudomonas fluorescens, P. putida, Achromobacter, Bacillus licheniformis, B. cereus, B. luteus, B. polymyxa, B. megaterium, e vrias bactrias termoflicas, incluindo

Thiobacillus thermophilica, Thermothrix thioparus, Thiobacillus TH1, e Sulfobolus acidocaldarius. Os

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organismos heterotrficos listados acima no foram usados ainda, mas provvel que no futuro processos sejam desenvolvidos no sentido que os metais sejam extrados dos minrios pela ao dos cidos orgnicos produzidos microbiolgicamente via quelatos e formao de sais. Por causa do seu crescimento mais rpido, as bactrias termoflicas podem acelerar significativamente o processo de lixiviao (EHRLICH, 1990)

2.3.2 PROCESSOS COMERCIAIS

Trs mtodos tem aplicaes prticas: - Lixiviao em curva (Slope leaching): Minrios modos so colocados em grandes pilhas ao lado de um barranco e continuamente irrigados com gua contendo Thiobacillus. O lquido coletado na base e reutilizado aps a extrao dos metais, e possvel o enriquecimento da bactria na lagoa de oxidao. - Lixiviao em pilhas. O minrio arranjado em grandes pilhas e tratado como no slope leaching. - Lixiviao In Situ: O lquido contendo Thiobacillus bombeado atravs de passagens perfuradas no minrio bruto (. Na maioria dos casos, a permeabilidade da rocha deve ser aumentada explodindo-a). O lquido cido passa atravs da rocha e coletado na cavidade inferior , sendo ento bombeado para cima, onde ocorre sua extrao. O lquido reutilizado aps novo enriquecimento regenerao da bactria.

2.3.3 LIXIVIAO DE MINRIOS DE COBRE

Vrios minrios so utilizados na produo de cobre, e vrios metais so encontrados associados. Por exemplo, a calcopirita (CuFeS2) contm 25% de cobre, 25,9% de ferro, 2,5% de zinco, e 33% de enxofre. A calcopirita oxidada da seguinte forma: 2 CuFeS2 + 8 O2 + H2SO4 -------> 2 CuSO4 + Fe2(SO4)3 + H2O A covelita (CuS) oxidada sulfato de cobre:

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CuS + 2O2 ----> CuSO4 O sistema de biolixiviao de cobre tem sido utilizado em grande escala no mundo inteiro, j h vrios anos, geralmente operados pelo mtodo de lixiviao em pilhas (slope leaching), e em algumas vezes como uma combinao de pilha e lixiviao in situ. A soluo lixiviadora (soluo de sulfato e Fe3+ ) irrigada sobre a pilha e percola atravs da rocha para o nvel inferior onde o lquido rico em cobre coletado. A soluo de cobre (contendo acima de 0,6 g/l) removida, o cobre precipitado, e a gua reutilizada aps o ajuste do pH para 2. Os pases no qual a lixiviao microbiana do cobre tem sido muito utilizada incluem Estados unidos, Austrlia e Japo. Atualmente 25% da produo mundial de cobre provm de processos de biolixiviao, representando anualmente cerca de 1 bilho de dlares. No Brasil a biolixiviao do cobre j vem sendo estudada em vrias localidades, tais como Jaguari - BA (FIGUEIREDO et al., 1994); Caraba - BA (URENHA & ALLI, 1990); Camaqu - RS (VAISBICH et al., 1979)

2.3.4 LIXIVIAO DE MINRIOS DE URNIO Embora a quantidade de urnio obtida por biolixiviao seja menor que a de cobre, o processo economicamente mais significante devido ao preo relativamente alto do urnio, centenas de toneladas do material devem ser manipuladas para obter uma tonelada de urnio, e a lixiviao in situ est ganhando cada vez mais, maior aceitao, pois elimina os gastos com o transporte de grandes quantidades de minrio. No processo de lixiviao do urnio, o xido de urnio tetravalente insolvel oxidado com uma soluo a quente de cido sulfrico e Fe3+ para formar o sulfato de uranilo (UO22+ ) solvel. UO2 + Fe2(SO4)3 -------- > UO2SO4 + 2 FeSO4 O sulfato frrico e o cido sulfrico podem ser produzidos pelo T. ferrooxidans a partir da metabolizao da pirita (FeS2) contida dentro do minrio de urnio. 2 FeS2 + H2O + 5.5 O2 ------> Fe2(SO4)3 A reao da pirita usada para a produo inicial da soluo lixiviadora de Fe
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As condies timas de lixiviao do minrio de urnio so: pH 1.5-3.5, 35C e 0.2% CO2 no ar. Algumas linhagens termoflicas so conhecidas e que tem uma temperatura tima de 45-50C (EHRLICH, 1990). Em processos comerciais, o urnio dissolvido extrado do lquido lixiviado com solventes orgnicos como o tributilfosfato, e o urnio precipitado subseqentemente da fase orgnica. A adsoro dos ons uranila com trocadores de ons outra possibilidade. Os solventes orgnicos que permanecem no sistema aps a extrao podem ser txicos e consequentemente causar problemas quando o sistema microbiolgico reutilizado. No Brasil a biolixiviao dos minrios de urnio j foi estudada em Poos de Caldas pela antiga Empresas Nucleares Brasileiras - NUCLEBRS, atualmente Urnio do Brasil S/A (GARCIA, 1993)

2.4 METAIS PESADOS

2.4.1 DEFINIO DE METAIS PESADOS Embora amplamente utilizado, o termo metal pesado, no possui uma definio nica, variando de acordo com o ramo da cincia que o aborda. Ao questionarmos um toxicologista sobre esta definio, este provavelmente dar nfase aos elementos qumicos txicos aos mamferos superiores (zootoxicidade). Ao agrnomo, nfase ser dada principalmente aos elementos qumicos txicos s culturas vegetais (fitotoxicidade), cuja contaminao no solo possa diminuir a produtividade agrcola. Um qumico poder enfatizar os elementos cuja densidade atmica seja maior que 6g cm . A idia comum de metais pesados estas diversas reas a de serem metais ou metalides que esto associados com poluio e toxicidade, mas tambm incluem alguns elementos que so essenciais para os seres vivos em baixas concentraes. Metais txicos uma alternativa ao termo metais pesados, mas mais emotivo e aplicvel somente aos elementos no essenciais, como Pb, Cd, Hg, As, Tl e U e no apropriado para os elementos que so biologicamente essenciais como Co, Cu Mn, Se e Zn (ALLOWAY, 1993).
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2.4.1.1 Cdmio Conforme ALLOWAY (1993), O cdmio uma descoberta relativamente recente, tendo sido descrito e descoberto em 1817, est em 67 lugar na ordem de abundncia de elementos. No possui funo biolgica e altamente txico plantas e animais, no entanto os nveis naturais de Cd encontrados normalmente no causam toxicidade aguda. O maior risco sade humana provm da sua acumulao crnica nos rins, onde podem causar disfuno no crtex em concentraes acima de 200 mg/kg do peso fresco. Os alimentos so a principal via pela qual o Cd entra no corpo, mas o fumo e as exposies ocupacionais aos vapores de CdO tambm so fontes importantes de contaminao. A FAO/WHO recomenda que nvel de ingesto mxima tolervel seja de 400 a 500 g/semana, o que equivalente aproximadamente 70g por dia. A ingesto mdia mundial de Cd varia entre 20 - 75 /dia e aparecem problemas claramente visveis quando a ingesto se aproxima do topo da variao. Os fumantes adicionam uma dose extra de 20 35 g Cd /dia sua ingesto. O Cdmio um dos metais pesados mais preocupantes, principalmente devido fcil absoro deste pelas plantas, acumulando-se medida que sobe na cadeia trfica (GILLER & McGRATH, 1989) Em vista dos danos da acumulao crnica do Cd no corpo humano, os fatores que influenciam sua concentrao nos componentes da dieta so de grande importncia. Como geralmente as concentraes deste metal nos solos no contaminados baixa, as fontes de contaminao e o comportamento deste elemento nos solos contaminados so de grande interesse. Com a vida-mdia estimada do Cd varia entre 15 - 1100 anos, torna-se este um problema de longo prazo, demostrando que sua poluio deve ser prevenida ou minimizada ao mximo. Como resultado da necessidade crescente do Cd pela indstria, a poluio ambiental deste elemento tem aumentando rapidamente nas ltimas dcadas. A poluio uma conseqncia inevitvel da atividade de minerao, manufatura e descarte. Ao contrrio do Pb, Cu e Hg que tem sido utilizados sculos, o Cd tem sido usado em grande escala somente neste sculo (mais da metade do Cd utilizado at hoje na indstria foi produzido nos ltimos 20 anos). obtido como um co-produto da fundio do Zn e outros metais-base. Nenhum mineral usado primariamente como fonte de Cd. A produo aumentou de 11.000 t em 1960 para 19.000 t em 1985. Seus usos

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principais so como: (1) revestimento protetor no ao; (2) vrias ligas; (3) em pigmentos para plsticos e vidros; (4) como estabilizantes para plsticos; (5) em baterias secas de Ni-Cd, e (6) outros usos diversos, incluindo clulas fotovoltaicas. As fontes de contaminao do solo pelo Cd so a minerao e fuso do Cd e Zn; poluio atmosfrica de indstrias metalrgicas; disposio de lixo contendo Cd, como a incinerao de containers plsticos e baterias, uso de lodos de esgoto em solos; e a queima de combustveis fsseis. Mesmo antes do Cd ser usado comercialmente, a contaminao ocorria vindo de uma grande variedade de materiais que continham Cd como impureza, e os fertilizantes fosfticos so um bom exemplo. Embora a concentrao de Cd nestes fertilizantes variasse bastante o seu uso contnuo leva a aumentos significativos no nvel de Cd de vrios solos agrcolas. A deposio de partculas de aerossol da poluio atmosfrica de grandes centros urbanos e industriais tambm afeta os solos da maioria dos pases industrializados, e o Cd desta fonte pode ser absorvido tambm pelas plantas atravs da folhagem. 2.4.1.1.1 Origem do cdmio nos solos A degradao de rochas uma das principais fontes de cdmio em solos. (PAGE & BINGHAM (1973) citado por ALLOWAY, 1993 sugeriram que os solos derivados de rochas gneas deveriam ter concentraes de Cd entre 0.1 - 0.3 mg/kg, os solos derivados de rochas metamrficas deveriam ter 0.1 - 1.0 mg/kg Cd e aqueles derivados de rochas sedimentares 0.3 - 11 mg/kg Cd. Em geral, para a maioria dos solos, espera-se conter < 1 mg/kg, com exceo daqueles contaminados com fontes discretas ou de material parenteral com altas concentraes de Cd. Em um levantamento feito para os pases europeus sobre as contribuies relativas de cdmio das principais fontes antropognicas, foi estimado que: Os fertilizantes fosfticos contribuiriam com 54 - 58%; deposio atmosfrica 39 - 41%; e os lodos biolgicos com 2 - 5% (YOST, 1979; TJELL, 1981 citado por ALLOWAY, 1993) . Estas fontes dariam origem um

aumento anual na concentrao de cdmio na Dinamarca de 0,6% (TJELL, 1981 apud ALLOWAY, 1993), embora acrscimos muito maiores ocorram em locais prximos indstrias metalrgicas ou onde o lodo de esgoto aplicado ao solo.

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2.4.1.1.2 Concentrao de cdmio nos solos Uma pesquisa realizada em solos no contaminados de 36 estados americanos (envolvendo 3.305 amostras) revelou uma variao na concentrao de cdmio de 0,005 2,4 mg/kg Cd (HOLMGREEN, 1986 apud ALLOWAY, 1993). A Tabela 1 fornece dados de vrios levantamentos feitos em diversos pases. Tabela 1 - Variaes e mdias das concentraes de Cdmio em solos (mg/kg) (ALLOWAY, 1993) Solo Dinamarca (agrcola) Sucia (agrcola) Canad (no agrcola) EUA (agrcola) Ohio, EUA (agrcola) Reino Unido (agrcola) Solos Europeus Variao 0,03 - 0,9 0,03 - 2,3 0,01 - 0,1 0,005 - 2,4 < 0,1 - 2,4 0,01 - 2,4 ------------Mdia 0,22 0,22 0,07 0,27 0,27 1,0* 0,2 - 0,4

* Valor comum, no a mdia

2.4.1.1.3 Cdmio em lodos de esgoto Os efluentes contm cdmio originrio das excrees humanas, produtos domsticos que contenham Zn, e efluentes industriais. Quase todo o cdmio se acumula no lodo produzido durante o tratamento de esgoto. Uma ampla faixa de concentraes de cdmio encontrada no lodo (Tabela 2). As concentraes variam de maior que 1 3650 mg/kg Cd na matria seca.

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Tabela 2 - Concentraes de cdmio em lodos biolgicos (ALLOWAY, 1993) Variao (mg/kg) 6,8 - 444 3 - 3410 2 - 1100 0,3 - 168 2 - 1500 < 1 - 90 < 2450 10-20 2,3 - 171 0,3 - 236 Fonte do lodo 16 cidades (EUA) 150 estaes de tratamento (EUA) 57 localidades em Michigan (EUA) 6 cidades (pases baixos) 42 estaes de tratamento (Reino Unido) 45 estaes de tratamento (Irlanda) Bordeaux (Frana) Helsinki (Finlndia) 93 Estaes de tratamento (Sucia) 7 cidades (Ontrio - Canad)

2.4.1.2 Cobre Conforme ALLOWAY (1993), O cobre considerado um dos elementos essenciais mais importantes para plantas e animais. No estado metlico o cobre tem colorao avermelhada, malevel e um bom condutor de calor e eletricidade. Os usos principais do Cu so na produo de fios e de suas ligas, bronze e lato. Na natureza o cobre forma sulfetos, sulfatos, carbonatos e outros compostos, e tambm ocorre, em ambientes redutores como metal nativo. O cobre se situa em 26, logo atrs do Zn, em abundncia na litosfera. A abundncia mdia do cobre na litosfera esta em aproximadamente 70 mg/kg enquanto os valores reportados para a crosta terrestre variam de 24 55 mg/kg. Para os solos mundiais o valor de 20 mg/kg de Cu da literatura antiga mudou para 30 mg/kg. O cobre se encontra associado com a matria orgnica do solo, xidos de Fe e Mn, argilas e outros minerais. O cobre extravel, algumas vezes denominado de disponvel, se refere quantidade deste elemento no solo que se correlaciona estatsticamente com as concentraes absorvidas e assimiladas pelas plantas. A disponibilidade do cobre para as plantas se refere prontido com o

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qual o on disponvel [Cu(H2O)6]2+ absorvido pelas plantas em solos cidos e Cu(OH)20 em solos neutros e alcalinos. A disponibilidade do cobre relacionada aos potenciais qumicos das respectivas espcies na soluo do solo. O nvel e distribuio do cobre total e extravel no perfil do solo varia com o tipo de solo e o material de origem. O cobre especificamente adsorvido ou fixado nos solos, tornando-o um dos metais trao que menos se desloca. Altas concentraes de Cobre na camada superficial de um solo so uma indicao da adio de fertilizantes, lodos de esgoto e outros resduos, fungicidas ou bactericidas, ou estrumes de sunos e cavalos. A abundncia de micronutrientes essenciais nas plantas geralmente se apresentam na seguinte ordem: Fe > Mn > B > Zn< Cu < Mo < Cl. A confirmao da essencialidade do cobre para plantas foi feita em 1930. Na maioria das espcies vegetais a concentrao varia de 5 - 20 mg/kg Cu. Sob condies extremas de solo ou de espcies vegetais especficas, o limite pode se alargar de 1 - 30 mg/kg Cu. Por causa das espcies vegetais e diferenas nos cultivares no possvel dar valores nicos para concentraes de cobre associadas com deficincia ou toxicidade do elemento. O cobre nas plantas atua como parte de grupos prostticos de sistemas enzimticos, e como ativador facultativo de sistemas enzimticos. Na nutrio animal a deficincia de cobre quase que totalmente confinada ao gado e ovelhas de pasto devido aos baixos nveis de Cu na forragem ou ao nvel normal de Cu acompanhado de ingesto elevada de Mo, S, Fe ou solo que so suficientes para limitar a absoro e reteno de Cu . Sob condies normais o Cu um agente benigno aos humanos. O Cobre total de um indivduo adulto se situa entre 100 - 150 mg. A dieta normal prov 1-5 mg Cu/dia e difcil elaborar uma dieta com menos que 1 mg Cu/dia. A toxicidade do Cu hereditria em humanos conhecida como doena de Wilson foi descrita em 1912. Para estes indivduos, os ligantes do cobre envolvidos na homeostasia do cobre so deficientes e nveis txicos se acumulam em diversos tecidos. O cobre no considerado um elemento txico de efeito cumulativo. No obstante, elevadas concentraes deste elemento podem produzir vmitos e uma ingesto oral muito prolongada pode ocasionar estragos no fgado.

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2.4.1.2.1 Cobre em lodos de esgoto Embora a adubao com lodos seja capazes de aumentar substancialmente os nveis de cobre no solo, no existem trabalhos que reportem toxicidade do cobre para plantas quando estas so cultivadas solos frteis e calados. A matria orgnica do solo aparenta ser o fator dominante no controle da reteno do cobre. Assim a taxa de decomposio da matria orgnica do lodo se torna uma considerao importante para solos tratados com lodos. Enquanto a toxicidade para plantas superiores seja de maior importncia, a atividade microbiana do solo pode ser mais sensvel as adies de cobre.

2.4.1.3 Chumbo

Conforme ALLOWAY, (1993), quando o chumbo liberado no ambiente, este possui um longo tempo de residncia comparado com a maioria dos poluentes. Como resultado, o chumbo e seus compostos tendem a se acumular nos solos e sedimentos, onde, devido sua baixa solubilidade e relativa resistncia degradao microbiana, estes permanecem acessveis cadeia alimentar e ao metabolismo humano por muito tempo. O chumbo venenoso e existem suspeitas que antes que qualquer sintoma clnico aparea ele possa causar problemas mentais em crianas. No existem evidncias significantes de que o chumbo exera qualquer papel essencial no metabolismo. Vrias investigaes tem sido feitas quanto ao chumbo no ambiente, incluindo solos, nos ltimos vinte anos e agora temos um entendimento mais detalhado da sua qumica no solo e significncia ecolgica e sanitria. O chumbo pode se encontrar em dois estados de oxidao Pb(II) e Pb(IV) que so estveis, mas no ambiente o elemento predominante o on Pb2+. No seu estado elementar o chumbo denso (11.3 pg/cm ), metal azul-acinzentado que se funde 327C e ferve 1744C. O baixo ponto de fuso permitiu que fosse fundido e trabalhado mesmo em sociedades primitivas. O metal bem malevel e tende a escorrer sob presso, assim pode ser facilmente cortado e moldado, e desde os tempos mais antigos tem sido usado como cano e telhas. O chumbo metlico ope razovel resistncia radiao ionizante, tornando um bom protetor em trabalhos que utilizem o Raio-X e radioistopos. O chumbo se liga prontamente com outros metais: a liga Pb/Sb usada
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principalmente na confeco de placas de baterias e a liga Pb/Sn so usadas geralmentes em soldas. O metal chumbo combinado com o PbO2 utilizado para fabricar a bateria cida . Outros compostos inorgnicos com chumbo amplamente usados so as tintas que contm xidos de chumbo ou sabes de chumbo que promovem a polimerizao. Existem uma ampla gama de compostos orgnicos base de Pb(IV), especialmente os compostos tetra alquil e tetra aril. 2.4.1.3.1 Chumbo em lodos de esgoto Uma fonte de chumbo nos solos que alcanou importncia considervel nos ltimos anos o lodo de esgoto. Devido propriedade dos resduos orgnicos de reter ons metlicos por complexao, o lodo se torna uma reserva considervel de metais pesados. O chumbo, juntamente com o Cdmio so os elementos mais preocupantes, pois no excercem nenhuma funo biolgica conhecida em vegetais ou animais. 2.4.1.4 Zinco Conforme ALLOWAY (1993), o zinco um elemento trao essencial ao seres humanos, animais e plantas superiores. Embora os efeitos benficos do Zn no crescimento de Aspergillus niger fossem descobertos por Raulin em 1869-1870, a descoberta da essencialidade do Zn para as plantas superiores em 1926 atribuda Sommer e Lipman. O zinco considerado essencial para seres humanos e animais, i.e. uma deficincia resulta em prejuzo do funcionamento normal do organismo, e a suplementao com nveis fisiolgicos deste elemento, e no outros, previne ou cura esta deficincia. A ingesto diria recomendada para adultos gira em torno de 15 mg/dia. O zinco age como um componente estrutural ou cataltico em vrias enzimas envolvidas no metabolismo energtico, transcrio e translao. Os sintomas da deficincia do zinco nos humanos e animais so a ausncia de apetite, deficincia severa no crescimento, leses na pele e imaturidade sexual. Para os humanos a depresso ou imunocompetncia e a perda da acuidade do paladar tambm podem ocorrer. As plantas superiores absorvem o Zn como um ction divalente (Zn2+), que age tanto como um componente metlico de enzimas ou como um cofator funcional, estrutural ou regulador de um grande nmero de enzimas, como as desidrogenases, aldolases, isomerases, trophosforilases, RNA e DNA polimerases. Por causa destas funes o zinco est envolvido no metabolismo das protenas

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e carbohidratos. O Zinco tambm necessrio para a sntese do triptofano, um precursor para a sntese do cido indol-actico (IAA). Culturas que so particularmente sensveis deficincia do Zn so os cereais, milho, sorgo, linho, algodo, legumes, uvas, ctricos e rvores frutferas (pssego, ma). Em geral, a maioria dos sintomas permanentes de deficincia de Zn so a clorose entre os veios (principalmente nas monocotiledneas), crescimento atrofiado, m formao do caule e das folhas. A concentrao de Zn nas plantas varia consideravelmente, como funo de diferentes solos e fatores climticos e tambm dos gentipos das plantas. Como uma aproximao geral, as seguintes faixas de concentrao de Zn podem ser adotadas para o tecido de folhas desenvolvidas; (I) deficiente se menos que 10-20 mg/kg de matria seca; (II) suficiente ou normal se estiver entre 25-150 mg/kg; (III) em excesso ou txica se acima de 400 mg/kg.

2.4.1.4.1 O Zinco em lodos de esgoto

Os lodos de esgoto contm geralmente grandes quantidades de Zn, que podem afetar as culturas vegetais. O zinco no esgoto bruto tende estar associado com os slidos em suspenso , que so dissociados durante o tratamento biolgico. O tratamento biolgico aerbio de esgotos convencional remove 40-47% do Zn do Influente. O lodo varia muito quanto concentrao de Zn, que geralmente maiores que os nveis encontrados nos solos. Se torna claro que o uso indiscriminado do lodo de esgoto em solos agrcolas levaria uma acumulao de Zn, constituindo em um risco permanente para plantas e cultivares. Neste contexto vrios esforos tem sido feitos para minimizar estes riscos pela regulamentao do uso do lodo de esgoto em solos agrcolas. As normas para o lodo tem sido adotadas em vrios pases, e so geralmente baseadas nos seguintes conceitos: a) Que as concentraes de Zn no lodo no excedam os limites estabelecidos. As diretivas da comisso da Comunidade Econmica Europia recomenda como concentrao mxima 2500 e 4000 mg/kg Zn. Para a maioria dos pases o mximo permissvel de Zn total em lodos fica na faixa de 100-5000 mg/kg Zn.

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b) que as concentraes de Zn nos solos no possam exceder os limites definidos. Na maioria dos pases adotado um nvel mximo de 300 mg/kg Zn total . ` c) Que as cargas de metais pesados aplicadas aos solos agrcolas no possas exceder os

limites definidos. As diretivas da CEC (Comunidade Econmica Europia) propem valores de 175550 kg/ha como carga mxima de Zn, no entanto se assume que a concentrao normal de Zn seja de 80 mg/kg e que o aumento de 1mg/kg Zn no solo (na camada superficial de 20 cm) seja resultado da aplicao de 2.5 kg/ha Zn. d) que o Zn tende a causar menos problemas se for adicionado em vrios incrementos pequenos durante um perodo longo de tempo, do que em um ou poucos grandes incrementos. Neste contexto a CEC sugere que a carga anual de Zn seja de 30 kg/ha baseado numa mdia de 10 anos.

2.4.2 PAPEL DOS ELEMENTOS INORGNICOS NA NUTRIO ANIMAL

Os animais necessitam de vrios elementos qumicos para manter seu metabolismo normal e podemos agrupar estes elementos em duas classes: Macroelementos (Ca, Mg, Na, K, P, S, Cl), necessrios em quantidades relativamente grandes, da ordem de gramas por dia, e que geralmente exercem mais de uma funo; e os microelementos, necessrios em quantidades dirias na ordem de miligramas ou microgramas (15 de interesse animal). A maioria dos microelementos funcionam como grupos prostticos ou cofatores de enzimas. Nestas enzimas os elementos essenciais parecem funcionar de pelo menos trs formas diferentes: (1) o elemento essencial pode ter atividade cataltica prpria sobre uma reao qumica e esta atividade muito aumentada pela protena enzimtica, isto especialmente verdade quanto ao ferro e ao cobre; (2) o on metlico essencial pode formar um complexo com o substrato e com o stio cataltico da enzima, desta forma ele aproxima os dois em uma forma ativa; (3) um on metlico essencial pode funcionar como um potente receptor de eltrons em algum momento do ciclo cataltico.

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2.4.3 EFEITOS DOS METAIS PESADOS EM LODOS BIOLGICOS A fauna dos lodos biolgicos, composta principalmente de bactrias e protozorios tem comportamentos variados quanto a presena de uma alta concentrao de metais pesados. LASKAUSKAITE (1989), reporta que em uma comparao de dois lodos onde o diferencial era a concentrao de metais pesados, no houve alterao na populao de protozorios. Segundo a Norma L5.220 - Determinao do nmero mais provvel pela tcnica de tubos mltiplos (CETESB, 1985), necessrio a adio de 0,3 ml de uma soluo a 15% de EDTA, para cada 100 ml de amostra, alm do tiossulfato de sdio (volumes de 0,1 ml de uma soluo a 10% para cada 100 ml de amostra). O EDTA atua como agente quelante, reduzindo a ao txica dos metais pesados, apresentando uma ao mais ampla que o tiossulfato de sdio, o qual, na concentrao empregada, previne a ao bactericida do cobre. KOUZELI-KATSIRI et al,. (1988) desenvolveram um mtodo para avaliao da toxicidade dos metais pesados em lodos anaerbios. O mtodo se baseia no monitoramento da produo diria de gs e na porcentagem de reduo dos slidos volteis. Por este mtodo fixaram valoreslimite de toxicidade dos metais flora anaerbia.

2.5 APLICABILIDADE DAS TCNICAS BIOHIDROMETALRGICAS NA DESCONTAMINAO DE METAIS PESADOS EM LODOS BIOLGICOS Analisando o potencial de aplicabilidade da tcnica biohidrometalrgica na

descontaminao de metais pesados em lodos biolgicos, TYAGI et al., 1988) iniciaram os estudos de adaptao desta tcnica, obtendo bons resultados, que variavam de acordo com o metal considerado. Dependendo do tipo de lodo de esgoto considerado (primrio, lodo ativado e lodo digerido), varia a eficincia do processo de solubilizao. Esta diferena pode ser explicada principalmente pela predominncia de determinados tipos de espcies inorgnicas (HAYES & THEIS, 19783). Durante a digesto anaerbia, a qumica dos metais pesados controlada no s pela solubilidade

HAYES, T.D. & THEIS, T.L. The distribution of heavy metals in anaerobic digestion. J. Water Pollut. Control Fed., 50(1), 61-72. 1978

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dos precipitados inorgnicos, mas tambm pela adsoro e posterior incorporao dos metais na biomassa do digestor. Existem evidncias que sugerem que os metais pesados associados com a frao orgnica do lodo esto menos disponveis para a disposio no ambiente do que os precipitados inorgnicos (LEEPPER, 1972; CHANEY, 1973). No caso especfico de ambientes cidos esperaria-se que os precipitados se solubilizassem rapidamente, no entanto para os metais ligados molculas orgnicas, seria necessria uma exposio mais prolongada sob condies mais cidas para que ocorresse a remoo e recuperao dos metais pesados. 2.5.1 MTODOS DE DESCONTAMINAO DE METAIS PESADOS EM LODOS BIOLGICOS Existem vrios mtodos que se propem a realizar a diminuio da concentrao de metais pesados em lodos biolgicos. 2.5.1.1 Biolgicos 2.5.1.1.1 Acumulao de metais nas clulas de microrganismos Este processo de descontaminao se baseia no acmulo de metais pesados na parede celular dos microrganismos, principalmente bactrias. As gram-positivas apresentam uma porcentagem de bioacumulao em torno de 30% a mais que em relao s gram-negativas, (GOURDON et al., 1990). LOWE & GAUDY (1989) prope um mtodo de tratamento modificado, que faria com que uma populao microbiana se desenvolvesse, e que esta teria propriedades de adsoro de metais na parede celular, iguais ou melhores culturas puras especficas. SCOTT et al.,(1986), em trabalho realizado com a camada de polissacardeos da membrana celular do microrganismo Pseudomonas putida, reportou uma porcentagem de remoo de 100% de cdmio (na faixa de 0,5 - 1,5 mg/l), atravs da adsoro realizada pela camada polissacardica. VENKOBACHAR (1990) , realizou trabalho com bio-adsoro de metais pelos fungos Aspergillus niger e Ganoderma lucidum. Em outro estudo utilizou-se o fungo Brettanomyces lambicus para descontaminao do chumbo e zinco (WENZL et al., 1990) SUYAMA et al. (1994) props um novo biomaterial obtido a partir de uma membrana da casca de ovo para reter ctions metlicos em solues diludas de lodo.

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2.5.1.2 Qumicos 2.5.1.2.1 Lixiviao cida O mtodo qumico da lixiviao cida, reportado por TYAGI et al. (1988), consistia na adio de cido sulfrico at que ocorresse a lixiviao dos metais. Este mtodo, altamente oneroso, foi utilizado somente em escala laboratorial. 2.5.1.2.2 Tratamento com EDTA Este tratamento consiste na quelao dos ons metlicos atravs do EDTA, atravs de um efluente especfico da indstria petroqumica (KASAN & BAECKER, 1989; SHAY & ETZEL, 1992) 2.5.1.3 Qumico-biolgicos 2.5.1.3.1 Bactrias oxidantes de ferro nativas e adaptadas do prprio lodo - Este mtodo apropriado para se confirmar a existncia e se obter um lodo adaptado com uma populao de bactrias oxidantes de ferro no lodo acima do normal, possibilitando que o processo de bio-lixiviao se desenvolva. Consiste basicamente na incubao do lodo sob agitao, com pH ajustado para 4.0 e com suplementao de ferro (II). Quando o potencial redox sobe acima de 500 mV e o pH caia abaixo de 2.5, transferida uma alquota de 5% deste para um lodo fresco, adicionado de 0,5% FeSO4 x 7H2O. Este processo repetido at que o potencial redox aumente constantemente acima de 500 mV em 2 transferncias consecutivas. Neste momento se assume que exista uma populao de Thiobacillus totalmente adaptada (TYAGI et al. , 1992; COUILLARD & CHARTIER, 1991a; COUILLARD et al. , 1991b; COUILLARD et al. , 1991c; COUILLARD & MERCIER, 1991d; COUILLARD & MERCIER, 1991; COUILLARD & MERCIER, 1990). 2.5.1.3.2 Bactrias oxidantes de ferro exticas ao lodo So utilizadas cepas padro (ATCC - American Type Collection Culture), do gnero Thiobacillus que so ento submetidas ao processo de biolixiviao (TYAGI et al., 1990) 2.6 DISPOSIO DO LODO EM SOLO A disposio do lodo em solos agrcolas, tem mostrado algum aumento na produo (BUCHGRABER & SCHECHTNER, 1989 `; BUGBEE et al., 1991; LERCH et al., 1990) e tem se

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comprovado que o nitrognio e o carbono proveniente de lodos so fontes de N e C, facilmente assimilveis (LERCH et al., 1992). Alm da utilizao do lodo de esgoto em solos agrcolas como fertilizante e condicionador do solo, existem 5 outros mtodos bem utilizados de disposio no solo: - Irrigao; - "Shallow lagooning"; - "Trenching"; - "Disposal to refuse tips"; - "Land reclamation"; O solo usado para estes mtodos de disposio pode ser classificado como de sacrifcio ou preparo. Irrigao, "Shallow lagooning" e entrincheiramento contnuo so executados

permanentemente e intensivamente em pequenas reas de terra. Assim, devido ao nvel de contaminao que resulta inevitavelmente das altas cargas de lodo aplicadas, esta se torna inadequada para a agricultura, e provavelmente nunca sero novamente.

2.7 MECANISMOS DE LIXIVIAO DE METAIS PESADOS POR Thiobacillus ferrooxidans Existem basicamente 2 mecanismos de lixiviao de metais pesados por T. ferrooxidans 2.7.1 DIRETO Onde os sulfetos so oxidados sulfatos pela bactria.

Thiobacilli MS + 2O2 ----------------------> MSO4

2.7.2 INDIRETO

Onde os ons frricos produzidos pela oxidao do on ferroso pela bactria reagem quimicamente com os sulfetos metlicos para produzir Fe(II), fechando o ciclo.

T. ferrooxidans 2Fe
2+

+ O2 + 2H -----------------------------> 2Fe

3+

+ H2O (1)

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MS + 2 Fe3+ ---------------------------> M2+ + 2Fe2+ + S0 Thiobacilli S0 + 3/2 O2 + H2O --------------------------> 2H+ + SO42onde: MS = sulfeto metlico insolvel

O on frrico um oxidante potente e como tal usado na hidrometalurgia para dissoluo de vrios minerais. No entanto, durante as reaes o on frrico se torna reduzido a on ferroso, uma forma qumica sem qualquer capacidade oxidante. Para formar o ferro trivalente, ele tem que ser reoxidado de volta para o estado de oxidao mais elevado. Isto feito geralmente com o oxignio em presena de cido (vide equao 1). A propriedade oxidante faz do on frrico um dos reagentes mais teis na hidrometalurgia. a utilizao do on frrico seriamente afetado pela sua lenta cintica de formao, e vrios mtodos tem que ser investigados para aumentar a taxa de oxidao dos ons Fe(II). A concluso geral, considerando o aumento da velocidade de oxidao do on ferroso, que algum tipo de catalisador, como o dixido de enxofre, carvo ativado, on cprico, etc., tem que estar presente. Outro mtodo para aumentar a taxa de oxidao do on ferroso usar bactrias apropriadas que necessitam oxidar o on ferroso para on frrico para satisfazer suas necessidades energticas de crescimento, como o caso do Thiobacillus ferrooxidans.. partir destes mecanismos, grupos de pesquisa canadenses iniciados por TYAGI et al., (1988) iniciaram experimentos para utilizao destes princpios em lodos biolgicos, objetivando a descontaminao de metais pesados. Os metais pesados nos lodos de estaes de tratamento de esgotos, se encontram geralmente na forma de sulfetos de metais pesados (MS), principalmente em lodos anaerbios, devido suas condies redutoras (COUILLARD & MERCIER, 1990). E estes sulfetos podem ser utilizados como substrato pelo T. ferrooxidans (WONG & HENRY, 1984). No entanto, estudos de especiao de metais pesados em lodos anaerbios e aerbios mostraram no haver diferena significativa entre estes lodos referentes ao contedo de frao oxidvel que representa os sulfetos metlicos e metais ligados organicamente. Sem alegar que o contedo de sulfetos seja to alto no lodo aerbio do que no lodo anaerbio, podemos esperar que o lodo aerbio contenha uma frao dos metais que estejam presentes como sulfetos (COUILLARD & MERCIER, 1990).

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Resistncia ctions metlicos

A possibilidade de se utilizar bactrias do gnero Thiobacillus na lixiviao de metais pesados condicionada pela resistncia inerente destes microrganismos s concentraes de metais pesados destas solues. A caracterstica diferencial dos microrganismos do gnero Thiobacillus, e em particular da espcie Thiobacillus ferrooxidans a resistncia, no compartilhada pela maioria dos microrganismos concentrao de ons metlicos de mesma ordem de magnitude dos processos hidrometalrgicos tpicos. O efeito dos metais pesados nos microrganismos depende da sua concentrao na soluo podendo ser bactericidas (os microrganismos so mortos), ou bacteriostticos (o crescimento inibido mas os microrganismos no so mortos). A tolerncia do Thiobacillus ferrooxidans aos ctions metlicos atribuda habilidade das clulas em excluir ctions metlicos da sua estrutura interna. O conhecimento terico que permitiu acreditar na existncia deste organismo em lodos de esgoto foi obtido em estudo feito com 19 lodos (primrios, secundrios, anaerbios, aerbios e de lagoas de estabilizao) do Canada e EUA, onde foi constatada a presena de Thiobacillus em todos (TYAGI et al., 1992) 2.8 GNERO Thiobacillus Conforme o Manual de Bergey, Vol 4. , as bactrias do gnero Thiobacillus so gramnegativas em forma de bastonete (~0,5 x 1,0-4,0m) com algumas espcies mveis por meio de flagelos polares. No possuem formas de resistncia conhecidas. Obtm energia da oxidao de um ou mais compostos de enxofre reduzidos, incluindo sulfetos, enxofre, tiossulfato, politionatos e tiocianato. O sulfato o produto final da oxidao dos compostos sulfurados, embora o enxofre, sulfitos ou politionatos possam ser acumulados. Algumas espcies podem obter energia tambm da oxidao do on ferroso para o on frrico. Todas as espcies podem fixar CO2 pelo ciclo BensonCalvin e so capazes de crescimento autotrfico. Algumas espcies so qumiolitotrficas obrigatrias, enquanto que outras so capazes de crescer quimiorganotrficamente. O gnero inclui

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aerbios obrigatrios e tipos desnitrificantes facultativos. As espcies deste gnero exibem pH timo de crescimento na faixa de 2-8 e temperatura tima de 20-43C. Validade Taxonmica Devido grande heterogeneidade fisiolgica e gentica dos microrganismos deste gnero, constatada pela relao mol% G+C do DNA, diversidade de homologia do DNA, variedades de ubiquinona, contedo de cidos graxos e a existncia de espcies quimiolitotrficas e quimiorganotrficas, a validade taxonmica deste gnero pode ser discutida. O nico fato que rene estes microrganismos que todas so eubactrias em formato de bastonete que obtm energia para o seu crescimento autotrfico da oxidao de enxofre inorgnico. 2.9 Thiobacillus ferrooxidans Conforme Temple and Colmer, 1951 - (Bergeys manual - vol. 4), a espcie Thiobacillus ferrooxidans consistem de bastonetes, geralmente nicos ou aos pares, 0,5 x 1,00 m; mveis. A linhagem-tipo mvel por um nico flagelo polar. Constituem pequenas colnias (0,5 - 1 mm) crescidas em gar tiosulfato ou tetrationato. O meio lquido com sulfato ferroso pH 1,6 muda de uma colorao esverdeada para mbar a marrom-avermelhada devido ao sulfato frrico. pH acima ou igual a 1.9 ocorre precipitao e incrustao considervel com sulfatos frricos bsicos (jarositas). So quimiolitotrficas e auttroficas obrigatrias. Oxidam e se desenvolvem em ferro (II), pirita, vrios minerais de sulfetos, enxofre, tiosulfato ou tetrationato. Estritamente aerbios. Podem usar sais de amnia e provavelmente nitratos como fonte de N. So capazes tambm de fixar nitrognio. Temperatura tima: 30-35C; faixa de crescimento de 10-37C (nenhum crescimento a 42C). pH timo: aproximadamente 2,5; Faixa de pH com crescimento: 1,3 - 4,5. Isolados em vrios locais do mundo onde existe ferro oxidvel, minerais , sulfetos e enxofre. importante ressaltar que na biohidrometalurgia, a identificao da bactria como sendo Thiobacillus ferrooxidans baseada na observao dos seguintes atributos (ROSSI, 1990): - Crescimento como cultura pura em um meio de sulfato ferroso onde o on ferroso a nica fonte de energia;

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- Aerbios obrigatrios; - Mesfilos - Auttrofos - Acidfilos No entanto, deve se ter em mente que o microrganismos Thiobacillus ferrooxidans no o nico capaz de oxidar o ferro e que exerce um papel importante nos processos bio-hidrometalrgicos

2.10 TEORIA DE MONOD E SUA APLICAO NA CINTICA DO CRESCIMENTO DE CULTURAS DE Thiobacillus Analisando-se o status atual do cultivo contnuo de microrganismos, marcante a influncia que a teoria de MONOD (1941) exerceu e continua exercendo na rea de pesquisa em microbiologia, fermentao e suas ramificaes. Como uma semente no estabelecimento de uma cultura em fermentao, a fundamentao na qual a tcnica de cultivo contnuo se baseia e o ponto de partida da qual vrias modificaes se estenderam. A teoria de Monod foi baseada na anlise do crescimento exponencial em culturas puras de microrganismos, um modelo essencialmente matemtico. Consequentemente tem as vantagens e desvantagens que tal teoria matemtica envolve. Os modelos matemticos so formados por equaes, de modo que se espera que a performance destes modelos reflitam somente o grau de preciso definidos pela(s) equao(es) usada(s), no importando quo boas ou ruins sejam as manipulaes envolvidas.. Este o ponto fraco e forte da teoria de Monod. BARFORD e HALL, 1978
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citado por DAWSON, 1985 consideraram a modelagem

matemtica do crescimento microbiano em uma reviso recente e concluram que o modelo Monod ainda o melhor exemplo na formulao de um modelo matemtico para descrever o crescimento microbiano. No entanto importante considerar que o modelo Monod se baseia em premissas simples, e importante reconhecer estas limitaes inerentes ao modelo. O modelo Monod relata o crescimento em um meio simples e definido para a concentrao de um nutriente limitante, sob condies ambientais constantes. Tambm assume que os

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microrganismos se desenvolvem de uma maneira uniforme (sob condies de crescimento balanceado). Nestas condies, o crescimento descrito por uma nica varivel, um nico passo de uma reao com estequiometria restrita, de tal modo que o rendimento seja constante (DAWSON, 1985). O modelo convencional de Monod til para descrever o crescimento limitado pelo carbono dos hetertrofos. Quando o substrato limitante do crescimento incorporado como material celular. Quando o Thiobacillus ferrooxidans desenvolvido em ambiente contendo ferro reduzido, o substrato limitante de energia no incorporado como material celular. O modelo de Monod depende de uma produo constante, que relaciona a taxa de crescimento especfico remoo do substrato. O modelo de Monod foi modificado tambm para acomodar a possibilidade que a produo possa aumentar com o aumento da taxa de crescimento (i.e. manuteno de energia). Mas menos adaptvel possibilidade de que o produto possa diminuir com o aumento da taxa de crescimento. A diminuio do produto com o aumento da taxa de crescimento normalmente observada em uma grande variedade de microrganismos crescidos em fermentadores sob a limitao de ons inorgnicos como o fosfato, magnsio, silicato, amnio, nitrato e vitaminas (B12). O modelo cintico de armazenagem interna (Internal stores model) proposto por Droop e modificado por Rhee tem sido usado para descrever taxas de crescimento em funo de concentraes internas mais do que externas dos substratos limitantes. essencial neste modelo cintico que os produtos variem

inversamente com a taxa de crescimento, desde que as concentraes do substrato intracelular aumentem com o aumento da taxa de crescimento. A aplicao tanto do modelo de Monod ou do armazenamento interno para o crescimento de culturas de Thiobacillus ferrooxidans limitado, mas apesar destas limitaes, ambos os modelos podem ser usados para descrever matematicamente o crescimento e funes de oxidao de ferro (BRADDOCK et al., 1884). 2.11 FIXAO DE CO2 EM MICRORGANISMOS A principal via de reduo do CO2 para carbono orgnico atravs do ciclo de Calvin, que consiste em uma srie de reaes de fixao, reduo e regenerao da molcula aceptora de CO2.
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BARFORD, J.P. & HALL, R.J., Evaluation of approaches to mathematical modelling of microbial growth, Process Biochem., 22(8), 1978

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Os principais microrganismos que realizam a fixao de CO2 so as bactrias aerbias quimiolitotrficas; bactrias fotossintetizantes, incluindo as cianobactrias; Espcies de

Pseudomonas; Actinomicetos, Rizbios; algumas bactrias metilotrficas e algas. Com exceo da especificidade do nucleotdeo piridina da reao da desidrogenase gliceraldedo fosfato, o esquema o mesmo nos procariontes e eucariontes. O resultado bruto do ciclo de Calvin a produo de uma molcula de triose fosfato a partir de 3 molculas de CO2. Embora este ciclo seja a via assimilatria mais utilizada na biosfera, vrias espcies autotrfcas fixam CO2 por rotas diferentes, como a reduo do CO2 para acetato (e outros cidos graxos de cadeia curta) pelas bactrias acetognicas ou metano pelas metanognicas. Algumas espcies de Thiobacillus facultativos so capazes de oxidar tanto compostos

sulfurados reduzidos como material orgnico. Na maioria dos casos a oxidao do substrato orgnico causa um bloqueio da represso da sntese do maquinrio da fixao de CO2. Em culturas de batelada em substratos orgnicos T. novellus e T. versutus inibiram completamente o metabolismo incompatveis. Um dos principais catalisadores-chave do ciclo de Calvin a Ribulose 1-5 bifosfato carboxilase/oxigenase (RuBPC/O), que sem dvida, a protena mais abundante na biosfera, e provavelmente a enzima mais estudada. A razo da sua abundncia se deve provavelmente sua baixa eficincia como catalizador. Com um turnover de 1.000 para 2.000 mol de CO2 fixados por mol de enzima por minuto. H necessidade que as clulas sintetizem grandes quantidades desta enzima para que ela sobreviva somente com o CO2 como fonte nica de carbono. A RuBPC/O catalisa tambm a oxigenlise do RuBP, resultando eventualmente na produo de cido gliclico (TABITA, 1988). autotrfico, sugerindo que o metabolismo heterotrfico e autotrfico so

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3. MATERIAL E MTODOS

3.1 - ESQUEMA DAS ATIVIDADES REALIZADAS NO TRABALHO DE TESE

FIGURA 5 - ESQUEMA DAS ATIVIDADES REALIZADAS DURANTE A TESE

Isolamento doT.f. do
lodo da Sanepar e medio de M.P. e micronutrientes.

Montagem da clula eletroqumica para monitoramento do potencial redox

Acerto da confeco de meios de cultivo para o T.f.

Reviso bibliogrfica

Cultivo do T.f. isolado do lodo em fermentador

IImplementao da avaliao quantitativa de Fe(II) colorimtrica com ortofenantrolina

Calibrao da curva padro com a clula eletroqumica

Determinao das condies timas de lixiviao de M.P. do lodo estudado

3.2 AMOSTRA As amostras de lodo utilizadas nos experimentos de cultivo do lodo artificial e enriquecimento de Thiobacillus foram coletadas na Estao de Tratamento de Esgotos Belm (ETE - Belm) da Companhia de Saneamento do Paran - SANEPAR (Curitiba - Paran - Brasil).

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3.3 REAGENTES

Tabela 3 - Reagentes utilizados Material 1,10 fenantrolina Acetato de amnia ACS Acetato de cdmio cristalizado P.A. Acetato de chumbo cristalizado P.A. Acetato de cobre P.A. Acetato de sdio Cristalizado P.A. Acetato de zinco P.A. cido clordrico P.A. cido Ntrico P.A. cido sulfrico P.A. Agarose Type IV P.A. Bacto-peptona Dextrose P.A. Enxofre P.A. ferricianeto de potssio P.A. Fluoreto de potssio P.A. Fosfato de potssio dibsico P.A. Haxacianoferrato (II) de potssio trihidratado P.A. Sulfato de Magnsio Sulfato ferroso heptahidratado P.A. Sulfeto de sdio Fabricante Merck Merck Baker Ecibra Merck Merck Merck Merck Merck Merck Sigma Difco Difco Merck Merck Merck Merck Merck Reagen P.A. Merck Merck Descrio C12H8N2 x H2O CH3COONH4 Cd(CH3COO) x 2H2O Pb(CH3COO)2 x 3H2O

CH3COONa x 3H2O (CH3COO)2Zn x 2H2O HCl HNO3 H2SO4

S elementar K3[Fe(CN)6] KF K2HPO4 K4[Fe(CN)6] x 3 H2O MgSO4 x 7H2O FeSO4 x 7H2O Na2S

3.4 SELEO DOS METAIS PESADOS ESTUDADOS Para este estudo foram escolhidos os elementos cobre (Cu), zinco ( Zn), chumbo(Pb) e cdmio (Cd) seguindo os seguintes critrios: - Fitotoxicidade - Zootoxicidade - Concentrao mdia nas amostras de lodo estudadas: Elementos como o cobre, zinco so considerados essenciais, desempenhando papel biolgico importante tanto em animais como vegetais, porm em nveis relativamente elevados, como os encontrados nas amostras de lodo analisadas, tambm excercem efeitos deletrios. O mercrio, que apesar de no ser essencial e ser altamente txico no foi includo por no apresentar concentraes no lodo estudado que justificassem seu estudo. O cromo, inicialmente considerado neste estudo, foi recentemente eliminado da lista dos principais metais pesados que

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restringem o uso de lodos em solos, pois em estudo conduzido pelo EPA (EPA, 1995; IZSAKI et al., 1989), no foi demonstrado nenhum retardamento no crescimento de vegetais at a concentrao de 3.000 kg/hectare. Alm disso, foram feitos estudos de exposio ocupacional de tratoristas, que trabalharam em solos que receberam lodos com concentraes de cromo at 3.000 kg/hectare. Neste estudo levou-se em conta tambm que somente uma porcentagem mnima deste cromo se encontra na forma hexavalante, e a maior parte na forma trivalente (a menos txica) (EPA, 1995). Como a biolixiviao atua basicamente com sulfetos. O Cromo no encontrado nesta forma, e sim na forma de hidrxido, devido principalmente aos respectivos produtos de solubilidade. O cromo acaba se precipitando como hidrxido de cromo antes que se forme o sulfeto de cromo. O mercrio e o cdmio so conhecidos por seus efeitos acumulativos, e mesmo estando em concentraes baixas podem ser potencialmente perigosos. Nenhum destes dois elementos essencial. 3.5 SELEO DA CONCENTRAO DOS METAIS PESADOS ESTUDADOS Como este trabalho se baseia principalmente nos estudos de biolixiviao do grupo de pesquisa canadense, resolveu-se adotar os limites mximos permitidos de metais pesados do Canad (Tabela 4). Como o cobre no consta nesta legislao, adotou-se o valor de 500 mg/kg (valor adotado pela Blgica - Tabela 4). Assim, temos as seguintes concentraes, que foram utilizadas nos experimentos: (500 mg/kg Pb; 20 mg/kg Cd; 1850 mg/kg Zn e 500 mg/kg de Cu).

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Tabela 4 - Concentrao mxima permitida de metais pesados (mg/kg peso seco) em lodos considerados aceitveis para uso agrcola Pas Blgica Canad Dinamarca Finlndia Frana Alemanha Pases Baixo Noruega Sucia Sua Cd 10 20 8 30 20 20 10 10 15 30 Zn 2000 1850 -5000 3000 3000 3000 3000 10000 1000 Cu 500 --3000 1000 1200 1500 1500 3000 1000 Ni 100 180 30 500 200 200 100 100 500 200 Pb 300 500 400 Cr 500 --Mn 500 --3000 --500 500 --Mo -20 -------20 Co 20 150 -100 20 -20 20 50 100 As 10 75 --------Se 25 14 --100 -----Hg 10 5 6 25 10 25 10 7 8 10

1200 1000 800 1000

1200 1200 300 300 300 200 200 1000

1000 1000

Fonte: WEBBER et al., 1983 3.6 EQUIPAMENTOS

Tabela 5 - Equipamentos utilizados Material Centrfuga 10.000 RPM pHmetro digital e medidor do potencial redox Espectrofotmetro Siel 500 5 aeradores para aqurio 2 Cubas de 10 litros Banho-maria com agitao Banho maria sem agitao Sistema de deionizao de gua Milli-Q - Microfiltrao de gua Pipetador automtico Bomba de vcuo 3.7 MEIOS DE CULTIVOS Os meios de cultivo para bactrias ferro oxidantes requerem cuidados adicionais na hora do preparo, pois ao contrrio das bactrias hetertrofas comuns, as primeiras no toleram muito bem altas concentraes de matria orgnica, chegando a inibir seu desenvolvimento. Uma srie de trabalhos abordou a problemtica do cultivo das bactrias do gnero Thiobacillus (SILVERMAN & Fabricante Sorvall Oriba Siel Brasil Fanem Fanem Millipore

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LUNDGREN, 1959; TUOVINEN & KELLY, 1973; TYAGI, 1991a; JONES & KELLY, 1983), pois o rendimento energtico da oxidao de compostos inorgnicos menor que o da utilizao de substratos orgnicos, fazendo com que seja necessrio um tempo maior de incubao para o crescimento de uma biomassa razovel.

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3.7.1 MEIO 9K MODIFICADO EM CONCENTRAO SIMPLES PARA Thiobacillus ferrooxidans - Soluo 1 (sais de base).........................................................700 ml - soluo 2 (fonte de energia)...................................................300 ml a) Preparar a soluo 1 (sais de base) com a seguinte composio: - Sulfato de Amnio [(NH4)2SO4 ].........................................................................3g - Sulfato de Magnsio (MgSO4 7H2O)..................................................................0.5g - Fosfato de Potssio dibsico (K2HPO4)................................................................0.5g - Cloreto de potssio KCl .....................................................................................0.1g - Nitrato de Clcio [Ca(NO3)2]..............................................................................0.01g - cido Sulfrico [H2SO4 1N] ..............................................................................1 ml - H2O ................................................................................................................700 ml pH final aps esterilizao: 2,8 a 3,0 Para o preparo dessa soluo, pesar os reagentes e acrescentar 700 mL de gua destilada. Ajustar o pH para 2,8 a 3,0. Esterilizar em autoclave. b) Preparar a soluo 2 (fonte de energia) com a seguinte composio: - Sulfato ferroso (FeSO4 x 7H2O) .........................................................................44,22 g - gua destilada ..................................................................................................300 ml Para esse preparo, pesar 44,22 g de sulfato ferroso, colocar em balo volumtrico de 300 mL e completar o volume com gua destilada. Homogeneizar at a completa dissoluo do sulfato ferroso e esterilizar por filtrao em membrana com porosidade de 0,20 m. c) juntar as solues 1 e 2 e , com todos os cuidados de assepsia, distribuir volume de 10 ml em tubos de ensaio estreis tamponados de 16 mm x 150 mm. d) os tubos de ensaio, contendo o meio 9K modificado, podem ser armazenados sob refrigerao, durante o perodo mximo de 2 semanas.

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3.7.2 MEIO T&K - Soluo de Sais ......................................................................................800 ml - Soluo de Sulfato ferroso ......................................................................200 ml Soluo de Sais - (NH4)2SO4 .......................................................0,4 g - K2HPO4 ...........................................................0,4 g - MgSO4 x 7H2O.................................................0,4 g - H2O Destilada ...............................................800 ml - H2SO4 (1 N) q.s.p. para pH 1.8 Esterilizar em autoclave 20 minutos/120C Soluo de Sulfato Ferroso - FeSO4 x 7H2O ................................................33,3 g - H2O Destilada ...............................................200 ml Obs: antes de adicionar o sal na soluo de Sulfato Ferroso , ajustar o pH com cido sulfrico (1 N) para 1,8. Esterilizar por membrana filtrante 0,45. Deixar esfriar a soluo de sais e misturar as duas solues. Para obteno de meio slido , utilizar agarose da Inlab (HSA 42C - MR : 0,13 - Cod: 1740)

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3.7.3 MEIO T&K MODIFICADO - Soluo de Sais ......................................................................................800 ml - Soluo de Sulfato ferroso ......................................................................200 ml Soluo de Sais - (NH4)2SO4 .......................................................0,5 g - K2HPO4 ...........................................................0,5 g - MgSO4 x 7H2O.................................................0,5 g - H2O Destilada ...............................................800 ml - H2SO4 (1 N) q.s.p. para pH 1.8 Esterilizar em autoclave 20 minutos/120C Soluo de Sulfato Ferroso - FeSO4 x 7H2O ................................................33,3 g - H2O Destilada ...............................................200 ml Obs: dissolver os sais da soluo de sais e a de sulfato ferroso separadamente em gua j acidulada com cido sulfrico (1 N) para 1,8. Esterilizar a soluo de sulfato ferroso por membrana filtrante 0,45m. Deixar esfriar a soluo de sais e misturar as duas solues.

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3.8

MTODO DE ENRIQUECIMENTO DE Thiobacillus DE LODOS DE ESGOTOS

Para a obteno de uma soluo enriquecida com bactrias do gnero Thiobacillus de lodos de esgoto, tentou-se adotar a metodologia utilizada por TYAGI et al.,(1992), que consistia basicamente em: Alquotas de 150ml de lodo so transferidas para erlenmeyers de 500 ml. O pH do lodo ajustado para 4.0 com cido slfurico 2N e adiciona-se 0,75g de FeSO4 x 7H2O cada frasco. Os lodos para aclimatao bacteriana so incubados temperatura ambiente (21C +- 1C) sob agitao. Aps a adaptao inicial, quando o potencial de xido-reduo alcanar 500 mV e o pH diminuir para 2.5 ou abaixo, 5% do lodo acidificado misturado com 150 ml do lodo fresco correspondente contendo 0,5% FeSO4 x 7H2O e incubado em seguida. Este passo repetido at que o aumento do ORP (Potencial de xido-reduo) para 500 mV seja constante em 2 transferncias consecutivas. Nesta fase, considera-se que os as bactrias estejam bem adaptadas (TYAGI et al, 1992). A presena de microrganismos oxidantes de Fe2+ nos lodos adaptados constatada misturando-se 1 ml do lodo adaptado em 100 ml de meio 9K (pH 2.8) (tem 3.7.1) contendo 44 g. FeSO4 x 7 H2O por litro, preparado de acordo com LACEY & LAWSON (1970). As amostras so incubadas por 4 semanas. Se uma colorao vermelho-escura-marrom e/ou precipitado aparecer, a amostra considerada positiva para a presena de bactrias oxidantes de Fe . Duas amostrascontrole so utilizadas (sem a adio de sulfato ferroso e outra com lodo esterilizado contendo 0,5% de sulfato ferroso) para distinguir-se entre a oxidao biolgica e qumica do ferro. Para determinar a capacidade de solubilizao de metais das bactrias nativas oxidantes de ferro, um volume de 200 ml de cada lodo ajustado pH 4.0 foi suplementado com 0.5% FeSO4 e um inculo 5% (lodo adaptado) foi utilizado para os experimentos de lixiviao em frascos erlenmeyers de 500 ml. Amostras de 15 ml foram retiradas dos frascos a cada 2 dias para anlises qumicas. As amostras foram centrifugadas 20.000 x g por 15 minutos e os metais na poro lquida analisados. Nesta metodologia, o tempo de incubao necessrio para aumentar o potencial de xidoreduo (ORP) para 500 mV foi de 11 a 28 dias para todos os lodos. Aps a adaptao, a
2+

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inoculao de cada lodo com a microflora oxidante de ferro ( no lodo adaptado) precisou entre 2 a 10 dias para aumentar o ORP para 500 mV (Ver esquema na FIGURA 6)

FIGURA 6 - ESQUEMA DA METODOLOGIA ORIGINAL DE ENRIQUECIMENTO DE THIOBACILLUS FERROOXIDANS DE LODOS BIOLGICOS

Para as condies do trabalho acima discutido, os autores determinaram que o potencial redox ideal para a mxima solubilizao dos metais deveria ser de 450-500 mV. Esta metodologia acima no dava as respostas esperadas, provavelmente devido ao alto teor de matria orgnica deste lodo em especfico, que fazia com que as leituras eletroqumicas

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fossem muito instveis, dificultando qualquer anlise. Assim optou-se por uma modificao no mtodo, na qual se centrifugou o lodo para que as partculas de matria orgnica maiores se sedimentassem. Assim, procedeu-se da seguinte maneira: 3.8.1 MTODO MODIFICADO DE OBTENO DE UMA CULTURA ENRIQUECIDA DE Thiobacillus - Centrifugou-se aproximadamente 40 ml da amostra de lodo (1000 rpm / 5 minutos) , retirando-se o sobrenadante. - O sobrenadante foi diludo nas seguintes diluies: 10-5, 10-6, 10-7, 10-8, 10-9, e incubado em meio T&K (pH 2,0) (tem 3.7.23.7.2) sob agitao ( 27C). - Centrifugou-se o lodo a 1000 rpm por 5 minutos, somente para precipitao dos slidos, fazendo com que somente a matria orgnica solvel se mantivesse, desfavorecendo o desenvolvimento de microrganismos que utilizassem este substrato. - Retirou-se o sobrenadante e fez-se diluies em soluo salina 0,85% 10-4 at 109 (volume final de 10ml) e adicionou-se estas diluies em 90 ml de meio T&K. Obtendo as diluies finais de 10-5 at 10-10.

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3.9 MTODO ELETROQUMICO COMO FORMA DE ACOMPANHAR A VELOCIDADE DE OXIDAO DO ON FERROSO A ON FRRICO NA PRESENA DE Thiobacillus ferrooxidans O mtodo oficial para se determinar a concentrao do on ferroso em soluo o da ortofenantrolina (APHA et al. , 1992) e se baseia na formao do complexo colorido entre 3 molculas de orto-fenantrolina com um tomo de on ferroso, que quantificado com um espectrofotmetro. Este mtodo tem o inconveniente de no fornecer resultados imediatos, alm de ser instrumentalmente mais exigente. PESIC et al., (1989) realizaram um trabalho mostrando que possvel se validar o mtodo eletroqumico atravs do mtodo oficial da orto-fenantrolina em solues de sulfatos com oxignio, na presena de Thiobacillus ferrooxidans, com a finalidade de se avaliar a atividade da bactria. No trabalho deste grupo de pesquisa foram comparados dois sistemas de clulas eletroqumicas. A primeira clula formada por um eletrodo de trabalho de pirita e um eletrodo de referncia de calomelano e a segunda por um eletrodo de trabalho de platina e um eletrodo de referncia de Ag/AgCl. Esta comparao foi realizada a fim de validar-se a clula eletroqumica que utiliza o eletrodo de platina, pois o eletrodo de pirita, apesar de ser o mais adequado para a medio da oxidao do on ferroso a frrico, no est comercialmente disponvel, e pode ser alterado no processo de medio. Estes autores concluram que o eletrodo de platina se presta muito bem para o acompanhamento da oxidao do Fe2+. Para a checagem do correto funcionamento da clula eletroqumica, foram utilizadas duas solues com potencial redox fixo, cuja composio especificada na TABELA 6 e na TABELA 7 TABELA 6 - REAGENTES PARA PREPARO DA SOLUO-PADRO 234 MV Soluo-padro 234 mV Ferrocianeto trihidratado de potssio Ferricianeto trihidratado de potssio gua destilada (q.s.p.) 2,1 g. 8,25 g. 500 ml

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TABELA 7 - REAGENTES PARA PREPARO DA SOLUO 300 MV Soluo-padro 300 mV Ferrocianeto trihidratado de potssio Ferricianeto trihidratado de potssio Fluoreto de potssio gua destilada (q.s.p.) 2,1 g. 8,25 g. 16,95 g. 500 ml

3.10 MTODO DA 1,10 - FENANTROLINA PRA DETERMINAO DE Fe (II) No contexto deste trabalho, este mtodo foi utilizado para a validao do mtodo eletroqumico no acompanhamento da cintica de oxidao do ferro II, e foi baseada nos trabalhos de PESIC et al., (1989) O Fe2+ reage com a 1,10 - Fenantrolina para formar o complexo de cor vermelho-alaranjado [(C12H8N2)3Fe]2+. A intensidade da cor independente da acidez no intervalo de pH de 2-9 e estvel por longos perodos. O Fe3+ pode ser reduzido com cloreto de hidroxilamnio ou com hidroquinona. Prata, bismuto, cobre, nquel e cobalto interferem seriamente, do mesmo modo perclorato, cianeto, molibdato e tungstato. O complexo de orto-fenantrolina ferroso ( e o perclorato) pode ser extrado com nitrobenzeno, para a medida da absorbncia em 515 nm contra um branco. Tanto o Fe
2+

como o Fe

3+

podem ser determinados espectrofotometricamente; o complexo

de Fe2+ laranja - avermelhado absorve em 515 nm, e ambos os complexos de Fe2+ e de Fe3+ amarelo tem idntica absoro em 396 nm, sendo as intensidades aditivas. A soluo, levemente cida por adio de cido sulfrico, tratada com 1,10-fenantrolina e tamponada com hidrogenoftalato de potssio em pH de 3,9; a leitura em 396 nm d o ferro total e em 515 nm d o Fe .
2+

55

3.11 MTODO DE SNTESE DOS SULFETOS DE METAIS PESADOS Como as amostras de lodo utilizadas no continham altas concentraes de metais pesados, foi necessria a contaminao artificial. Para isso foram sintetizados sulfetos dos metais pesados, que foram obtidos reagindo o acetato ou sulfato dos metais desejados com sulfeto de sdio (Na2S). As reaes para cada um dos 4 metais utilizados so as que se seguem: Sulfeto de cdmio Cd(CH3COO)2 x 2H2O + Na2S ------------> CdS (meio levemente cido) Sulfeto de Zinco (CH3COO)2Zn x 2H2O + + Na2S -------------> ZnS neutro/OHSulfeto de Cobre CuSO4 x 5H2O + Na2S -------------> CuS (HCl 1M forte) Sulfeto de Chumbo Pb(CH3COO)2 x 3H2O + Na2S -------------> PbS (neutro a levemente cido) Aps a reao de precipitao, aquece-se a soluo por 20 minutos, resfria-se e procede-se a filtrao em papel de filtro qualitativo. feita a lavagem do filtrado vrias vezes com gua deionizada at que o odor caracterstico de cido actico se dissipe. O filtrado ento colocado em estufa 100 graus celsius para desidratao. feita a raspagem dos sulfetos no papel de filtro e ento modos em almofariz de quartzo , para ento serem utilizados.

3.12 MTODO DE ANLISE DE METAIS PESADOS Foi utilizada a metodologia de anlise de metais pesados preconizada pela CETESB - SP . - Coleta-se uma alquota de 50 ml de cada tratamento; - Filtra-se com membrana de 0,45 m. O filtrado vai em recipiente plstico diretamente para anlise por espectrofotometria de absoro atmica; - O material retido na filtrao por membrana colocado em bcker de 250 ml, e feito o ataque qumico com 40 ml de gua rgia (cido ntrico e cido clordrico na proporo 3:1), at que o volume se reduza para aproximadamente 40 ml;

56

- Aps o ataque feito a filtrao para balo de 50 ml, e enviada anlise por espectrofotometria de absoro atmica. 3.13 CULTIVO DO LODO ARTIFICIAL

3.13.1 CONTAMINAO ARTIFICIAL DO LODO Aps a determinao da concentrao dos metais pesados em vrios lodos de esgoto disponveis para estudo (ver seqncia de tabelas a seguir, concluiu-se que a concentrao nestes era baixa para o tipo de experimento pretendido, assim optou-se para a contaminao artificial com os sulfetos destes metais. Estes dados so resultado do projeto de destinao final do lodo de esgoto, conduzido pela Sanepar (Companhia de Saneamento do Paran).

57

TABELA 8 - VARIAO DA CONCENTRAO SANEPAR (CURITIBA, 1995)

Amostra 1001 1002 1003 1004 1005 Mdia Cr 180 190 165 175 183 178,6

DE METAIS PESADOS NO LODO AERBIO DA

ETE - BELM -

Zn 757 880 837 855 790 824

Pb 115 130 127 140 102 123

Ni 95 66 72 68 68 73,8

Cu 473 520 454 440 310 439

Hg nd nd 2,4 1,9 1,6 1,18

Cd nd nd nd nd nd

Obs: As amostras correspondem ao mesmo material coletado ao longo de 2 meses FIGURA 7 - VARIAO DA CONCENTRAO DE METAIS PESADOS NO LODO AERBIO DA ETE - BELM - SANEPAR (CURITIBA , 1995)
Variao da Concentrao de Metais Pesados no Lodo da ETE Belm
900 800 700 Cr 600 mg/Kg 500 400 300 200 100 0 1001 Zn Pb Ni Cu Hg Cd

1002

1003

1004

1005

58

TABELA 9 - VARIAO DA CONCENTRAO DE MACROELEMENTOS (%) E PROPRIEDADES FSICO-QUMICAS DO LODO AERBIO DA ETE - BELM
amostra N total P2O5 K2O Ca Mg pH Cinzas P total M.O total C total C/N Umidade 1001 4,78 1,67 0,36 1,03 0,34 5,6 30,2 3,47 58,5 32,5 7:01 11,3 1002 5,82 2,81 0,46 1,22 0,45 5,9 35,6 3,92 63,2 35,1 6:01 1,16 1003 6,36 2,43 0,65 1,04 0,35 5,6 27,8 3,45 69,2 38,5 6:01 2,92 1004 6,64 2,69 0,42 1,07 0,42 5,8 27,7 3,71 69,9 38,8 6:01 2,4 1005 5,98 2,68 0,66 1,18 0,37 5,8 25,4 3,84 66,3 36,8 6:01 8,75 Mdia 5,916 2,46 0,51 1,11 0,39 5,74 29,34 3,678 65,42 36,34 6:01 5,306

Obs: As amostras correspondem ao mesmo material coletado ao longo de 2 meses FIGURA 8 - SEQUNCIA DE GRFICOS MOSTRANDO A VARIAO NA CONCENTRAO DE MACROELEMENTOS E PROPRIEDADES FSICO-QUIMICAS DO LODO AERBIO DA ETE BELM
% % P2O5 % K2O

N total

1001

1002

1003

1004

1005

1001

1002

1003

1004 1004 1004

1001

1002

1003

1004

1005

Ca

Mg

pH

1001

1002

1003

1001

1002

1003

1004

1001

1002

1003

1004

1005

1005

Cinzas

P total

M.O total

80 60 40 20 0 1001 1002 1003 1004 1005

1 0,8 0,6 0,4 0,2 0 1001 1002 1003 1004 1005

40 30 20 10 0 1001 1002 1003 1005

C total

Umidade

25 20 15 10 5 0 1001 1002 1003 1004 1005

30 25 20 15 10 5 0 1001 1002 1003 1004 1005

1005

0,85 0,8 0,75 0,7 0,65 0,6

0,5 0,4 0,3 0,2 0,1 0

8 6 4 2 0

1005

2,5 2 1,5 1 0,5 0

0,8 0,6 0,4 0,2 0

0,5 0,4 0,3 0,2 0,1 0

59

TABELA 10 - VARIAO DA CONCENTRAO DE METAIS PESADOS NO LODOANAERBIO DE RALFS (REATORES ANAERBIOS DE LEITO FLUIDIZADO)
Amostra 1001 1002 1003 1004 1005 mdia Cr 58 55 68 40 71 58,4 Zn 415 475 430 465 495 456 Pb 60 65 60 70 65 Ni Cu 41 71 36 82 45 83 40 120 40 90 89 Hg nd 1,7 nd 0,8 nd 0,5 Cd nd nd nd nd nd

64 40

Obs: As amostras correspondem ao mesmo material coletado ao longo de 2 meses FIGURA 9 - VARIAO DA CONCENTRAO DE METAIS PESADOS NO LODO ANAERBIO DE RALFS (REATORES ANAERIOS DE LEITO FLUIDIZADO)
Variao de Metais Pesados no Lodo de Ralf's
500 450 400 350 300 250 200 150 100 50 0 1001

Cr Zn Pb Ni Cu Hg Cd 1002 1003 1004 1005

mg/Kg

60

TABELA 11 - VARIAO DA CONCENTRAO DE MACROELEMENTOS E PROPRIEDADES FSICO-QUMICAS DO LODO ANAERBIO DE RALFS (REATOR ANAERBIO DE LEITO FLUIDIZADO)
Amostra N total P2O K2O 5 1001 1,92 0,48 0,36 1002 2,5 0,8 0,46 1003 2,32 0,67 0,31 1004 1,61 0,55 0,19 1005 2,4 0,67 0,25 mdia 2,15 0,63 0,31 Ca 0,71 0,85 0,83 0,75 0,82 0,79 Mg 0,31 0,41 0,34 0,2 0,37 0,326 pH 6,4 6,2 6,8 7,5 6,2 6,62 Cinzas P total M.O total C total 58,6 61 59,5 48,1 55,7 56,58 0,78 0,94 0,86 0,66 0,84 0,816 C/N Umidade 6,2 1,78 25,7 5,43 7,822

35,1 19,5 10:01 37 20,5 8:01 38,6 21,4 9:01 26,2 14,5 9:01 38,8 21,5 9:01 35,14 19,48

Obs: As amostras correspondem ao mesmo material coletado ao longo de 2 meses FIGURA 10 - SEQUNCIA DE GRFICOS MOSTRANDO A VARIAO NA CONCENTRAO DE MACROELEMENTOS E PROPRIEDADES FSICO-QUIMICAS DO LODO ANAERBIO DE RALFS (REATOR ANAERBIO DE LEITO FLUIDIZADO)
% % N total P2O5 % K2O

2,5 2 1,5 1 0,5 0 1001 1002 1003 1004 1005

0,8 0,6 0,4 0,2 0 1001 1002 1003 1004 1005

0,5 0,4 0,3 0,2 0,1 0 1001 1002 1003 1004 1004 1004 1005 1005 1005

Ca

Mg

pH

1001

1002 1002

1001

1002

1003

1004

1001

1002

1003

1004

1005

1005

Cinzas

P total

M.O total

80 60 40 20 0 1001 1002 1003 1004 1005

1 0,8 0,6 0,4 0,2 0 1001 1002 1003 1004 1005

40 30 20 10 0 1001 1003

C total

Umidade

25 20 15 10 5 0 1001 1002 1003 1004 1005

30 25 20 15 10 5 0 1001 1002 1003 1004 1005

1003

0,85 0,8 0,75 0,7 0,65 0,6

0,5 0,4 0,3 0,2 0,1 0

8 6 4 2 0

61

Devido a concentrao baixa, optou-se pela contaminao artificial do lodo por sulfetos metlicos pelos seguintes motivos: - A eficincia ou no do processo de biolixiviao poderia ser comprovada com mais clareza, no ficando mascarada pela sensibilidade do instrumento analtico utilizado (Absoro atmica ou ICP Plasma) ou pela margem de erro maior inerente baixas concentraes ; - A frao dos metais que interessaria que fosse afetada no processo seria exatamente a insolvel, que se precipita junto com o lodo na forma de sulfetos metlicos - O mecanismo de ao das bactrias do gnero Thiobacillus, se baseia principalmente na ao em cima de sulfetos;

3.14 LODO ARTIFICIAL

A metodologia de cultivo do lodo artificial foi utilizada somente para obteno de um lodo estvel para a realizao dos experimentos de biolixiviao, evitando assim a variao inerente coletas em diferentes condies, facilitando a comparao dos resultados. A metodologia original (DAZAI 1980) recomenda cultivar o lodo artificial usando uma soluo nutriente contendo glucose (33.33g/L); Polipeptona (33,33g/L) e Fosfato de potssio (3.3 g/L). Durante o experimento as seguintes tarefas tem que ser feitas diariamente: - Parar a aerao e esperar 30 minutos para que o lodo se decante no fundo; - Descartar o sobrenadante e completar no mesmo nvel com gua de torneira; - Adicionar 100 ml do substrato (Soluo Nutriente); - Alternao de fases aerbias e anaerbias (3 horas de aerao com baixa agitao e 3 horas de baixa agitao somente).

62

FIGURA 11 - ESQUEMA DE CULTIVO DO LODO ARTIFICIAL

obs: - necessrio o uso de gua de torneira, pois fornece microelementos necessrios ao crescimento bacteriano;

Aps a discusso deste mtodo, conclumos que para os propsitos de biolixivao as seguintes modificaes seriam adequadas: - Uso de aerao contnua ao invs de alternao de fases aerbias/anaerbias;

63

- Aps o perodo de pr-cultivo (aproximadamente 1 ms) os sulfetos de metais pesados so adicionados e se tornam estveis (quanto concentrao) por aproximadamente 1 semana a 10 dias; Para se comprovar a estabilidade do lodo, faz-se diariamente o clculo do IVL (ndice Volumtrico do Lodo), obtido da seguinte forma: IVL = SD30 SSVta = ml/L g/L = mL/g

Onde: SD30 = Decantao do lodo aps 30 minutos (ml/l) SSVta = Slidos em Suspenso no tanque de aerao

O SSVta obtido da seguinte forma: - Uma membrana de fibra de vidro seca 1 hora 110C; - A membrana resfriada em um dessecador e pesada; - uma alquota de lodo de 10 ml filtrada atravs desta membrana; - Seca-se a membrana por 2 horas 110 C; - Pesa-se a membrana novamente e atravs da diferena de peso o SSVta calculado. Com o acompanhamento dirio deste parmetro, possvel detectar quando o lodo se tornou estvel quanto ao seu teor de slidos e quanto velocidade de decantao.

64

3.15 CONFIRMAO DE ESPCIE As biohidrometalurgia utiliza como provas de identificao da presena de Thiobacillus ferrooxidans , somente a comprovao da caracterstica acidoflica (crescimento em pH 2,0), e crescimento em meio inorgnico, tendo o ferro como fonte de energia ( partir da oxidao do Fe2+ para Fe3+ (ROSSI, 1990)

65

3.16 EXPERIMENTO DE BIO-LIXIVIAO Para a realizao deste experimento foram utilizadas cubas de 2,5 L contendo 1 litro de lodo padronizado pelo mtodo de cultivo de lodo artificial (Ver tem 3.13 - CULTIVO DO LODO ARTIFICIAL, pg. 58). Este experimento teve a durao de trs dias. Foram utilizados 4 tratamentos, descritos a seguir: 3.17 DESCRIO

3.17.1 TRATAMENTO 1 (T1) Controle negativo, contendo somente o lodo obtido pelo mtodo de cultivo artificial. Este tratamento objetiva monitorar as alteraes no lodo utilizado no experimento dentro das mesmas condies do experimento 3.17.2 TRATAMENTO 2 (T2) Lodo com pH corrigido para 4,0 (com H2SO4 1N), mais sulfetos de metais pesados. Neste tratamento pretende-se descontar qualquer possvel lixiviao qumica que ocorra com a adio de cido slfurico para correo do pH. 3.17.3 TRATAMENTO 3 (T3) Lodo com pH corrigido para 4,0 (com H2SO4 1N), mais sulfetos de metais pesados, mais sulfato ferroso (FeSO4 7H2O) Este tratamento tem o mesmo objetivo do anterior, porm verificando se a adio de sulfato ferroso afetaria tambm na lixiviao qumica. 3.17.4 TRATAMENTO 4 (T4) Lodo com pH corrigido para 4,0 (com H2SO4 1N), mais sulfetos de metais pesados, mais sulfato ferroso (FeSO4 7H2O), mais inculo do Isolado de Thiobacillus ferrooxidans (100 ml cultivado em meio T&K 5 dias). Neste ltimo tratamento que ocorreria o processo de biolixiviao.

66

3.17.5 VARIVEIS MONITORADAS Para que pudssemos obter resultados conclusivos neste experimento, foi necessrio que os seguintes parmetros fossem monitorados: - Potencial de xido-reduo: foi feita a medio de cada tratamento a cada 24 horas - pH: foi feita a medio de cada tratamento a cada 24 horas - Slidos totais: Feita a determinao no incio e no final do tratamento. - Concentrao dos metais estudados na frao solvel e insolvel dos 4 tratamentos, do incio e do final do experimento. - Concentrao de micro e macroelementos no lodo original e no lodo aps o processo de biolixiviao.

67

4. RESULTADOS E DISCUSSO

4.1 MTODO ELETROQUMICO O mtodo eletroqumico adotado (Vide tem 3.9-, pag.55) mostrou ser adequado para o monitoramento da atividade de oxidao do on ferroso pelas bactrias ferro oxidantes. Como pode-se constatar que entre uma medio e outra do potencial redox dos meios de cultivo onde eram incubados as bactrias, a utilizao de uma soluo de hipoclorito de sdio 40% foi eficiente na preveno de contaminao cruzada. A adoo das solues-padro 234 mV e 300 mV (Tabela 6 e Tabela 7) para verificao do funcionamento correto do sistema de medio eletroqumico foi de grande valia, pois foi possvel se estabelecer um procedimento de checagem antes de cada medio. As solues se mostraram estveis ao longo do tempo do experimento, no sendo necessria a preparao de novas solues. A seguir esto colocadas as leituras destes padres ao longo do tempo (FIGURA 12):

68

FIGURA 12 - LEITURAS ELETROQUMICAS DAS SOLUES-PADRO DE CALIBRAO

Padres de calibrao redox

350 300 mV vs. Ag/AgCl 250 200 150 100 50 0 19/mai 20/mai 21/mai 22/mai 23/mai 24/mai 25/mai 17/jun 20/jun 23/jun 27/jun 1/jul 2/jul 3/jul 6/jul 8/jul 21b 234 mV 300 Mv

TABELA 12 - LEITURAS ELETROQUMICAS DAS SOLUES-PADRO DE CALIBRAO

Dia 19/mai 20/mai 21/mai 21b 22/mai 23/mai 24/mai 25/mai 17/jun 20/jun 23/jun 27/jun 1/jul 2/jul 3/jul 6/jul 8/jul

234 mV 221 222 225 227 224 221 223 220 221 224 229 227 227 226 230 224 224 225

300 Mv 290 294 295 296 295 293 294 294 292 300 299 297 301 297 300 296 294 297

4.2 MTODO ESPECTROFOTOMTRICO Este mtodo, discutido no tem 3.10 - MTODO DA 1,10 - FENANTROLINA PRA DETERMINAO DE Fe (II), pag. 56 foi importante no processo de validao do mtodo

69

eletroqumico, pois a partir deste, pode-se obter resultados de correlao entre os resultados destes dois mtodos. Foram necessrias vrias tentativas para se assimilar e utilizar este mtodo. A seguir so enumerados os aspectos de maior relevncia na sua utilizao: - necessrio um excesso de 1,10 fenantrolina para que ocorra o desenvolvimento da cor. - Tomar cuidado com a exposio excessiva a luz solar, sendo recomendado que se proteja o balo volumtrico com papel alumnio. - No deve ser feita a adio do tampo s solues que forem utilizadas para leituras eletroqumicas, pois o mesmo estabiliza as leituras.

FIGURA 13 - CORRELAO ENTRE O MTODO ELETROQUMICO E O ESPECTROFOTOMTRICO

Mtodo O-fen X Eletroq. Experimento 2
250 mV vs. Ag/AgCl 200 150 100 50 0 0,003

0 10 20 30 40 50

Absorb. 0,003 0,023 0,043 0,062 0,09 0,113

redox 156 187 208 221 229 240

(r = 0,9978 para absoro e r = para leitura eletroqumica)

0,023 0,043 0,062 0,09 0,113

Absorb. 510 nm

70

TABELA 13 - CORRELAO ENTRE O MTODO ELETROQUMICO E O ESPECTROFOTOMTRICO - REPETIO Conc.

Grfico de correlao entre o mtodo eletroqumico e espectrofotomtrico
300 mV vs. Ag/AgCl 250 200 150 100 50 0 0,015 0,037 0,056 0,081 0,105 0,135

0 10 20 30 40 50

Abosrb. 0,015 0,037 0,056 0,081 0,105 0,135

Redox 192 211 226 237 246 252

Absorbncia - 510 nm

4.3 LODO ARTIFICIAL Com este mtodo, discutido no tem 3.13CULTIVO DO LODO ARTIFICIAL, pag. 58, foi possvel se obter um lodo estvel ao longo dos experimentos, possibilitando uma melhor comparao de resultados. 4.4 ENRIQUECIMENTO E CULTIVO DE Thiobacillus ferrooxidans

4.4.1 MTODO MODIFICADO DE OBTENO DE UMA CULTURA ENRIQUECIDA DE Thiobacillus ferrooxidans A seqncia de grficos e tabelas a seguir mostra o comportamento eletroqumico da cultura enriquecida, dando uma idia do comportamento, quanto oxidao do ferro, ao longo do tempo.

71

FIGURA 14 - PRIMEIRO REPIQUE DA CULTURA DE THIOBACILLUS FERROOXIDANS ENRIQUECIDA PARTIR DO LODO - LEITURAS ELETROQUMICAS

2 Incubao - Redox

600 500 mV vs. Ag/AgCl 400 300 200 100 0 1 2 3 4 5 6 7 Dias 8 9 10 11 12 13 Cult. enriq. Repetio Branco

TABELA 14 - PRIMEIRO REPIQUE DA CULTURA DE THIOBACILLUS FERROOXIDANS ENRIQUECIDA PARTIR DO LODO - LEITURAS ELETROQUMICAS Tempo 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 Cepa enriq. 278 297 327 361 398 549 565 558 555 554 553 552 551 Repetio 277 298 325 358 397 554 562 564 560 560 559 559 558 Branco 276 292 311 326 337 342 351 352 354 359 362 365 367

Nesta segunda incubao, pode se observar bem a diferena na resposta entre o branco e os erlenmeyers com o inculo. A maior velocidade de oxidao do ferro se d partir do 4 dia, se estabilizando em seguida, devido exausto do on ferroso.

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FIGURA 15 - SEGUNDO REPIQUE DA CULTURA DE THIOBACILLUS FERROOXIDANS ENRIQUECIDA PARTIR DO LODO - LEITURAS ELETROQUMICAS 3 Incubao - Redox
700 600 500 400 300 200 100 0 11 13 15 17 19 Dias 21 1 3 5 7 9 Cult. enriq. Repetio Branco

TABELA 15 - SEGUNDO REPIQUE DA CULTURA DE THIOBACILLUS FERROOXIDANS ENRIQUECIDA PARTIR DO LODO - LEITURAS ELETROQUMICAS Tempo 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 Lodo 292 302 324 355 390 439 554 565 Repetio 292 302 323 351 382 416 548 561 Branco 288 294 310 322 331 337 342 349

mV vs. Ag/AgCl

583 571 575 569 573 573 576 576 573 576 571 573 571 565 564

568 569 570 567 571 572 573 572 573 574 570 569 565 563 564

361 364 369 369 374 375 376 378 380 387 409 522 599 610 608

73

Aqui tambm mais uma vez se repete o aumento na velocidade de oxidao do on ferroso partir do 4 dia. A partir do 20 dia ocorreu a contaminao do branco, fazendo com que ocorresse resposta semelhante no branco. Nesta fase ainda se utilizava o lcool como desinfetante do eletrodo. Aps discusso deste procedimento na apresentao dos resultados no laboratrio , chegou-se concluso que o hipoclorito de sdio o desinfetante mais recomendado. FIGURA 16 - TERCEIRO REPIQUE DA CULTURA DE THIOBACILLUS FERROOXIDANS ENRIQUECIDA PARTIR DO LODO - LEITURAS ELETROQUMICAS 4 Incubao - Redox
700 600 500 400 300 200 100 0 10 11 12 13 14 15 16 Dias 17 1 2 3 4 5 6 7 8 9 Cult. enriq. Branco 4

TABELA 16 - TERCEIRO REPIQUE DA CULTURA DE THIOBACILLUS FERROOXIDANS ENRIQUECIDA PARTIR DO LODO - LEITURAS ELETROQUMICAS Tempo 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 Cult. enriq. 327 347 369 Branco 322 329 334

mV vs. Ag/AgCl

552 565 577 578 588 592 596 599 601 603 601 600 594 600 600

351 355 360 362 366 368 369 372 373 373 375 377 379 381 384

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Comportamento semelhante segunda incubao, onde estima-se tambm que o aumento da velocidade de oxidao se de aps o quarto dia. FIGURA 17 - QUARTO REPIQUE DA CULTURA DE THIOBACILLUS FERROOXIDANS ENRIQUECIDA PARTIR DO LODO - LEITURAS ELETROQUMICAS

5 Incubao - Redox
600 500 mV vs. Ag/AgCl 400 300 200 100 0 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 Dias 22 1 2 3 4 5 6 7 8 9 Cult. enriq. Branco Temp. amb. Branco temp. Ar

TABELA 17 - QUARTO REPIQUE DA CULTURA DE THIOBACILLUS FERROOXIDANS ENRIQUECIDA PARTIR DO LODO - LEITURAS ELETROQUMICAS Tempo Cult. enriq. Branco Temp. amb. Branco Ar Temp. 1 319 313 314 308 308 2 329 323 319 312 311 3 338 333 325 318 318 4 351 341 332 323 323 5 369 348 345 327 327 6 402 353 364 333 333 7 553 357 375 337 337 8 565 362 383 339 339 9 10 574 367 396 345 345 11 580 371 402 348 347 12 582 372 406 350 351 13 583 374 410 351 352 14 585 376 414 352 353 15 585 378 418 355 355 16 588 379 425 356 355 17 589 381 432 360 357 18 588 382 441 362 361 19 590 385 451 367 362 20 592 387 462 375 363 21 594 383 479 384 362 22 598 389 503 391 364

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4.4.2

MEIO DE CULTURA Dos meios de cultura lquidos recomendados pela bibliografia para crescimento de

Thiobacillus ferrooxidans, o meio T&K (TUOVINEN & KELLY, 1973) modificado apresentou o melhor resultado, tanto na facilidade de preparo, como na resposta de crescimento. O pH 1,8 deste meio previne a precipitao do ferro II. O meio 9K (SILVERMAN & LUNDGREEN, 1959), tambm recomendado para o cultivo de Thiobacillus ferrooxidans, foi utilizado somente no incio dos experimentos. 4.5 SNTESE DOS SULFETOS DE METAIS PESADOS Como houve uma discrepncia nas concentraes de metais pesados obtidas no experimento de biolixiviao, foi feita a determinao da pureza dos sulfetos obtidos atravs da pesagem de 0,1 g de cada sulfeto em um bcker nico, feito o ataque com gua rgia e determinada a concentrao com absoro atmica. Foram obtidas os seguintes resultados: Tabela 18 - Determinao da Pureza dos Sulfetos de metais sintetizados Elemento Conc. Esperada (PPM) Cobre Cdmio Zinco Chumbo 665 778 671 866 Conc. Obtida (PPM) 550 550 550 750 Pureza (%) 83 71 82 87

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4.6 BIO-LIXIVIAO No processo de bio-lixiviao, puderam ser observados os seguintes aspectos : - A atuao bacteriana que realizou a bio-lixiviao; - Ao contrrio do esperado, no houve inibio da populao microbiana hetertrofa aps a adio dos sulfetos de metais pesados. - Boa eficincia do processo de solubilizao dos metais

Tabela 19 - Valores do Potencial de xido-reduo (mV) monitorados ao longo do experimento de biolixiviao Tratamento 1 2 3 4 1 dia 382 299 238 257 2 dia 330 280 249 238 3 dia 302 272 238 239

Tabela 20 - valores de pH monitorados ao longo do experimento de biolixiviao Tratamento 1 2 3 4 1 dia 4,43 6,56 5,22 5,00 2 dia 4,43 6,22 5,14 5,02 3 dia 5,16 6,94 5,15 5,08

Na Tabela 19, ao contrrio do esperado, houve um decrscimo no potencial redox ao longo dos 3 dias do experimento, assim como o pH (Tabela 20) que aps a correo para pH 4,0 subiu. Isto se deve provavelmente ao alto teor de matria orgnica, que fez com que ocorresse um fenmeno de tamponamento do pH.

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Tabela 21 - Determinaes da concentrao de metais pesados no experimento de biolixiviao Tratamento 1 (somente lodo) Incio Elemento Pb Cd Zn Cu Ni Fe Cr solvel (ppm) < 0,5 < 0,05 < 0,010 < 0,05 < 0,1 0,30 < 0,1 Insolvel (ppm) < 0,5 < 0,05 1,0 0,63 < 0,1 51 < 0,1 Solvel (ppm) < 0,5 < 0,05 < 0,010 < 0,050 < 0,10 < 0,10 < 0,10 Fim Insolvel (ppm) < 0,5 < 0,05 1,0 0,60 < 0,10 49,0 < 0,1

No tratamento 1(somente lodo ), pode-se constatar que as concentraes de metais estavam a nveis bem baixos, tanto na frao solvel como na insolvel.

Tabela 22 - Determinaes da concentrao de metais pesados no experimento de biolixiviao Tratamento 2 (Lodo + metais pesados) Incio Elemento Pb Cd Zn Cu Ni Fe Cr solvel (ppm) < 0,5 < 0,05 37 < 0,05 < 0,1 < 0,1 < 0,1 Insolvel (ppm) 145 9,0 775 175 < 0,1 50 < 0,1 Solvel (ppm) < 0,5 < 0,05 2,0 < 0,050 < 0,10 < 0,10 < 0,10 Fim Insolvel (ppm) 147,5 7,0 775,0 175,0 < 0,10 50,0 < 0,1

Neste tratamento (tratamento 2 - Lodo + metais pesados), pudemos observar os metais se apresentavam na forma insolvel no incio do tratamento como no final.

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Tabela 23 - Determinaes da concentrao de metais pesados no experimento de biolixiviao Tratamento 3 (Lodo + metais pesados + cido slfurico (pH 4,0 + Sulfato ferroso) Incio Elemento Pb Cd Zn Cu Ni Fe Cr solvel (ppm) < 0,5 < 0,05 600 < 0,05 < 0,1 575 < 0,1 Insolvel (ppm) 135 9,0 450 175 < 0,1 142,5 < 0,1 Solvel (ppm) < 0,5 < 0,05 650 0,09 < 0,10 215 < 0,10 Fim Insolvel (ppm) 132,5 9,0 475,0 150 < 0,10 375,0 < 0,1

Neste tratamento (tratamento 3 - Lodo + metais pesados + cido sulfrico (pH 4,0) + sulfato ferroso), pode se observar que o chumbo, cdmio e cobre permaneceram insolveis tanto no incio como no final do tratamento. O zinco se solubilizou acima de 50% logo aps a adio de cido sulfrico, e permanecendo neste nvel at o final do tratamento, mostrando que para este elemento a adio de cido j suficiente para ocorrer a solubilizao. Tabela 24 - Determinaes da concentrao de metais pesados no experimento de biolixiviao Tratamento 4 (Lodo + Metais pesados + cido Sulfrico (pH 4,0) + Sulfato ferroso + inculo de Thiobacillus ferrooxidans ) Incio Elemento Pb Cd Zn Cu Ni Fe Cr solvel (ppm) < 0,5 0,18 725 < 0,05 < 0,1 825 < 0,1 Insolvel (ppm) 125 9,0 300,0 150,0 < 0,1 425,0 < 0,1 Solvel (ppm) 107,5 8,0 375,0 125,0 < 0,10 525,0 < 0,10 Fim Insolvel (ppm) < 0,05 < 0,5 375,0 < 0,050 < 0,10 525,0 < 0,1

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Neste tratamento (Tratamento 4 - Lodo + metais pesados + cido sulfrico (pH 4,0) + sulfato ferroso + Thiobacillus), pode-se observar que no incio do tratamento os metais se encontravam na forma insolvel, com exceo do zinco, que como comprovado atravs do

tratamento 3, j havia se solubilizado somente com o abaixamento do pH. E no final do tratamento, o chumbo, cdmio e cobre haviam se solubilizado, estimando-se a eficincia de biolixiviao em torno de 90%. Com exceo do zinco que teve 50% de sua frao na parte insolvel e a outra metade na frao solvel. Ao contrrio da biohidrometalurgia, que trabalha a biolixiviao em condies inorgnicas, a lixiviao em lodo se realiza sob condies bem diferentes, possuindo alto teor de material orgnico (solvel e insolvel). Esta condio fez com que aparentemente se alterassem os mecanismos, e entrassem em jogo outras variveis. Os dados do experimento mostram que a biolixiviao ocorreu de fato, mas no seguindo as mesmas vias que ocorrem na biohidrometalurgia, pois ocorreu a diminuio do potencial de xido-reduo e aumento do pH, enquanto era esperado um comportamento oposto (Aumento do potencial redox e diminuio do pH). Isto sugere uma provvel solubilizao dos metais pesados atravs da sua interao com a frao solvel da matria orgnica, que solubilizaria estes elementos. importante destacar que qualquer que seja o mecanismo de biolixiviao envolvido, o microrganismo Thiobacillus ferrooxidans teve atuao fundamental, pois sem este, a solubilizao no ocorria.

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Na Tabela 25 esto esquematizados os dados referentes s propriedades fertilizantes do lodo. importante ressaltar, que no caso do seu aproveitamento agrcola, este adensado ainda cerca de 15 a 20 vezes, e feita a calagem, assim estas concentraes seriam pelo menos 15 vezes maiores. Tabela 25: Determinaes fsico-qumicas das propriedades fertilizantes do lodo N total P total Tratamento g/100 (g/100 mg mg) K solvel (g/100 mg) 1 2 3 4 L.A*. 0,23 0,22 0,21 0,21 0,26 0,037 0,037 0,053 0,085 0,048 0,081 0,0032 0,067 0,09 0,003 0,004 5,3 6,5 5,4 5,3 5,7 97,8 97,8 97,9 96,5 97,2 1,1 0,56 0,58 0,41 0,32 1:01 0,22 1:01 0,36 2:01 0,61 3:01 0,31 1:01 5,3 6,8 11,9 13,4 4,8 Ca (g/100 mg) pH Umidade % MO C total C/N Cinzas (g/100 mg)

(g/100 (g/100 mg) mg)

0,126 0,0058 0,109 0,0033

* L.A. - Lodo Artificial Ao compararmos os valores do tratamento 4 com o L.A. - Lodo artificial, que o lodo que foi utilizado no experimento, mas que continuou recebendo nutrientes (lodo do tratamento 1 o mesmo, s que durante os 3 dias do experimento no recebeu nutrientes), teremos um parmetro para compararmos se o processo de bio-lixiviao de metais pesados lixivia tambm os elementos que tornam o lodo um bom fertilizante agrcola. Assim, ao compararmos o Tratamento 3 com o 4, no observamos alteraes significativas. Comportamento do zinco O zinco foi o elemento que apresentou uma resposta diferenciada dos outros sulfetos estudados, j apresentando solubilizaes diferenciadas nos incios dos tratamentos 2, 3 e 4, como mostrado na FIGURA 18.

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FIGURA 18 - PORCENTAGENS DE SOLUBILIZAO DO ZINCO NO EXPERIMENTO DE BIOLIXIVIAO DE METAIS

PESADOS

100 90 80 % de solubilizao 70 60 50 40 30 20 10 0 2 3 Tratamento 4 4,5 57,1 70,7

A solubilidade crescente nos tratamentos 2, 3 e 4 se deve ao favorecimento, tambm crescente, das condies timas de lixiviao (pH mais cido e presena do on frrico) A maior solubilidade do sulfeto de zinco no incio dos tratamentos acima citados pode ser explicada pelo seu produto de solubilidade (Kps), que o maior, em relao ao Kps dos outros sulfetos estudados (Tabela 26), ou seja a solubilidade do sulfeto de zinco a maior do que todos os outros avaliados, fazendo com que j ocorra a lixiviao no incio do processo. Tabela 26 - PRODUTOS DE SOLUBILIDADE (Kps) DOS SULFETOS UTILIZADOS NO EXPERIMENTO DE BIOLIXIVIAO DE METAIS PESADOS Sulfeto CdS Cus PbS ZnS Kps 1,0 x 10-8 8,0 x 10-37 7,0 x 10
-29

1,6 x 10-23

Fonte: OCONNOR, Rod. Fundamentos de Qumica. Harbra. So Paulo. 1977

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5. CONCLUSO

O lodo ativado utilizado no continha concentraes de metais pesados acima dos limites preconizados pela legislao internacional.

O uso da tcnica do lodo artificial, consorciada com a contaminao artificial por sulfetos dos metais estudados possibilitou um melhor controle de variveis intervenientes na avaliao da bio-lixiviao.

Foi confirmada a presena de Thiobacillus ferrooxidans no lodo ativado da ETE-Belm Sanepar (Curitiba).

O processo de bio-lixiviao apresentou eficincia mdia de 95% para o cdmio, chumbo e cobre, utilizando-se de cepas nativas do lodo, mas os parmetros de potencial redox e pH no corresponderam.

A bio-lixiviao no diminuiu as concentraes de nutrientes (N, P, K) do lodo ativado, no inviabilizando sua utilizao agrcola.

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6. GLOSSRIO Acidofilismo (Acidophilism): Habilidade de crescer bem quando inoculado em meio pH menor ou igual a 3. (HARRISON, apud ROSSI, 1994)

Adensamento (Thickening): Baixa fora de separao dos slidos da gua, por gravidade ou flotao (EPA, 1984).

Autotrofismo (Autotrophism): Habilidade de crescer em um meio completamente inorgnico com dixido de carbono como fonte de carbono (KETCHUM, 1988).

Bio-lixiviao (Bioleaching): um processo de dissoluo de rochas, concentrados produzidos por mtodos minerais convencionais ou componentes de produtos metalrgicos, catalisado por microrganismos adequados (ROSSI, 1990)

Contedo mole percentual Guanina + citosina - Mol% G+C : Entre as bactrias os valores mol% G+C varia de 24 - 75 e o valor constante para um dado organismo. Bactrias intimamente relacionadas tem valores mol% G+C similares. No entanto importante observar que dois organismos que tenham valores Mol% G+C prximos no so necessariamente relacionadas; isto por devido a este valor no levar em conta o arranjo linear dos nucleotdeos no DNA (BERGEY, 1994).

Desidratao (Dewatering): Alta presso/fora de separao da gua dos slidos (EPA, 1984 )

Efluente: Refere-se gua que sai do clarificador final, e deve estar livre de matria orgnica dissolvida ou suspendida e conter o mnimo de componentes minerais como NH4+, NO3- e PO43pois estes elementos podem induzir ao processo de eutrofizao (Efluente ?).

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Eletrodo combinado : Um sensor no qual o eletrodo sensor e o eletrodo de referncia esto alojado em um corpo (Eletrodo combinado ?). Eletrodo de Referncia: a metade do par de eletrodos que prov um potencial constante apesar da composio da soluo. O potencial desenvolvido pelo eletrodo sensor medido contra o potencial de referncia para dar um potencial total do sistema que pode ser convertido para o nvel dos elementos monitorados. Existem vrios tipos de eletrodos de referncia: - Eletrodo-referncia de calomelano: Tem um elemento de referncia interno de mercrio/cloreto de mercrio (mercurous chloride). A soluo de enchimento geralmente KCl saturado, tambm pode ser cloreto de mercrio saturado. Este eletrodo embora seja muito usado para pH, no recomendado para uso com outros eletrodos on-seletivo pois eles se equilibram mais vagarosamente que os eletrodos de prata/cloreto de prata aps mudanas de temperatura. - eletrodo-referncia de prata/cloreto de prata: Tem um elemento de referncia interno de prata e cloreto de prata. A soluo de enchimento deve conter cloretos e ser saturada com respeito ao cloreto de prata. Solues saturadas de KCl, 1M KCl so geralmente usadas. Este eletrodo, com melhores caractersticas trmicas que o de calomelano, so preferveis para medidas precisas de pH e medidas on-seletivas (Eletrodo de referncia ?).

Equao de Nerst : Uma descrio matemtica do comportamento de eletrodos: E = Ex + 2,3 RT/nF log A ` E o potencial total, em milivolts, desenvolvido entre o eletrodo-sensor e o eletrodo-

referncia; Ex uma constante que depende principalmente do eletrodo de referncia; 2,3 RT/nF o fator de Nerst (R e F so constantes, n a carga do on, incluindo o sinal, T a temperatura em graus Kelvin); e A a atividade do on ao qual o eletrodo est respondendo. Fator de Nerst: o termo 2,3 RT/nF na equao de Nerst, que igual ( T = 25C) para 59.16 mV quando n = 1 e 29.58 mV quando n = 2, e que inclui o sinal da carga do on no termo n. A equao de Nerst varia de acordo com a temperatura) Influente: Se refere ao esgoto que chega ETE para ser tratado.

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IVL (ndice Volumtrico do lodo): um ndice utilizado para avaliar as condies de uma Estao de Tratamento de Efluentes (ETE) num dado momento. Lodo de esgoto (Wastewaster Sludge): um co-produto do tratamento do esgoto, contendo geralmente 93 99,5% de gua, alm de slidos e substncias dissolvidas que estavam presentes no esgoto e que foram transformados durante o processo de tratamento (EPA, 1984).

Lodo primrio (Primary sludge): gerado durante o tratamento primrio do esgoto, remove os slidos que se sedimentam mais facilmente. Este lodo contm 3 a 7% de slidos; Geralmente a porcentagem de gua pode ser facilmente diminuda por adensamento (EPA, 1984).

Lodo Secundrio (Secondary Sludge): Geralmente denominado de lodo de processo biolgico, pois gerado pelo processo secundrio de tratamento biolgico, incluindo os sistemas de lodo ativado e dos sistemas de crescimento aderido como os trickling filters. O lodo secundrio tem uma concentrao baixa (0,5 a 2%) e mais difcil de ser adensado e desidratado que o lodo primrio.

Lodo Tercirio (Tertiary Sludge): produzido por processos avanados de tratamento, tais como a precipitao qumica e filtrao. As caractersticas do lodo tercirio dependem do processo de tratamento de esgoto que o gerou. Lodos qumicos resultam destes processos que adicionam substncias qumicas como cal, polmeros orgnicos, alumnio e sais de ferro. A adio de cal ou polmeros melhora o adensamento e a desidratao (EPA, 1984) .

Mesofilismo (mesophilism): Habilidade de ter crescimento timo temperaturas entre 20 a 50 graus celsius (KETCHUM, 1988)

Potencial Redox - Redox Potential (ORP): o potencial desenvolvido por um eletrodo metlico quando colocado em uma soluo contendo um elemento qumico em dois estados de oxidao diferentes.

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Quimiolitotrofismo (chemolithotrophism): Habilidade de ganhar toda sua energia da oxidao de compostos inorgnicos (KETCHUM, 1988)

SD30 (Sludge decantation after 30 minutes): Teste rpido que avalia principalmente presena de bactrias filamentosas no lodo biolgico.

SSVta (Slidos em Suspenso no tanque de aerao): Mtodo de avaliao dos slidos em suspenso no lodo biolgico.

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7. REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS

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(1988) .................... 32 L LACEY & LAWSON (1970)............................. 50 LAMBERT & WEIDENSAUL, 1991 .................. 5 LANGENOHL, 1991........................................... 4 LASKAUSKAITE (1989).................................. 32 LEEPPER, 1972; CHANEY, 1973 .................... 33 LERCH et al., 1990 ........................................... 34 LERCH et al., 1992 ........................................... 35 LEVINE et al., 1989............................................ 4 LIN, 1989............................................................ 4 LOWE & GAUDY (1989)................................. 33 M MILLER & MILLER, 1991................................. 3 MONOD (1941) .......................................... 11, 39

P PAINTER, 1958............................................ 8, 10 PESIC et al., (1989) .................................... 53, 54 PETRUZZELLI, 1989 ......................................... 4 Potencial Redox ?.............................................. 86 R REED et al., 1991 ............................................... 4 ROSSI, 1990 .............................. 18, 19, 38, 64, 84 S SCHONBORN & HARTMANN, (1978) ............. 6 SCOTT et al.,(1986) ......................................... 33 SD30 ? .............................................................. 87 SHAY & ETZEL, 1992..................................... 34 SHRIVASTAVA & SINGH, 1989....................... 5 SILVERMAN & LUNDGREEN, 1959.............. 76 SILVERMAN & LUNDGREN, 1959 ................ 46 SPRAGUE & RAMSAY, 1965............................ 4 SRIKANTH & REDDY, 1991............................. 4 SSV ?................................................................ 87 STAHR, 1989 ..................................................... 4 SUYAMA et al. (1994) ..................................... 33 T TABITA, 1988.................................................. 41 TJELL, 1981 apud ALLOWAY, 1993.............. 24 TORMA, 1986 .................................................. 19 7.1.1

TUOVINEN & KELLY, 1973 ..................... 46, 76 TYAGI et al, 1992 ............................................ 50 TYAGI et al. (1988)...................................... 6, 34 TYAGI et al. , 1992 .......................................... 34 TYAGI et al., (1988)......................................... 36 TYAGI et al., 1988 ....................................... 6, 32 TYAGI et al., 1990 ........................................... 34 TYAGI et al., 1992 ........................................... 37 TYAGI et al.,(1992).......................................... 50 TYAGI, 1991a .................................................. 46 U URENHA & ALLI, 1990................................... 21 V VAISBICH et al., 1979...................................... 21 VANDERZANT & SPLITTSTOESSER, 1992 .. 16 VENKOBACHAR (1990) ................................. 33 W WEBBER et al., 1983........................................ 45 WENZL et al., 1990 .......................................... 33 WILD et al., 1991 ............................................... 4 WONG & HENRY, 1984 .................................. 36 Y YOST, 1979; TJELL, 1981 citado por ALLOWAY, 1993 ......................................... 24