BIOQUMICA FUNCIONAL TEMA 3

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TEMA 3 METABOLISMO DE CIDOS NUCLEICOS. REPLICACIN

Replicacin: proceso donde se copia todo el DNA paterno, para producir dos copias de DNA hijas idnticas. Esto va a permitir que la informacin pase de una generacin a otra. La replicacin del material gentico tiene lugar durante la fase S del ciclo celular. La molcula de DNA tiene dos cadenas que presentan complementaridad y son antiparalelas. La replicacin es semiconservadora, las dos hebras paternas van actuar como molde para la sntesis de una nueva hebra. Teniendo la cadena hija, una hebra vieja parental, y otra nueva. Segn sea procariota o eucariota hay uno o varios orgenes de replicacin respectivamente. El experimento de Cairns demostr que la replicacin era bidireccional, con dos horquillas de replicacin. Si fuera unidireccional, se vera en dicho experimento una sola hebra marcada, en lugar de ver las dos vistas de la bidireccionalidad. Hay excepciones que no presentan bidireccionalidad como en las mitocondrias. La replicacin transcurre en direccin 53 por lo que solo se pueden aadir nucletidos al extremo 3, nunca al 5. En cada horquilla de replicacin se tiene que sintetizar dos cadenas. En cada horquilla habr una que se sintetice de manera continua en 53desde el origen de replicacin, en la direccin de avance de la horquilla, a esta se le llama cadena conductora. La otra que se sintetiza en la horquilla, es la llamada cadena retardada o rezagada, y lo hace de manera discontinua debido a que no hay sntesis 35, a partir de los fragmentos de Okazaki, que luego se unirn. La sntesis de DNA es siempre 53, se dice que la replicacin es semidiscontinua.

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Replicacin en Procariotas
DNA Polimerasas

Las DNA polimerasas son las enzimas encargadas de la sntesis de DNA. Hay 5 DNA polimerasas distintas nombradas con nmeros romanos segn el orden de descubrimiento. La I y la III participan en la replicacin. La I, II, IV y V en procesos de reparacin. Se caracterizan porque necesitan un molde, es decir un fragmento de cadena abierta sencilla a la que va aadiendo nucletidos segn la regla de apareamiento de bases. La enzima no es capaz de iniciar cadena, todas requieren un cebador, que es un fragmento de cadena polinucleotdica, complementaria con el extremo del molde, 3con el OH libre, para aadir nucletidos a esta cadena en 53. El cebador puede ser DNA o RNA, permitiendo que se inicien cadenas con RNA y se terminen con DNA. El extremo 3 libre se llama extremo cebador. El proceso de crecimiento de la cadena polinucleotdica necesita la presencia de magnesio, uno que va a estar unido a la enzima (metaloenzimas) y otro unido a los nucletidos (dNTP , 3 fosfatos, el ms cercano a la ribosa alfa beta y gamma, pueden formar complejos con cationes divalentes como el magnesio). La enzima cataliza el ataque nucleoflico del hidroxilo libre del cebador de la cadena en crecimiento, sobre el tomo de fosforo de la posicin alfa del nucletido entrante. Se libera pirofosfato del nucletido entrante y se forma un nuevo enlace fosfodiester. En principio la reaccin casi no produce variacin de energa libre. El pirofosfato que se produce en las clulas enseguida se hidroliza por las pirofosfatasas para dar dos molculas de fosfato y esta reaccin si que tiene una variacin de energa libre de aproximadamente 7kcal/mol. El pirofosfato transcurre por tanto en el proceso de sntesis debido a esto. Las cadenas crecen por lo tanto por el extremo 3' y a una velocidad que depende mucho de las polimerasas. PPi Pirofosfatasa 2Pi AG= -7 Kcal/mol

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La polimerizacin est catalizada por un solo centro activo, al que puede entrar cualquier dNTP (desoxinucletido), pero solo se formar un enlace fosfodiester, es decir solo actuar la enzima cuando el nucletido que entre sea complementario con el molde. Esto se debe a las dos conformaciones de la enzima; una abierta inactiva donde puede entrar cualquier dNTP, que produce una modificacin a una conformacin cerrada, que solo se produce cuando el desoxinucletido que ha entrado es complementario con el de la molde siendo el apareamiento perfecto. Si no se llega a esta forma cerrada no se producir apareamiento y no habr actividad. Es decir la forma cerrada es la forma activa. Las DNA polimerasas presentan progresividad, es decir pueden realizar varias reacciones consecutivas, antes de separarse del sustrato. La I presenta un progresividad de 20-30 nucletidos y la III de 500.000 nucletidos es decir de casi todo el proceso de replicacin. Adems de la actividad polimerasa presenta una actividad exonucleasa 35que permite la eliminacin de nucletidos errneos (a veces tambin los correctos). Se dice que tiene un sistema de correccin a prueba de fallos. Esta actividad est presente en un centro activo distinto a la actividad polimerasa. Cuando se aade un nucletido incorrecto, la polimerasa va hacer pasar la zona de doble cadena por un estrechamiento de manera que va a comprobar la disposicin de los nucletidos y si esta es correcta, si es incorrecta, retroceder, colocndose en el centro activo de actividad exonucleasa, eliminando el nucletido mal incorporado. Hay veces que elimina incluso los que estn bien apareados. Por cada 10 nucletidos con actividad polimerasa, se elimina 1 por actividad exonucleasa. Esto le sale caro a la clula pero a cambio la fidelidad es muy alta.

-DNA pol I Es una enzima pequea que esta formada por una sola cadena polinucleotdica, de aproximadamente unos 100000 Daltons, pero tiene dos dominios estructurales fcilmente separables cuando tratamos con proteasas. En el dominio grande (fragmento Klenow), presenta actividad polimerasa en un lado y exonucleasa 35 en el otro. En el dominio pequeo tiene actividad exonucleasa 53importante durante el proceso de replicacin, es capaz de quitar nucletidos al cebador por el lado contrario, por el extremo 5' del cebador. La exonucleasa 5' 3' est activa Pgina 3 de 14

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2 Grado De Biotecnologa Sergio Aranda Romero sobre todo cuando la enzima esta actuando tambin con actividad polimerasa. La enzima va a ser la encargada de eliminar los cebadores de RNA de los fragmentos de Okazaki, sustituyndolos por DNA, dndose un cambio de mella, Esta actividad exonucleasa 5' 3' slo la tiene la ADN polimerasa I. La mella, (falta de un enlace fosfodister ) antes de unirse y formar el enlace fosfodister realizada por la ligasa, debe quitarse el RNA, de esto se encarga la DNA polimerasa I. Se coloca en el sitio de mella y con su actividad exonucleasa 5' 3' quita nucletidos por el extremo 5' y con su actividad polimerasa va aadienndo nucletidos de DNA al extremo hidroxilo 3' del fragmento de Okazaki anterior. Elimina el RNA de los extremos de los fragmentos de Okazaki. El fragmento de Klenow se utiliza para la sntesis de DNA. Tiene forma de mano derecha. -DNA pol III Encargada de la sntesis de DNA. Presenta una progresividad alta, actividad cataltica alta, es muy diferente a pol I. Est formada por muchas subunidades (10 subunidades distintas) que constituyen lo que se denomina holoenzima DNA pol III. (Holoenzima: muchas subunidades que estn juntas pero que en ocasiones pueden estar separadas). Tiene 2 ncleos, uno encargado de la sntesis continua de la cadena conductora, y otro encargado de la sntesis discontinua de la retardada. Uno con actividad polimerasa y otro (psilon) con actividad exonucleasa 35. Y una subunidad (theta) de funcin no conocida.

Replisoma

Tiene 2 anillos , uno cada ncleo, formado por 2 subunidades que forman entre las dos un anillo por el que puede pasar un dplex (doble hlice) formado por DNA molde y DNA cebador. Tambin tienen un complejo gamma-tau (-), que es un complejo cargador del anillo. Su misin es abrir las dos subunidades , meter en su interior el DNA y luego cerrarlo. Mediante un proceso que consume ATP. Pasando el anillo al ncleo una vez cargado. En este complejo, las se encargan de mantener unido el holoenzima, ya que cada una de ellas est unida a un ncleo y tambin le van a servir para unirse a la helicasa en el replisoma.

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-Las helicasas son enzimas encargadas de separar las dos hebras de DNA para que se copie cada DNA, se unen a una de las hebras de DNA parental. Hay helicasas de distinto tipo: Helicasas se mueven en direccin 53. Helicasas que lo hacen en 35. En la replicacin acta helicasa DNA B de tipo 53 que se une al molde y se mover en esta direccin, en la horquilla estar unida al molde de la cadena rezagada. La helicasa DNA B est formada por 6 unidades idnticas, y entre ellas tiene un hueco, donde cabe una cadena sencilla de DNA, la enzima encargada de abrir el anillo y meter el DNA es la DNA C. Otras enzimas que participan en la replicacin son las topoisomerasas. -La topoisomerasa es la enzima encargada de deshacer los superenrollamientos. Durante la replicacin en procariotas actan 2 topoisomerasas: Topoisomerasa II o DNA girasa que quita los superenrollamientos por delante de la horquilla de replicacin. Topoisomerasa IV que acta al final de la replicacin, provocando la descatenacin final entra las finalizadas dobles cadenas hijas. Cambia 2 unidades el n de enlace cada vez que acta. Otra enzima que acta durante la replicacin es SSB. -La SSB (single strand binding) es un tetrmero formado por 3 subunidades idnticas que se unen al DNA de cadena sencilla para impedir que las dos cadenas de la horquilla se asocien de nuevo para formar la doble hlice. Ocupa una zona de 25-30 nucletidos. - Protena DNA G o DNA polimerasa primasa: es la encargada de la sntesis de cebadores de RNA. Tanto de las de cadena conductora como de los cebadores de los fragmentos de Okazaki en la rezagada. La DNA G es capaz de comenzar cadena, sintetiza unos fragmentos cortos de RNA de 5-12 nucletidos utilizando al DNA como molde. Trabaja en direccin 53. Solo est activa en la horquilla de replicacin cuando se encuentra unida a la helicasa DNA B. Como llevan movimiento opuesto, el tiempo que permanecen unidas es muy corto, por lo que puede ser el motivo de que los fragmentos de DNA sean tan cortos. Todas ests protenas se encuentran juntas en la horquilla de replicacin, formando el replisoma. -La DNA ligasa, que a pesar de no encontrarse en el replisoma, interviene en la replicacin, sellando los huecos entre los fragmentos de Okazaki y mellas en el DNA donde falta un en lace fosfodiester. La enzima activa el extremo 5' fosfato de uno de los fragmentos de Okazaki para que el hidroxilo pueda atacar al fosfato. Pgina 5 de 14

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2 Grado De Biotecnologa Sergio Aranda Romero Para que acte requiere que se active: el proceso va a requerir de energa, en eucariotas la fuente va a ser ATP y en procariotas NAD+. a. La enzima reacciona con ATP o NAD+ formando un intermedio enzima-AMP, que queda unido a un resto de lisina de la protena, liberndose pirofosfato si el sustrato era ATP, y si era NAD+ se libera nicotin mononucletido y se queda con AMP. b. En el caso de las procariotas con, la enzima transfiere el AMP al extremo 5fosfato de uno de los fragmentos de Okazaki. Formando un intermedio AMP-DNA. Teniendo activo el fosfato. c. El ltimo paso es el ataque nucleoflico del grupo hidroxilo de otro fragmento de Okazaki sobre el fosfato formndose un enlace fosfodiester y liberndose AMP.

Fases de la Replicacin Procariota

La replicacin tiene lugar en tres fases: Inicio, Elongacin, Terminacin

- Fase de Inicio: comienza en un DNA que tenga superenrollamientos negativos en un

sitio, donde E. Coli se llama Ori C. Es una regin relativamente pequea de unos 200pb. En uno de los extremos de Ori C hay 3 repeticiones de unas secuencias de 13 pb, rica en pb A-T. El hecho de estas repeticiones A-T, significa que es una zona fcilmente desenrollable, llamada DUE (elemento de desenrollamiento de DNA, DNA unbinding element). En el resto de Ori C hay una serie de 5 (R1, R2, R3, R4, R5) secuencias de repeticiones de 9 pb (caja DNA A) reconocidas por la protena de DNA A. El elemento clave de la fase de inicio es la protena DNA A, que puede tener unido ATP o ADP. Solo cuando tiene unido ATP se une a secuencias de la caja DNA A, unindose varias protenas de DNA formndose un complejo en el que el DNA se enrolla alrededor de un ncleo formado por 20 unidades de DNA A. La formacin de este complejo tensiona y provoca la separacin de las dos cadenas de DNA parental en la zona DUE. Formndose un complejo abierto de dos cadenas separadas unos 45 pb. Se consume Pgina 6 de 14

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2 Grado De Biotecnologa Sergio Aranda Romero ATP. Al complejo abierto se van unir dos complejos DNA B-DNA C. El DNA C abre al DNA B y mete en su interior la cadena molde de DNA. Por eso son dos complejos para cada cadena molde de DNA (1 por horquilla). Al abrir el DNA B tambin se consume ATP.

- Fase de Elongacin: el DNA G se une a DNA B (helicasa) y sintetiza un corto cebador de

RNA. El primer cebador que se sintetiza es el cebador de la cadena conductora, va a ir a la horquilla opuesta de la helicasa de ese molde. Estn en Ori C las dos. A cada horquilla de replicacin se va a unir un holoenzima DNA pol III. De este DNA pol III, el complejo cargador del anillo unir un anillo al bucle del cebador y las pasar a uno de los ncleos, que ser el encargado de la sntesis de la cadena conductora que ser sintetizada de forma continua y avanzar en el mismo sentido que la horquilla de replicacin. La cadena rezagada ser sintetizada en el fragmento de Okazaki, y por cada uno que haiga se tienen varias etapas que se van a repetir de forma cclica, sintetizando el otro ncleo de la DNA pol III, el movimiento de la sntesis contraria al de la avance de la horquilla, por lo que durante la sntesis el DNA va a formar un bucle, que se denomina modelo de trompn. Sntesis de la cadena rezagada: I. Lo primero que ocurre en la sntesis de fragmento de Okazaki, es que a la horquilla se une DNA G que se une a helicasa DNA B, activndose, para sintetizar un fragmento de RNA (cebador). El complejo - coge el anillo y lo abre para introducir en su interior el cebador, esto favorece que la primasa DNA G se separe. Una vez unido el anillo , se lo pasa al otro ncleo de la DNA pol III. El DNA formar un bucle que va aumentando de tamao conforme avance la sntesis de fragmento de Okazaki. El bucle se forma por el avance hacia arriba de la helicasa dejando cadena sencilla y por slo aade nucletidos al extremo 3'. La sntesis de fragmento de Okazaki se da hasta que el ncleo se encuentra con el fragmento de Okazaki sintetizado anteriormente. En el caso de que el fragmento de Okazaki sea el primero, la sntesis seguir hasta encontrarse con la cadena conductora recin sintetizada de la cadena opuesta. Los cebadores del fragmento de Okazaki se eliminan y se sustituyen por DNA, esto lo hace la DNA pol I, mediante el cambio de mella. Por ltimo la DNA ligasa une los distintos fragmentos de Okazaki para generar una hebra continua. Pgina 7 de 14

II.

III. IV.

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-Terminacin: es una zona mucho ms extendida que la de origen, que se encuentra

enfrentada, justo al otro lado de Ori C. Presenta a lado y lado unas secuencias denominadas Ter. La horquilla de replicacin que avanza en el sentido de las agujas del reloj pasan sin detenerse por Ter E, TerD y TerA y se detiene cuando pasa por TerC. La horquilla de replicacin que avanza en sentido contrario pasa sin detenerse por TerF, TerB y TerC y se detiene cuando pasa por TerA. Las Ter van a obligar as a que la sntesis termine entre Ter A y Ter C aproximadamente. Las secuencias Ter van a obligar a detener el avance de la helicasa al unrsele la protena TUS a Ter. Que impide el avance de la helicasa. Cuando la replicacin ha terminado las dos molculas de DNA hijas se separan gracias a la topoisomerasa IV.

Regulacin de replicacin procariotas.

El inicio de replicacin est regulado para que tenga una sola vez por ciclo celular. Y para ese control lo que va a hacer es controlar la fase de inicio, y la puede controlar a varios niveles: -Un modo de control es la relacin ATP/ADP, solo cuando est relacin es alta se va a producir la replicacin. Cuando el ATP es alto, significa que la clula ha crecido suficiente y presenta altos niveles de nutrientes para poder producirse la replicacin. La replicacin se producir cuando el DNA A tiene ATP unido. -Otra manera de regulacin es el control de la cantidad de DNA libre. El cromosoma eucariota tiene una secuencia Dat A que puede unir un gran nmero de molculas de DNA A de manera que cuando el DNA A se replica Dat A se duplica, pudiendo secuestrar gran cantidad de molculas de DNA libre (baja DNA A libre) no producindose ms replicacin. -Otro tipo, es la metilacin. Antes de que se produzca la replicacin, la zona de Ori C es intensamente metilada por una metilasa (metilasa Dam). Cuando el DNA se replica o est a medio replicarse la zona de OriC est semimetilada, tiene metilada la cadena de DNA metilada, pero no la cadena nueva. Esas secuencias de OriC semimetiladas son reconocidas por unas protenas denominadas SeqA que lo que hacen es unirse a OriC y secuestrar de alguna manera OriC.

Replicacin Eucariota

El proceso de replicacin en eucariotas en s es parecido al de procariotas aunque se complica porque hay mayor cantidad de DNA. Las DNA polimerasas en el ncleo de la eucariota son 12 o 13. Pgina 8 de 14

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DNA pol Ecuariotas

En la replicacin van a participar: -La DNA pol , que es un tetrmero (4 subunidades), las de mayor tamao tienen actividad polimerasas 53, y la ms pequea, actividad primasa de RNA pol, es decir sintetiza cebadores extendidos de unos 12 nucletidos de RNA y luego sigue aadiendo 20 nucletidos de DNA por su actividad polimerasa. No tiene actividad exonucleasa. La DNA alfa sintetiza tanto cadena rezagada como conductora. -La DNA pol (delta), es un tetrmero con actividad polimerasa 53y exonucleasa 35.Encargada de la sntesis de la cadena rezagada, aunque tambin puede encargarse de la sntesis de la cadena conductora. -La DNA pol , tiene actividad polimerasa 53, exonucleasa 35y 53. Es la encargada de la sntesis de la cadena conductora. Es la nica con las 3 actividades de la DNA pol I de procariotas. Tanto la como la , cuando se aslan se ven asociadas se ven asociadas a una protena denominada PCNA (antgeno nuclear en clulas en proliferacin). Tiene 3 subunidades idnticas en forma de anillo . La encargada para abrir el anillo y meter el DNA es la protena factor de replicacin C,RFC (equivalente a - de DNA pol III) Otra enzima encargada e la replicacin pero que no est en el ncleo si no en las mitocondrias, es la DNA pol (ganma), encargada de la replicacin de DNA mitocondrial. Otras como el complejo MCM tambin participa en la replicacin, con actividad equivalente a helicasa. RPA (factor replicacin A) equivalente a SSB, es decir se unir a cadenas de DNA sencillas de la horquilla para que no se vuelvan a unir.

Orgenes de replicacin

El origen de replicacin, a diferencia de las procariotas tiene varios, de 3-300kb. Llamndose replicn al segmento de DNA que se replica a partir de un origen. La replicacin comienza en el origen y transcurre bidireccionalmente hasta que se encuentra con la burbuja de replicacin contigua. Otra de las caractersticas, es que los orgenes no se activan simultneamente, sino que se activan grupos de replicones adyacentes, permitiendo que la replicacin transcurra en menos tiempo. Las eucariotas no presentan una secuencia consenso conocida, nicamente en levaduras se encuentra una secuencia de 11pb que se repite en los distinto orgenes de repliacin, denominada ars (secuencia de replicacin autnoma) Los orgenes de replicacin son reconocidos por complejos ORC (complejo origen de replicacin) Pgina 9 de 14

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2 Grado De Biotecnologa Sergio Aranda Romero En humanos, se sabe que los orgenes de replicacin estn cerca de islas CpG (repeticiones de C-G). Zonas del DNA donde se repiten pares C-G en la misma cadena unidos por enlace fosfodister.

Regulacin Replicacin Eucariota

El inicio de replicacin va estar regulado para que se de 1 vez por ciclo celular, gracias a la existencia de un interruptor binario, de manera que durante fase G1 se va a formar un complejo pre-replicativo inactivo incapaz de comenzar la replicacin. Cuando la clula entra en fase S (previa a divisin celular) el complejo se activa. En la formacin del complejo prereplicativo tiene lugar: I. II. El complejo ORC se une al origen de replicacin. Despus unos factores de inicio ayudan a la entrada de 2 unidades de helicasa MCM que se une a dobles cadenas y se encuentra inactiva. Este sera el complejo prereplicativo. Cuando entra en fases S se activan unas proteinquinasas(que fosforilan a las protenas) dependientes de cilcinas (protienas que se sintetizan en las distintas etapas del ciclo celular). Es un dmero. Esas proteinquinasas dependientes de ciclinas fosforilan a distintos componentes del complejo prereplicativo, lo que provoca la salida de alguno de los componentes del complejo y la reestructuracin de la helicasa para que ahora albergue nicamente a una cadena monocatenaria en su interior. No se sabe muy bien cmo tienen lugar esa separacin de las dos hebras y que la helicasa pase de tener dos cadenas a tener solo una. Una vez separadas las dos cadenas, entraran las protenas que mantienen las dos hebras separadas, RPA y la DNA pol , una para cada hebra. Que sintetizarn un cebador extendido con DNA. Posteriormente, entran dos complejos PCNA-RFC, lo que va a hacer el anillo que el anillo de PCNA se una al cebador provocando la salida de la DNA pol y la entrada de la DNA pol y de la DNA pol , una encargada de la sntesis de la cadena conductora y otra de la rezagada respectivamente.

III.

IV.

V.

Parece que en eucariotas todas estas protenas se encuentran asociadas, formando un replisoma eucaritico. En determinadas circunstancias, la DNA polimerasa delta, si no est presente la DNA polimerasa psilon, se encarga de la sntesis de la cadena conductora y de la cadena rezagada.

-Cmo se quitan los cebadores de los fragmentos de Okazaki?

Tiene lugar por un mecanismo donde interviene DNA pol y una exonucleasa denominada FEN1 (nucleasa especfica de flap), que hace que DNA pol levante para arriba el fragmento de Pgina 10 de 14

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2 Grado De Biotecnologa Sergio Aranda Romero okazaki, al desplazarlo por sntesis continua de nucletidos del contiguo (flap= aleta). Entonces la FEN1 va a cortar los nucletidos que salen de la aleta, repitindose varias veces el proceso, hasta que se encuentra DNA, la DNA . La DNA pol deja de levantar nuceltidos, no formando aletas y dejando de actuar FEN1.Entrando la DNA ligasa y une los fragmentos de Okazaki.

-Qu pasa con las histonas?

Conforme avanza la horquilla los nucleosomas se deshacen por delante de la horquilla e inmediatamente se vuelven a hacer por detrs. Por lo que debe haber sntesis muy activa de histonas durante la replicacin. Las histonas no se separan del todo por completo si no que quedan en forma de tetrmero (H3-H4) y dmeros (H2A-H2B), a la hora de formarse los nuevos nucleosomas tendremos tetrmeros viejos (de las hebras parentales) que podrn unir dmeros viejos y nuevos de (H2A-H2B) y tetrmeros que podrn unir dmeros (H2A-H2B) viejos y nuevos. No hay predileccin por ninguna de las hebras hijas.

-Replicacin en los telmeros.

Otra cosa que diferencia al DNA de procariotas al de eucariotas es que es lineal, de manera que en los extremos del DNA las dos hebras no pueden ser replicadas por completo, ya que en el mejor de los casos, suponiendo que a la hora de replicarse el RNA cebador se sintetizase por uno de los extremos, una vez que se elimina el RNA no hay ninguna enzima capaz de aadir nucletidos al extremo 5'. Lo mismo ocurre con el otro extremo. Esto supondra que divisin tras divisin los cromosomas se van a ir acortando.

Los extremos de los cromosomas de los eucariotas contienen miles de repeticiones en tndem de una secuencia rica en guanina denominada secuencia telomrica, miles de repeticiones de secuencia pero siempre hay un trozo de cadena sencilla. La responsable de que exista esa secuencia es una enzima denominada telomerasa que aade la secuencia telomrica al extemo 3' del telmero. La telomerasa es una ribonucleoprotena, enzima que tiene, por tanto, un trozo de RNA. Parte de ese RNA acta como molde para la sntesis de la secuencia telomrica, de manera que tiene un reaccin de tipo transcriptasa inversa. Pgina 11 de 14

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Lo que ocurre es que la enzima se coloca sobre el extremo 3' del telmero y utilizando como molde su RNA, sintetiza la secuencia telomrica, cuando termina se vuelve a desplazar al extremo 3', as una vez tras otra, va aadiendo la secuencia telomrica. La secuencia complementaria a la telomrica es sintetizada por la maquinaria propia de la clula (DNA pol), pero siempre quedar una zona de cadena sencilla. En los eucariotas inferiores a esa zona de cadena sencilla se van a unir una serie de protenas para proteger el DNA, que es mas fcil de hidrolizar. En los eucariotas superiores, se forma lo que se denomina un lazo T, en los que la cadena sencilla se aparea con un segmento, con un trozo del propio DNA. El estudio de los telmeros est muy de moda porque est muy relacionado con el cncer y con el envejecimiento. Su descubrimiento es relativamente reciente Se sabe que la telomerasa slo esta presente en clulas de la lnea germinal y en los tejidos fetales pero est ausente en los tejidos de los adultos, a excepcin de la piel, el colon, las clulas sanguneas, clulas que se tienen que dividir con mucha frecuencia. De manera que cuando nacemos, nuestras clulas tienen un determinado numero de secuencias telomricas y divisin tras divisin se van acortando los telmeros, de manera que Pgina 12 de 14

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2 Grado De Biotecnologa Sergio Aranda Romero los tejidos adultos tienen menos repeticiones de las secuencias telomricas que las de los individuos jvenes.

El 85-90% de los tumores tienen actividad telomerasa, lo que hace a las clulas inmortales.

-Replicacin del DNA mitocondrial

El DNA mitocondrial, tiene una estructura circular cerrada, similar al de procariotas. Se le ha descrito la existencia de dos orgenes de replicacin, Ori H y Ori L. La replicacin comienza solo en Ori H, y tiene lugar de forma unidireccional, es decir tiene lugar el avance de una sola horquilla, y se copia solo una de las hebras, la replicacin avanza hasta llegar al otro origen, Ori L, el cual da comienzo a la replicacin de la otra hebra.

-Replicacin de los genomas de RNA

Prcticamente la mayora de los virus de vegetales y alguna parte de los virus animales contienen como material gentico RNA, en vez de DNA. Se pueden dar varios casos: Cadena RNA +, cadena con sentido. Ese RNA acta como si fuera un RNA mensajero, de manera que la propia maquinaria de la clula podra directamente utilizar como mensajero el RNA del virus. Una de las primeras protenas que se sintetizara sera una RNA polimerasa dependiente de RNA, que lo que hace es sintetizar RNA, utilizando como molde RNA Cadena RNA -, si la molcula de RNA es RNA , es muy comn que junto el RNA el virus ya lleve la RNA polimerasa dependiente de RNA. Pgina 13 de 14

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En los retrovirus, como por ejemplo el del SIDA, la molcula de RNA es un RNA bicatenario y junto con el RNA entra una enzima denominada transcriptasa inversa, esta enzima no est presente en las clulas eucariotas, tiene que entrar junto al virus, utiliza como molde el RNA y fabrica a partir de RNA DNA que se insertar dentro del genoma de la clula hospedadora y desde ah ser transcrito como si fuese un gen de la propia clula hospedadora.

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