PRCTICA 5 REACCIONES DE IDENTIFICACIN DE CARBOHIDRATOS I. OBJETIVOS: II. Reconocer los principios inmediatos de los carbohidratos.

tos. Diferenciar experimentalmente monosacridos, disacridos y polisacridos. Familiarizarse con la clasificacin de los hidratos de carbono en reductores y no reductores. Estudiar las propiedades del almidn.

FUNDAMENTO TERICO: Se denominan carbohidratos o glucsidos los derivados aldehdicoscetnicos, reales o potenciales de alcoholes polivalentes o sus productos de condensacin segn la cantidad de glucsidos o azcares sencillos que se obtengan por hidrlisis de los policarbohidratos. Se les clasifica como: Polisacridos (celulosa, almidn) Trisacridos (rafinosa) Disacridos (sacarosa, lactosa, maltosa), y Monosacridos Los monosacridos por el grupo carbonilco pueden ser aldosas o cetosas por el. nmero de tomos de oxigeno, pueden ser hexoaas (glucosa, galactona, manosa, fructosa), pentosa (arabinosa, xilosa, ribosa, lixosa), terrosas (treosa y eritrosa). Los carbohidratos poseen algunas propiedades de las funciones carbonilo y oxhidrilo y, adems, algunas especficas. Todos son ptimamente activos. Por el calor y la accin de cidos fuertes se deshidratan, dando en algunos casos derivados del furfural. Los hidratos de carbono ms abundantes de la bisfera estn constituidos por el almidn y celulosa que son polmeros de glucosa presentes en plantas. El almidn est distribuido ampliamente en las plantas que lo almacenan en granos y en tubrculos como reserva alimenticia para el momento de la germinacin. Todos los tipos de almidn producen un color azul con el yodo, lo cual sirve de indicador cualitativo sensible, tanto para ensayar el yodo como el almidn. La hidrlisis del almidn catalizada por cidos lo convierte en varias clases de dextrinas, en maltosa y por ltimo en D (+) glucosa. El ensayo con yodo se utiliza para seguir la marcha de la hidrlisis puesto que la coloracin va cambiando de azul a rojo a medida que decrece el peso molecular delcompuesto orgnico. Los grupos funcionales existentes en el almidn y en la celulosa son los grupos hidroxilo y acetal. Estos polisacridos tienen diferente configuracin, siendo el almidn un glucsido y la celulosa un f -glucsido. Tambin difieren en el tamao teniendo lacelulosa un peso molecular medio mucho mayor que el del almidn.

III. MATERIALES Y REACTIVOS Reactivo Molisch Reactivo Fehling Tubos de ensayo Pipetas

Reactivo Tollens Reactivo Seliwanoff Reactivo Barfoed Sol. glucosa 1% Sol. fructuosa 1% Sol. sacarosa 1 Sol. lactosa 1% Sol. almidn 1% Sol. sacarosa 5% Sol. HCl 10% Sol. NaOH 10% Sol. yodo - yodurado

Bao de agua hirviente Pinzas Bao hirviente Vaso de precipitados Luna de reloj

IV. PROCEDIMIENTO: Reacciones genricas de los carbohidratos Reaccin de Molisch En 6 tubos de ensayo ponga respectivamente 1 ml. de una solucin de glucosa al1%, 1 ml. de solucin de fructuosa o levulosa al 1%, 1 ml. de una solucin de sacarosa al 1%, 1 ml. de una solucin de lactosa al 1%, 1 ml. de una solucin de almidn al 1% y en el ltimo 1 ml. de agua (testigo). A cada una agrguele 2 gotas de reactivo de Molisch; inclinando el tubo, deje resbalar por las paredes 2 ml. de cido sulfrico concentrado. Observe el color violceo del anillo formado en la interfase entre los dos lquidos. Anote aquellas soluciones que den positiva la prueba. Reacciones Especficas Reacciones de Fehling En 5 tubos de ensayo mezclar en cada uno 0.5 ml. de solucin A de Fehling con 0.5 ml. de la solucin B de Fehling, agrgueles 1 ml. de la solucin de los carbohidratos utilizados en el experimento anterior. Introducir los tubos en un bao hirviente, observe si hay cambios de color, formacin de precipitados.

Reaccin de Tollens En 5 tubos de ensayo colocar a cada uno 1. ml. de Reactivo de Tollens recientemente preparado, aadir a cada uno 2 ml. de las soluciones de carbohidratos utilizados anteriormente. Introducir los tubos en un bao hirviente, observe si hay formacin de espejo de plata y cuales carbohidratos dan negativa esta reaccin. Realice una comparacin de estos resultados con los de la prueba de Fehling.

Reaccin de Seliwanoff En 5 tubos de ensayo coloque 1 ml. del reactivo Seliwanoff, luego aada 3 gotas de solucin de los carbohidratos utilizados anteriormente, luego lleve los tubos a bao hirviente. Anote el tiempo en que se colorea cadaa tubo y el color adquirido.

Reaccin de Barfoed En 5 tubos de ensayo coloque 1 ml. del reactivo Bartoed luego aada 1 ml. de solucin de los carbohidratos utilizados anteriormente, luego llevar los tubos a bao hirviente y observar la formacin de un precipitado de color rojo ladrillo, lo que indicar la presencia de monosacridos. Los disacridos tambin precipitan xido cuproso, pero muy lentamente.

Hidrlisis de la Sacarosa En 3 tubos de ensayo coloque 5 ml. de solucin de sacarosa al 5%, llvelos a bao hirviente y a cada tubo aada volmenes iguales de agua para el primer tubo, cido clorhdrico al 10% en el segundo tubo, e hidrxido sdico acuoso al 10% en el tercero. Calentar los tubos durante cinco minutos y ensaye a continuacin la reaccin de una porcin de cada mezcla con la solucin de Fehling. Qu conclusiones deduce?

Ensayo del Almidn frente al Iodo En un tubo de ensayo coloque 6 ml de solucin de almidn al 1%, aada una gota de solucin de Iodo - lodurada, observe el color de la solucin. Luego caliente la solucin coloreada a ebullicin y observe el efecto, observe tambin qu efecto produce el enfriamiento de la solucin.

Hidrlisis del Almidn En un vaso de precipitados coloque 50 ml de solucin de almidn al 1%, aada 1 ml de cido dorhdrico concentrado. Hierva la solucin y retire muestras de Y ml. a intervalos prximos, ensayando su reaccin frente al iodo. Anote el color en los diferentes ensayos. Cuando la solucin ya no produzca coloracin con el iodo, neutralcela y ensaye la reaccin de una muestra frente al Fehling. Formule estructuralmente los productos finales de la hidrlisis del almidn (un disacrido y un monosacrido).

V.

CUESTIONARIO: 5.1. 5.2. 5.3. 5.4. Indique la composicin de los reactivos utilizados en la prctica (R. Molish, R. Seliwanoff, R Barfoed, R Fehling). Elabore un diagrama de flujos del proceso de produccin de la glucosa a nivel industrial. A qu se debe la coloracin azul del iodo sobre las muestras de almidn? Cmo se utiliza el ensayo del iodo para seguir la hidrlisis del almidn?

VI. OBSERVACIONES VII. CONCLUSIONES VIII. BIBLIOGRAFA Reaccin de Molisch Saltar a: navegacin, bsqueda Reaccin de Molisch La reaccin de Molisch es una reaccin que tie cualquier carbohidrato presente en una disolucin; es llamada as en honor del botnico austraco Hans Molisch. Se utiliza como reactivo una disolucin de -naftol al 5% en etanol de 96. En un tubo de ensayo a temperatura ambiente, se deposita la solucin problema y un poco del reactivo de Molisch. A continuacin, se le aade cido sulfrico e inmediatamente aparece un anillo violeta que separa al cido sulfrico, debajo del anillo, de la solucin acuosa en caso positivo. Es una reaccin cualitativa, por lo que no permite saber la cantidad de glcidos en la solucin original Prueba de Seliwanoff Saltar a: navegacin, bsqueda La prueba de Seliwanoff es una prueba qumica que se usa para distinguir entre aldosas y cetosas. Los azucares son distinguidos a traves de su funcin como cetona o aldehdo. Si el azcar contiene un grupo cetona, es una cetosa, y si contienen un grupo aldehdo, es una aldosa. Esta prueba esta basada en el hecho de que, al calentarlas, las cetosas son deshidratadas ms rpido que las aldosas.

Reaccion de Seliwanoff El reactivo consiste en resorcinol y cido clorhdrico concentrado: La hidrlisis cida de polisacridos y oligosacridos da azucares simples Entonces la cetosa deshidratada reacciona con el resorcinol para producir un color rojo. Es posible que las aldosas reaccionen produciendo un leve color rosa. La fructosa da positiva a esta prueba. La sacarosa da negativa a esta prueba ya que la molecula, si bien esta constituida por glucosa y fructosa, en la union alfa (1-2) se anulan las propiedades reductoras de la glucosa y la fructosa, por lo que no da positiva, la sacarosa da positiva cuando se

le realiza una hidrolisis cida, lo que la convierte en un azucar invertido o invertasa, donde se rompe el enlace alfa (1-2) y permite que la reaccion con esta prueba d positivo. Prueba de Barfoed Saltar a: navegacin, bsqueda La Prueba de Barfoed es un ensayo qumico utilizado para detectar monosacridos. Se basa en la reduccin de cobre (II) (En forma de acetato) a cobre (I) (En forma de xido), el cual forma un precipitado color rojo ladrillo.1 2 RCOH + 2Cu+2 + 2H2O RCOOH + Cu2O + 4H+ Los disacridos tambin pueden reaccionar, pero en forma ms lenta. El grupo aldehdo del monosacrido que se encuentra en forma de hemiacetal se oxida a su cido carboxlico correspondiente. Muchas sustancias, entre ellas el cloruro de sodio,3 pueden interferir en la prueba. Esta prueba fue descrita por primera vez por el qumico dans Christen Thomsen Barfoed1 y se utiliza principalmente en botnica.4 La prueba es similar a la prueba de Fehling. Composicin El reactivo de Barfoed se compone de una solucin de 0.33 molar de acetato de cobre neutro en una solucin de 1% de cido actico. No es recomendable guardar el reactivo, sino preparalo previamente a su uso.5 1. a b C. Barfoed (1873). ber die Nachweisung des Traubenzuckers neben Dextrin und verwandten Krpern. Fresenius' Zeitschrift fr Analytische Chemie 12 (1): pp. 27. doi:10.1007/BF01462957. 2. Biochemistry Department. Colorimetric Identification of Unknown Sugars. Biochemistry Laboratory 353. Smith College. 3. William H. Welker (1915). A Disturbing Factor in Barfoed's Test. J. Am. Chem. Soc. 37: pp. 2227. doi:10.1021/ja02174a036. 4. Raaman, N. (2006). Phytochemical Techniques. New India Publishing. ISBN 8189422308, 9788189422301. 5. Bowen, Graham and Williams, A Students' Handbook of Organic Qualitative Analysis, University of London Press, 1957, page 73 Reactivo de Fehling Saltar a: navegacin, bsqueda El reactivo de Fehling, es una solucin descubierta por el qumico alemn Hermann von Fehling y que se utiliza como reactivo para la determinacin de azcares reductores. El licor de Fehling consiste en dos soluciones acuosas: Sulfato cprico cristalizado, 35 g; agua destilada, hasta 1.000 ml. Sal de Seignette (tartrato mixto de potasio y sodio), 150 g; solucin de hidrxido de sodio al 40%, 3 g; agua, hasta 1.000 ml. Ambas se guardan separadas hasta el momento de su uso para evitar la precipitacin del hidrxido de cobre (II). El ensayo con el licor de Fehling se fundamenta en el poder reductor del grupo carbonilo de un aldehdo. ste se oxida a cido y reduce la sal de cobre (II) en medio alcalino a xido de cobre(I), que forma un precipitado de color rojo. Un aspecto importante de esta reaccin es que la forma aldehdo puede detectarse fcilmente aunque exista en muy pequea cantidad. Si un azcar reduce el licor de Fehling a xido de cobre (I) rojo, se dice que es un azcar reductor. Esta reaccin se produce en medio alcalino fuerte, por lo que algunos compuestos no reductores como la fructosa (que contiene un grupo cetona) puede enolizarse a la forma aldehdo dando lugar a un falso positivo.