Aislamiento de Thiobacillus ferroxidans Fase I Preparacin del medio 9K liquido, titular mineral e incubar Fase II Preparacin del medio

9K solido Preparacin para el medio liquido 9K (500 ml) (NH4)2SO4 3.00 g/L Mg SO4 . 7H2O.. 0.5 g/L K2HPO4 . 0.5 g/L FeSO4 . 7 H2O .. 7.50 g/L H2O Destilada.. 1 L pH final: 2 bajar con H2SO4 (10N) No es necesario esterilizar Introducir la muestra (calcopirita o pirita) en el medio liquido y dejar actuar diariamente o interdiario removiendo hasta que aparezcan un color anaranjado en el medio, lo que evidencia la presencia de la bacteria, luego preparar el medio solido Preparacion del medio solido 9K (150ml) Solucin A (NH4)2SO4 0.5 gr Mg SO4 . 7H2O. 0.1 gr KCl 0.75 gr H2O Destilada 500 ml pH final: 4.6 Bajar con H2SO4 (10N) Se autoclava Solucin B Agar.6 gr. H2O Destilada.. 480 ml Se autoclava Solucin C FeSO4 . 7 H2O .. 2 gr. H2O Destilada 10 ml Bajar con H2SO4 (10N) No se autoclava Solucin D Na2SO3 . 5H2O.. 2gr. H2O Destilada 10 ml No se autoclava para 75 ml 0.075 gr para 75 ml 0.015 gr para 75 ml 0.1125 gr si: 500 ml 1 Litro (1000 ml) X 150 ml X = 75 ml para 500 ml para 500 ml para 500 ml para 500 ml 1.5 gr 0.25 gr 0.25 gr 3.75 gr

Para 72 ml 0.9 gr si: 480 ml 1 Litro (1000 ml) X 150 ml X = 72 ml

Para 1.5 ml 0.3 gr si : 10 ml 1 Litro (1000 ml) X 150 ml X = 1.5 ml Para 1.5 ml 0.3 gr si : 10 ml 1 Litro (1000 ml) X 150 ml X = 1.5 ml

Entonces 75 ml + 72 ml + 1.5 ml + 1.5 ml = 150 ml

Mezclar solucin A con la Solucion C a 45 C (bao maria)

Solucin A

Solucin C

Solucin A

Mezclar solucin B con la Solucion D a 45 C (bao maria)

Solucin B

Solucin D

Solucin B

Mezclar solucin A+C con la Solucion B+D (en bao maria) a 45 C

Solucin A + C

Solucin B + D

Solucin (A + C) + (B+D)

Solucin (A + C) + (B+D)

Plaquear

Con un asa de Koll sacar muestra del medio lquido que esta de color anaranjado Sembrar por estrias en las placas con medio solido 9 K, e incubar a 30C por 15 das