RECUENTO DE ESPORAS DE CLOSTRIDIUM SULFITO REDUCTOR

INTEGRANTES: NELSY GARCIA CERVANTES YEINIS CORREA GARRIDO VANESSA DAZA COLLAZOS PEDRO TRIANA CATAO LUIS MIGUEL GUILLEN LEINIKER QUINTERO JESSICA CARRERO SANDRA IRIARTE JOSE ALTAMAR JOSE DURAN

DOCENTE: YUMAR RUIDIAZ

FACULTAD DE INGENIERIAS Y TECNOLOGICAS PROGRAMAS DE INGENIERIA AGROINDUSTRIAL UNIVERSIDAD POPULAR DEL CESAR VALLEDUPAR CESAR 2012

INTRODUCCION El gnero Clostridium est formado por ms de cien especies con limitada relacin gentica y propiedades bioqumicas diversas. Comprende a bacilos grampositivos, anaerobios, esporulados. Son ubicuos pudiendo ser encontrados en el suelo y aguas residuales as como tambin en la flora intestinal de hombres y animales. En su mayora son saprofitos, pero los patgenos pueden causar graves enfermedades como gangrena gaseosa, botulismo, ttanos, infecciones de piel y partes blandas, colitis asociada a antibiticos e intoxicaciones alimentarias. La capacidad para provocar enfermedad est vinculada a la posibilidad de sobrevivir en condiciones ambientales adversas mediante la formacin de esporas, crecer rpidamente y producir toxinas histolticas, enterotoxinas y neurotxicas. El mtodo de recuento en tubo, es otro mtodo que permite la determinacin del nmero de microorganismos viables presentes en muestras de alimentos. Este mtodo, es particularmente til para el recuento de microorganismos anaerobios, tales como los Clostridium sulfito reductores, siempre y cuando se utilice el medio adecuado y las correctas condiciones de incubacin. Los medios de cultivo empleados para el recuento de anaerobios (por ejemplo Clostridium sulfito reductor), son el medio Triptona Sulfito Neomicina Agae (TSN Agar), o el medio Sulfito Polimixina Sulfadiacina Agar (SPS Agar). En este laboratorio utilizaremos el agar SPS como medio de cultivo para determinar esporas de Clostridium sulfito reductor.

OBJETIVOS OBJETIVO GENERAL: Determinar la presencia de esporas de Clostridium sulfito reductor a partir de productos embutidos (salchichas, salchichn jamn, butifarra entre otros). OBJETIVOS ESPECFICOS: Identificar la presencia sulfito reductor en la muestra de alimento (salchicha cunit) mediante el color y el nmero de las colonias. Determinar el nmero de microorganismos viables (anaerobios sulfito reductores) presentes en la muestra de alimento. (salchicha cunit). Tomar conciencia de los peligros que ocasionan la presencia de estos microorganismos en los alimentos. Analizar la calidad microbiolgica del alimento salchicha cunit.

MARCO TEORICO Clostridium spp son organismos Gram positivos, anaerbicos, formadores de esporas, que estn normalmente en las heces, su representante ms caracterstico es Clostridium perfringens. Son deteriorantes, ya que producen malos olores y, con mucha frecuencia, ennegrecimiento del producto cuando ste tiene hierro, formando un precipitado oscuro de sulfuro de hierro. Estos microorganismos tienen la capacidad de reducir los sulfitos a sulfuros a partir de aminocidos y compuestos azufrados y para su deteccin se utiliza la evidente coloracin negra dada por la formacin del precipitado. El origen de los anaerobios sulfito-reductores no es exclusivamente fecal, ya que pueden proceder de otras fuentes ambientales como suelo, sedimentos marinos, vegetacin en descomposicin, heridas infectadas de hombre y animales, aguas superficiales, como tambin en los alimentos, especialmente cuando las condiciones de higiene en la elaboracin son deficientes. Clostridium perfringens Es agente etiolgico de muchas enfermedades y es la tercera causa de toxinfeccin alimentaria bacteriana despus Salmonella spp y Staphylococcus aureus. Existen dentro de la especie cinco tipos llamados A, B, C, D y E. C. perfringens A es el responsable de la mayora de los procesos infecciosos. Produce una enterotoxina (polipptido de 35.000 daltons de peso molecular) que se comporta como un superantgeno promoviendo la liberacin de

mediadores de inflamacin en forma masiva. La enterotoxina es susceptible a pronasa pero no a tripsina niquimiotripsina. En el intestino delgado, la enterotoxina se une a un receptor de membrana del ribete en cepillo e induce una alteracin de la permeabilidad calcio dependiente resultando en una prdida de iones y metabolitos. Esta prdida electroltica altera la funcin metablica intracelular provocando dao morfolgico y eventual lisis. La enfermedad se produce cuando el individuo ingiere alimento contaminado con un elevado nmero de organismos productores de enterotoxinas. Los alimentos que pueden estar contaminados son carnes vacuna, pollo, salsas cocinadas y no refrigeradas. Cuando los alimentos llegan al intestino delgado se produce la esporulacin y la liberacin de enterotoxinas. Clostridium botulinum. Es un bacilo gram positivo largo, anaerobio, que forma esporas subterminales. Las esporas son altamente resistentes pudiendo sobrevivir en alimentos incorrectamente procesados. Esta ampliamente distribuidos en la naturaleza, suelos, agua, vsceras de cangrejos y bivalvos y en el tracto intestinal de mamferos. Produce una potente neurotoxina de la que existen siete tipos: A, B, C, alfa, D, E, F y G. Es posible dividir a los organismos en cuatro tipos (I a IV) segn la toxina que producen y su actividad proteoltica. Los pertenecientes al grupo I producen toxinas A, B o F y son proteolticas en los cultivos. Los del grupo II producen toxinas B E o F y no son proteolticos. La enfermedad humana est vinculada a los tipos I y II y ala toxina A principalmente. El mtodo de recuento de esporas de Clostridium sulfito reductores consiste en determinar la presencia de esporas de los mismos mediante un medio de cultivo; en este caso SPS que permite el crecimiento de diferentes especies de esporas de Clostridium sulfito reductor.

MATERIALES

Papel graff estril. 11 g de salchicha cunit 1 Erlenmeyer con 99ml de agua peptonada. 3 tubos de ensayo con 9ml de agua peptonada. 3 tubos de ensayo estril. Balanza analtica. Agar SPS. Puntas azules. Micropipeta de 1ml. Esptulas estriles. Alcohol Algodn Gradilla Mortero

PROCEDIMIENTO Se Desinfect con alcohol al 75% el sitio por donde se tom la muestra. Abrimos aspticamente (con el mechero en medio). y adecuadamente la muestra. Luego pesamos adecuadamente11 gramos de la muestra (salchicha cunit) en una balanza analtica, sobre una caja de petri estril y se macero en un mortero. Los 11 g de muestra macerados se aadieron a un recipiente de dilucin que contena 99 ml de agua peptonada para obtener la dilucin de 10-1. Se agito vigorosamente el recipiente para homogenizar. Luego preparamos la dilucin 10-2 trasfiriendo 1 ml de la dilucin 10-1 a un tubo de ensayo que contena 9 ml de agua peptonada y agitamos cuidadosamente. Despus preparamos la dilucin 10-3 trasfiriendo 1 ml de la dilucin 10-2 a un tubo de ensayo que contena 9 ml de agua peptonada y agitamos cuidadosamente. De las tres diluciones anteriores se tomaron 1 ml y fueron adicionados en tubos de ensayos tapa rosca previamente rotulados. luego se calentaron a 80C durante 10 minutos en bao de mara y pasado el tiempo se dejo enfriar; luego se adicionaron 12 ml de agar SPS (Sulfito Polimixina Sulfadiacina). Dejamos solidificar y se agreg otra capa de SPS. Se Incubo a 37C durante 72 horas, y se observo cada 24 horas Hacer recuento de colonias negras al contar tubos que contengan menos de 50 colonias.

RESULTADOS Luego de incubar los tubos durante 24 horas 48 horas 72 horas obtuvimos: Al pasar las 72 horas de incubacin, no logramos observar ninguna colonia de color negro en el medio de cultivo, es decir hubo ausencia de microorganismos de Clostridium sulfito reductor. INFORME: < 10 UFC/g de esporas de Clostridium sulfitos reductoras en 11 g de salchicha cunit.

ANALISIS DE RESULTADO El gnero Clostridium por ser productor de esporas, tiene una mayor resistencia a las condiciones ambientales, por esta razn su identificacin en alimentos embutidos no es muy comn. Segn los datos obtenidos fue posible reportar la ausencia de esporas de Clostridium sulfito reductor debido a que no se presentaron colonias de color negro, al no llevarse a cabo la reduccin del sulfito de sodio que contena el medio ni la produccin de sulfuro de hierro.

CONCLUSIONES Con la realizacin del anterior trabajo se logr determinar que en la muestra del producto embutido analizado (salchicha cunit) no se observ la presencia de esporas de Clostridium sulfito reductor. Se considera que el alimento present una adecuada calidad microbiolgica, ya que de acuerdo a los estudios realizados se observ la ausencia de Clostridium sulfito reductor tanto de esporas como de colonias.

BIBLIOGRAFIA 1. Aycachi R. 2008. Aislamiento e Identificacin de Clostridium perfringens. Lambayeque. Universidad Nacional Pedro Ruiz Gallo. Disponible en:http://es.scribd.com/doc/6674027/Microbiologia-de-Alimentos-Practican14Aislamiento-e-identificacionde-Clostridium-perfringens 2. Gesche E, Vallejos A, Saez M. 2003.Eficiencia de Anaerobios sulfitoreductores como indicadores de calidad sanitaria de agua. Mtodo de Nmero Ms Probable (NMP). Chile. Universidad Austral de Chile. P 99105. Disponible en:http://mingaonline.uach.cl/pdf/amv/v35n1/art11.pdf

3. Alayo G. 2008. Recuento en tubo de anaerobios Sulfito Reductores. Per Universidad Nacional de Trujillo. Disponible en:http://es.scribd.com/doc/8536988/microbiologia-de-alimentosLaboratorios4. Guerra laura14 oct 2011 Clostridium sulfitos reductoras, recuento de anaerobios Clostridium sulfito reductores. Disponible en: http//www.clostridiumreductor.blogspot.com.pdf