Objetivos - Observar e identificar las diferentes estructuras de gnadas y gametos de anfibios, mamferos y aves.

- A travs de material histolgicamente preparado observar inducciones de gametos y la fecundacin de stos, en erizos de mar. - Identificar los distintos estados del embrin de erizo de mar en su proceso de desarrollo.

I. Gnadas y gametos de anfibios (rana chilena) 1. Testculos y espermatozoides: Se nos hizo entrega de un corte transversal preparado histolgicamente de rana chilena y teido con la tcnica de Gallego. Aqu se pueden observar claramente los tbulos seminferos y agrupaciones de clulas en diferentes estados de madurez (cistos). Se denota que las clulas germinales van madurando a medida que nos acercamos al centro del tbulo; aqu pasan a ser espermatozoides listos para migrar al epiddimo y completar su proceso de espermiacin. Los espermatozoides que se observan son muy parecidos a los del ser humano, pero la diferencia radica en que los de la rana tienen una cola mas alargada.

2. Ovarios y vulos: Se nos hizo entrega de una preparacin histolgica de rana chilena y tratada con la tincin de Gallego. Al observar ms detenidamente la muestra se observan numerosos vulos y de gran tamao en comparacin a los del ser humano. Adosado a ellos se pueden ver grnulos de vitelo, los cuales aportan los nutrientes a los vulos y la melanina que los proteger de depredadores y la radiacin UV una vez fecundados. Durante esta parte del laboratorio tambin se hizo entrega de un frasco con vulos de hembra desovados y preservados donde se observa sin necesidad del MOC su forma y unin.

II. Gnadas de mamferos (ratn y gata) 1. Testculo: Se nos hizo entrega de una muestra de testculo de ratn histolgicamente preparada, en donde se observa la organizacin de los espermatozoides en capas y no cistos a diferencia de los anfibios. A medida que nos acercamos al lumen del tbulo seminfero se observa que hay una mayor maduracin de las clulas germinales. Otra estructura que se puede ver claramente es la tunica albugnea, que es una membrana que delimita al testculo. Lo que si no puede ser visto a travs del MOC son las clulas de Sertoli, debido a que son muy deformes para ser vistas a simple vista, sin embargo se sabe que estas son las encargadas de la maduracin de espermios (al ser activadas por la hormona foliculoestimulante).

2. Ovario: Se observo bajo el MOC una preparacin histolgica de ovario de gata. En la muestra se ven ovocitos en diferentes estados de maduracin y que estos junto con las clulas foliculares forman los folculos de Graff. El tamao del folculo determina el estado de maduracin en que se encuentra la clula germinal, por eso a mayor tamao es mas probable que se desprenda y pueda ser fecundado.

III. Gametos de ave (gallina) 1. Ovulo: Se nos hizo entrega de un huevo para observar el ovulo de gallina a simple vista (ya que es gran tamao al compararse con las muestras de otras especies). Se debe hacer una pequea incisin en la parte inferior del huevo. Al abrir la cscara externa (fosfato de calcio) podamos observar que hay una membrana interna muy fina y luego de esta una cmara de aire. Luego de observadas estas capas se vaci el contenido del interior del huevo y entre las primeras cosas que se ven a simple vista estn la albmina, el vitelo y la chalaza (encargada de mantener al ovulo fijo en el huevo). Al ponerse a contraluz se puede observar una zonas mas oscura en el vitelo, esta es el disco germinativo (contiene los organelos principales para la fecundacin).

IV. Pelcula: Se nos explican los procesos de gametognesis en erizos de mar y como estos animales son utilizados debido a su corto periodo de gestacin (3 das ms o menos) hasta llegar al estado larvario. Se muestra como realizar la liberacin de gametos al aplicar una descarga de 6 a 8 voltios en la zona oral o bien inyectando 5 ml de KCl (O.5 M). Luego de realizado dichos mtodos el erizo deber expulsar sus gametos travs de 5 gonoporos ubicados en los 5 canales radianes de su parte inferior.

V. Gametos de erizos y fecundacin 1. vulos: Se nos entrego una muestra histolgica de vulos de erizo de mar. Estos son de color rojizo y puede observarse el ncleo al MOC.

2. Espermatozoides: Se nos hizo entrega de una muestra histolgica de espermatozoides de erizos de mar. Se puede ver que estos poseen acrosoma y cabeza, junto con una cola un poco ms larga que la del ser humano.

Una vez que uno de los espermatozoides logra encontrarse con el ovulo y luego de superar las barreras que este impone ocurre la fecundacin. La unin entre los ncleos de ambas clulas conlleva a una gran cantidad de cambios.

Se hizo entrega de una muestra histolgica que contena gran cantidad de clulas germinales fecundadas

3. Cigota: El ovulo ha sido fecundado y despliega su membrana de fecundacin, esta impide que otros espermatozoides queden retenidos y puedan ingresar. Los espermatozoides a la larga morirn.

4. Segmentacin temprana: Al cabo de unas pocas horas desde la fecundacin el cigoto comienza a dividirse y multiplicarse; en esta etapa el proceso ocurre unas 2 a tres veces, es decir, se obtienes entre un conjunto de 4 a 8 clulas. Todas estas divisiones se dan dentro de la membrana de fecundacin.

5. Segmentacin tarda y mrula: Las divisiones siguen pero sin afectar el tamao del

embrin. Este periodo comienza a partir de 6 a 8 horas despus de la fecundacin donde las clulas comienzan a aumentar en cantidad y reducirse en citoplasma (micrmetros). Se pueden observar embriones entre 16 y 64 clulas.

6. Blstula: En esta etapa el embrin se caracteriza por ser una esfera hueca que posee cilios, los cuales le permiten librarse de la membrana de fecundacin y nadar libremente. El espacio interno del embrin recibe el nombre de blastocele.

7. Gstrula: La gastrula se forma luego de 24 a 30 horas despus de la fecundacin y se caracteriza por su invaginacin, la que a la larga dar lugar a 2 capas de de clulas, que darn lugar (en su capa mas externa) al tracto digestivo. .

8. Estado larval: Se nota un aumento de tamao y cambio de forma en el embrin. Luego de 36 a 42 horas el ovulo fecundado a pasado de ser una nica clula a un individuo

pluricelular que es capaz de desplazarse y alimentarse por su cuenta. Ahora posee una estructura bucal y anal. Esta larva recibe el nombre de larva Pluteus.

Conclusin Se pudo ver la organizacin que hay al interior de las gnadas de anfibios, especficamente en los tbulos seminferos (testculos); cmo van madurando las clulas germinales mediante la espermatognesis y formando agrupaciones celulares, llamadas cistos Tambin se pudieron observar los espermatozoides, con su cabeza alargada y su flagelo caracterstico. En el caso de las gnadas femeninas, se pudo apreciar la clula ovular, grandes vulos donde es posible distinguir claramente cada uno de los polos: vegetativo y animal, dejndose ver tambin las placas de vitelo presentes, adems del ncleo y sus nucleolos. Posteriormente se vieron gnadas de mamferos; en el caso del testculo (de ratn), es posible rescatar el mayor nivel de organizacin dentro de l. Para el ovario (de gato) es importante sealar la diferencia folicular con el de anfibio, aunque a mayores rasgos no vara completamente. En el huevo de gallina se pudo ver un vulo con gran cantidad de vitelo, rodeado por variadas sustancias, proteicas en su mayora, adicionadas al vulo en el oviducto y que sirven para asegurar la ptima salida del huevo, sin daos. Al no ser poca de apareamiento en los erizos de mar se recurrieron a muestras histolgicas de gametos y embriones. Finalmente, en las muestras de embriones vistas en distintos estados de desarrollo embrionario (cigoto, mrula, segmentacin tarda) hasta las larvas, nos ensean de la complejidad del desarrollo y creacin de un nuevo ser vivo, y como a partir de 2 clulas tan pequeas se logra formar un individuo de tamao mucho mayor y capaz de auto valerse.