ISSN 1983-4209 - Volume 01 Numero 01 2007.

ANLISE DE CONTAMINANTES MICROBIOLGICOS EM PRODUTOS COMERCIALIZADOS EM FARMCIA DE MANIPULAO

Medeiros, A. C. D. ; Porto, K. L.; Paiva, A. V. R.; Procpio, J. V. V. Universidade estadual da Paraba, Departamento de Farmcia e Biologia E-mail: *anacdmedeiros@yahoo.com.br RESUMO O Brasil criou em 2000, a Resoluo da Diretiva Colegiada n 33, que aprova o regulamento tcnico sobre Boas Prticas de Manipulao de medicamentos. O controle da qualidade de medicamentos analisa todos os insumos que participam do processo produtivo e o produto acabado. Nesse controle so realizados testes fsico-qumicos e biolgicos, como a contagem de microrganismos viveis em produtos no-estreis. Produtos no-estreis so aqueles nos quais se admite conceitualmente a presena de carga microbiana, embora limitada, tendo em vista as caractersticas de sua utilizao. A ateno no controle dos produtos no-estreis assegura que a carga microbiana presente no comprometa a sua qualidade final ou a segurana do paciente. Assim, o objetivo desse trabalho foi avaliar a qualidade dos produtos comercializados por farmcias de manipulao. Foram adquiridas nove amostras, as quais foram analisadas pelo mtodo de contagem em placas (Pour Plate). Observouse que 55,5 % das amostras estudadas no apresentaram valores significativos para contagem de microrganismos viveis dentro dos limites especificados pela Farmacopia Brasileira. Foram observadas as presenas de Staphylococcus aureus e Salmonella, nas amostras estudadas. Como tambm foi verificado que os provveis fungos encontrados nas amostras poderiam ser dos seguintes gneros: Arpergillus, Penicillium, Fusarium, Cladosporium, Microsporum, Epidermophyton e Phialophora. Diante dos resultados obtidos, observa-se a grande necessidade da implantao das normas estabelecidas pela RDC n 33, que rege a garantia da qualidade, referente ao controle microbiolgico interno de produtos no-estreis. Palavras-chaves: Controle da Qualidade, Produtos No-estreis, Farmcia de Manipulao.

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ANALYSIS OF THE QUALITY OF PHARMACEUTICAL PRODUCTS MARKETED BY MANIPULATION DRUGSTORES

ABSTRACT Brazil created in 2000, RDC no. 33, which approves the technical regulation on Good Practices of Manipulation of Medicines. The quality control of medicines analyzes all the inputs that participate in the productive process and the finished product. In that healthy control accomplished physicalchemical and biological tests, as the count of viable microorganisms in non sterile products. Non sterile products are those us which the presence of load microbial, although limited is admitted. The attention in the control of the non sterile products assures that the present microbial load in the product doesn't commit your final quality or the patient's safety. Like this, the objective of that work was to evaluate the quality of the pharmaceutical products marketed by manipulation drugstores. They were acquired nine samples. The samples were analyzed by the Pour Plate method. It was observed that 55.5 % of the studied samples didn't present values inside for count of viable microorganisms of the limits specified by Farmacopia Brasileira. The presences of Staphylococcus aureus and Salmonella were observed, in the studied samples. It was verified that the probable fungus found in the samples they can be of the following goods: Arpergillus, Penicillium, Fusariu, Cladosporium, Microsporum, Epidermophyton and Phialophora. Before the obtained results, the great need of the implantation of the established norms is observed by RDC no. 33, that it governs the quality control, regarding the control internal of non sterile products.

Key words: Quality Control, Non Sterile Products, Manipulation drugstores.

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INTRODUO O Brasil criou em 2000, a RDC n 33, que aprova o regulamento tcnico sobre Boas Prticas de Manipulao (BPM) de medicamentos, farmcias e seus anexos. Essas BPM em Farmcias, de acordo com seu anexo I, tem como objetivo fixar os requisitos mnimos necessrios para a manipulao, fracionamento, conservao, transporte, dispensao de preparaes magistrais e oficinais, alopticas e ou homeopticas, e de produtos de interesse da sade (BRASIL, 2000). Enquanto que, a RDC n 481 considera a necessidade de estabelecer parmetros para controle microbiolgico de produtos cosmticos, bem como aprimora as aes de controle de produtos sujeitos a Vigilncia Sanitria e s aes de proteo ao consumidor (BRASIL, 1999). Com os avanos cientficos e tecnolgicos, observa-se que so imprescindveis que qualquer medicamento cumpra os requisitos bsicos essenciais, quais sejam: EFICCIA, SEGURANA e QUALIDADE. A eficcia est relacionada farmacologia do medicamento no paciente, a segurana com os efeitos adversos que o medicamento possa causar no paciente e a qualidade implica controle e neste esto envolvidas uma gama de experincias, testes, ensaios em que, sem dvida, se insere o controle microbiolgico. Apesar de todos os avanos no ramo da cincia, poucas e escassas so as publicaes concernentes a este tema especfico (SANTOS; OLIVEIRA; TOMASSINI, 1995). Produtos no-estreis so aqueles nos quais se admite a presena de carga microbiana, embora limitada, tendo em vista as caractersticas de sua utilizao. A ateno no controle dos produtos noestreis assegura que a carga microbiana presente, seja no aspecto qualitativo ou quantitativo, no comprometa a sua qualidade final ou a segurana do paciente. A presena de cepas reconhecidamente patognicas proibitiva, pois representa potencial risco de aquisio de quadro clnico infeccioso, ou de transferncia de toxinas igualmente indesejveis. A qualidade microbiana dos medicamentos deve ser definida frente a diferentes fatores, entre os quais, o fato de ser consumido por pessoas debilitadas s vezes at imunodeprimidas. Cargas microbianas elevadas podem tambm facilmente comprometer a estabilidade do produto (OHARA, 2000).

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A qualidade microbiana uma dentre as vrias exigncias relacionadas com os critrios de segurana a serem considerados com produtos cosmticos viveis, alm de alterar propriedades do produto, pode constituir risco para a sade do consumidor, principalmente em se tratando de microrganismos patognicos (SOUZA; OHARA; SAITO, 1994). A avaliao da qualidade microbiolgica de cosmticos consiste na determinao da carga microbiana vivel e na comprovao da ausncia de microrganismos especficos considerados de risco para o usurio (OHARA; FISCHER; SAITO, 1991). A Farmacopia Brasileira estipula em limite de contaminao de at 100UFC/ml para fungos e 300UFC/ml para bactrias (FARMACOPIA BRASILEIRA, 1988). Ao lado da qualidade microbiana adequada para comercializao, o cosmtico deve ser seguro ao consumidor, garantindo a manuteno dessa qualidade durante o uso, mediante a adio de conservantes eficazes em concentrao adequada. Este aspecto assume importncia maior quando se trata de cosmticos de uso drmico, j que estes passam um bom tempo em contato direto com a pele antes da remoo. Existe sempre o contato do produto com as mos e a possibilidade de exposio do produto s repetidas contaminaes durante o uso (OHARA; FISCHER; SAITO, 1991). A presena de contaminantes microbianos pode resultar em alteraes fsico-qumicas do produto, comprometendo sua estabilidade. Estas alteraes ainda que no afetassem o teor do princpio ativo, podem se manifestar pela mudana de cor, aparecimento de odor desagradvel e mudanas nos valores de pH. Portanto, mesmo em produtos no-estreis h necessidade de se estabelecer padres quali e quantitativos de microrganismos presentes na amostra, a fim de assegurar a estabilidade do produto durante o prazo de validade, de modo a garantir inocuidade e eficcia teraputica ao paciente (OHARA; SAITO, 1984). Assim, o objetivo desse trabalho foi avaliar a qualidade dos produtos farmacuticos comercializados pelas farmcias de manipulao, da cidade de Campina Grande - PB. MATERIAL E MTODOS Amostras: As amostras foram adquiridas em farmcias de manipulao da cidade de Campina Grande PB, nas quais foram coletadas nove amostras, sendo cinco amostras de xaropes, trs de loo hidratante e uma de hidratante, na forma de emulso cremosa. As amostras foram analisadas no dia posterior a sua aquisio. 4

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As amostras analisadas foram: Amostra A - xarope de cido flico 5 mg; Amostra B - xarope de cido flico 5 mg; Amostra C - xarope de cido flico 5 mg; Amostra D - xarope de acerola (Extrato fluido de acerola, prpolis e mel de abelha); Amostra E - xarope de mastruo composto (Tintura de mastruo, tintura de guaco, tintura de alcauz e mel de abelhas); Amostra F - creme hidratante com extrato de Aloe Vera, extrato de Hamamelis e vitamina E acetato; Amostra G - loo hidratante com leo de macadmia; Amostra H - loo hidratante com dermoglycan; Amostra I - loo hidratante com uria 10% e leo de amndoas doce. Meios de Cultura Utilizados: Foram utilizados, na pesquisa de possveis contaminantes microbiolgicos dos produtos em estudo, os seguintes meios de culturas: Meio I gar nutriente - este meio nutritivo adequado para o cultivo de diversas bactrias. So utilizados para determinao do nmero de germes por isso enriquecido e preparado como os meios de cultivo especiais. Meio II gar Sabouraud-dextrose - utilizado para pesquisa de fungos. Meio III gar Manitol Salgado seletivo para o isolamento e identificao presuntiva de Staphylococcus patognicos. A elevada concentrao de sal (NaCl 7,5%) suprime o crescimento de outras bactrias, deixando crescer apenas o gnero Staphylococcus. Meio IV gar verde brilhante altamente seletivo, sendo recomendado para isolamento de amostras de Salmonella. As colnias se apresentam opacas, ligeiramente branco-rosceas, rodeadas de uma colorao vermelha do meio; Meio V - Caldo nutritivo - utilizado para o crescimento de bactrias. Tcnica de Preparao da Amostras e Reagentes: Preparao da Soluo Tampo Fosfato pH 7,2 - dissolveu-se 34 g de fosfato de potssio monobsico em 500 mL de gua, corrigiu-se o pH para 7,2 0,1 com hidrxido de sdio 4 %, 5

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completando-se o volume para 1000 mL com gua destilada. Depois a soluo foi esterilizada e conservada sob refrigerao (FARMACOPIA BRASILEIRA, 1988). Manuseio e Preparao das Amostras - todos os frascos foram limpos com lcool a 70 % e aps agitao manual, transferiu-se 10 mL, com pipetas estreis, de cada uma das amostras para recipientes volumtricos devidamente identificados, contendo em cada um 90 mL de Tampo fosfato pH 7,2 estril (diluio 1:10) e agitou-se at total dissoluo. Transferiu-se 1 mL desta diluio para 9 mL da soluo Tampo Fosfato (1:100), novamente transferiu-se 1 mL da diluio de 1:100 para 9 mL de Tampo Fosfato (1:1000) e finalmente 1 mL desta soluo de 1:1000 para 9 mL de tampo Fosfato diluio 1:10000 (FARMACOPIA BRASILEIRA, 1988). Preparao dos Meios de Cultura - foram preparados de acordo com especificaes contidas nas embalagens cedidas pelos fabricantes. Mtodo do Ensaio (Pour Plate): Seguiu-se a tcnica de semeadura em profundidade, segundo o mtodo da Farmacopia Brasileira. Colocou-se em placas de Petri uma alquota de 1 mL de cada diluio, contendo a amostra, e verteu-se 15-20 mL de gar nutriente e gar Sabouraud-dextrose, liquefeito e estril, sobre cada uma das placas, seguido de homogeneizao. As placas foram incubadas em estufa durante 4 dias de inoculao a 30-37 C, para bactrias e 7 dias a 20-25C para fungos (FARMACOPIA BRASILEIRA, 1988), (PINTO; KANEKO; OHARA, 2000). Paralelamente colocou-se 10 mL, sem diluio, de cada amostra em erlenmeyer contendo 90 mL de caldo nutriente e incubou-se em estufa durante 4 dias a 3035 C. Aps o tempo estabelecido foi realizada a contagem de bactrias e identificao morfolgica dos fungos. Das amostras que tiveram crescimento bacteriano fora dos padres estabelecidos pela farmacopia, fez-se um repique pelo mtodo de estrias sucessivas em meios seletivos para Staphylococcus aureus (gar manitol salgado) e Salmonella (gar verde brilhante) e incubou-se em estufa a 30-37 C durante 48 horas de acordo com especificaes da Farmacopia Brasileira, 1988. Depois de decorrido o tempo de incubao, verificou-se se houve crescimento microbiano. Para comprovar o crescimento de Staphylococcus aureus fez-se a colorao pelo mtodo de Gram.

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RESULTADOS E DISCUSSO Com os resultados obtidos, observou-se que 45,5 % das amostras estudadas apresentaram valores para contagem de microrganismos viveis dentro dos limites especificados pela Farmacopia Brasileira IV edio (Figura 01).

Percentagem das Amostras Contaminadas

60,00% 50,00% 40,00% 30,00% 20,00% 10,00% 0,00% Contaminados No-contaminados

Figura 01 ndice de contaminao das amostras analisadas.

Apenas as amostras A, B, D e I, encontravam-se dentro dos limites estabelecidos pela Farmacopia Brasileira IV edio, pois no foi detectado a presena de bactrias. J as amostras C, E, F, G e H obtiveram valores na contagem de bactrias fora dos padres da farmacopia ( 103 UFC/mL) (Tabela 01).

Tabela 01 - Contagem total de bactrias presentes nas amostras analisadas. AMOSTRAS N APROXIMADO DE BACTRIAS (UFC/mL) ESPECIFICAES

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A B C D E F G H I

103 103
51,225 x 102

Sim * Sim * No ** Sim * No** No** No** No** Sim *

103
2,55 x 103 1,4 x 103 3,6 x 103 1,4 x 103 0,4 x 10
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* Atende as especificaes da Farmacopia Brasileira, IV edio. ** No atende as especificaes da Farmacopia Brasileira, IV edio. Na amostra C foi identificada cepa de Staphylococcus aureus atravs do cultivo em gar manitol salgado. Provavelmente essa contaminao tenha se originado a partir de portadores assintomticos na hora da manipulao. Pois, segundo TRABULSI, 1989, o Staphylococcus aureus pode ser encontrado em vrias partes do corpo, como fossas nasais, garganta, intestinos e pele. E a contaminao pode ocorrer atravs da perda de escamas do corpo, visto que em atividades normais essa perda da ordem de 104 por minutos (PINTO; KANEKO; OHARA, 2000). Os Staphylococcus tambm podem ser encontrados regularmente na vestimenta, roupa de cama e outros fmites em ambientes humanos. Esses microrganismos podem, em pacientes causar pneumonia e meningite (KERN; BLEVINS, 1999). A amostra E, quando inoculada no meio de Agar verde brilhante, apresentou crescimento de colnias, tratando-se provavelmente espcies de Salmonella. Essa contaminao pode ter se originado a partir do procedimento utilizado na manipulao do produto, das condies de estocagem das matriasprimas e/ou da gua utilizada na manipulao, visto que a Salmonella pode sobreviver por um determinado perodo em guas. Bem como das condies de higiene dos operadores (FARMACOPIA BRASILEIRA, 1988), (PINTO; KANEKO; OHARA, 2000). Dos cosmticos analisados apenas a amostra I, encontrava-se dentro dos padres estabelecidos pela Farmacopia Brasileira. A contaminao microbiolgica em produtos cosmticos pode alterar as propriedades do produto, como tambm constituir um risco para o usurio. A farmacopia Brasileira estipula um limite de contaminao de at 103 UFC/ml para bactrias. Tambm especifica a ausncia de Salmonella sp., Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa e Sthaphylococcus 8

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aureus, em produtos farmacuticos. Alm dos microrganismos citados, indesejvel a presena de Serratia marcescens, Klebsiella sp., Pseudomonas sp., e Streptococcus sp. em produtos de aplicao
tpica (FARMACOPIA BRASILEIRA, 1988). Os manipuladores de medicamentos, quando portadores de alguma doena, podem contaminar o ar ambiente e, conseqentemente as amostras produzidas. Escherichia, Salmonella,

Klebsiella e Serratia so bactrias cujo habitat natural o trato intestinal de seres humanos e animais.
Contaminao das amostras por estes organismos se relaciona com a higiene pessoal dos operadores, podendo estar presentes nas mos e nas vias respiratrias. Os Streptococcus provocam infeco pulmonar, o que pode afetar o operador, e conseqentemente o produto. A Farmacopia Brasileira estipula um limite de contaminao de at 100 (UFC/mL) para fungos e/ou leveduras, os quais tambm devem ser evitados em produtos farmacuticos e cosmticos, principalmente os causadores de dermatofitoses (Tabela 02).

Tabela 02 - Contagem total de fungos presentes nas amostras estudadas. Amostras

A B C D E F G H I

Nmero Aproximado de Fungos e/ ou Leveduras/mL

< 100 < 100 12,6 x 102 < 100 43,5 x 10 < 100 0,7 x 10
3 3 3 2

Especificaes
Sim * Sim * No ** Sim * No** Sim * No** No** No**

1,7 x 10 0,3 x 10

* Atende as especificaes da Farmacopia Brasileira, IV edio. ** No atende as especificaes da Farmacopia Brasileira, IV edio. Na tabela 02, observa-se a contagem total de fungos presentes nas amostras analisadas. As amostras A, B, D e F apresentaram contagens de fungos dentro dos limites estabelecidos pela Farmacopia Brasileira. 9

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De acordo com a observao visual, comparou-se os resultados obtidos com fotos presentes em Atlas de Micologia, nos quais foi verificado que os provveis fungos encontrados nas amostras podero ser dos seguintes gneros:

Arpergillus, Penicillium, Fusariu, Cladosporium, Microsporum,

Epidermophyton e Phialophoara (KERN, M. E.; BLEVINS, K. S., 1999).

Pelos resultados obtidos, observou-se que os xaropes que atenderam as especificaes da Farmacopia Brasileira (amostras A e B) apresentavam-se mais viscoso. Essa viscosidade alm de conferir-lhes maior estabilidade protege a amostra contra ataques de microrganismos, visto que solues concentradas de acar so muito resistentes aos microrganismos, pois no h gua suficiente para sua proliferao (PRISTA, L. N.; ALVES, A. C.; MORGADO, M. R., 1990). Alm disso, a amostra D apresenta na sua composio mel de abelha e prpolis, substncias reconhecidamente antimicrobianas. Segundo ANTUNES (1995), a prpolis apresenta atividade antibacteriana sobre germes gram positivos e negativos. Com relao aos xaropes que estavam fora das especificaes estabelecidas pela Farmacopia Brasileira, observou-se que tinha pouca viscosidade. Provavelmente havia uma maior quantidade de meio aquoso, essencial para proliferao de microrganismo, e sua manipulao deve ter sido realizada a frio. Segundo PRISTA et al. (1990), em xaropes preparados a frio no ocorre destruio de possveis formas microrgnicas vivas existentes, provenientes da gua ou da sacarose. Assim pode ser encontrado nesses xaropes, certo fungo do gnero Arpergillus e Penicillium, alm de bactrias. A gua utilizada na manipulao dos produtos estudados tambm uma possvel fonte de contaminao, sendo muitas vezes o componente mais representativo de uma formulao farmacutica, a contaminao do produto pode se originar diretamente da gua do processo, ou indiretamente em decorrncia de processos de limpeza na rea produtiva (PINTO; KANEKO; OHARA, 2000). A contaminao tambm pode ocorrer acidentalmente decorrente do material da embalagem, ms condies de estocagem e transporte, sendo os principais agentes de contaminao, os esporos de

Penicillium sp. e Aspergillus sp.

Apesar de existir a RDC n 33 de 19 de abril de 2000 da ANVISA, referente s Boas prticas de manipulao, grande parte das farmcias de manipulao alopticas e fitoterpicas ainda no implantaram o controle da qualidade microbiolgica dos produtos no-estreis em seus estabelecimentos.

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CONCLUSO
Observou-se que a maioria dos produtos estudados no atende as especificaes da Farmacopia Brasileira. Diante dos resultados obtidos, observou-se a grande necessidade da implantao das normas estabelecidas pela RDC n 33, que rege a garantia da qualidade, referente ao controle microbiolgico interno de produtos no-estreis. Com a finalidade de efetuar-se um controle das possveis fontes de contaminao de um produto farmacutico, seja princpio ativo ou coadjuvante farmacotcnicos, alm dos equipamentos, pessoal e local de produo. Finalizando o processo com estudo da eficcia dos conservantes, a fim de que o consumidor no seja exposto ao risco.

REFERNCIAS
1) ANTUNES, R. M. P. Atividade Antimicrobiana da Prpolis. Monografia, Campina Grande: UEPB, 1995. 2) BRASIL. Diretoria Colegiada da Agncia Nacional de Vigilncia Sanitria. Resoluo no 481, de 23 de setembro de 1999. 3) BRASIL. Diretoria Colegiada da Agncia Nacional de Vigilncia Sanitria. Resoluo no 33, de 19 de abril de 2000. 4) FARMACOPIA Brasileira. 4. ed. So Paulo: Editora Atheneu, 1988. 5) GOMES, M. V. M.; REIS, A. M. M.Cincias Farmacuticas. So Paulo: Editora Atheneu, 1. ed., 2000. 6) KERN, M. E.; BLEVINS, K. S. Micologia Mdica: texto e Atlas. 2 ed., So Paulo: Editora Premier, 1999. 7) OHARA, M.T.; FISCHER, D.C.H.; SAITO, Takako. Contaminao Microbiana em Condicionadores de Cabelo. Revista Brasileira de Farmcia e Bioqumica. 27(1), 1991. 11

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8) OHARA, M.T.; SAITO, Takako. Contaminao Microbiana em Solues para Uso Oral.

Revista Brasileira de Farmcia e Bioqumica. 20(1): 17 27. 1984.

9) PINTO, T. J. A.; KANEKO, T. M.; OHARA, M. T. Controle Biolgico da Qualidade de

Produtos Farmacuticos, Correlatos e Cosmticos. So Paulo: Atheneu, 2000, p. 53 95.

10) PRISTA, L. N.; ALVES, A. C.; MORGADO, M. R. Tcnicas Farmacuticas e Farmcia

Galnica. 3 ed., Vol. II, Lisboa: Fundao Calouste Gulbenkian, 1990.

11) SANTOS, P. R. V.; OLIVEIRA, A. C. X.; TOMASSINI, T. C. B. Controle Microbiolgico de produtos Fitoterpicos. Revista Brasileira de Farmcia e Bioqumica. 3(1): 35 38, 1995. 12) SOUZA, M.R.; OHARA, M.T.; SAITO, Takako. Contaminao Microbiana em Emulses Cosmticas para Aplicao Drmica. Revista Brasileira de Farmcia e Bioqumica. 30(1): 23-28, 1994. 13) TRABULSI, L. R. Microbiologia. 2 ed., Rio de Janeiro: Atheneu, 1991.

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