ENDOTELIO VASCULAR

INTODUCCION

Hasta hace pocos aos el endotelio vascular se consideraba como una simple barrera fsica, que separaba la sangre en los tejidos y facilitaba el intercambio gaseoso. Actualmente es reconocido como un rgano importante con actividades metablicas y funcionales que participa en muchos procesos incluyendo en los de defensa inmune. Las clulas del endotelio vascular se originan en la medula sea, entran en circulacin y colonizan al interior de los vasos. Su nmero de circulacin incrementa cuando es necesario reparar el endotelio como en el caso de cicatrizacin de heridas. Gracias a la presencia de molculas, cumple funciones de gran importancia, varias de las cuales hacen parte de la respuesta inmune, a saber:

1) Permite el transito preferencial hacia los tejidos de diferentes tipos de leucocitos, segn las necesidades de los mecanismos de fagocitosis, inflamacin o respuesta inmune especifica. 2) Responde a estmulos recibidos de los tejidos para expresar en su membrana molculas que facilitan en su adherencia de los diferentes tipos de leucocitos. 3) Modifica su permeabilidad para que los leucocitos, Acs y factores del complemento puedan pasar a los tejidos. 4) Produce varias citoquinas y quimioquinas que cooperan en la modulacin de la respuesta inmune. 5) En determinados territorios producen ciertas citoquinas con accin local. En el hgado producen un factor de crecimiento, VEGF-A, que facilita la regeneracin de las clulas hepticas y que es responsable de la extraordinaria capacidad de regenerar el tejido heptico.

Las clulas del endotelio vascular son, en su gran mayora, planas. No obstante en los rganos linfoides, el endotelio venoso posterior esta conformado por clulas cuboides o altas. La migracin de los leucocitos hacia los tejidos se logra por una cascada de eventos moleculares en los cuales participan las clulas del endotelio vascular que por medio de citoquinas y quimioquinas, permiten la migracin, adherencia y transmisin selectiva de leucocitos Durante los procesos inflamatorios parte del epitelio plano se otros territorios del organismo puede convertirse en cuboides por donde el trnsito de linfocitos hacia los rganos linfoides es mayor.

QUIMIOQUINAS
Todas las celulas del sistema inmune necesitan estar conectadas entre si para elaborar de forma conjunta y ordenada una respuesta inmune que termine con la eliminacion del patogeno. Para ello, las celulas utilizan dos medios principales de comunicacion: uno es el contacto directo mediante las distintas moleculas de membrana. Otra forma, igualmente importante, de relacionarse es mediante la sintesis de pequeas proteinas que reciben el nombre generico de citocinas. Estas citocinas son producidas en 105 primeros instantes de la activaci6n celular, alertando alas diferentes celulas que poseen receptores de citocinas en la ,membrana, de que hay una respuesta inmune en marcha. A menu do tienen un efecto local, actuando en el espacio de reconocimiento antigenico, aunque tam bien pueden actuar sobre dianas que se encuentran mas alejadas.Sus funciones son regular la duraci6n y la amplitud de la respuesta inmune, tanto innata como especifica, reclutar celulas a la zona en conflicto, e inducir la generacion de nuevas celulas a partir de 105precursores hematopoyeticos.

DEFINICION
Son citocinas que facilitan: La migracin y la ubicacin en el lugar donde son requeridas las diferentes poblaciones de leucocitos .

FUNCION
Cuando una celula se activa en respuesta a ciertos estimulos(por ejemplo, una bacteria), comienza a sintetizar citocinas para advertir de 10 que esta sucediendo al resto de las celulas del sistema inmune. la union de la citocina a su receptor en la celula diana, genera una selial intracelular en la que intervienen un gran numero de proternas, entre ellas cinasas de la familia JAK que reclutan y activan factores de transcripcion de la familia STAT. Cada receptor activa un numero limitado de rutas Como consecuencia de esta cascada de reacciones bioquimicas,se inducen ciertos genes, que median las actividades bio-16gicas de las citocinas. Las citocinas pueden ejercer susacciones de forma autocrina, cuando la propia celula productoraes ala vez diana, 0 paracrina, cuando la celula productora y la celula diana son distintas. Si un patogeno consigue atravesar las barreras fisicas y qufmicas de un organismo y alcanzar un determinado tejido, se encontrara con 105macr6fagos y

105mastocitos que se localizan en ese tejido. La union del patogeno provoca la sintesis de diversas citocinas.

-Estimulan la degranulacin en algunos leucocitos -Activan angiogenesis

ESTRUCTURA Y PRODUCCIN
Todas las quimiocinas son polipptidos de 8-12 kD que poseen dos puentes disulfuro. Hasta el momento se han identificado unas 50 quimiocinas y probablemente existan ms. Existen dos familias de quimiocinas. Las que poseen contiguas las dos cistenas que forman el puente disulfuro se llaman quimiocinas CC y aquellas que poseen las dos cistenas separadas por otro aminocido se llaman quimiocinas CXC. Estas diferencias se correlacionan con sus genes, que se organizan en dos grupos genticos separados. En la inflamacin, las citocinas CC actan sobre monocitos, linfocitos y eosinfilos mientras que las CXC actan sobre todo sobre neutrfilos. Como excepciones, existe una quimiocina con una sola cistena y otra con dos cistenas separadas por tres aminocidos (CX3C). Las quimiocinas, tanto CC como CXC, son producidas por leucocitos y por varios tipos de clulas tisulares,como endoteliales, epiteliales y fibroblastos. En muchas de estas clulas la secrecin de quimiocinas es inducida por microbios y por citocinas inflamatorias como el TNF y la IL-1. Algunas quimiocinas CC son producidas por linf. T activados actuando de puente entre la inmunidad adaptativa y la innata. Algunas citocinas se producen de forma constitutiva, sin ningn estmulo inflamatorio, en los rganos linfoides, por lo que estn relacionadas con el trafico fisiolgico de linfocitos entre los rganos linfoides. Las quimiocinas de ambas familias se une en la superficie de la clula endotelial a proteoglicanos de heparn sulfato y de esta forma quedan expuestas a los leucocitos circulantes. Los leucocitos circulantes, al contacto con las quimiocinas, se unen al endotelio por medio de las molculas de adhesin y aumentan su motilidad para abandonar la sangre.

ESTRUCTURA DE UNA QUIMIOQUINA

LA SECRECIN DE QUIMIOQUINAS ES INDUCIDO POR: - RLT -Citocinas inflamatorias: TNF , IL-1

Se han identificados 45 diferentes quimoquinas que se subdividen en 4 grupos . - FAMILIA CC ( CISTEINAS ADYACENTES) -FAMILIA CXC (CISTEINAS SEPARADAS POR UN AMINOACIDO) -FAMILIA C ( CON UNA SOLA CISTEINA) -FAMILIA CX3C ( CISTEINAS SEPARADAS POR TRES AMINOACIDOS )

ENTONCES: Son citoquinas que facilitan la migracin y ubicacin de las diferentes poblaciones de leucocitos, a la vez que estimulan su degranulacin y activan los angiognesis. Recientemente se ha reglamentado la clasificacin de las 45 existentes, as como la de sus receptores. Se subdividen en 4 grupos Las CXCL o a-quimoquinas: en las cuales un aminocido (a.a.) diferente se interpone entre dos cistenas. Los genes que codifican para su produccin estn localizados en los cromosomas 4 (q 12-21) Y10. Varias actan principalmente sobre los PMN como quimioatractantes y activadores, induciendo la degranulacin y liberacin de mieloperoxidasa y otras enzimas.

Las CCL o B-quimoquinas: que presentan dos cistenas adyacentes, los genes que codifican para once de ellas estn localizados en el cromosoma 17 (q 11-21), pero cuatro de las ms recientemente caracterizadas se encuentran en los cromosomas 2, 9 Y16 (Tabla 4-1). En esta tabla aparecen todas las conocidas hasta diciembre del 2000 y las clulas que ellas atraen.

Las CX3CL o o-quimoquinas y XCL

En las cuales tres a.a. se interponen entre dos cistenas. En la tercera y cuarta familia slo se han clasificado hasta la fecha una molcula en cada una: la linfoactina y la fractalquina, respectivamente. La linfotactina es producida por clulas NK y acta tanto sobre ellas como sobre LsT. El que codifica para esta quimoquina est localizado en el cromosoma 1. Las distintas quimoquinas son especficas para determinado tipo de leucocitos; as, por ejemplo, la CXCL8 (IL-8) atrae PMN. La eotaxina, CCL 11, atrae exclusivamente eosinfilos. Las citoquinas se clasifican tambin en constitutivas u homeostticas e inducibles a inflamatorias. Las primeras regulan el trfico normal de las clulas, en tanto que las segundas se generan en los procesos inflamatorios para acelerar y facilitar el flujo del tipo de leucocitos requeridos en el lugar de la agresin. Las citoquinas tienen actividad sobre clulas diferentes a los del sistema inmune como son las del sistema nervioso central y el endotelio vascular, los factores C5a. C3a y C4a, derivados del sistema del complemento. Tambin actan como quimoquinas, as como varios leucotrienos y molculas derivadas de microorganismos. Todas las quimoquinas tienen cargas positivas por lo cual reaccionan con las cargas negativas de los proteoglicanos presentes en la superficie celular (heparina y glucosaminoglicanos). Probablemente todo tipo de clula puede producir quimoquinas bajo las condiciones apropiadas. En general. Hay dos modos de produccin: Uno constitutivo y otro inducible este ltimo en respuesta a estmulos microbianos inflamatorios o inmunes.

RECEPTORES (RCPT) PARA LAS QUIMOQUINAS:

Cada quimoquina interacta con un Rcpt especfico presente en la membrana de la clula que atrae; stos pertenecen a la familia de los receptores acoplados a protena-G conocidos como receptores serpentina debido a los 7 dominios transmembranosos que presentan. A partir de 1996 se estableci una nomenclatura especfica para estos Rcpts: receptores CXCRs, aquellos que unen a-quimoquinas; CCRs para las B-quimoquinas, y CX3CRs para las CX3CL quimoquinas (fractalquina). Hasta la fecha se han descrito cinco receptores CXCRs, nueve CCRs y un receptor CX3CRs. El estudio de estos receptores para quimoquinas ha cobrado bastante importancia en los ltimos aos debido a su relacin con el SIDA; as, el CXCR-4 ha sido identificado como un co-factor necesario para la entrada del virus VIH-1 en las clulas TCD4- (estas cepas del virus con tropismo para LsT se denominan tambin virus X4). Ms recientemente, el CCR-S ha sido reconocido como un correceptor para la infeccin con cepas del VIH-1 virus en otras clulas CD4 como los monocitos y M0s (estas cepas del virus con tropismo por clulas fagocticas se conocen tambin como virus RS). El antgeno Duffy, tambin conocido como DARC, ha sido identificado como un receptor serpentina y tiene la capacidad de unirse a a y a-quimoquinas, constituye un sitio de unin para el Plasmodium vivax facilitando la invasin del eritrocito por el parsito. Algunas quimoquinas y sus receptores son candidatos para el control de la migracin de los Ls a rganos linfoides primarios, de stos a los secundarios y durante la respuesta inmune. Los Ls Th1 y Th2 han mostrado diferencia en el repertorio de receptores para quimoquina que expresan; as, los Th1 expresan preferencialmente CCR7, CXCR3 y CCR5 mientras que los Th2 expresan ms CCR3 y CXCR4.

QUIMOQUINAS Y RESPUESTA INMUNE:

Hay importantes avances en el conocimiento de las funciones de las quimoquinas en la respuesta inmune. As por ejemplo, las DCs reclutan diferentes subpoblaciones de LsT segn las quimoquinas que produzcan. Por otra parte su migracin de la periferia a los rganos linfoides est controlada por la interaccin de diferentes quimoquinas y sus receptores. Las DCs inmaduras expresan el receptor (R) CCR6 que les permiten responder a la CCL20. Una vez que maduran por la captura de un Ag inician la expresin del CCR7 con lo cual pueden responder a las CCL9 y CL21 que les permiten migrar a los ganglios linfticos y ponerse en contacto con LsT que tienen el mismo R, el CCR7 y que responden al llamado de una de esas quimoquinas, la CCL21. El CCR9 es esencial para los LsT CD4+ de memoria puedan colonizar el intestino en tanto que CCR4 lo son para el ingreso de esos Ls a la piel. Diferentes virus codifican unas 30 quimoquinas o sus receptores como manera de evadir la respuesta inmune. De esos, seis tienen importancia mdica a saber: HIV, CXV, herpes 6, 7 y 9 y Molluscum contagiosum.

FRACTALQUINA
La fractalquina es una quimioquina que tiene adems actividad como molcula de adherencia. Se expresa en las clulas endoteliales activadas en los procesos infecciosos e inflamatorios por efecto de los TNF-a y de la IL-1. Un exceso en su funcionamiento puede ocasionar dao vascular en el rin y en el corazn.

LAS QUIMIOQUINAS SE CLASIFICAN TAMBIN EN :

O Constitutivas u homeostticas: Regulan el trfico normal de las clulas. O Inducibles a inflamatorias: Se generan en los procesos inflamatorios para acelerar y facilitar el flujo del tipo de leucocitos requeridos en el lugar de la agresin.

MOLCULAS DE ADHERENCIA
Se conocen con la sigla de CAMs (celulas de adhesin celular). Son protenas o glucoprotenas que inducen la adherencia de los leucocitos circulantes en la sangre a las clulas del endotelio vascular como primer paso en su trnsito hacia los tejidos para llegar a donde est el patgeno que debe atacar. Cuando los leucocitos son requeridos en los tejidos, expresan en su membrana, y en las clulas endoteliales, molculas llamadas selectinas, que al interactuar con receptores especficos de tipo monosacridos permiten el acercamiento de los leucocitos al endotelio. Se agrupan de 6 familias: Selectinas Mucinas Integrinas ICAMs JAMs C Aderinas

SELECTINAS
Son glucoprotenas de membrana que poseen un segmento distal tipo lectina que interacta con cadenas de monosacridos presentes en la membrana de otras clulas. Son de tres tipos: P, L y E. Las selectinas son receptores de adhesin, que pueden formar uniones hetero y homotpicas, transitorias y especficas. Se caracterizan por poseer una estructura muy conservada, la cual incluye a un dominio tipo lectina, un dominio tipo factor de crecimiento epidrmico, dos o ms dominios tipo protena reguladora del complemento, una regin transmembranal y una regin intracitoplsmica corta en el extremo carboxilo terminal. Se han identificado a tres miembros de esta familia, los cuales corresponden a los antgenos de diferenciacin leucocitaria CD62L (L-selectina), CD62P (P-selectina) y CD62E (E-selectina); estas tres molculas reconocen y se unen, a travs de su dominio tipo lectina, a diversos oligosacridos, los cuales estn usualmente conjugados con protenas transmembranales. Los carbohidratos corresponden a las ismero, Lewis a interaccionan con carbohidratos que parecen interaccionar ms fuertemente con las selectinas formas sializadas y fucosiladas del tetrasacrido Lewis x (sLex) y su (sLea). Segn se describe posteriormente, las molculas que las selectinas poseen, en mayor o menor grado, este tipo de

SELECTINA P:
O Se encuentra almacenada en las clulas endoteliales en unas formaciones conocidas como cuerpos de wibel palade. O Se traslada a la membrana celular, a los pocos minutos de recibir el estmulo de diferentes molculas originadas por la inflamacin generada por el ingreso de un patgeno. O Estas molculas son: Histamina, leucotrieno B4, TNF-o y C5a. Tambin se expresa en las plaquetas activadas por algunas de las molculas mencionadas.

SELECTINA E:
O Aparece en la membrana de las clulas endoteliales despus de 30 min de iniciado el proceso inflamatorio y de haber recibido el estmulo de la IL-1, el INFo y el TNF a. O Al igual que la P, proporciona el acercamiento al endotelio de PMNs, Eos y Mos al unirse en forma interminente a molculas de cido silico o al antgeno Lewis presentes en estos leucocitos. O En su estructura molecular se diferencian un dominio extracelular aminoterminal de tipo lectina, capaz de unirse a ligandos carbohidratados del tipo oligosacrido sialil Lewisx y lactosaminoglicanos (GlyCAM-1, CD34, MadCAM-1, PSGL-1 y CLA). O A ste le sigue un dominio EGF-like y 6 secuencias cortas repetidas ("consensus repeat"). Adems, posee un dominio transmembrana y una cola citoplasmtica corta. En su conjunto, el peso molecular aproximado es de 64 kD, aunque se han caracterizado formas de 107-115 kD segn el grado de glicosilacin que haya adquirido la molcula en su forma madura. O Su expresin "de novo" en clulas endoteliales activadas por IL-1, LPS o TNF es un pre-requisito para la activacin de clulas inmunes mediante mediadores inflamatorios. Esta expresin es mxima entre las 2-4 horas posteriores a la activacin. Pasadas 24-48 horas el dominio extracelular es liberado a la circulacin como forma soluble de la E-selectina (sE-selectina). O sta posee efectos quimiotcticos sobre neutrfilos y una funcin activadora sobre las B2-integrinas. Se han encontrado niveles elevados de sE-selectina en pacientes con enfermedades autoinmunes como la enfermedad de Kawashaki o en vasculitis de pequeo vaso.

SELECTINA L:
O Se expresa en los leucocitos y su segmento terminal tipo lectina reconoce e interacta con carbohidratos o mucinas que se expresan en el endotelio de los capilares.

MUCINAS
O Las mucinas son protenas altamente glucosiladas, presentes, unas en la membrana de los leucocitos y otras en el endotelio vascular. O Se conocen tambin como adresinas porque indican la direccin a donde pueden ingresar determinadas sub- poblaciones de linfocitos. O Las mucinas o adresinas al interactuar con las selectinas inducen el acercamiento y adhesin interminente o rodamiento de los leucocitos sobre el endotelio.

MOLECULAS DE ADHESION INTERCELULAR

Hacen parte de un grupo de molculas de reconocimiento llamadas superfamilia de las inmunoglobulinas. Las principales son: ICAM-1 ICAM-2 ICAM-3 ICAM-4 VCAM-1 PECAM-1

Las CAM1 se encuentra prefabricada en el interior de las clulas endoteliales pero se expresa en la membrana nicamente despus de 16 a 24 horas de un estimulo dado por citoquinas como IL-1, el TNF-alfa o el IFN-gamma. S u presencia se prolonga hasta 72 horas. Tiene como ligando la molcula LFA-1 presentes en otras clulas endoteliales. Es tambin un receptor para eritrocitos infectados con plasmidium falciparum. El ICAM-2 se expresa espontneamente, es decir, sin necesidad de que intervenga una citoquina, en la membrana de las clulas endoteliales as como en los linfocitos T y B. No est en la membrana de los Macrfagos. El ICAM-3 tiene como ligando el LFA-1 y se une preferentemente a una integrina, que se expresa en Macrfagos. Se expresa en LsT inactivos y es el nico ICAM en los PMN. Su funcin no est aun esclarecida. El ICAM-4 tiene como ligando el LFA-1 pero igualmente su funcin no se conoce aun.

Telencefalon (ICAM-5) se expresa nicamente en clulas del sistema nervioso central

y tienen como ligando de LFA-1 que se expresa en la Microglia. La regulacin de la produccin de los ICAMs est dada por varios factores como TNF-a, la IL-1b, IFNg, IL-6, CD40, lipopolisacaridos y molculas de estrs. El VCAM-1, en cambio, requiere para ser expresada, la accin de la IL-1 y el TNF-alfa, interacta con la integrina VLA-4 que se encuentra en Ls, Macrfagos y Eos. La eventual regulacin del VCAM-1 podra convertirse en importante arma teraputica en el control de la artritis reumatoidea, la sarcoidosis, y del rechazo de trasplantes. El PECAM-1 conocida tambin como CD31, est presente en los bordes de las clulas endoteliales y contribuye al paso de los PMN a los tejidos.

INTEGRINAS
Estructura de alta resolucin:
A pesar de muchos aos de esfuerzo, el descubrimiento de la estructura de las integrina a alta resolucin sigue siendo un reto: las protenas de membrana son protenas de difcil purificacin. Las integrinas son adems grandes, complejas y estn unidas a multitud de azcares (estn altamente "glicosiladas").

Se han combinado imgenes de baja resolucin de la integrina GPIIbIIIa en extractos de detergente, obtenidas mediante microscopa electrnica, y datos obtenidos mediante tcnicas indirectas, estudiando las propiedades de las integrinas en solucin mediante ultracentrifugacin y light scattering, con datos fragmentarios de cristalografa de alta resolucin o de RMN de dominios nicos o emparejados de algunas cadenas de integrinas, y con modelos moleculares para predecir el resto de la estructura de las cadenas. A pesar de todo ello, la estructura obtenida mediante cristalografa de rayos X para la regin extracelular completa de la integrina v3 result inesperada y sorprendente. Se demostr como la molcula se encuentra plegada en forma de "V" invertida, con los sitios de unin a ligando cerca de la membrana celular. La estructura cristalogrfica tambin fue obtenida en el caso de esta misma integrina unida a un pequeo ligando que posea la secuencia RGD (arginina-glicina-asprtico), el frmaco cilengitida.

Estos datos revelaron finalmente por qu los cationes divalentes de los dominios A son crticos para la unin de la secuencia RGD del ligando a la integrina. La interaccin con tales secuencias parece ser una primera fase mediante la cual la matriz extracelular ejerce su efecto en el comportamiento celular.

La estructura suscita numerosas cuestiones, especialmente en lo referente a la unin del ligando y la transduccin de la seal. El sitio de unin al ligando est dirigido hacia el extremo C-terminal de la integrina, la regin donde la molcula emerge de la membrana celular. Si emerge ortogonalmente de la membrana, el sitio de unin a ligando sera aparentemente obstruido, especialmente teniendo en cuenta que los ligandos de las integrinas suelen encontrarse a elevadas concentraciones, y entrecruzado con los componente de la matriz extracelular. De hecho, poco se conoce acerca del ngulo existente entre las protenas de membrana y el plano de la misma; este es un problema difcil de abordar con las tecnologas actuales.

Por defecto, se asume que las protenas emergen en forma de pequeas "piruletas", algo de lo que no existe ninguna evidencia.

Aunque la estructura cristalina de la integrina antes mencionada sorprendentemente apenas cambia cuando lleva unida la cilengitida, la actual hiptesis es que la funcin de la integrina implica cambios en la forma para mover el sitio de unin a ligando a una posicin ms accesible en la superficie celular, y este cambio conformacional pone en funcionamiento la sealizacin intracelular. Hay una gran cantidad de literatura biolgica y bioqumica que apoya esta hiptesis. Quizs, la evidencia ms convincente es la que ofrece el uso de anticuerpos que slo reconocen integrinas cuando estn unidas a sus correspondientes ligandos, o cuando estn activadas. Pues to que la "huella" que deja el anticuerpo en su diana de unin es ms o menos un crculo de 3 nm de dimetro, la resolucin de esta tcnica es baja. En cualquier caso, estos denominados anticuerpos LIBS (Ligand-Induced-Binding-Sites), demuestran inequvocamente que la forma de la integrina sufre un cambio drstico al unirse a su ligando.

FUNCIN
Representacin esquemtica de la estructura de una integrina. Fundamentalmente son receptores de membrana, algunos reconocen fibronectina, laminina, que son componentes mayoritarios de la matriz extracelular.

Algunas de estas integrinas pueden ser especficas para una sola molcula, pero en cambio hay otras que pueden reconocer diferentes ligandos. Las integrinas 1 forman dmeros con, como mnimo, 9 tipos distintos de cadenas alfa. Las 2, dimerizan con al menos tres tipos de cadenas alfa y median contactos clulaclula. Hay algunas que estn muy estudiadas, como son LFA1 o el antgeno de funcin linfocitaria L2. Mayormente se encuentra en la superficie de los leucocitos. m2 es el equivalente al anterior pero se presenta en los macrfagos. VLA-4 esta en los linfocitos. Los receptores para estas tres molculas son I-CAM y V-CAM, que se encuentran en la superficie de las clulas endoteliales. Las 3, se pueden hallar en plaquetas, entre otro tipo de clulas, y se unen a protenas como el fibringeno, participando en la coagulacin sangunea. En el interior celular principalmente se ligan a molculas de actina, excepto las integrinas que poseen la cadena 4 que pueden unirse a los filamentos intermedios, como la queratina. Participan en uniones hemidesmosomales, habindose caracterizado principalmente dos; una de ellas tiene siempre la cadena 6 mientras que la otra contiene siempre 4. Las integrinas tambin desempean un papel fundamental en la adhesin de los leucocitos al endotelio, cuando estos migran hacia un foco inflamado. Intervienen en la parada de los leucocitos y permite el paso de stos a travs del endotelio.

Transduccin de seales
Las integrinas juegan un papel crucial en la sealizacin celular. La conexin con los componentes de la matriz extracelular pueden causar una seal que ser transmitida al interior celular por medio de una quinasa que se encuentra indirecta y temporalmente conectada con el extremo intracelular de la integrina, probablemente recibiendo los cambios conformacionales inducidos por la unin con componentes de la matriz extracelular. Las seales que recibe la clula a travs de las integrinas pueden dar lugar a diversos procesos celulares como los que se indican a continuacin: O O O O O Crecimiento celular. Divisin celular. Supervivencia celular. Diferenciacin celular. Apoptosis.

INTEGRINAS

MOLECULA 1- 9/ 1 (VLA-4) LFA-1 (L2) Mac-1 (M2) P150,95 (CR4) (x2) 4 7 (LPAM-1)

CD CD49-/ CD29 (CD49D/CD29) CD11a/ CD18

LIGANDO Matriz extracelular Colgeno, laminina. ICAM 1,2,3

EXPRESION EN: L, Mon, cel. tmicas

Leucocitos

CD11b/CD18

ICAM-1, C3bi, Fibringeno

Granulocitos, macrfagos, NK Granulocitos, Mos, Mon, Mo

CD11c/CD18

C3bi, fibringeno

CD49d/CD-

MAdCAM-1 VCAM-1 Fibronectina

Linfocitos(intestino) Tejido linfoide asociado

E7

E-caderina

Linfocitos(intestino)

CADHERINAS
Las cadherinas son las principales molculas de adhesin celular. Estas molculas son glicoprotenas transmembranales responsables de las uniones clula-clula para mantener la integridad de los tejidos. Es una molcula de unos 700-750 aminos cidos, y son especficas de tipo celular. Como su nombre lo indica, son molculas de adhesin calciodependientes. La adhesin celular a travs de cadherinas tiene un papel importante en procesos fisiolgicos como la morfognesis, la estabilizacin y diferenciacin de los tejidos, y el establecimiento de la polaridad en los tejidos.

ESTRUCTURA:
Consta de tres regiones: extracelular, transmembranal e intracelular. La regin extracelular la cual contiene los sitios que van a permitir la unin con otras protenas, est formada por cinco dominios (EC1 hasta EC5) los cuales tienen aproximadamente 100 aminocidos cada uno. Se cree que por lo menos 10 aminocidos participan en la unin entre estos dominios, donde se encuentran sitios de unin de iones calcio los cuales tienen una funcin de proteccin frente a enzimas de degradacin. La regin transmembranal como su nombre lo indica se encuentra entre la regin extracelular e intracelular, atravesando la membrana celular. La regin intracelular, que se encuentra en el citoplasma, conecta el cito esqueleto de actina a las cadherinas mediante un complejo de protenas llamadas cateninas

MECANISMO DE ADHESION
Se logra mediante la interaccin de miles de clulas, y de molculas de adhesin celular de la superfamilia de protenas caderonas, las cuales unen clulas y establecen vas de interaccin y comunicacin a travs de las membranas celulares. El proceso es el siguiente: despus de la traduccin del mRNA, las cadherinas son transportadas a la membrana celular donde se establece como una protena transmembranal con dominios citoplasmticos y extracelulares, estos ltimos son los encargados de enlazarse con clulas adyacentes que tengan cadherinas compatibles. El segmento extracelular consta de 5 dominios los cuales son calcio-dependientes, es decir, en presencia de iones calcio (Ca+2) cada segmento extracelular se aparea con otro segmento extracelular formando dmeros. Estos dmeros formados tambin se les conocen como dmeros cis, pues ambos segmentos se unen por el mismo lado (). Una vez se han formado los dmeros cis, estos se unen con otros dmeros cis de clulas adyacentes formando nuevos dmeros denominados trans, pues la unin de estos dmeros es en sentido contrario (). Cuando no hay iones Ca+2, las cadherinas no pueden formar estos dmeros y la adhesin celular es irrumpida. La cola o segmento citoplasmtico permanece intracelularmente e interacta con un tri de cateninas (P1-20, ,) formando un complejo el cual se une al citoesqueleto de actina proveyendo un soporte para una fuerte adhesin clula-clula. As mismo se encontr que los mecanismos de adhesin clula-clula pueden ser divididos en dos sistemas: dependiente de Ca2+ e independiente de Ca2+ . El sistema dependiente de calcio (CADS) es altamente sensible a la tripsina, pero puede ser protegido por iones Ca2+ contra la protelisis. Por el contrario, el sistema independiente de calcio (CIDS) es inactivo nicamente con concentraciones altas de tripsina y la degradacin proteoltica no puede ser protegida por Ca2+. Por esta razn, el ion Ca2+ es esencial para la adhesin celular en todos los animales; por ejemplo, si se incuban tejidos en un medio libre de Ca2+ puede que estos fcilmente se disocien. Una definicin mucho ms precisa de CADS es un mecanismo cuyos componentes estn expuestos en la superficie celular, que requieren Ca2+ para que haya una unin clulaclula y que al mismo tiempo estn protegidos por este ion contra el clivaje proteoltico.

Este tipo de agregacin ha sido encontrada en muchas lneas celulares recolectadas de tejidos en varios organismos. Una caracterstica clave de CADS es la resistencia a la tripsina en presencia de Ca2+, adems se ha visto que esta resistencia no es nicamente contra tripsina sino tambin contra una gran cantidad de enzimas proteoltica

TIPOS DE CADHERINAS:
1 Cadherinas clsicas o tradicionales: Existen varios tipos de cadherinas y siendo las ms representativas:
Cadherina-E (cadherinas epiteliales, o llamada uvomorulina): es expresada en todas las clulas tempranas en embriones de mamferos, probablemente aun en la etapa celular-1 y juega un papel indispensable en la compactacin desde la etapa celular-8 hasta la etapa celular-16 . A medida que las clulas embrionarias se van diferenciando en varios tipos, la cadherina-E desaparece de algunas capas de clulas. En embriones que se encuentran en etapas tardas, esencialmente todas las clulas epiteliales que proliferan derivan del ectodermo y el endodermo expresa cadherina-E, de alguna forma quedando restringida nicamente a tejidos epiteliales en adultos. Tejido neural y mesodrmico a parte de algunas excepciones no tienen cadherinas-E. Estas cadherinas juegan un papel importante en la morfognesis de rganos epiteliales como pulmones. Cadherina-N (cadherinas neurales): fue detectada por primera vez en la gastrulacin de algunas clulas del ectodermo (epiblasto). Las clulas que se invaginan inicialmente tienen cadherinas-E y cadherinas-N, sin embargo a medida que las clulas se diferencian en mesodermo, se pierden las cadherinas-E y se empieza solamente a expresar cadherinas-N. Son altamente expresadas en clulas que desarrollan el sistema nervioso central y juegan un papel importante en la mediacin de seales neurales. Un ejemplo del papel de las cadherinas-N en el desarrollo mesodermal se ve en los somitas y diferenciacin del nefrotoma (tejido primordial del sistema urogenital y da origen al cordn nefrgeno). En el desarrollo ecto y endodermal, la cadherina-E es la principal cadherina que se encuentra en estas clulas epiteliales, sin embargo, la cadherina-N se expresa en algunas zonas de este epitelio, como en los primordios de rganos endodermales como el cristalino. Cadherina-P: detectada inicialmente en capas extraembrionarias de embriones tempranos, como en el cono ectoplacentario y el endodermo visceral. El tero de ratones no embarazados no expresa cadherina-P, por tanto se establece que esta cadherina est continuamente distribuida desde los tejidos maternales hasta tejidos embrionarios dando origen a la placenta, lo cual sugiere que esta protena puede servir para conectar los embriones al tero.

Cadherina-R: es crtica en la formacin de la retina. Cadherina-VE: presente en clulas endoteliales que revisten a los vasos sanguneos

2 Cadherinas noclsicas o no tradicionales:

Cadherina-T: una superfamilia de cadherinas que carecen de dominios transmembranales y citoplasmticos. Estn ancladas a la membrana de las clulas a travs del ancla GPI. La funcin de la cadherina-T in situ, en condiciones normales, y en la patologa sigue siendo en gran parte desconocido. -cadherina se expresa altamente en el corazn, la pared artica, las neuronas de la corteza cerebral y la mdula espinal y tambin en los pequeos vasos sanguneos en el bazo y otros rganos. Protocadherina: una clase de cadherinas que carecen de las conexiones al citoesqueleto de actina mediante las cateninas. Se ha encontrado que son importantes en separar la notocorda de otros tejidos mesodermales durante la gastrulacin de Xenopus.

Caderinas

Lugar de Expresin

Endotelio

Tejidos neural y muscular

placenta

JAMS
Son molculas que aseguran la unin ntima entre las clulas endoteliales que en condiciones normales evitan el paso de clulas de los vasos a los tejidos, pero que en los procesos inflamatorios se expresan en menos cantidad para permitir su separacin y facilitar el paso de los leucocitos. Se conocen dos, la JAM-1 que controla el paso de monocitos y la JAM-2 el de los Ls. La disminucin en la expresin de una molcula similar, presente en la barrera hematoenceflica conocida como claudina-1, incrementa la permeabilidad de esta barrera.

CADHERINAS : FUNCIONES
Mantener adhesin entre clulas Transferir seales entre clulas vecinas. Las kinasas, las tirosinofosfatasas, componentes del RAS y protenas de unin de GTP se concentran en la zona de uniones adherentes formadas por las cadherinas. Al controlar los niveles de catetinas citoplasmticas , regulan las seales. Son responsables del reconocimiento cl-cl y de la segregacin de tejido. ROL en AUMENTO DE PERMEABILIDAD, al disminuir la unin cadherina-catetinas por cambios de calcio La adhesin leucocitaria al endotelio induce aumento de permeabilidad por disminuir anclaje de catenina y favorece con ello la infiltracin.

MIGRACION DE LEUCOCITOS Y OTRAS FUNCIONES

O Los leucocitos tienen caracterstica de llegar al lugar preciso en el momento requerido. O Esto se logra gracias a la actividad coordinadora de 4 sistemas de molculas: citoquinas, y los mediadores de inflamacin como histamina, factores de complemento, prostaglandinas y leucotrienos originados en tejidos agredidos por infeccin o procesos inflamatorios, inducen la produccin de quimioquinas que atraen al lugar requerido diferentes tipos de clulas. O stos tienen receptores especficos para esas quimioquinas.

O Los factores mencionados, generados en los tejidos, actan sobre el endotelio y hacen que se expresen en l y en diferentes leucocitos, selectinas e integrinas. O stas al interactuar con sus ligandos, ICAMs y carbohidratos, favorecen la adherencia de diferentes tipos de clulas al endotelio y su posterior migracin a los tejidos. O Algunas selectinas e integrinas, como se emociono antes, se expresan constitutivamente, en tanto otras se expresan en membrana de leucocitos o del endotelio, cuando son estimulados por citoquinas como IL 1, IFN y TNF generados en tejidos.

O Las quimioquinas estimulan la degranulacin de Mas perivasculares que liberan histamina y TNF , que incrementan la expresin de selectinas P y E, respectivamente. O La accin combinada de estos 4 sistemas moleculares se convierte en un cdigo especfico para la migracin a los tejidos de cada clase de leucocitos. O Cada clase de leucocitos se adhiere al endotelio por medio de diferentes molculas. O En los procesos inflamatorios, la rapidez de migracin es diferente: de mins para PMN, horas para Ms y das para Ls. Vrgenes (no han tenido contacto con antgenos).

O En la migracin de PMN, participan 3 diferentes integrinas: LFA 1, CR3, p150, p95, que interactan con la selectina E y con ICAM 1 de clulas endoteliales. O Otra molcula, PECAM 1, conocida como CD31, ayuda al trnsito de PMN a tejidos. O Durante procesos inflamatorios se requiere de mayor presencia de Ms en tejidos.

O Las diferentes citoquinas incrementan la adhesividad del endotelio para Ms, los cuales expresan adems LFA 1 y CR3, molculas que permiten adherirse al ICAM 1 del endotelio e iniciar la migracin hacia tejidos. Posiblemente intervienen otras molculas no bien definidas an. O La migracin de Ls., que est controlada por integrinas LFA 1 y VLA 4, que interactan con ICAM 1 y VCAM 1. Su circulacin se hace en circuitos diferentes, uno por rganos linfoides y otro por los dems tejidos.

O Los Ls. Vrgenes pasan por la sangre a los rganos linfoides, a travs de endotelio cuboide poscapilar; en tanto los Ls. de memoria, capaces de reconocer al antgeno que los gener, pana por el endotelio comn al territorio tisular, no linfoide, en donde es requerida su presencia.

RESPUESTA A CITOQUINAS
Las diferentes citoquinas modifican el metabolismo y funcin de las clulas endoteliales y posibilitan el paso de diferentes leucocitos a tejidos al incrementar la expresin de las molculas de adherencia.

Produccin de citoquinas:
Durante los procesos de fagocitosis e inflamacin las citoquinas liberadas estimulan el endotelio ha producido atrs y toxinas las principales son las IL-1, IL-6 y IL-8.

Participacin del endotelio vascular en los procesos inflamatorios:

Las clulas endoteliales no expresan normalmente algunos de los Ags del sistema mayor de histocompatibilidad, pero lo hacen bajo el influjo de IFNs. La expresin en su membrana de molculas HLA posibilita que LsT citotoxicos puedan adherirse al endotelio y dirigirse a los distintos rganos produciendo el procesos auto inmune.

Oxido ntrico:
Hasta 1987 se crean que era el factor relajante derivado del endotelio pero se demostr que no, tambin se demostr que este radical tiene diversas funciones y es producido por varios tipos de clulas. En el endotelio se produce a partir de L-arginina en respuesta a los estimulos de la acetilcolina y bradiquinina e induce la vasodilatacin el favorecer los procesos inflamatorios.

CORRELACIONES CLNICAS:
Deficiencia de adhesin leucocitaria: deficiencia en la cadena B2 de las integrinas son responsables de un defecto de adherencia de los PMN que se traduce en una mayor frecuencia de procesos infecciosos. Tipo 1 : deficiencia de CD18 Tipo2: ausencia del Ag Sialyl Lewis X, ligando para la E. Selectina, se debe a defectos genticos en la sntesis de la fucos impidiendo la interaccin de leucocitos con las selectinas E y P dificultando una adecuada respuesta fagocitaria e inflamatoria. Ausencia de receptores para quimioquinas, como el CXCR-4 y el CCR-5, constituye un factor de resistencia innata contra el sida.

IMPLICACIONES TERAPUTICAS:
IFN-a : se emplea en el tratamiento de la esclerosis mltiple VCAM-1: extravasion de leucocitos en CNS Se ah logrado frenar los procesos inflamatorios con los antagonistas de selectinas L y E.

ANEXOS

Martes 29 de mayo de 2011

Mucosa intestinal, un buen escondite para el VIH

7 de julio de 2008

INTRODUCCIN Se sabe que la infeccin con el virus de la inmunodeficiencia humana 1 (VIH-1) invade rpidamente los ndulos y los tejidos linfticos que abundan en el intestino. El VIH se reproduce primero all y luego destruye las clulas inmunolgicas CD4 del tejido linftico, lo que contribuye a la disfuncin inmunolgica. La migracin de linfocitos al tejido linfoide asociado al intestino est mediada por la integrina alfa-4-beta-7. Tambin se ha demostrado que la protena gp120, que envuelve al VIH-1, se vincula a una forma activa de alpha4beta7. Esta interaccin est regulada por un tripptido en el bucle V2 de gp120, un pptido que imita estructuras presentes en los ligandos naturales de la integrina alfa-4beta-7. En las clulas T CD4, la unin de la alfa-4-beta-7 y de la gp120 tiene como consecuencia una rpida activacin de la LFA-1, otra integrina, la cual est implicada en el establecimiento de sinapsis virolgicas, facilitando una eficiente proliferacin del VIH a travs de las clulas. Hoy en da, los investigadores estn interesados en describir receptores porque ofrecen blancos ms concretos para el desarrollo de nuevos frmacos contra la enfermedad, ya que los intentos de controlar el VIH por estimulacin del sistema inmunitario del cuerpo han fracasado. Integrinas, VIH y sistema inmunitario Aunque en ausencia de tratamiento, el sndrome de inmunodeficiencia adquirida (SIDA) generalmente se desarrolla de 8 a 10 aos despus de la infeccin con el virus de inmunodeficiencia humana (VIH) tipo 1 (VIH-1), su arremetida en el sistema inmunolgico comienza con la rpida disminucin de memoria de las clulas T CD4+, la mayora de los cuales residen en el intestino. Un reciente informe de James Arthos y colaboradores (Nat Immunol 2008; 9:301-9) sugiere que el VIH-1 es capaz de controlar la cada de los linfocitos T CD4+, en parte, al intervenir la molcula que apoya directamente a las clulas T del tubo digestivo: la integrina alfa-4-beta-7. Aunque el agotamiento celular de T CD4+ est reflejado en ltima instancia (y

clnicamente medido) como la disminucin de los linfocitos T CD4+ circulantes, su anlisis en sangre proporciona una evaluacin imperfecta de la cantidad total, ya que solamente entre 1 y el 2% se encuentra en la sangre perifrica. Se cree que un 30% o ms de todas las clulas T residen en la mucosa, en particular, en el intestino. Los estudios realizados en primates no humanos infectados con el virus de inmunodeficiencia smica (VIS), y confirmados posteriormente en personas infectadas con el VIH-1, han demostrado que la infeccin primaria induce un rpido y profundo agotamiento de las clulas T CD4+ en el tracto gastrointestinal. Los mecanismos mediante los cuales se produce esta cada siguen siendo controvertidos. La infeccin directa parece tener un papel importante: de un 30 a un 60% de los linfocitos T CD4+ son clulas contagiadas con el VIS 10 das despus de la infeccin del hospedador. Sin embargo, tambin es probable que los mecanismos indirectos resultantes de la apoptosis en clulas no infectadas participen en la destruccin de los T CD4+ en clulas del tubo digestivo. Varios mecanismos parecen dar cuenta de la predileccin distintiva del VIH-1 y del VIS sobre las clulas T CD4+ intestinales. Ambos virus preferentemente se replican gracias a las clulas T CD4+ que tienen la memoria activada, que constituyen la mayora de las unidades que residen en el tracto gastrointestinal. Los T CD4+ intestinales tambin expresan niveles relativamente elevados de receptores de quimiocinas CCR5, uno de los principales correceptores para la entrada del VIH-1 y SIV en las clulas T CD4+. Sin embargo, la capacidad de SIV para infectar T CD4+ que no expresan niveles detectables de CCR5 en su superficie y de infectar clulas que no expresan marcadores tpicos de activacin, seala que otros factores tambin regulan la inclinacin del VIH-1 por las clulas T intestinales. El grupo de J. Arthos describe una serie de experimentos que apoyan la hiptesis de que el VIH-1 es capaz de obligar al alojamiento intestinal de la molcula alfa-4-beta-7. La capacidad de los linfocitos a migrar a zonas especficas del cuerpo, tales como la piel o el intestino, est regulada en parte por molculas de superficie que amarran a las clulas a compaeros moleculares expresados en el endotelio vascular. La integrina alfa-4-beta-7 ayuda a dirigir el trfico de clulas T hacia el tubo digestivo mediante la unin a molculas de adhesin expresadas por clulas endoteliales en los ganglios linfticos mesentricos y en la lmina propia intestinal (figura 1).

Figura 1: una integrina, clulas T e infeccin por VIH El alojamiento de las clulas T en el tubo digestivo se ve facilitado por la integrina alfa-4beta-7 (panel A). La posterior unin de la integrina a la MAdCAM-1 (molcula de adhesin celular de adresina mucosal 1) media la unin de alfa-4-beta-7 a los linfocitos en las vnulas de endotelio alto (por ejemplo, la lmina de la vnula propia [LPV]) del tejido linfoide asociado con el intestino. La integrina alfa-4-beta-7 puede optar por facilitar la entrada y propagacin del VIH-1 en el tejido linfoide asociado al intestino (panel B). Interacciones entre el bucle V2 del VIH-1 sobre la glicoprotena 120 (gp120) y alfa-4-beta-7 mejora la interaccin del virus con la memoria de las clulas T CD4+ en del tubo digestivo y la posterior entrada celulalar a travs de mecanismos dependientes de CD4 y del receptor de quimiocinas CCR5. La participacin de alfa-4-beta-7 con la gp120 soluble o la gp120 de los viriones del VIH-1 o las clulas infectadas por VIH-1 genera la activacin de LFA-1 (funcin del antgeno-1 del linfocito), aumentando la relacin celular a travs de interacciones de LFA-1 con la molcula de adhesin intercelular 1 (ICAM-1) y, por tanto, se incrementa la transmisin clula a clula del VIH-1. Inicialmente impulsados por la inesperada observacin de que el VIH puede unirse a las clulas asesinas naturales, los autores demostraron que alfa-4-beta-7 podra servir como una alternativa para que el VIH-1 cubriera la glicoprotena 120 (gp120). En base a la informacin existente sobre ciertos aminocidos que median la unin de ligandos a alfa-4beta-7, los autores pudieron identificar una regin variable del bucle V2 del VIH que se

une a alfa-4-beta-7. Sorprendentemente, los aminocidos responsables para la unin de alfa-4-beta-7 (leucina-aspartato-valina, o LDV) estn altamente conservados entre cepas del VIH-1, a pesar de que el bucle V2 es muy variable. La mutacin de LDV afect la capacidad del VIH para crecer en cultivos de linfocitos. Por ltimo, la unin de VIH-1 a alfa4-beta-7 tambin fue capaz de inducir la activacin de otra integrina, la funcin del antgeno-1 del linfocito (LFA-1), que tiene un papel clave en las interacciones clula-clula. La LFA-1 facilita la formacin de enlaces entre los linfocitos que pueden desempear un papel importante en la transmisin del VIH entre clulas. Por lo tanto, la unin del VIH-1 sobre alfa-4-beta-7 puede ser capaz de inducir la activacin celular que mejora an ms la eficiencia de la propagacin del VIH-1 a partir de una clula a otra. Aunque el estudio de Arthos y colegas proporciona pruebas concluyentes de una interaccin bidireccional entre el VIH-1 y alfa-4-beta-7, es necesario realizar ms experimentos para entender si la predileccin del VIH por los linfocitos intestinales se debe principalmente a las interacciones entre alfa-4-beta-7 y la gp120. La infeccin de monos con cepas recombinantes del VIS debe proporcionar informacin definitiva sobre la importancia in vivo de la interaccin entre gp120 y alfa-4-beta-7. Si la trascendencia de esta interaccin se confirma, puede ser til disear pequeas molculas antagonistas para las interacciones entre gp120 y alfa-4-beta-7 respecto a terapias coadyuvantes. Por otra parte, la induccin de respuestas de anticuerpos contra V2, la cual debera interrumpir la capacidad del virus para replicarse en las clulas T CD4+ intestinales, podra ser una solucin ms viable que la generacin de anticuerpos neutralizantes contra el VIH, lo que frustrantemente ha sido difcil de generar a travs de la vacunacin. Sin embargo, los esfuerzos para explotar las mltiples interacciones del VIH con el sistema inmunolgico probablemente se vea complicado por la variabilidad de los aminocidos que rodean las zonas conservadas responsables para la unin de alfa-4-beta-7. Fuente bibliogrfica How HIV guts the immune system R. Paul Johnson, M.D. New England Primate Research Center, Harvard Medical School, Southborough, MA, USA. N Engl J Med. 2008 May 22; 358(21):2287-9