ADN Recombinante

El ADN recombinante, o ADN recombinado, es una molcula de ADN artificial formada de manera deliberada in vitro por la unin de secuencias de ADN provenientes de dos organismos de especies diferentes que normalmente no se encuentran juntos. Al introducirse este ADN recombinante en un organismo, se produce una modificacin gentica que permite la adicin de un nuevo ADN al organismo, conllevando a la modificacin de rasgos existentes o la expresin de nuevos rasgos. La produccin de una protena no presente en un organismo determinado y producidas a partir de ADN recombinante, se llaman protenas recombinantes. El ADN recombinante es resultado del uso de diversas tcnicas que los bilogos moleculares utilizan para manipular las molculas de ADN y difiere de la recombinacin gentica que ocurre sin intervencin dentro de la clula. El proceso consiste en tomar una molcula de ADN de un organismo, sea virus, planta o una bacteria y en el laboratorio manipularla y ponerla de nuevo dentro de otro organismo. Esto se puede hacer para estudiar la expresin de un gen, para producir protenas en el tratamiento de una enfermedad gentica, vacunas o con fines econmicos y cientficos.

Procedimiento
El proceso de produccin de un ADN recombinante comienza con la identificacin desde un organismo de una secuencia de ADN de inters con el fin de propagarlo en otro organismo que carece de la secuencia y, por ende, del producto proteico de esa secuencia de ADN.2 As se pueden producir cantidades ilimitadas de la protena codificada por el susodicho gen. En trminos simples, el procedimiento consiste en:

Localizacin de genes y sus funciones. Clonacin del ADN, y su posterior almacenamiento en genotecas. Reaccin en cadena de la polimerasa (PCR) Utilizacin de vectores de expresin

Aplicaciones
El vector que se utiliza contiene secuencias de ADN que al ser replicadas confieren resistencia a antibiticos especficos. Esta tcnica ha sido ampliamente utilizada en el campo de la medicina y ha permitido el

desarrollo de importantes avances teraputicos como por ejemplo la produccin de insulina recombinante.2 Permite adems la posibilidad de utilizar plantas y alimentos transgnicos, as como microorganismos modificados genticamente para producir frmacos u otros productos de utilidad para el hombre, entre los que se pueden citar: la insulina humana, la hormona del crecimiento, interferones, la obtencin de nuevas vacunas o la clonacin de animales. El uso de ADN recombinantes puede tambin tener un impacto perjudicial que un uso inadecuado podra provocar en el ser humano y en el propio planeta. Con el uso de ADN recombinante se ha logrado obtener plantas transgnicas resistentes a insectos, hongos, bacterias y herbicidas, con mejores caractersticas de calidad durante pos cosecha y con alto contenido nutricional. Tambin ha permitido la clonacin, expresin y produccin mediante esta tcnica de diversos antgenos, por ejemplo, la vacuna contra la hepatitis B5 y la vacuna contra el virus del papiloma humano.

Produccin o terapia con vitaminas recombinantes

Las protenas recombinantes son aquellas que se producen mediante la tcnica del ADN recombinante, es decir, expresando un gen de un organismo en otro organismo distinto. Para que estas protenas sean tiles desde el punto de vista teraputico tienen que conservar su actividad. Adems, se debe evitar que sean inmunognicas para el ser humano. Para ello es importante decidir para cada protena recombinante cual es el organismo de expresin ms adecuado. Produccin en bacterias Estas protenas recombinantes han intentado expresarse en bacterias como E. coli, ya que son fciles de mantener, crecen rpido y se conoce bien su genoma. Sin embargo, el mayor problema que presenta la produccin en bacterias es que en ellas no existe glicosilacin proteica, por lo que algunas protenas producidas en bacterias pierden totalmente su funcin. An as se han logrado producir con xito algunas protenas recombinantes en bacterias. La primera protena recombinante que se produjo en E. coli fue la somatostatina, una hormona anti-crecimiento de 14 aminocidos. Sin embargo, aunque desde el punto de vista cientfico fue un xito, desde el punto de vista econmico fue un fracaso, ya que su utilidad estaba reducida a personas con problemas de gigantismo y similares, que son poco comunes. Posteriormente se logr un gran xito en este campo mediante la produccin de insulina en bacterias. La insulina presenta la ventaja de no necesitar modificaciones postraduccionales, por lo que se evita este problema de su produccin en bacterias. Adems, la diabetes es una enfermedad muy frecuente en la sociedad, con unos 170 millones de

diabticos. En EEUU el 6% de la poblacin (20 millones de habitantes) son diabticos y esta enfermedad es la 6 causa de muerte. Antes de esta produccin en bacterias, se usaba insulina porcina. Produccin en levaduras Al ser clulas eucariotas y por lo tanto ms similares a las humanas que las bacterias y ser muy fciles de emplear industrialmente, las levaduras constituyen otro grupo de organismos susceptibles de producir protenas recombinantes para uso humano. Sin embargo, aunque s presentan glicosilacin proteica, al contrario que las bacterias, esta es totalmente distinta a la humana, por lo que estas protenas presentan problemas, en muchos casos incluso inmunognicos. Produccin en clulas de insecto Ms cercanas an a las clulas humanas que las levaduras son las de insecto, como las de Spodoptera frugiperda (una polilla parsito del maz y del algodn), que se cultivan fcilmente in Vitro, aunque el medio de cultivo es caro. Dicho medio, adems, no contiene suero, lo que hace ms fcil el procesado de la protena. Otra de las propuestas ha sido el uso no de clulas de insecto, sino de los insectos completos para la produccin de estas protenas. Para ello se infectan a los insectos con baculovirus modificados (que adems no infectan a los seres humanos) para que expresen la protena recombinante. Sin embargo, este sistema presenta exactamente el mismo problema que el de levaduras: que las clulas de insecto presentan glicosilacin, pero esta es totalmente distinta a la de mamferos. Produccin en clulas de mamfero Al ser clulas ms parecidas a las humanas, el procesamiento que sufren las protenas recombinantes producidas en clulas de mamfero tambin es ms similar, por lo que se conserva su funcin (aunque puede haber ligeros cambios en el patrn de glicosilacin). Los inconvenientes de este mtodo es que el crecimiento celular es ms lento, tardando de 6 a 24 horas en duplicarse las clulas, que los cultivos pueden sufrir contaminacin de bacterias u hongos y que se puede contaminar el producto con virus que infecten a humanos. Para la produccin en mamferos se usan las clulas CHO, de ovario de ratn chino, que presentan la ventaja de que crecen bien y existen gran cantidad de mutantes de glicosilacin. Adems, se est intentando que los animales secreten estas protenas en la orina, en la leche, etc.