MICROSCOPIO COMPUESTO

I.- INTRODUCCIN El ser humano posee el sentido de la vista desarrollado. Sin embargo, no se pueden ver a simple vista cosas que midan menos de una dcima de milmetro. Y muchos de los avances en qumica, biologa y medicina no se hubieran logrado si antes no se hubiera inventado el microscopio. El tipo de microscopio ms utilizado es el microscopio ptico, que se sirve de la luz visible para crear una imagen aumentada del objeto. El microscopio ptico ms simple es la lente convexa doble con una distancia focal corta. Estas lentes pueden aumentar un objeto hasta 15 veces. Por lo general, se utilizan microscopios compuestos, que disponen de varias lentes con las que se consiguen aumentos mayores. Algunos microscopios pticos pueden aumentar un objeto por encima de las 2.000 veces. Un microscopio simple (de un lente o varios lentes), es un instrumento que amplifica una imagen y permite la observacin de mayores detalles de los posibles a simple vista. El microscopio ms simple es una lente de aumento o un par de anteojos. El microscopio compuesto consiste en dos sistemas de lentes, el objetivo y el ocular, montados en extremos opuestos de un tubo cerrado. El objetivo est compuesto de varias lentes que crean una imagen real aumentada del objeto examinado. Las lentes de los microscopios estn dispuestas de forma que el objetivo se encuentre en el punto focal del ocular. Cuando se mira a travs del ocular se ve una imagen virtual aumentada de la imagen real. El aumento total del microscopio depende de las distancias focales de los dos sistemas de lentes. La amplificacin total es producto de las amplificaciones producidas por las dos lentes individuales. Para que el microscopio sea satisfactorio, es necesario que tenga suficiente poder de amplificacin, produzca una imagen visible, definicin adecuada y posea capacidad de resolucin elevada. II. OBJETIVOS 1.- Reconocer los accesorios que conforman las partes mecnica y ptica del microscopio compuesto. 2.- Indicar la funcin que cumple cada accesorio. 3.- Realizar observaciones microscpicas en fresco y seco. III. MATERIALES Microscopio compuesto Lminas porta objetos Laminillas cubreobjetos Recorte de la letra e Diagrama grande de un microscopio.

IV. PROCEDIMIENTO Experiencia N 1. Analizar y reconocer las partes de un microscopio compuesto. Colocar el microscopio aproximadamente a 15 centmetros del borde de la mesa de laboratorio, de tal manera que el brazo del microscopio delante para poder observar sin peligro de hacerlo caer.

Una ves colocado apropiadamente el microscopio examinar e identificar las partes PTICA y la parte MCANICA. PARTE PTICA En la parte ptica nos agrandar la muestra, que consta de las siguientes partes:

a)

Ocular: Llamado as porque la lente esta situada cerca del ojo del observador. Ampla la imagen del objetivo, ya que consta de un sistema de lentes plano convexas, dispuestas en un tubo cilndrico de metal, con un diagrama intermedio, ambas lentes presentan las caras planas hacia el ojo del observador y las caras convexas hacia el objeto. La lente que va cerca del ojo del observador se denomina ocular propiamente dicho y la lente inferior se le conoce con el nombre de lente de campo. En la parte lateral o superior del tubo ocular lleva un numeral: 5x, 10x, 15x, 16x, que indica el nmero de amento del ocular. El ocular proporciona una imagen virtual magnificada y derecha, y se forma a la altura del diafragma.

b)

Objetivos: Se encuentran cerca del objeto por observar, est constituido por un tubo metlico cilndrico, la parte inferior cnico que lleva en su inferior un sistema de lentes destinados a dar la imagen real e invertida del objeto. La lente de la parte inferior se denomina lente frontal de ella depende principalmente la mayor o menor amplificacin. Es siempre plano convexa, de foco muy corto y dimetro tanto menor , cuanto mayor sea el aumento. Detrs de esta lente hay otras que son las que corrigen las aberraciones cromticas y , esfricas. En la parte lateral del tubo metlico, lleva inscrita una numeracin (4x, 10x, 40x, 100x, etc.; pero no siempre son nmeros enteros abecs son con decimales.) que indica el numero de aumentos propios del objetivo. Adems llevan la longitud focal (1, 4mm,8mm, 16mm).

Clases de objetivos Objetivos a seco: Son los que se usan mas corrientemente, son aquellos que entre la lente frontal y el cubreobjeto solo hay aire, se utilizan generalmente par observaciones de preparados en seco. Por el nmero de aumentos son de tres clases: - De pequeo aumento: Mayor de 0 y menor de 10x. - De mediano aumento: Mayor de 10 y menor de 30x. - De mayor aumento: Mayor de 30 y menor de 90x. Objetivos de inmersin: Se llama as a aquellos en los cuales, para su observacin, debe interponerse entre la lente frontal y el preparado microscopio un liquido que, por su ndice de refraccin apropiado, permita una mayor luminosidad; comnmente se utiliza el aceite de cedro, cuyo ndice de refraccin es de 1, 5 Son estos objetivos de gran aumento y de gran poder definidor. Se emplean en Microbiologa y Parasitologa. Requieren de gran luminosidad y empleo de condensador. El objetivo de inmersin se caracteriza por : a. Es el de mayor aumento (95x, 100x, 120, 150x) b. La lente frontal es mas pequea

c. Lleva inscrita una fraccin: 1/12 o un decimal: 1. 20 , 1. 30 , la palabra oil

inmersin. d. De acuerdo a la procedencia lleva una franja o una raya negra o roja en el borde inferior para facilitar su identificacin.

Cualidades de los objetivos Los objetivos deben poseer tres cualidades: poder definidor, poder penetrante, poder resolvente.

a. Poder definidor: Consiste en la propiedad de presentar, con limpieza y

correccin de los contornos de la imagen.

b.

Poder penetrante: Es la propiedad de presentar, sin variar el enfoque, perfectamente detallados varios planos del espesor de una preparacin.

c. Poder resolvente: Es la que permite apreciar delicados detalles de estructura.

Distancia focal Es la distancia que media entre la parte inferior de la lente frontal y el objeto por observar, cuando se tiene un enfoque perfecto. Las distancias focales aproximadas son: - Para objetivo de pequeo aumento: Es entre 0.5 y 3 cm. - Para objetivo de mediano aumento: Es entre 0,5cm y 3mm. - Para objetivo de mayor aumento: Es entre 1mm y 3mm - Para objetivo de inmersin: Es entre 1,20mm y 0,8mm. SISTEMA DE ILUMINACIN Se encuentra situado bajo la platina y tiene la mide iluminar los objetos por medio de la luz transmitida, a causa de que la mayora de las observaciones se realiza por transparencia. Esta conformado por los siguientes accesorios:

a)

Espejo o lmpara de iluminacin: El espejo, es de forma redonda, presentados con caras, una plana y otra cncava, sujeto por medio de un eje giratorio. El espejo plano, para grandes aumentos. El espejo se utiliza para enviar rayos de luz hacia el preparado. Algunos microscopios llevan acoplada a su pie una lmpara especial para estos aparatos. Diafragma: Es un dispositivo constituido por laminillas metlicas dispuestas concntricamente, de tal forma que permiten cerrar y abrir, regulando de esta manera la entrada de luz emitida por el espejo o la lmpara de iluminacin. Condensador: Constituido por un sistema de lentes de gran abertura, montados dentro de un cilindro cnico, truncado, de metal. Este sistema situado debajo de la platina, pueden subirse y bajarse a voluntad. Este sistema sirve para concentrar los rayos luminosos emitido por la fuente de iluminacin; funciona accionado por un tornillo. Porta filtro: Es un dispositivo que permite colocar filtros de diferentes colores, los que facilitan la observacin.

b) c)

d)

PARTE MECANICA Sirve de soporte a las piezas donde se instalan los lentes, y posee mecanismos de movimiento controlado Esta constituido por :

a)

El pie: Llamado tambin base o esttico, es una pieza pesada, maciza, para asegurar la estabilidad del aparato y servir de soporte a sus dems partes. Presenta diferentes formas, siendo la ms comn la de la herradura

b) La columna o brazo: Es la parte que sostiene a la platina y el tubo ptico, lleva

los tornillos macromtrico y micromtrico. Se una al pie directamente (fijo) o mediante una charnela (articulada) que acta como una bisagra. Generalmente tiene la forma de un arco, que s por donde se toma para su traslado.

c)

La platina: Es una plancha metlica, redonda o cuadrada, de posicin horizontal, presenta un orificio en la parte central que permite el paso de la luz proveniente del sistema de iluminacin. En los modelos mas perfeccionados, la platina puede desplazarse por tornillos macromtricos y micromtricos, hacia arriba y hacia abajo. Adems lleva adherida un par de pinzas que sirven para sujetar a la lamina portaobjetos , o un carro mvil o charriot para el desplazamiento del preparado durante la observacin. Posee adems en este dispositivo dos escalas NONIUS, que permiten ubicar la muestra ya observada, marcando los puntos en los ejes de la abscisas y ordenada de dichas escalas.

d) El tubo ptico: Es metlico y de forma cilndrica, interiormente de color negro

para evitar la reflexin de la luz. En el extremo superior del tubo se acopla el ocular en el extremo inferior se inserta el objetivo directamente o por intermedio de una pieza denominada revlver. El revlver portaobjetitos permite cambiar los objetivos instantneamente, sin desenfocar la preparacin. La longitud del tubo ptico puede modificarse en los modelos perfeccionados por medio de un enchufe que divide el tubo en dos partes, una inferior fija, y otra superior que se introduce o se saca de la anterior.

e)

El revolver: Es un dispositivo metlico de forma circular, atornillado en la parte inferior del tubo ptico, gira sobre su eje central. Presenta cuatro o cinco orificios a los que van atornillados los objetivos. Este dispositivo sirve para cambiar los objetivos durante las observaciones. macromtrico: Se encuentran ubicados en la columna, permiten grandes desplazamientos del tubo ptico o de la platina. Permite el enfoque aproximado.

f) Tornillo

g) Tornillo micromtrico: Se encuentra en la parte inferior o superior de la

columna, debajo del macromtrico. Realizan pequeos desplazamientos, permitiendo el enfoque fino, es decir aclara la imagen del objeto observado. En los microscopios modernos, el macromtrico y el micromtrico se encuentran accionados por un solo tornillo.

Partes de un microscopio ptico

MANEJO DEL MICROSCOPIO Iluminacin.- La iluminacin se consigue utilizando fuentes luminosas adecuadas, que pueden ser natural o artificial. Los rayos de luz son reflejados por el espejo o por la lmpara de iluminacin hacia el objeto o preparado. Cuando se examina con grandes aumentos, la luz debe ser intensa, en cambio cuando se hace observaciones con aumentos menores, la luz debe ser menos intensa, lo que se consigue desplazando en sentido vertical (arriba y abajo) el condensador y graduando la abertura del diafragma. Enfoque.- Luego de la iluminacin, se efecta el enfoque del preparado, utilizando primeramente el macromtrico hasta encontrar la imagen (enfoque aproximado) y por ltimo accionando el micromtrico se consigue el enfoque perfecto (visualizacin de la imagen). Al realizar el enfoque se debe tener en cuenta la distancias focales a que trabajan los diferentes objetivos, a fin de evitar rupturas de la lente frontales o del preparado microscopio. Se inicia la observacin utilizando el objetivo de menor aumento. TRANSPORTE DEL MICROSCOPIO Para transportar el microscopio de un lugar a otro emplee las dos manos, con una mano tome de la columna y la palma de la mano colquela debajo del pie o base procurando mantener la verticalidad para evitar la cada del espejo y oculares. MANTENIMIENTO Y PRECAUCIONES 1. Al finalizar el trabajo, hay que dejar puesto el objetivo de menor aumento en posicin de observacin, asegurarse de que la parte mecnica de la platina no sobresale del borde de la misma y dejarlo cubierto con su funda. 2. Cuando no se est utilizando el microscopio, hay que mantenerlo cubierto con su funda para evitar que se ensucien y daen las lentes. Si no se va a usar de forma prolongada, se debe guardar en su caja dentro de un armario para protegerlo del polvo. 3. Nunca hay que tocar las lentes con las manos. Si se ensucian, limpiarlas muy suavemente con un papel de filtro o, mejor, con un papel de ptica. 4. No dejar el portaobjetos puesto sobre la platina si no se est microscopio.
5. Despus de utilizar el objetivo de inmersin, hay que limpiar el aceite que queda en el

utilizando el

objetivo con pauelos especiales para ptica o con papel de filtro (menos recomendable). En cualquier caso se pasar el papel por la lente en un solo sentido y con suavidad. Si el aceite ha llegado a secarse y pegarse en el objetivo, hay que limpiarlo con una mezcla de alcohol-acetona (7:3) o xilol. No hay que abusar de este tipo de limpieza, porque si se aplican estos disolventes en exceso se pueden daar las lentes y su sujecin.

6. No forzar nunca los tornillos giratorios del microscopio (macromtrico, micromtrico, platina, revlver y condensador). 7. El cambio de objetivo se hace girando el revlver y dirigiendo siempre la mirada a la preparacin para prevenir el roce de la lente con la muestra. No cambiar nunca de objetivo agarrndolo por el tubo del mismo ni hacerlo mientras se est observando a travs del ocular. 8. Mantener seca y limpia la platina del microscopio. Si se derrama sobre ella algn lquido, secarlo con un pao. Si se mancha de aceite, limpiarla con un pao humedecido en xilol. 9. Es conveniente limpiar y revisar siempre los microscopios al finalizar la sesin prctica y, al acabar el curso, encargar a un tcnico un ajuste y revisin general de los mismos.

Experiencia N2 : Uso del microscopio 1. Limpiar el portaobjetos y el cubre objeto; y colocar una gota de agua en e le centro de la lmina portaobjetos

2. A continuacin cortar varias letras del peridico y asegurarse que por lo menos una de ellas sea e minscula.

3. Colocar la letra e en la gota de agua y tapar la preparacin con un cubreobjetos. Con el fin de limitar la cantidad de burbujas de aire en esta preparacin, observar las siguientes indicaciones:

a) Poner el borde del cubreobjeto sobre la gota de agua del porta objetos, de tal manera que el fluido humedezca por completo el borde. b) A continuacin colocar la aguja de inoculacin bajo el cubreobjetos y hacer descender ste sobre el portaobjetos.

4. Realizar el examen y hacer un dibujo de la letra e aproximadamente con las mismas dimensiones con que aparece en porta objeto.

5. Realizar una observacin con objetivo de inmersin y graficar.

CONCLUSIONES 1. El microscopio tuvo que pasar por varias etapas desde su descubrimiento, porque primero fue el microscopio simple luego el microscopio compuesto y el microscopio electrnico. Donde estos dos ltimos tuvieron un papel importante en la vida de nosotros porque nos ayudan en el reconocimiento de bacterias, virus, entre otras. 2. El microscopio es utilizado para fines de salud, ingeniera, agrcola y otras ciencias, para el reconocimiento de bacterias, virus y en la investigacin de antdotos y tratamientos para las enfermedades ; en la aleacin de los minerales es utilizado el microscopio electrnico en la ingeniera para poder realizar mejores estructuras ; en agricultura es utilizado tambin el microscopio electrnico para identificar a los viroides que solamente estn presentes en las clulas vegetales. 3. El microscopio juega un papel importante en la vida del ser humano porque nos han ayudado a aclarecer dudas que se nos pona en el frente.

V. CUESTIONARIO 1.- Qu entiendes por apertura numrica? En microscpica, la apertura numrica es donde es el ndice de refraccin del medio en que est trabajando la lente (de 1,0 para el aire a 1,56 para los aceites de inmersin) y es la apertura angular de la lente. La apertura numrica bsicamente es una medida del dimetro de la apertura comparada con la distancia focal. 2.- Qu es el poder de resolucin? Llamamos poder de resolucin a la capacidad de un sistema ptico para diferenciar entre dos puntos o lneas muy prximos.
Varios factores lo condicionan: el tamao de las clulas de la retina, la longitud de onda de la luz y el dimetro de la pupila.

3.- Qu sucedi con la orientacin original preparacin :

e cuando se movi el portaobjeto de la

a) De lado a lado: Podemos observar en el ocular un movimiento lateral igual que fuera del ocular b) De arriba y hacia abajo, y viserversa: En este caso observamos que si movemos la muestra hacia abajo se aprecia en el ocular, que la muestra se mueve hacia arriba; e igualmente sucede si movemos hacia arriba, en el ocular se aprecia que se mueve hacia abajo. 4.- Cmo se calcula el nmero de aumentos de una muestra? Se calcula con al multiplicacin de el nmero de objetivo y por el nmero que indica el objetivo:

Aaumento = Aocular Aobjetivo

5.- Qu tipos de microscopio pticos y electrnicos existen? Cul es la funcin de cada uno de ellos? Tipos de microscopios: Microscopio ptico Simple (MOS) Este es el ms comn, y popularmente se lo conoce como lupa, este esta formado por un lente convergente y es l ms sencillo de los instrumentos pticos. Este microscopio tiene una capacidad de ampliacin de unas 10 veces aproximadamente. El microscopio ptico simple fue utilizado por Robert Hooke para observar la pared celular de las clulas vegetales en una lamina de corcho ahora no es utilizada por que su poder de resolucin es muy poco.

Microscopio Electrnico de Transmisin Un TEM dirige el haz de electrones hacia el objeto que se desea aumentar. Una parte de los electrones rebotan o son absorbidos por el objeto y otros lo atraviesan formando una imagen aumentada del espcimen. Pueden aumentar un objeto hasta un milln de veces. Microscopio Electrnico de Barrido Un microscopio electrnico de barrido crea una imagen ampliada de la superficie de un objeto. No es necesario cortar el objeto en capas para observarlo con un SEM, sino que puede colocarse en el microscopio con muy pocos preparativos. Microscopio Electrnico de Barrido y Transmisin Combina los elementos de un SEM y un TEM, y puede mostrar los tomos individuales de un objeto.

BIBIOGRAFIA QUIMICA GENERAL/ Maria Aliga Machaca, Rosa Espinoza BIOLOGIA CELULAR Y MOLECULAR : DE ROBERTIS

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