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1. Resumo Nesta aula prtica foi realizado experimentos com reaes de precipitao com desnaturao (precipitao pela ao de solventes orgnicos, precipitao pelo calor, precipitao por reagentes cidos, precipitao com sais de metais pesados) e experimentos com reaes de precipitao sem desnaturao (solubilizao por ao de fora inica (Salting-in), Precipitao e ressolubilizao por ao de fora inica (Salting-out)). 2. Introduo As protenas so as molculas orgnicas mais abundantes e importantes nas clulas. So encontradas em todas as partes de todas as clulas, uma vez que so fundamentais sob todos os aspectos da estrutura e funo celulares. A importncia das protenas, entretanto, est relacionada com suas funes no organismo, e no com sua quantidade. Todas as enzimas conhecidas, por exemplo, so protenas; catalisam todas as reaes metablicas e capacitam aos organismos a construo de outras molculas que so necessrias para a vida. 3. Objetivos Reconhecer os grupamentos responsveis pela solubilidade das protenas em gua; Identificar os agentes que podem alterar essa solubilidade; Verificar experimentalmente a precipitao de protenas com e sem desnaturao.

4. Materiais e Mtodos Reaes de Precipitao com desnaturao Precipitao pela ao de solventes orgnicos Foi adicionado soluo lcool etlico gelado (ou acetona gelada) em um tudo de ensaio, adicionado soluo de ovoalbumina 1% e observado os resultados. Precipitao pelo calor Foi adicionado soluo de ovoalbumina 1% em um tubo de ensaio, aquecido o tubo em banho-maria em ebulio e observado os resultados. Precipitao por reagentes cidos Foi adicionado soluo de ovoalbumina 1% para um tubo de ensaio, adicionado soluo de cido tricloroactico 10% e observado os resultados. Precipitao com sais de metais pesados Foi adicionado soluo de ovoalbumina 1% em um tubo de ensaio, adicionado soluo de sulfato de cobre 10% e observado os resultados. Reaes de Precipitao sem desnaturao Solubilizao por ao de fora inica (Salting-in) Foi adicionado de ovoalbumina no filtrada em um tubo de ensaio, adicionado soluo de cloreto de sdio a 0,1 mol/L e observado os resultados.

Precipitao e ressolubilizao por ao de fora inica (Salting-out) Foi adicionado soluo diluda de ovoalbumina 1% em tudo de ensaio, adicionado soluo saturada de sulfato de amnio e observado os resultados. Aps isso foi adicionado gua destilada e observado novamente os resultados. 5. 6. Materiais Utilizados Bquer; Tubos de ensaio; Pipetas; Basto de vidro; Pipeta de pasteur; Banho-maria. Reagentes Utilizados Soluo de Ovoalbumina 1% (Diluir a clara do ovo 10 vezes e filtrar); Clara de ovo in natura; cido tricloroactico 10%; Cloreto de sdio 0,1 mol L-1; Soluo de Sulfato de cobre 10%; lcool Etlico absoluto (ou acetona) Gelado; Soluo saturada de sulfato de amnio.

7. Procedimento Experimental Reaes de Precipitao com desnaturao Precipitao pela ao de solventes orgnicos Foi adicionado 3 mL da soluo de lcool etlico gelado (ou acetona gelada) em um tudo de ensaio, adicionado 1 mL da soluo de ovoalbumina 1% e observado as mudanas ocorridas. Precipitao pelo calor Foi adicionado 2 mL da soluo de Ovoalbumina 1% em um tubo de ensaio, aquecido o tubo em banho-maria em ebulio e observado as mudanas ocorridas. Precipitao por reagentes cidos Foi adicionado 2 mL da soluo de ovoalbumina 1% para um tubo de ensaio, adicionado, gota a gota, a soluo de cido tricloroactico 10% e observado as mudanas ocorridas. Precipitao com sais de metais pesados Foi adicionado 3 mL da soluo de ovoalbumina 1% em um tubo de ensaio, adicionado, gota a gota, a soluo de sulfato de cobre 10 e observado as mudanas ocorridas. Reaes de Precipitao sem desnaturao Solubilizao por ao de fora inica (Salting-in)

Foi adicionado 3 mL da soluo de ovoalbumina no filtrada (com a presena de grumos) em um tubo de ensaio, adicionado, gota a gota, a soluo de cloreto de sdio a 0,1 mol/L e observado as mudanas ocorridas. Precipitao e ressolubilizao por ao de fora inica (Salting-out) Foi adicionado 3 mL da soluo diluda de ovoalbumina 1% em tudo de ensaio, adicionado 3 mL da soluo saturada de sulfato de amnio e observado as mudanas ocorridas. Posteriormente foi adicionado 5 mL de gua destilada e observado as mudanas ocorridas novamente. 8. Resultados e Discusso Reaes de Precipitao com desnaturao Precipitao pela ao de solventes orgnicos A adio de solventes orgnicos, como o etanol, ter etlico e acetona, s solues aquosas de protenas pode levar precipitao das mesmas. Ento foi observado que ocorreu desnaturao de protenas, com precipitao parcial e formou-se uma mistura esbranquiada. Precipitao pelo calor Desnaturao quando, ao fornecer energia a um meio aquoso contendo protenas, atraes entre os radicais so desfeitas e a protena "desenrolada", expondo, ao meio aquoso seus radicais apolares que estavam contidos no seu interior. Ento foi observado que a desnaturao promove alteraes que diminuem a solubilidade da protena, levando sua precipitao total. Precipitao por reagentes cidos Foi observado que ocorreu desnaturao promovendo a precipitao, porm o precipitado pode ser ressolubilizado atravs de alteraes do pH. Precipitao com sais de metais pesados A adio de sais de metais pesados, levam formao de sais denominados "quelatos" entre os aminocidos cidos e estes metais. A protena precipita porque estes sais so insolveis em gua. Ento foi observado que ocorreu desnaturao promovendo precipitao, porm o precipitado pode ser ressolubilizado atravs de alteraes do pH. Reaes de Precipitao sem desnaturao Solubilizao por ao de fora inica (Salting-in) A capacidade dos sais neutros de influenciar a solubilidade das protenas, que tanto depende de sua concentrao como na valncia de ctions e nions que formam o sal. Em concentrao reduzida, os sais aumentam a solubilidade de muitas protenas, um fenmeno denominado salting-in, geralmente devido interao da protena com os sais. Precipitao e ressolubilizao por ao de fora inica (Salting-out) As protenas podem ser precipitadas sem sofrer desnaturao por ao de solventes orgnicos, variao do pH e por alteraes da fora inica do meio. A variao do pH pode ser usada para precipitar protenas no seu ponto isoeltrico. Este efeito denominado de salting-out. As protenas podem ser ressolubilizadas

mantendo as suas caractersticas estruturais nativas por uma variao de pH acima ou abaixo do ponto isoeltrico. 9. Concluses As reaes de precipitao com ou sem desnaturao de protenas permitem a caracterizao dessas protenas pela analise de suas propriedades fsicas e qumicas, entre elas a solubilidade. A deteco dessas protenas envolve reaes especficas, as quais originam substancias coloridas. J as reaes de colorao no alteram a estrutura tridimensional da protena. E as reaes denominadas Salting-in e Salting-out precipitam sem ocorrer a desnaturao. 10. Referncias PRATT, Charlotte W.; CORNELY, Kathleen. Bioqumica essencial. Rio de Janeiro, RJ: Guanabara Koogan, 2006. 716 p. ISBN 8527711281 LEHNINGER, Albert L.; NELSON, David L.; COX, Michael M.: Princpios de Bioqumica. 4 Ed. Sarvier: So Paulo, 2006.