Las bacterias viven en un mundo en constante cambio. Tienen que adaptarse una y otra vez a estos cambios.

Escherichia coli para ejemplo, que vive en el intestino de los mamferos, tiene que adaptarse a la comida constantemente cambiando estos animales comen. Es por lo tanto un necesidad de E. coli para regular la sntesis de sus enzimas de acuerdo a sus necesidades. Las enzimas que descomponen cierto compuestos, por ejemplo lactosa, slo se necesitan cuando estos compuestos estn presentes, las enzimas que sintetizan otros compuestos, por ejemplo aminocidos, son slo necesaria cuando estos aminocidos estn ausentes. Desarrollo Histrico del Campo El primer anlisis sistemtico de adaptacin se hizo en el 1930 por el finlands bioqumico Henning Karstro m (Karstro m, 1938). Su trabajo se repiti entonces en el 1940 por el genetista francs Jacques Monod. Monod analiz en particular, el crecimiento de E. coli en presenciade mezclas de glucosa y otros azcares, tales como lactosa, arabinosa o maltosa. Monod confirmado Karstro m de observacin de que la glucosa se utiliza siempre primero. Monod llamado este fenmeno diauxie. En la dcada de 1940 se convirti as en claro que ciertos azcares, como lactosa, arabinosa o maltosa, inducir la sntesis de enzimas que descomponen estos azcares hacia abajo para que los compuestos puede ser utilizado directamente por las bacterias. Por otra parte, ciertos aminocidos, tales como triptfano, metionina o histidina, reprimir la sntesis de enzimas que sintetizan ellos. Por lo tanto, fue necesario decidir qu sistema debe ser analizado extensamente. La respuesta fue inequvoca. Era el sistema lac de E. coli, para que las mejores pruebas se haba desarrollado. o-nitrofenil-b-D-galactsido (ONPG) fue un sustrato ideal para probar la presencia de b-galactosidasa. ONPG es incolora. Cuando se hidroliza por b-galactosidasa su nitrofenol producto es de color amarillo. Adems, isopropil-1-tio-bd-galactsido (IPTG), un anlogo de lactosa, se sintetiz. Induce la sntesis de b-galactosidasa pero no es un sustrato de bgalactosidase. Con estas dos sustancias puede ser demostr que la b-galactosidasa pueden ser inducidas sobre 1000-veces. Adems, se pudo demostrar que el sntesis de b-galactosidasa es la sntesis de novo nuevo. Esta destruido, entonces predominante, la hiptesis de que la instruccin el inductor oblig a un precursor ya sintetizado protena se pliegue correctamente en activo b-galactosidasa, al igual que anticuerpos fueron pensados para doblar en la presencia de antgenos en su conformacin final. No fue simplemente excelente bioqumica que condujo a la solucin del problema. En Adems, el anlisis gentico mutante ayudado enormemente. Dos tipos de mutantes fueron aisladas. Un tipo mutante no puede crecer en lactosa. En ese momento, tres tipos de tales LAC2 mutantes se encontraron que poda no crecer en lactosa. Haba mutaciones que destruyeron actividad de bgalactosidasa (Z2) y otros que bgalactosidase izquierda actividad intacta. Se ha demostrado que estos ltimos mutantes eran defectuosos en lactosa permeasa (Y2), la bomba que bombea la lactosa desde el exterior en la clula. Haba tambin un tercer tipo de mutante en el que tanto bgalactosidase y la actividad de la lactosa permeasa estaban ausentes. La cartografa gentica indica que el Z y Y mutaciones estaban estrechamente relacionados. Los dos genes son de hecho parte de uno unidad de transcripcin, de un opern. El otro tipo de mutante era constitutiva, es decir, sintetizado b-galactosidasa en grandes cantidades, incluso en el ausencia de inductor. Estos mutantes se llamaron I2. Una vez ms, estas mutaciones estn estrechamente vinculadas a la lacZ

y Lacy genes. La pregunta ahora era, cmo funciona la regulacin de bgalactosidase y Lac trabajo permeasa? Funciona en un manera positiva? El producto del gen I activar la transcripcin de los genes lacZ y Lacy en la presencia de inductor o una mutacin adecuada? O se regulan de modo negativo, es decir, es la sntesis de mensaje lacZY inhibida por la presencia, pero descontrolado en ausencia, del producto del gen lacI? Si bien estas cuestiones se suscitaron a finales de 1950 y principios de 1960, la existencia de cido ribonucleico mensajero (ARNm) se demostr. Entonces pareca tener sentido asumir que el producto del gen lacI inhibe la la iniciacin de la sntesis de mRNA lac. La evidencia de la modelo que Jacob y Monod luego present en 1960 y1961 fue el siguiente (Jacob y Monod, 1961). Presentaron los dos tipos de laca mutantes constitutivos que se prev para el control negativo y se incompatible con el control positivo: 1. Ellos encontraron mapeo constitutiva mutaciones recesivas en el gen lacI. En otras palabras, la presencia de un I+ gen en un cromosoma o un episoma es dominante sobre una mutacin en el cromosoma I- o viceversa, en un episoma. Esto es lo que cabra esperar en el caso de control negativo. La ausencia de cables represor exceso de produccin de b-galactosidasa y permeasa Lac. Su presencia es dominante sobre su ausencia. 2. Represor Lac debe, de acuerdo con el modelo, interactuar con el operador, una estrecha regin del promotor, la sitio de inicio de la transcripcin. Jacob y Monod encontrado mutaciones dbiles, constitutivos Oc que eran cis dominante. De este modo, dar lugar a la sntesis constitutiva de los genes que se unen covalentemente a la regin que lleva la mutacin Oc. Los genes en trans no son encendida. Esto es exactamente lo que uno esperara de control negativo. El modelo represor-operador fue tan convincente porque no se present slo por Monod para el sistema lac, pero tambin, por Jacob, para la maquinaria de fago lambda (l) determinar la lisis o lisogenia de E. coli. Fago l, descubierto por Esther Lederberg, tiene dos formas de desarrollar despus entrar en E. coli. En la va ltica puede multiplicarse y lisar la clula husped E. coli. En la va lisognica fuere incorporar su cido desoxirribonucleico (ADN) en una determinada sitio en el ADN de E. coli y se quedan all para siempre. El fago l hace que las placas turbias de E. coli que no lleven l. La turbia centros de las placas consisten de bacterias que tienen convertido lisognica para l fago. IC del represor de lambda evita l de fago de hacer placas en E. coli lisognica para l. Hay mutantes de L que siguen el camino ltico exclusivamente. Algunos de ellos se producen en el gen represor cI. Hacen placas claras sobre E. coli. Hay operador mutantes de L que son capaces de hacer placas en E. coli lisognica para l. Aqu el operador del sitio con el que l interacta represor ha sido daado. Fue la combinacin de la laca y los sistemas que l hizo que el modelo de JacobMonod de control negativo de transcripcin tan convincente. As, los bilogos moleculares ms en el momento cree que todo el control gentico es negativo. Pasaron aos hasta que los primeros casos de control positivo en E. coli (Ara, mal) eran generalmente aceptadas. Y tom una dcada o ms hasta que se acept que en casi todos los eucariotas control gentico es positivo.

Pasos a seguir en la transcripcin de Multicistrnica Operones

En las bacterias como E. coli ADN es ms eficaz desnudo. En Por el contrario, en el ADN de eucariotas se envasa en la cromatina de los simple orden o superior. Debido a los nucleosomas, el ARN polimerasa no puede por lo tanto fcilmente reconocer TATAAT en eucariotas secuencia para iniciar la transcripcin. Sin embargo, una Secuencia de ADN puede ser fcilmente reconocida por una protena en E. coli ADN. En E. coli una secuencia 5'TATAAT en el 210 posicin y una secuencia 5'TTGACA en la posicin 235 (11 es el inicio de la transcripcin) es suficiente para unirse a ARN polimerasa eficaz y especficamente. En E. coli, una subunidad particular de la ARN polimerasa, s (sigma), reconoce estas secuencias y garantas efectivas, la unin especfica de ADN. Recientemente se ha demostrado que los una subunidad a de la RNA polimerasa puede unirse a una rica en AT regin alrededor de 250, la UP element.DNA est en su forma B cuando se reconocen y as forma el complejo cerrado. La ADN entonces se abre desde la regin de 210 al inicio posicin y forma el complejo abierto. En presencia de la cuatro trinucletidos UTP, ATP, GTP y CTP (uridina, guanosina adenosina, citosina y trifosfato) el comienzo de la transcripcin se inicia, de manera ptima cada segundo. Transcripcin procede entonces a 378C, a razn de unas 70 bases por segundo. En bacterias tales como E. coli, el ADN que se transcribe menudo contiene varios genes. Tal conjunto de varios genes que se transcriben a partir de un promotor se denomina opern. Cabe sealar que E. colimRNAis, en general, no empalmados, en contraste con los ARNm eucariotas. No es tambin edicin, transcripcin inversa o modificado en su extremo 5 'y 3'. Se utiliza para la traduccin tal como es. Cabe sealar que la mayora mRNAof E. coli es ms bien inestable. En general tiene una semivida de aproximadamente 2 min. Por lo tanto, con el fin de utilizar eficientemente tiene que ser traducido en protena mientras se est sintetizando. Hay secuencias especiales de ADN donde la transcripcin detiene. Algunas de estas seales no necesitan la ayuda de un protena. Otros lo hacen. Las protenas reguladoras pueden inhibir la parada de la transcripcin. La transcripcin puede ser en principio regulado en todas las etapas entre el comienzo, de alargamiento y de parada. Sin embargo, es evidente que la mayora efectiva negativa o positiva regulacin se produce por la formacin de inhibir o mejorar de el complejo cerrado.

Control negativo de la transcripcin A travs de un represor: el opern lac

El sistema lac fue en 1960, y es hoy, uno de los mejores entendido sistemas de regulacin de Escherichia coli. Represor lac fue el represor primer aislado (Gilbert y Mu ller-Hill, 1966) y se secuenci. Por lo tanto, vale la pena presentarlo aqu. Lo es un tetrmero. Cada monmero consta de 360 residuos. Su X-ray estructura se ha resuelto (Lewis et al., 1996). Tiene una estructura modular que ha sido analizado genticamente en gran detalle (Suckow et al, 1996;.. Pace et al, 1997). Residuos 1-60 cdigo para la pieza de cabeza que se une a operador de ADN. Para ello se utiliza una hlice a, el reconocimiento Regulacin de la transcripcin bacteriana hlice, la hlice de un segundo motivo hlice-giro-hlice, para unirse en el surco mayor de la mitad de la del operador. Residuos 61-330 de cdigo represor Lac para el ncleo, que lleva un nico sitio de unin inductor y una dimerizacin sitio.

Residuos 330-360 de cdigo para dos repeticiones heptad que garantizar que dos dmeros formar un tetrmero. As, hay mutaciones en la pieza de cabeza que destruyen la capacidad de represor Lac de obligar al operador lac y para reprimir. Ellos conservan la capacidad de unirse inductor y a tetrmeros forma. Tales mutantes son dominante negativo constitutives (I2D). Existen mutaciones en el ncleo que destruir la capacidad de Lac represor para unirse inductor pero mantener la capacidad de formacin de dmero y el operador vinculante. Estos mutantes son dominantes negativos (IS). El operador lac 5 'AATTGTGAGCGGATAA CAA T T TTAACACTCGCCTAT TGTTAA muestra una simetra imperfecta didica. Cada medio est obligado por una hlice de reconocimiento. Las secuencias de ADN que son byRNApolymerase reconocido, el promotor, y por Lac represor, el operador, se superponen. El centro de simetra de opern lac es 11 pb aguas abajo del inicio de la transcripcin. Que se superponen promotor y el operador puede demostrar por experimentos de proteccin de ADNasa. As ARN polimerasa y represor Lac no puede obligar a su unin sitios al mismo tiempo. Cuanto ms fuerte es el represor Lac vinculante, menos la ARN polimerasa se une y menos la ARNm del gen lacZ se produce.. Cuando el ADN del opern lac fue secuenciado, dos secuencias adicionales que parecan operador lac se encontrado. Uno de ellos, O2, est situado 401 pb corriente abajo desde el centro de simetra de Lac O1 (el autor ahora llama operador lac O1). La otra secuencia est situado 92 pb aguas arriba del centro de simetra de O1. O2 se une Lac represor menos bien que O1 por un factor de 5. O3 se une Lac represor menos bien que O1 por un factor de 300. No hay mutaciones constitutivas se encontraron nunca en estos O2 O3 o secuencias. Por lo tanto, durante mucho tiempo que eran considerados como restos funcionales de la evolucin. Esta estaba mal. Se ha demostrado en efecto que cuando O3 justO2or es destruida, la represin disminuye en un factor de 2-3. Sin embargo, cuando O2 y O3 son destruidos, la represin disminuye en un factor de 70! Cmo se puede explicar esto? Lo Se propuso que tetramricos Lac formas represor bucles ya sea entre O1 y O2 o entre O1 y O3. Si formacin de uno de los bucles se hace imposible por el destruccin de cualquiera de O2 u O3, y luego el otro lazo todava puede formulario. Pero si ambos O2 y O3 se destruyen bucles no ms puede ser formado. La represin tiene que ocurrir exclusivamente de O1. Pero, por qu un lazo entre O1 y O2 O3 o llevar a fuerte represin de la unin del represor en O1 en paz? Hay una explicacin simple, razonable: si tetramrica Lac represor se une con dos subunidades a O2 u O3, entonces el dos subunidades que estn libres y no han llegado cerca de O1. Su concentracin local con respecto a O1 es, pues, fuertemente aumentado. Se increment ms de O3 que de O2. Esto aumenta la capacidad de unin de estos represor Lac dmeros hasta O1. Esto conduce entonces a menos de la ARN unin de la polimerasa al promotor, es decir, ms

represin. En la distancia de ms de 600 pares de bases de la concentracin local de un represor deja de tener importancia, es decir, se alcanza el nivel de represor flotante libremente alrededor de la clula, es decir, 1028m. Slo los complejos que son nicos en E. coli permite la accin de represores que estn situados ms lejos (Mu ller-Hill, 1998) (Figura 1). Dos de tales dispositivos independientes, paralelas de cualquier funcin se llaman a menudo redundante. Este trmino es engaoso. La autor lo prefiere llamar O2 y O3 auxiliar o complementaria en lugar de redundante, pseudo (es decir mentira) los operadores.

Control positivo de la transcripcin

A travs de un Activador: El opern lac Cuando el control negativo del opern lac se propuso en 1960-1961 por Jacob y Monod, fue completamente pasa por alto que el opern lac es tambin regulado positivamente. Un anlisis gentico detallado indica que las mutaciones en dos loci fuera del opern lac conducir a una disminucin de 50-veces de bgalactosidase sntesis. Se encontr que uno de estos genes codifica para el monofosfato de adenosina cclico (cAMP) sintetasa, mientras que los otros cdigos para una protena que era protena activadora de catabolitos entonces llamada (CAP) o catablica protena represora (CRP). Se demostr que el CAP / CRP se une en la presencia de AMPc a secuencias especficas de ADN y el ADN se inclina fuertemente. Es la misma curvatura que activa la ARN polimerasa? No lo creemos. La flexin, por supuesto, es una parte integral del complejo formado de CAP y la ARN polimerasa en el ADN. La centro de simetra de una de tales CAP secuencia de unin era encontrado 61,5 pb aguas arriba del inicio de la transcripcin de la lac operon.How CAP es aumentar la eficiencia de la lac promotor de 50 veces? Se une dbilmente a la RNA polimerasa. Lo Se ha demostrado en detalle cules son las regiones de la PAC se unen a que las regiones de la subunidad ofRNApolymerase un (Busby y Ebright, 1994). En el caso de que el sistema lac es el subunidad aguas abajo que hace la interaccin. As, la explicacin ms simple de la activacin de 50-veces mayor de la transcripcin es que la presencia de CAP en el sitio CAP aumenta la concentracin local de la RNA polimerasa en una de otro modo ineficiente promotor lac con un ineficiente 210 regin. Por lo tanto la concentracin de complejo cerrado es aumento de 50-veces. Esto lleva a la consecuencia ms abrir complejo y ms inicios de transcripcin. En el caso de un bucle represor entre O2 y O1, CAP se puede unir a su sitio de unin; ARN polimerasa no puede unirse a su promotor. En el caso del bucle entre O3 y O1, Protena CAP no puede unirse a su sitio correcto. Es, posiblemente, puede se unen cuando se desplaza Lac represor de O3 a una secuencia 5 pb aguas arriba. Sin embargo, esto no est claro. El nivel ofcAMPdepends en cierta medida en el nivel de glucosa. En CAP E. coli se lo utiliza para activar o desactivar (que entonces acta como un represor!) con ms de una docena de sistemas. Existe otra protena, similar, FNR, con semejante poderes reguladores, cuya actividad est regulada por la disponibilidad de oxgeno.

Cmo es el Reglamento general de la lac Operon? El represor lac familia

Las E. coli cromosoma cdigos para 16 protenas que son homloga a Lac represor. Algunos, no todos, pero, Se han analizado en detalle. Cul es la conclusin? Cada sistema es diferente de cualquier otro sistema. El sistema gal, por ejemplo, produce Gal dimrica represor. Sin embargo, el sistema tiene dos operadores separados por 114 pb. Los dos operadores se acercan el uno al otro por la protena HU, que forma un complejo con el ADN entre los dos operadores. As que el Gal dimrica dos represores por lo tanto interactuar de alguna manera con la otra. El sitio CAP est posicionado 41,5 pb aguas arriba de la promotor. Esto entonces tiene la consecuencia de que la corriente ascendente subunidad de CAP interacta con la RNA polimerasa. En el sistema deo, Cyt represor es tambin dimrica. Lo hace no inhibir la unin de ARN polimerasa al promotor. Lo une entre dos tapas unidas a 293,5 y 240,5 y les impide unirse con sus sitios activos para la sitios ofRNApolymerase activo. As CYTR represor inhibe el funcionamiento de, pero no la unin de dos tapas para sus sitios en el ADN. Existen sistemas en los que un represor puede constituir una ruta " bloque "que detiene la progresin de la polimerasa de ARN? Pur represor se inform para reprimir el gen purB por una barricada 242 pb aguas abajo del inicio de la transcripcin por un factor de 2-3.We no conozco ningn sistema natural con un efecto ms grande. Parece que todos los sistemas de la familia tiene su propio lac forma de funcionamiento. Lo mismo se puede decir de la transcripcin regulacin en general. As que si se compara con la represin Lac Represin Lambda observamos que ambos as lo compitiendo directamente con la polimerasa de ARN. Aqu el similitud es notable. Lac y represores l tanto de uso una. una hlice de unirse especficamente al surco mayor del ADN Esto es cierto para la mayora de los represores o activadores incluyendo CAP. Pero hay pocos represores, tales como la metionina represor y algunos represores de fagos, que utilizan hojas de b a reconocer el surco mayor del ADN. Y, por ltimo, recordamos l represor que es capaz de activar su propia transcripcin.

Other Systems
l represor era el ejemplo que soporte el Jacob Monod y la teora de la regulacin gnica. l represor inhibe la formacin del complejo cerrado por la ARN polimerasa en los promotores PL y PR (Ptashne, 1987). En el otro sistemas del opern trp el operador que se une a Trp represor en la presencia del triptfano corepressor tiene su centro de simetra dentro de la caja 210 de la Trp promotor. Por tanto, parece que la competencia directa de la represor con la RNA polimerasa para unirse a su promotor, o la competencia con CAP o activador otro por sus sitios de unin, es un importante medio de represin. en lugar de un inductor o un fosforilacin corepressor, covalente se puede usar para cambiar la capacidad de un represor o un activador. Tal es el caso con OmpR, que se une mejor a sus sitios de ADN cuando est fosforilada (Head et al., 1998).

Hay otras formas de regulacin de la sntesis de mRNA que hasta ahora no han encontrado, por ejemplo, terminacin y antitermination puede ser utilizado para la transcripcin controlar. La protena N del fago l acta como un antiterminator. Por tanto, es esencial para la fase ltica de esta fago. El opern trp utiliza para regular la antitermination cantidad de ARNm trp. En presencia de triptfano una pptido corto que est codificada por el ADN directamente en frente de un seal

de terminacin se traduce. Esto conduce a la terminacin Regulacin de la transcripcin bacteriana de la transcripcin. Sin embargo, cuando el triptfano est ausente, la paradas de ribosomas en los dos Trp (UGG) codones que codifican para este aminocido. Esto conduce entonces a antitermination. La dispositivo similar se encuentra en la su opern. As pues, tanto de inicio y parada de la transcripcin se utilizan forregulation de la transcripcin. Por ltimo, hay muy pocos los casos en E. coli donde inicio de la transcripcin de un opern es inhibida por la formacin de un complejo protena-ADN que abarca una regin grande de todo el opern. Tal es el caso del opern bgl. Sin embargo, no est claro qu protenas que se unen a secuencias. La principal deficiencia del modelo de Jacob-Monod era la exclusin de la posibilidad de control positivo. En efecto, una anlisis detallado indica que l activa el represor sntesis de su propio ARNm! Y entonces los sistemas como el arabinosa o el sistema de maltosa! En ambos casos activadores, AraC y malta, son necesarios para la transcripcin de estos operones en la presencia de arabinosa o maltosa. Ambos activadores estn unidos directamente aguas arriba de la pertinente promotores. Es de suponer que actan aumentando el local de concentracin de ARN polimerasa sobre su dbil promotores. Los problemas que los represores y activadores tienen que resolver para trabajar ptimamente son bastante diferentes. La represor tiene que se unen especficamente y fuertemente a su operador. Cuando ocupa 99% de su operador reprime 100 veces. En contraste, el activador no es necesario que se unen fuertemente a su sitio. Si se satura slo la mitad de su sitio, se activa al 50% de su capacidad. El activador, no el represor, puede unirse dbilmente pero especficamente a la RNA polimerasa. Slo se necesita una posicin exacta sobre el ADN. Cuando E. coli entra en un entorno donde no ms crecimiento es posible el gen rpoS est encendido. Se produce una sigma factor, ss, que permite que la ARN polimerasa para utilizar un nuevo conjunto de promotores que hasta ahora haban estado disponibles. En bacterias hecho de pasar la mayor parte de su vida en la fase estacionaria. El correspondiente gen sigma factor de Salmonella typhi es un determinante de virulencia importante. Los genes implicados en la degradacin de compuestos orgnicos tales como benzoato de metilo y mtoluate son controlados por el gen correspondiente en Pseudomonas putida. Es un gran placer para hoy investigadores para analizar estas construcciones maravillosas evolucin.