23-05-2011

3. Metabolismo Bioenergtico
AULA 16 BIOQUMICA

A VIA DOS FOSFATOS DE PENTOSE O SISTEMA PIRUVATO DESIDROGENASE

Metabolismo energtico das clulas

Gliclise

Beta-oxidao

Ciclo dos cidos tricarboxlicos

Cadeia respiratria e fosforilao oxidativa ATP

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Metabolismo Energtico
VIA DOS FOSFATOS DE PENTOSE

A via dos fosfatos de pentose

A via dos fosfatos de pentose um processo no linear responsvel pela sntese de NADPH e de 5fosfato de ribose A via dos fosfatos de pentose indissocivel da gliclise porque contem intermedirios comuns. uma via de converso de hexoses em outras oses (trioses, tetroses, pentoses e heptoses) no linear, com uma parte oxidativa e uma no oxidativa

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A via dos fosfatos de pentose inicia com o 6-fosfato de glucose

Funo Produo de NADPH
Equivalente

redutor Vias de sntese (ex., c gordos) Papel na regulao redox da clula e no controlo antioxidante (glutationo)

Sintese de ribose
Nucletidos

e cidos

nucleicos

Viso geral da via dos fosfatos de pentose

Fase oxidativa O 6-P-glucose oxidado a 5-P-ribulose, e forma-se duas molculas de NADPH Cria-se potencial redutor e uma pentose. Fase no oxidativa Na segunda fase, ocorre a converso de duas pentoses em diversas oses de 3, 4, 6 e 7 carbonos. Entre outras forma-se 5-P-ribose (nnucletidos) e 3-P-gliceraldeido e 6-P-frutose, intermedirios da gliclise

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Fase oxidativa da via dos fosfatos de pentose

(1) O 6-P-glucose oxidado (no C 1) a 6-P-gluconolactona, pelo 6-P glucose desidrogenase (EC1.1.1.49), com reduo do NADP+ a NADPH.

(2) A lactona hidrolisada a 6-P fosfogluconato pela 6-fosfogluconolactonase (EC 3.1.1.31) (3) O 6-P-gluconato descarboxilado oxidativamente pelo 6-P-gluconato desidrogenase (EC 1.1.1.44), (oxidao do C3 a cetona), com libertao de CO2 e formao de NADPH

Fase no oxidativa da via dos fosfatos de pentose

Nesta fase participam 4 enzimas: 5-P de D-ribulose epimerase (EC 5.1.3.1)
5-P de D-ribulose isomerase (EC 5.1.3.6) (ambas isomerases) Transcetolase (EC 2.2.1.1) Transaldolase (EC 2.2.1.2) (ambas transferases)

Esta fase inicia-se com a formao de ismeros do 5-fosfato de ribulose por enzimas fosfopentose isomerase e fosfopentose epimerase, respectiva\ 5-P-xilulose e 5-P-ribose

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Fase no oxidativa da via dos fosfatos de pentose

Nesta fase, transcetolases e transaldolases catalisam transferncias de fragmentos de 2 ou 3 C, tornando a via no linear e com sucessivas bifurcaes Aco da Transcetolase

A partir da 5-P-xilulose e 5-P-ribose, a transcetolase transfere um grupo glicoaldedo (CH2CO- ) do 5-P-xilulose para um C1 aceitador que contenha um aldeido terminal (ex, 5-P-ribose, eritrose-4-P).

Fase no oxidativa da via dos fosfatos de pentose

Nesta fase, transcetolases e transaldolases catalisam transferncias de fragmentos de 2 ou 3 C, tornando a via no linear e com sucessivas bifurcaes

Aco da Transaldolase

A transaldolase transfere um resduo de dihidroxiacetona do 7-P de D-sedo-heptulose para o 3-Pgliceraldeido, formando 4-Peritrose e 6-P frutose

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A gliclise e a via dos fosfatos de pentose

Esta via um desvio gliclise pois parte dos produtos podem reentrar na gliclise. essencial para a manuteno de NADPH, a sntese de pentoses, a converso de outras oses em metabolitos da glicolise.

Esta via muito importante em tecidos que sintetizam cidos gordos, fgado e tecido adiposo

Papel do NADPH e do glutationo no equilbrio redox

O glutationo um tripptido com um grupo tiol. designado pela sigla GSH, na forma reduzida e GSSG o dmero oxidado com ponte persulfureto. o tiol (pequeno) mais abundante nas clulas de mamferos. O glutationo usado nas clulas na defesa antioxidante, e a sua regenerao catalizada pelo glutationo redutase que consome NADPH

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Sntese de cidos gordos necessita de NADPH

1 Ciclo

Ciclos sucessivos
Enzima

A sntese de cidos gordos faz-se por ciclos de adio sucessiva de 2 C a partir do malonil-CoA, composta por reaces de reduo e desidratao, que consomem NADPH

Enzima

Metabolismo Energtico
O SISTEMA PIRUVATO DESIDROGENASE

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O sistema piruvato desidrogenase

O Sistema piruvato desidrogenase um sistema multienzimtico (um conjunto de enzimas) tambm chamado complexo enzimtico que cataliza a converso de piruvato em acetil-CoA A entrada no ciclo dos cidos tricarboxlicos requer a activao do piruvato a acetil-CoA Faz a ligao da gliclise ao ciclo TCA e cadeia respiratria. O sistema piruvato desidrogenase localiza-se na matriz mitocondrial

Neste processo esto envolvidos 5 passos reaccionais

A molcula de acetil-CoA
O acetil-CoA um conjugado de acetato ao Coenzima A (CoA) A presena do CoA facilita (activa) a molcula de acetato para que ela reaja mais facilmente.

A gliclise (piruvato) no a nica fonte de acetil-CoA O TCA no o nico destino do acetil-CoA (ex, sntese de c. gordos)

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O sistema piruvato desidrogenase

O complexo piruvato desidrogenase formado por trs enzimas ou componentes E1, E2 e E3

Reaco geral

5 passos intermdios

5 passos i

Descarboxilao e desidrogenao do piruvato

Mecanismo reaccional
Reaco 1 Piruvato hidroxietil-TPP E1
(ligao do piruvato ao cofactor TPP do E1)

Reaco 2 hidroxietil-TPP acil lipolisina E2

(oxidao do grupo hidroxietiltiamina pirofosfato a pirofosfato de acetiltiamina. 2 electres so transferidos para reduzir o persulfureto do grupo lipoilo a 2 tiois (-SH). O grupo acetilo transferio para o cido lipico)

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Mecanismo reaccional
Acetil-CoA

Reaco 3 acil lipolisina lipolisina reduzida

(D-se a tranferncia do grupo acilo para o CoA, formando-se acetil-CoA transesterificao)

E2

5 4 E3

Reaco 4 e 5 Lipolisina reduzida lipolisina oxidada

(regenerao por oxidao da lipolisina, e transferncia dos electres para o FADH2 (reaco 4), que reoxidado na reaco 5, transferindo electres/ reduzindo NAD+ a NADH)

Balano energtico e regulao

A converso de piruvato a acetil-CoA faz-se com formao de CO2 e de 1 NADH Na cadeia respiratria, 1 NADH leva formao de 2,5 ATP. Assim por cada glucose h 2 piruvatos 2NADH 5 ATP

1. Regulao por inibio por produto

NADH e acetil-CoA inibem o sistema piruvato desidrogenase, com acumulao de produtos

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Balano energtico e regulao

Regulao por ciclo reversvel de fosforilao NADH Acetil -CoA P

Piruvato TPP NAD+ CoA

PDHK
Piruvato desidrogenase cinase

ATP ADP Pi PDHP

Piruvato desidrogenase fosfatase

Inactivo

Mg2+,Ca2+ ATP

Anlise da regulao do fluxo da via

E1 E2 E2

E3 Reaco irreversvel Esperar-se-ia que a reaco E1 fosse a limitante e controladora da via. E , quando ocorre a velocidades baixas. Mas a velocidades altas de E1, a regenerao do E2 (reaes 4 e 5, catalizadas pelo E3) torna-se o factor limitante Reaces em semi equilbrio
(coeficient de controlo de fluxo)

1,5 1 0,5 0

CCF

-0,5 -1
0

-1,5

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Deficincias funcionais no sistema piruvato desidrogenase

Existem diversas patologias associadas ao mau funcionamento do piruvato desidrogenase. Elas so doenas genticas que resultam de mutaes nos genes que codificam as componentes E1, E2, e E3, e tambm a PDHK e PDHP. Entre outros efeitos, estas patologias esto associadas a acidose lctica, por excesso de fermentao do piruvato a cido lctico. Esto tambm associadas a problemas de desenvolvimento motor e neurolgico, devido baixa produo geral de ATP, que afecta globalmente o metabolismo das clulas. A mutao na E3 mais grave pois afecta tambm outros complexos enzimticos que usam o mesmo sistema de regenerao (-cetoglutarato desidrogenase e cetocido de cadeia ramificada desidrogenase).

Deficincias funcionais no sistema piruvato desidrogenase

Uma teraputica uma dieta rica em cidos gordos e pobre em glcidos O objectivo baixar os nveis de gliclise globais (diminui o piruvato c lctico), e estimular a utulizao dos cidos gordos como fonte de acetil-CoA pela beta oxidao. O fgado consegue assim alimentar o crebro e msculos custa de corpos cetnicos, mas estes tb acidificam o sangue. Uma segunda teraputica a administrao de doses elevadas de tiamina, nicotinamida, lipoato e riboflavina Todos estes compostos so cofactores do sistema Piruvato Desidrogenase, e por vezes, algumas mutaes podem apenas alterar os Km (ou seja a afinidade) dos enzimas para os cofactores, fazendo-os necessitar de maior concentrao para funcionarem.

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bibliografia
Captulo 24 e 25

Questes
7. Quando se adiciona O2 a uma suspenso de clulas em condies de anaerobiose e em meio rico em glucose, a velocidade de consumo de glucose diminui significativamente assim que o oxignio comea a ser consumido. Adicionalmente a acumulao de lactato cessa. Este efeito foi inicialmente observado por Louis Pasteur na dcada de 1860 e trata-se de um efeito caracterstico da maioria das clulas que so capazes de oxidar a glucose em condies de aerobiose e anaerobiose. a) Qual a explicao para a acumulao de lactato cessar aps a adio de O2 ao meio? b) Porque que a adio de O2 ao meio provoca a diminuio no consumo de glucose?

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Questes
6. Uma criana de 3 anos apresenta uma sintomatologia de acidose lctica e um lento desenvolvimento das capacidades motoras, bem como atraso no desenvolvimento mental. A determinao da actividade enzimtica do sistema piruvato desidrogenase num homogenato de uma cultura de fibroblastos provenientes de uma biopsia revela apenas 15% da actividade comparativamente com os valores normais. a) Como que uma deficincia no sistema piruvato desidrogenase pode explicar estes sintomas? b) Uma forma de terapia para estes casos a administrao de doses elevadas de tiamina, nicotinamida, lipoato e riboflavina. Qual a explicao para a utilizao desta teraputica

Questes
1. Em que parte da clula se localiza a via dos fosfatos de pentose? 2. Resuma as funes atribudas via dos fosfatos de pentose. 3. Que tipos de reaces so catalisadas pelos transcetolases? 4. Indique quais so funes do glutationo na clula: a) defesa antioxidante b) Sntese de nucletidos c) Manuteno do estado redox intracelular d) Reduo de espcies reactivas de oxignio e) Armazenamento e transporte de cistena f) Catabolismo dos cidos gordos (beta-oxidao) 5. O complexo piruvato desidrogenase composto por 3 enzimas que funcionam sequencialmente catalizando 5 reaces, mas a primeira reaco de descarboxilao que o ponto de controlo do fluxo da via porque irreversvel. Comente esta afirmao.

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