TECFII{IQUES DE

CFIIMIE MEDICALE
A L'USAGE DU PRATICIEN

Traduction de l'ouvrage MEDIZINISCH-CHEMISCHE "

UNTERSUCHUI\TGSMETHODEN' MERCK
l]emc $digi6n

r93t

E.MERCK.DARMSTADT

Tous droits rservs

Imprimerie Roetherdruck Darmstadt

PREFACE II y a plus de cent ans que H. E. Merck, alors propritaire d,e la <Engel-Apotheke> Darmstadt, entreprit ses trauaux fondamentaux pour I'isolement l'tat pur des alcalodes et d,'autres principes actif s reti,rs des ugtaux. Ces trauaux lui auai,ent di fai.t reconnai,tre toute I'importa.nce de la puret des ractifs et d'autres produits chimiques et c'est en se basant sur cette constatati,on qu'il entreprit par la suite, dans les usines fondes par lui, la fabrication de ractifs trs pars. Il s'est d,uelopp ai.nsi ane nouuelle branclte d'industrie laquelle ma firme a touiours port toute son attenti,on: c'est pourquoi, Ies racti,fs >>Merck< ont t considrs de tous temps cornftte des prod,uits standard et que, d,'autre part, le liure <Prtifung der cltemischen Reagenzien auf Reinheit> (Essai,s de puret appliqus aux ractifs chimiques), dit par ma firme, est uniuersellement reconnu cornme ouurage f ondamental (ane quatri.me dition en a d,i paru en rg3r). Le pr,sent recuei,l a pour but de montrer I'utilit des
r

imique s . II d,oit offri,r aux mdeci.ns pratici,ens, aux pbarnta.ci,ens, aux laboratoires des cliniques et des hpi.taux ainsi, qu'aux autres centres de recherches une slecton d,e tecltniques d,e laboratoire qui. ont fai,t lears preuues

acti,f s

<<M

er ck>> d ans

Ie

s r e ch er ch e s m

d,i c o - ch

et qui, faciliteront la t.che u chercbeur. En runissant ces mthodes, ie me suis propos de prsenter Ia matire d,e faon succincte etconcise,mais cependantaussi co?nplte que possible et de fai,re d.e ce liure l'intermdiaire entre les traits trs tallls et les manuels trop brefs pour les dbutants. Bi,en que le cboix des mthod.es exposes ici, soi.t bas stn I'exprience d,'un important laboratoi,re de recberches cliniques, il se peut que ce petit opuscule ai,t encore besoin d,'additions ou. de corrections. Aussi,lors d,e la raction de la d.euxime dition allemande de ce Iiurerai.-ie tenu compte,dans la mesure d,upossiblerdes nombreuses suggestions qui, m'auaient t f aites pour Ie rendre plus complet et pour l'amli,orer. L'excellent accuei.l f ait en Allemagne aax <Medizini.s cb - ch e mi s ch e U nt er s uch un gs me th o d enu ( qui a r e n du ncessaire la deuxinte dition dans le courant d,'une anne) ai,nsi que les d,emandes qui. me sont paruenues d,es pays d,e langue franaise, m.'ofl.t i.ncit fai.re para,tre galement une dition franaise de cet ouurage.

En prsentant auiourd,'hui cette trad,uction

M e dizini,s
ch - ch emis ch

des

e U nter s uch un gs me th a d.enu i' ai l'espoi.r qu'il lui. sera rseru de la part d,es milieux intresss d,es pays d,e langue franaise un accuei.l tout
<

aussi.

fauorable que celui dont ont bnfici les ditions originales d,ans les pays d,e langue allemande.
S,

Darmstadt, Octobre rg7

E. A(ERCK.

Ta,ble des Matir'el

Dxomon du ta,ng
Prlvernent du sang Densit Formule sanguine Mthodes de coloration

r
3

heim (7), Leishman (7),Coloration vitale (8) Mthodcs de numration

Coloration selon Ia mthode de Giemsa (5)' Pappen-

4-r7 5-8

(ro-r 3), Hmaties grnulations vitales (r 3), Hmatoblastes (r5) Groupes sanguins
la grosse goutte Hmoglobine, Dosage d'aprs Sahli
Technique de

Formule leucocytaire

(lo),

ro-r5
t7
20

Numration globulaire

2r
22
23

Valeur globulaire (Index colorimtrique)

Rsistance globulaire

Vitesse de coagulation du sang

25

Temps du saignement
Vitesse de sdimentation des globules rouges
Oxydases Substances actoniques

z6 z6 z8
29

Acide lactique
Alcool, Dosage d'aprs'Widmark Ammoniaque (Dosage) Sucre sanguin (Dosage)

3r
34 37

Calcium (Dosage)
Chlorures (Dosage) Cholestrinc (Dosage) Pigments biliaires

39 +3

4+
+5 48 5o 52
53 53

Bilirubine, Dosage d'aprs la mthode de Bakaltsdruk

Acide urique
Urc
Dosage par l'urase > d'aprs la mthode de Saegesser

55

Cratinine

Cratine ct Cratinine Azote rsiducl

.58 -6t .62

.69 .63

'57

'59

Dxnmen du llquide dnod6nal

Bilirubine
Sdiments du liquide duodnal cr de la bile

Eprerrves dtappreia,tion d.es fonctions de la vsieule et des voles bilialres

Epreuve de Kalk et Schndube Eprcuve dc Lyon au sulfate de magnsium

Dxa,men de I'urine
Densit, Cou1cur, Raction, Aspect

Albumine
Recherche qualitative
Dosage

' 6+-6s 6s-Tt ' 6s-6s

'

Albumose de Bence-Jones
Pseudo-albumine
Sucres

Glucose, Recherche qualitative > Dosage

Lvulose (fructose)
Lactose
Pentoses

' '

.7r '7r

.69 .70

72-74 7 5-77

G':

ji

.78 .8o

Diastase

l"',

Acide glycuronique
Actone, Recherche qualitative

>

Dosage

Acide acrylactique
Pigments biliaires a) Bilirubine b) Urobilinogne c) Urobiline
Diazo-tection

' '

.82 .83
84-86 87-Bg

.8r

.90

.9r

-92.

'93 '9+ '94

vu
Ammoniaque (Dosage) Acide urique (Dosage) Azote total (Dosage)

Indoxyle

95

96
97

gg
gg

Acide phosphorique Recherche qualitative Dosage Porphyrines

gg

- roo

ror

Acide sulfurique a) Acide sulfurique des sulfates minraux (Dosage) . roz . ro3 b) D ) des sulfo-thers (Dosage)

Chlorures Sang Calculs urinaires Sdiments urinaires

Soufre neutre

(Dosage)

. ro3 . ro4

.roj

. ro6 . ro8

Recherdre de mdicaments dans

l'urine

. ro9

Actanilide, Acide salicylique et salicylates, Anthraquinones, Antipyrine, Drivs barbituriques, Eucodal, Hexamthylne-ttramine, Mtaux lourds, Phnactine, Phnol, Pyramidon, Santonine

Examon du liquide ophalo-raehidien

Examen du

leucocytes sdiment Examen du liquide clair

Numration des

. rr8 . rr9 . r 19 . rr9 . rzj

Raction I'or collodal d'aprs Lange Raction au mastic Dosage de l'albumine d'aprs les mthodes de RobertsBrandberg-Stolnikow, Nonne-Apelt et Pandy rz7-r3o

Exa,men du suc gastrlque

Acide clrlorhydrique I'tat libre Acidit totale, Acide chlorhydrique libre et combin

. I3I

'r30 'r32

Acide lactique

uII
Sang

Ferments

'r33 'r33

Dxomen det liquldec de ponctlon

Transsudats et Exsudats Raction de Takate-Ara
Pseudo-mucine cide succinique

'r35
'136

' r37
'r37 'r38 'r39 'r39 'r39 'r39 'r40
. I4I 'r+2 'r+2 .r+z 'r+3

Uratcs

Examen des crachatl

Albumino-raction
Recherc.he du pus ou Globules rouges

du sang

Globules rouges et cellules de lsions Fibres lastiques

Cristaux de Charcot-Leyden Cristaux d'acides gras

Cholestrine Cristaux d'hmatodine Recherche des bacilles tuberculeux

Ilxam.en des rnatires lealer

Sang

Matire
Graisses

sche

Azote total
Pigments biliaires

' r++ ' r45 ' r45

Amidon Ferment amylolytique (Amylase)

Concrtions solides

' r47 ' r47

.r48

'

146

' r49

trfode de prpera,tflon des mllleux nutritif pour le ba,ctriologle

Bouillon de viande

Milieu nutritif

la glose

r50 r50

Milieu nutritif la

Milieux nutritifs standard <Merck> I et II <Mer&> Bouillon nutritif - standard standard I et II <Merck> Agar nutritif Milieux nutritifs <Merck> prts I'emploi Milieu nutritif de Conradi-Drigalski Glose lactose la fuchsine d'Endo
Solution de

glatine

Glose au rouge neutre Bouillon glyc,rin de Stern, la fuchsine Milieu de Ritter au rhamnose Milieu de Neisser-Pringsheim f indol TecJrnique de l'enrichissement des bacilles tuberculeux dans r58 le sang par le tel de buf r59 Milieu de Petruschky au petit lait tournesol

Barsiekow

' r5r ' r5r ' r5r ' tsz ' r53 ' r54 ' | 5+ ' r55 ' 156 ' 156 ' r57 ' r58

Bouillon de Tarozzi Milieu nutritif de Lffler

r6o
r6o

Milieu de Clauberg pour la culture du bacille diphtrique r6r Milieu liquide de Sauton pour la culture des bacilles tuberculeux

r6z

Bouillon au srum

r63 Glose au sang ft+ Glose au sang d'aprs Levinthal r65 Milieu l'esculine pour la culture des entrocoques Culture des bacilles tuberculeux dans le sang d'aprs Lwenstein
r6.5

baetries

Solutions eolora,ntes et mthodee de eoloration des

. 168 Solution de Lffler au bleu de mthylne ' 168 Coloration d'aprs le procd de Gram ' 169 Coloration du bacille diphtrique . t7o Coloration du bacille tuberculeux . t7z Coloration des capsules du pneumocoque Coloration du spirochte de la bouche et du bacille fusiforme r73

Coloration

d.es oottBes histologiquec Hmatoxyline alun de Bhmer Hmatoxyline alun de Delafield Hmalun de P.Mayer

rZ+

. r7S

Hmatoxyline acide

.r7T coloration des graisses par le soudan rrr ou I'Ecarlate R. . rT7 Carmin alun de Grenacher .r7g Carmin borar de Grenacher .ryg Carmin lithique d'Orth .r7g

Solution d'osine Coloration par Ia mthode de van

d'Ehrlich

. r7s

.rT6

Gieson

. 176

Intrieur d'un laboratoire du nouveau btiment des laboratoires scientifioues.

E. iVlerck. Darmstadt.

ong Exa,men du. a,ng.

Remarques prliminaires.

Tous les examens sont efiectuer sur des sujets jeun et reposs, de prfrence le matin au lever.
Prluement du sang.
On obtient le sang examiner par simple piqre du lobule de l'oreille ou de la pulpe du doi.gt. Avant de procder La prise de sang, nettoyer les tguments et l'aiguille de Frank avec un peu d'ther. Seules les gouttes de sang qui s'coulent spontanment sont utiliser. Eviter de presser la phalangette ou le lobule de I'oreille pour faire sourdre le sang. Les premires gouttes sont rejeter. Avant de se servir des instruments, se convaincre de leur intgrit et de leur propret (vrifier que I'extrmit des pipettes soit intacte). La prise de sang peut encore se faire par ponction veineuse. On utilisera une aiguille de Strauss en platine iridi, strilise par flambage et parfaitement sche; la rco1te du sang se fait dans un tube essai. A I'aide d'une pipette gradue, rigoureusement propre et sche, on prlve une certaine quantit de ce sang (4 cmc. environ) q,r. l'on reporte dans un deuxime tube essai contenant exactement r cmc. d'une solution de citrate de soude J,B ou Solo. Bien agiter le mlange.

Nettoyage des ustensiles en uerre. Rgles gnrales.

(I1 est indispensable de suivre une technique spciale pour certaines mthodes de recherches telle que, par exemple, Ia raction de Lange 1'or collodal.)

Dissoudre chaud roo gr. de bichromate de potassium dans r litre d'eau. Laisser refroidir, puis ajouter lentement et en remuant r oo cmc. d'acide sulfurique concentr. Plonger les objets de verrerie dans ce mlange et les y laisser pendant r 3 jours. Rincer ensuite I'eau, passer dans de la lessive de soude ou de potassse dilue et finalement laver grande eau pendant plusieurs heures (eau courante si possible). Si I'on possde une tuve dessication, orr pourra y faire scher les objets la temprature de 8o-9o". Les lames porte-objet seront conserves dans un mlange parties gales d'ther et d'alcool absolu. Au moment de s'en servir, on les sche, on les passe dans la fl.amme d'un bec Bunsen et on les essuie ventuellement avec un petit morceau de coton imbib d'ther. Les pipettes souilles par du sang coagul sont plongs dans une solution dilue d'alcali, puis Iaves I'alcool contenant r o/o d'acide chlorhydrique; on rince l'ther et on sche par insufflation d'air. Prparation des talenzents sur lanzes. On applique la lame soigneusement nettoye ( conser,rer dans I'alcool-ther) sur une gouttelette de sang que I'on a lait sourdre par piqre de la

Song
pulpe du doigt ou du lobule de I'oreille. En maintenant la lame entre le pouce et le mdius de j.a main gauche, on appuie lgrement le bord d'une lamelle couvre - objet ordinaire rigoureusement propre (ou mieux encore d'une lamelle plane-parallIe ou d'un cube de verre bords rods qu'on trouve dans le commerce), tenue entre le pouce et I'index de la main droite contre la goutte de sang en la poussant vers la droite, de sorte qu'elle se ftpartit sur tout le bord de la lamelle. Puis, d'un mouvement rapide de droite gauche, on balaye vec la lamelle la surface de la lame. La goutte de sang est entraine et s'tale rgulirement en une couche pas trop paisse. On s'habituera toujours fafue au moins deux prparutions, dont une seule sera colore par la suite. Les frottis seront simplement schs I'air; leur fixation ne devra pas se faire par la chaleur. On a;trra soin de conserver les prparations I'abri des insectes, des mouches en particulier.
Techniques d'examen.

I)ensit.

La connaissance de la densit ne parait plus prsenter actuellement qu'un faible intrt clini(ue.
Seul l'tablissement d rapports entre la densit et d'autres donnes, telles qu la quantit d'hmoglobine, le nombre des rythrocyts, la valeur de l-'albumine totale et la quantit totale du sang, pourrait avoir quelque valeur pour la rsolution d certains problmes scientifiques.

Densit du sang normal: Chez I'homme sain, elle varie de r,o55 r,o6e. Chez la femme saine, elle varie de r'o5o r,o5. I1 est plus r&te d'observer une augmentation u del d r,o8o qu'une diminution au-dessous. de r,o3o. -ditct Jusqu'ici-on n'a pas pu obs-erver un paralentre Ia densit et les tats patholeliime logiques. Lit. : Nnnc nr;r,,Blutkrankbeiten und Blutdiagnostib", p' 55' Hand'bucb d'er Inneren Medi,zin, vol. IV/rr p. 415' trtormu.le sa,nguitter. Mthodes de coloration' Gnrali,ts. La lame de sang prpare selon la technique dcrite plus haut pe"ftt utilise Pgur les colorations. On iolore selon Glnnase ou Mrt-GnNwe.lo ou mieux encore d'aprs la mthode panoptique de PepprNnerM; celle-ci consiste faire agir successivement la solution de Mlv-GntiNweln et celle de Gtnusn. En proc dant d'aprs les mthodes prcites, les rythrocytes re colorent en fouge, les noyaux des leucocyts et des rythrocytes nucls enviolet,les granultions osinophiles en roug" ."-ifl les granuiations neutrophileJ en un violet indcis, le protoplasme basophile des lymphocytes en bleu'

Coloration selon la mthode d,e Mm-Gnur,rwALD. Verser sur la lame fralchement prp are, sche l'air mais non fixe, de la solution de Mlv-Gntii-r'wALD. Au bout de minutes, ajouter avec prcau3
+

Sa,ng
tion, l'aide d'une pipette, |a mme quntit d'eau distille que de colrnt. Laisser agir.pend.*"1.5- ro nouv.fl.t minutes. Lavef ensuite I'eau distille jusqu' ce gue I'talement prsente une coloration rose ple. Ractifs pour la colorati.on: Eosine-Bleu d.e mthytne <<Mer&.>> (selon la formule d'e Coloration selon la mtltode d'e GteMsl.

May-Grnwald, sous forme sold,e ou en soluti,on prte I'emploi).

Fixer la prparution sche I'air pendant 2 1 minut.t d"ttt I'alcool mthylique pur et anhydre' i"isrer ensuite agit la soluiion de Grrnasa dilue (r goutte de solutTon colorante pour-r cmc. d'eau) ir*i.h.*ent prpare, pendant 2o 3o minutes, puis laver I'eau.
Ractifs />our Ia coloration: Alcool mtbylique (Mthanol pr. anal. Solution d'e Gi,emsa
<<Metck>>.

a) Procd habituel.

<<Metck*).

b)

Procd rapide.

On peut obtenir un liquide Ia fois colorant et fixatur en mlangeant des quantits gales de la solution ordinaire de GrsN{sA. et d'alcool mthylique (ou d'actone). La coloration se fait de la faon suivante: Recouvrir les lames sches I'air d'une couche de
solution colorante et fixatrice; laisser agir pendant minute, au maximum r minute. Renouveler la coloration au moyen de la solution ordinaire de Grnuse, frachement prpare; aprs to minutes, laver l'eau.
1/e

Ractifs:

Alcool mtbylique (Mtbanol pr. anal. <Merck>).

Bleu azur-Eosine-Bleu d,e mtbylne <<Mer&;> (selon la forsolide.

male d,e Giemsa), en sol. prte l'emploi ou sous forme

Causes tl'erreur de la coloration d,'aprs GrpMSA. L'eau distille du comrnerce est en gnral trop acide et par consquent inutilisable pour les colorations selon la mthode de Giemsa. On peut y remdier en la faisant bouillir avant

de s'en servir. L'preuve de la neutralit de l'eau se fait

comme suit, Dissoudre quelques grains d'hmatoxyline (autant que possible incolore) dans une petite quantit d'alcool absolu. Verser quelques gouttes de la solution ainsi obtenue dans l'eau examiner. Celle-ci prend une teinte jaune ple qui doit virer au violet aprs une minute au plus tt et 5 minutes au plus tard. Si, au bout de 5 min., l'eau a conserv sa couleur initiale,

on

ajoutera goutte goutte une solution de carbonate de

Rcemment on a recomm and I'utiiisation d'eau contenant des substances taTrpon pour la coloration des talements par le Grnnsn, (Wersn, Arch. f . Scb!ffs- u. eropenhyg. 37, 1933, p. 32.Pour obtenir une solution tampon de pn : /,Zt on dissout 5gr. 7o de phosphate disodique et zgr.4j de phosphate monoacide de potassium (Sorenlen) dans 5 litres d'eau bouillie. Cette solution restera stable pendant plusieurs semaines si on prend la prcaution de la conserver dans un flacon muni d'un tube de chaux sodique pour tra mettre I'abri du CO' atmosphrique.
6

soude au centime jusqu' ce que la raction ait lieu. Lorsque le changement de couleur s'est produit trop tt, c'est dire avt r rninute, il y a lieu d'ajouter l'eau distille de l'acide actique au centime pour la ramener la neutralit. (Grnrase, Ztrbl. f . Bahteriol. rgz4, sect. I [Orig.] vol. gr, p. 343.)

nnE
Lorsqu'on prparer une dilution de la solution de il faudra viter la formation d'un prcipit

Grnrtrie.,

la propret des rcipients dans lesquels on fait le mlange, employer des verres pas trop troits et de I'eau exempte de sels; ne ps agiter trop longuement les liquies mlanger et conserver les solutions mres dans des flacons bien bouchs.
Ractif s:

de matire colorante. Dans ce but, veiller

Phosphate rnonoacid,e d,e potassium d'apts Srensen (Bi' phosphate de potassium <<Mer&,>>, d,'aprs Srensen)Phosphate d,isodique d" aprs Sorensen (Phospbate de so' dium cri.st. <<Merck>>, d"aprs Srensen).

Mthode pano?tique d'e P*pENHEINI. Fixer la prparation sche I'air au moyen du mlange de Mov-GnNwALD; aprs 3 minutes ajouter Ia mme quantit d'eau distille et laisser en contact pendant quelques minutes. Rejeter la solution colrante et, sans rincer, colorer par Ia solution de Grsuse frachement prpare, dilue avec de l'eau distille. Aprs avoir laiss agk cette solution pendant r 5 minutes, bien laver I'eau. Mthode de Lnrsnutx. Arroser la lame de sng avec une vingtaine de gouttes du colotant de LnTsHMAN (solution sature de bleu de mthylne et d'osine dans I'alcool mthylique) et laisser agir pendant une demi-heure. Ajouter e fois autant d'eau que de solution colorante et agiter doucement la lame pour que le mlange se fasse. Aprs j minutes, rincer I'eau, recouvrir nouveau d'une vingtaine de gouttes d'eau et agiter comme prcdemment. Une traine

bleue apparut dans I'eau et La prparution prend une teinte rose. Lavet et laisser scher comme l'ordinaire. Si la prparution est altre par un dpt, il faut diluer la solution colorante avec de I'alcool mthylique. Si Ia coloration est insuffisante, ajouter de la matire colorante.
Ractifs:
Easne-Bleu d,e mtbylne <<Merck> (d'aprs Leishman) sous

forme solid,e ou en solution. Pour pry>arer la soluton, on prend,

matire colorante pour Jo cmc.
d,e

gr. zo

o gr.3o d,e

mthanolpr. anal. <<Merck*.

Colorati.on uitale.

La colo ration par le bleu de crsyle brillant, le bleu azut ou le bleu de mthylne (d'aprs Schilling) permet de reconnatre les hmaties granulolamenteuses. a) Coloration par le bleu de crsyle brillant. On recouvre les lames de verre soigneusement dgraisses et nettoyes ( conserver dans I'alcool absolu) d'une couche uniforme, ni trop mince, ni trop paisse de bleu de crsyle brillant en solution alcaline. On laisse scher (ce qui est I'afiaire de quelques secondes) puis on tale sur la lame une goutte de sang recueillie de Ia faon habituelle par

piqrire du doigt. Mettre ensuite la prp araton dans une bote de Psrnr garnie de papier filtre humide et I'y laisser pendant 5 minutes; scher l'air, colorer par la solution de Grpnrsl, scher nouveau et examiner au microscope. Par ce procd on rend visible les rticulocytes que I'on rencontre normalement dans la proportion de r S p. mille. L'augmentation du
B

SanE
nombre des rticulocytes est le signe ceftain d'une pousse rgnratrice.
Ractil:

solution alcoolique de

bl,eu d.e ctsyle

brillant r p. taa.

b) Coloration Par le bleu az.ur TI' La coloration se fait comme ci-dessus avec la seule ifir.rtce qu'on recouvr e la lame d'une solution alcooliq.r. . bleu anrt II et q"]oq laisse 1a prparatio pendant r/e heure dans la bote de Pprnl 'Les images obtenues avec le bleu irumide. ^znt r. r"pptocheraient"le plus des conditions naturelles'
Ractif s:

Azur II <<Merck>>. Alcool absolu pr- anal. <<Merck>>' c) Coloration par le bleu de mthylne' On ne colore pas la lame avant de faire l'talement' La orparutin sche I'air est plonge pendant q *'irt.._,ies dans I'alcool mthyliqu pour la durcir. prs I'avoir 1ave I'eau, oh 1 reouvre, sans la ,th." d'une solution de bleu de mthylne <LrrLER))

qu'on laisse en contact pendant 5 ro secorrde. On peut aussi colorer_ La ptp-aration durcie et sch. *", lavage pralable. La dure de la coloration varie snirrnt la force du colorant' Quand cette technique russit, on obtient une pr Plrlti9n bleu ple montrant au microscope . des globules ,o,rn." de la mme couleur. Lorsqu'on soumet la la*i Ia chaleur aprs I'avoir colore, les hmaties prennent une teinte verdtre et les rticulocytes (d. .orrleur fonce) deviennent par ce fait un peu plus nettement visibles.

Ractifs:

Bleu d.e mthylne <<Merck>> en solution d,'aprs Lfiler. Mthanol pr. anal. <<Merck>>.

z. Mthodes de num ration.

F

ormul e I euc o cyta.ir e.

de

scHrr.r,r.c et faire les calculs I'aide du tableau qu'il prconise ( obtenir chez F. et. M. L.c,urENscHr-crn, Berlin). On cesse de compter quand on a atteint un total de r oo ou de zoo lments cellulaires. A l'tat normal, fa proportion de chaque varit de leucocytes est la suivnte: r ) Polynuclaires basophiles oro-* I,o z) Polynuclaires osinophiles 2ro-- 4lra
3

Etablir cette formule d'aprs la technique

) Aylocytes

oro oro

4) Polynuclaires neurrophiles (formes jeunes) . Polynuclaires noyaux en forme 5) de btonnets 6) Folynuclaires noyaux segments

3,O-- 5,O 5B,o- 66,o

2OrO--3OrO

TlLy*phocyres
B)

Monocytes
Elobulaire.

4,o-'

8,o

lumratlon

La dtermination du nombre total des globules -gn&aL loy.gg: et des globules blancs se fait en I'aide de la chambre gradue de Tno*I-Zrrss

ou de la cellule quadrille de Bnrnn (quadrillage de Tunr<).

IO

Sa,ng
a) Globules rougesAspirer le sang prlev pal piqre de I'oreille ou c1e la pulpe du doigt jusqu' la marque. o'5 o1.l,o de la piptte gradue. P,ris, pour obtenir une dilution iu- centime ou au 2 centime, aspirer du chlorure de sodium en solution ? p. cent ou de la solution de Hlvsu jusqu' ce qu'on arrive au niveau de la marque ror. Il-faut veiller ce qu'aucune bulle d'aif ne pntre dans la pipett! pendant les oprations. Ml"ttger le sang et 19 liquide de dilution en agitant pendant t z minutes, puis, aprs avoir liss s'couleT 19t p"eTites gouttes d la pipette, remplir la cellule quadrille. Pour faire la numration au microscope (employer l'objectif no 6 de Lnrcz ou l'objectif C de Zmssl porrt les globules rouges, on se sert en gnra1 des bjectifs-r :), it seilindiqu.de mettre d'abord au point rrt gi"n d carc et de dterminer ensuite le ttr.nbr. de globules rouges enferms dans un petit carc. On n. comptera que les lments faisant rellement partie d carc ou se trouvant cheval sur les lignes de dessous et de gauch. 4t quadrill ag1On passr" s.rc.essivement en revue Bopetits carrs coriespondant 5 grands carrs.

Les calculs sont bass sur les considrations suivantes: Les petits carrs, dont 1es cts rnesurent'lro de mm ont une surface de 1/ooo de mmt - L'paisseur de la couche de sang est de t/rn de mm et son volume, correspondant un carr -rl+ooxl/ro ou t/*o*demm3. Le nombre de globules rouges enferms dans r mrns

II

de sang est donc 4ooo fois plus lev que dans un carr.
Exemple: On a compt tzz globules rouges dans r o cams ce qui fait, en moyenne, par carr,, tzrz. Comme la dilution du sang a t faite au r ss me, il faudra multiplier le nombre des hmaties (tz,z) par f inverse du volume de la couche sanguine (4ooo) et pat roo: TL.ZX Ioo X 4ooo : +88o ooo.
Ractifs:

le cblorure e sodiurn pr. anaL

Solution d,e Hayem
<<Merck>>.

Soluti.on d,e cblorure d,e sodi.um z p. rco (prpare auec

<<Merck>).

b) Globules

blancs.

Aspirer co_mme prcdemment une goutte de sang frais dans la pipette compte-globutel de manire atteindre le niveau de Ia marque r, puis complter au moyen du liquide de dilution lusqu' la marque r r. Ce liquide sera compos d'acide actique 3 o^ auquel on ajoute du violet de gentiane au millime (p"r indispensable). L'acide ctique dtruit les globules rouges; les. noyaux des leuocytes se colorent en violet et deviennent, de ce fiait, plus visibles. Les oprations sont les mmes que poqr la numration des globules rouges avec- la seule difirence qu'on compte les leucocytes dans un plus grand nombre de carrs, parce qu'ils sont
bien moins nombreux que les globules rouges. On fera la numration pour 4 grands carrs (nn subdiviss) de la chambre de bErker, c'est--dire, pour
T2

Sa,ng
les carrs qui sont ux 4 coins du quadrillage. o_n utilisera I'Jbjectif 3 de Lrtru ou l'objectif A. A. de Zplss. Chacun des iarrs a une surface de r x r mm : r mma; l'paisseur de la couche de sang comporte comme prcdemment t/ro de mm; son voirr*e correspondant t/ro de mm'.

Exemple: On a compt z5o globules blancs dans 4 carrs' La dilution est au dixime.

*:?59Il9llo-:6z5o
+

ou bien: Nombre de globules blancs x 25 : 6z5o'

Le nombre normal
gl0bures rouses globules btancs
des

"H:j'tX,fl

""i*,li:r*:;: ) i '!l3iil
) ,.""_Booo
<<Mefck>>

Ractifs: Acid,e actique

jolo (Acide actique pr. anal. d,itu auec de I'eau au dixime)' 3oolo Violet d'e gentiane B <<Merck>>'

IIunrttton des hnotLes granutltlon: vltales' La prise de sang et la coloration se font suivant les mthodes dcries aux pages r et 8 ("-.), Dterminer le nombre de ceJ Iments de la mme m ' nire que celui des hmatoblastes.
Les hmaties granulations vitales prsentent un grand intrt pouf la clinique. Si l'ott faisait leur numration en mme te1Ps d:t iue celte des^ autres lments chaque fois -qu'on procde -l *"*.r, rpts du sang, il serait possible d'apprcier I'activit de la moelle o*r"os (du moinJ dans certains tats patho-

r3

prsence de globules r_ouqgs granulations basophiles est le

logiques). Le nombre des hmaties granulations vitales est un critrium trs important de l'volition des anmies. La

fois

signe caractristique de I'intoxication saturninel Toutes les

que.le_sang_ est en

la solution colorante se fait sur des lames a iriple cncavit ou prsentant une rainure t .*. ^d,,
bo,rd, on emploie comme colorant re bleu de crsyle brillant en solution alcoolique
5vo.

par le Giemsa n'a pas donn de rsultats.) Mthode de coloration de \(/orpnn :

sang contenant un _grand nombre de corpuscrrles- d'Howell_ Jolly, on peur facilement distinguer des debrir de ces lments au moyen de la coloration vitale (mme si la coloration

des globules rouges renfermant plusie.r", gr"o,rlations distinctes, rendues visibles par ra colration .,ritIle; il existe probablement une relation ntre la prsence de .., g"rrrr.rlaiions et la destruction des globules rouges. Dans ,m- p.Ep"ration de

grosses granulations. Dans I'anmie pernicieuse, on rencontre

des globules de grande taillJ renfermant d'abondantes et

tat de r,gn&ation intensifie, on trouve

Le mlange de

e echnique.

lame, recouvrir de la lame divisior, ..rrtrale et oprer le mlange du sang et de ra matire colorante en soulevant et en replaant prusieurs fois lalame couvre-objet. Faire r,rit. pusieurs tale-

couche de colorant les bords d'une i"*. normale division centrale. .Apre* avoir dpos. une grosse goutte de sang dans la conc avit ou dans l rainu"re de la p".i".

Etaler la solution de bleu de crsyle brillant sur r z cm., aux extremites du porteobjet. Laisser scher. A I'aide d'un ringe d soie, tpanir le colorant en une couche rgulire tout en soufflant sur la lame. Recouvrir eilement d'une
une surface de

r4

Sa,ng
ments avec la solution ainsi obtenue sur des lames rigoureusement propres.
Dans certains cas, les globules rouges restent incolores sur des prparations colores par cette mthode; I'image Prsente alors de petits espaces clairs l'endroit o se trouvent les hmaties (chez les malades trs anmiques). Dans ces cas il faudra mlanger plus longuement le sang avec la matire colorante (5 minutes au maximum) pour que celle-ci puisse pntrer dans les globules. Le sang peut rester entre z et 5 minutes sous la lame couvre-,objet sans qu'il s'ensuive des erreurs de numration; on observe parfois de fins caillots qui ne gnent cependant Pas les oprations. Les prparations se conservent bien sans qu'il soit ncessaire de les monter dans

le baume du Canada. On examine f immersion. La numration se fait comme pour les hmatoblastes dans un chmp.microscopique rduit. Si les hmaties granulations vitaleJsont en grand nombre (au-dessus de 5'r'), il sufiira de faire la numration pour zooo globules rouges; si leur taux est compris entre r et s'il est Soto, on comptera 4ooo globules rouges; infrieur ro/o on s'arrtera entre 6ooo et roooo. Les globules rouges sont colors en vert ou en bleu vert; les hmaties granulations vitales sont nettement noir bleu.
Ractifs: Solution d,e Giemsa
<<Merck>>. <<Merck>>

ou mlange d,e May-Griinwald

5olo.

Bleu d,e crsyle brillant en solution alcoolique Xumratlon

d.es

hna,toblastos (plaquettes sanguines).

Aprs avoir recueilli le sang ncessaire l'tablissement de la formule sanguine, dpOser une goutte d'une solution de sulfate de magnsie r{0/o sur

r5

pour r cmc. d'eau; faire cette dilution au moment de l'emploi). Au bout de zo minutes, laver I'eau distille; laisser scher, puis faire la numration au microscope avec I'objectif immersion. Dterminer le nombre des hmatoblastes pour r ooo globules rouges.
Pour faciliter la numration, mettre dans l'oculaire une petite feuille de carton, dans laquelle on aura dcoup un cam; compter les hmaties et les hmatoblastes compris dans le champ circonscrit par ce cadre. Dplacer ensuite la lame de verre latralement et compter les lments dans le nouveau catr ainsi dlimit. On s'arrte de compter quand on a atteint un total de rooo hmaties. Voici comment on calcule le nombre des hmatoblastes contenus dans

l'eau s'est claircie, ajouter de la solution de Grnusr dilue ( r goutte de liquide de Grnuse.

la pulpe du doigt au point (sch au pralable) de la piqre et, par faible pression, faire surdre unpeu de sang. Porter une goutte du mlange de sulfate de Mg et de sang sur une lame de verre rigoureusement propre, puis l'taler en couche trs mince. Laisser scher; colorer selon la mthode habituelle (voir p. 4, formule sanguine) par le mlange de M.q.v-Gnxwnlo qu'on laisse en contact pendant r rtl, minute et, aprs avoir tendu avec de I'eau, laisser encore agft pendant 5 minutes. LIne fois que

r nuns: Exemple: On a compt 5o hmatoblastes pour rooo globules rouges. II y avait donc, dans r mms 5 millions de globules rouges et sox5oooooo : zjoooo hmatoblastes.

rooo

ft

fla,ng
Le nombre normal dcs hmatoblastes est de r3oooo-Uoooo

grossessc, les hmorragies, la chlorose (anmic simple), le cholra et aprs des accs de fivrc. Il cst diminu dans I'anmie pernicieusc, les infections aigus etc.
Ractif s:

par mm3. Ce nombre est augmcnt deus la

fuIlange d,e May-Grnwald (solution d.'osine et de bleu

de mthylne)
<<Mer&,>>.

<<Merch>>.

Solution d,e Giemsa (Bleu dsur, bleu de mthylne, osine)

Sulfate de magnsie (Sulfate de magnsium tout
<<Mer&>>.

pur crist.)

Grou.pes songnlns.

La dtermination des groupes sanguins a acquis une grande importence depuis qu'elle a" t, tudie scientifiguement. On I'applique non seulement en mdecine lgale et pour la recherche de la p^ter nit, mais encore dans la pratique clinique, o elle joue un rle considrable dans la transfusion sangrrine, mthode dont les indications augmentent mesure que sa technique se simplifie. eechnique de la dtermination des groupes sangains. Avec une eiguille ponction bien sche, prlever la fois chez le donneur et chez le receveur j cmc. de sang qu'on recueille dans des tubes centriluger. Laisser le sang se coaguler dans les z tubes et, avec un fil de platine ou d'acier nickel, dtacher soigneusement le caillot adhrant aux parois du verr. Centrif uger ensuite pend ant J minutes la vitesse de zooo 3ooo tours la minute. Prlever le srum dans chacun des tubes avec une pipette (ou si I'on ne dispose que d'une petite quantit de srum, avec
T.7

un aspirateur de \TucHrnor) et le reporter dans deux prouvettes tiquetes <donneur> et <rcepteun. En se servant d'un tube capillaire qu'on peut se fabriquer soi-mme, olr recueille ensuite quelques-uns des globules rouges non coaguls qui se sont dposs dans le culot des tubes et on les lave r z fois avec du srum physiologique. Dans deux prouvettes ayant ro cm. de longueur et o,4 cm. de diamtre, introduire rro cmc. ouo,Scmc. de chacun des srums. Puis, I'aide d'une capillaire, y laisser tomber une petite goutte des hmaties
laves, prleves sur le sang htrologue (les quantits absolues de srum et de globules rouges n'ont

qu'une importance secondaire;

il importe surtout

que les proportions soient les mmes dans les deux tubes). Agiter pour bien rpartir les hmaties dans le srum. Il sufiit que la suspension soit lgrement rose; laisser reposer I'abris de la lumire

pendant 5 minutes la temprature ordinaire, centrifuger pendant r 3 minutes La vitesse de r ooo tours au maximum, puis remuer vivement pou.r remettre en suspension les globules rouges qui se sont sdiments. Dans le cas de non agglutination, les hmaties se rpartissent dans le srum comme prcdemment; dans le cas d'agglutination, c'est--dire d'incompatibilit entre les deux groupes sanguins, les globules rouges continuent former une masse compacte.
Cas

I: Srum du rcepteur *

hmaties du donneur agglutination et par consquent transfu-

sron rmpossible.

r8

Sang

: non agglutination : transfusion possible. Cas III: Srum du donneur f hmaties du rcepteur
transfusion possible sous certaines rserves. Cas IV : Srum du donneur f hmaties du rcepteur : rron agglutination : transfusion possible.
Dans les cas II et IV, la transfusion est toujours possible. Dans le cas III, elle peut ofirir un danger mortel et ne doit tre tente que par un clinicien expriment (en observant certaines prcautions) dans les cas d'urgence o I'on n'a aucun autre donneur sous la main. Dans le cas I, la transfusion est absolument contre-indique et son application constituerait mme une grave faute. Cette mthode peut naturellement tre aussi employe quand on plusieurs donneurs la disposition d'un rcepteur. Elle rpond toutes les exigences de la clinique en ce qui conceffre son exactitude, la srret de ses rsultats, sa rapidit et son indpendance de facteurs inconnus (le vieillissement des srums-tmoin).
Epreuue de Ltrrns pour ls dtermination des Qroupes sanQuins.

CasII: Srum du rcepteur*hmaties du donneur

gglutination

Si I'on ne dispose que d'une faible quantit de srum talon, on proc dera de la faon suivante : Recueillir une goutte du sang examiner dans z cmc. de srum physiologique et I'y rpartir rgulirement. Dposer sur une lame gauche une grosse goutte de srum talon A (anti-B) et droite la rnme quantit de srum B (anti-A). Ajouter r9

ensuite chacune des gouttes de srum tmoin une quantit gele de la solution sanguine et bien mlnger ( lraide d'un fil de platine et en imprimant la-lame un lger balancement). Dans les cas oles srums sont a[ressifs, la raciion d'agglutination sera termine en 5 minutes ou' au plus tard, en ro minutes. On suivra cette raction en mettant la lame sur un fond blanc. (Extrait de F. Scnrr, ,,Die Cechnih d'er Blutgruppenuntersadtung", Bedin, J. Springerr 1932.)

Technlqne de lo cgrosre goutte*

coloration).

(prparation et

Deux trois gouttes de sang sont rparties sur une lame soigneuement nettoye I'alcol et l'ther, de faon couvrir une surface de la dimension d'une piace de ro centimes, puis scJres l'tuveou I'air ( I'abri des insectes). L" couche de sang ne doit pa tre trop paisse perce qu'elle fixerait mal le colorant et qu'en schant elle risquerait de s'cailler. Recouvrir la prparation sdre I'air mais non fixe, de liquide de Giemsa frachement dilu. Au bout de z 3 minutes, loigner soigneusement la solution colorante, puis laver avec cette solution jusqu' disparition de toute trace d'hmoglobine; Ia gutte d sang apparait ce moment d'un blanc gristre. Colorer ensuite pendant Jo minutes par [e Giemsa dilu ( renouveler toutes les 3 minutes). Laver en faisant couler I'eau obliquement sur la lame et laisser scher. Si la techniqu e e t bonne, la prparation prsente une teinte violet rougetre.
20

Sa,ng
Toutes ces manipulations doivent tre faites soigneusement et sant hte, sinon, n'tant pas fixe, la prparation pourrait tre facilement entralne evec I'eau ou les solutions colorantes. Applications cliniques. On emploie cette mthode pour la recherc,he des protozoaires et en particulier pour dceler la prsence du parasite du paludisme.
Remarque.
Seules les globules blancs sont prsen dans

la grosse goutte,

tant donn que les hmaties ont t entraines au lavage.

Ces globules ont une structure un peu dforme, autre que sur

les prparations tales et fixes. Ractil: Solution de Giemsa <<Mer&>>.

IDosa,ge

de lthmogloblne d'a,pre S.lErAppareil de SnHr.r.

L'appareil imagin par Sahli se comPose d'un tube contetent
une solution talon de chlorhydtate d'hmatine (ce tube peut aussi tre remplac par un cylindre de r'erre color reproduisant exactement la couleur de la solution et prsentant l'avantage de ne pas s'altrer comme e11e), d'un autre tube gradu de r r4o qui servira la comparaison, et d'un support en bonite. IJn verre dpoli est plac derrire les tubes qui reoi-

la sorte une lumire gale et diffuse; leurs parties latrales ne sont pas visibles. On prlve le sang avec une pipette capillaire. Pour viter I'altration de la solution type, on la conservera I'abri de la lumire.
vent de

eechnique du osage. Remplir le tube gradu d'une solution dcinormale d'acide chlorhydrique jusqu' la marque ro. Ajou-

2t

ter zo mms de sang prlevs par piqre du doigt ou de l'oreille (soufiler dans la pipette pour chasser le sngr puis rincer), et attendre 5 minutes pendant lesquelles l'hmoglobine rouge se transforme en

chlorhydrate d'hmatine de couleur brune. Diluer goutte goutte avec de l'eau jusqu' ce que la solution prsente une teinte gale celle de l'talon (pour mlanger les liquides, on remue soigneusement avec une mince baguette de veffe ou bien on soufile de I'air dans la solution par la pipette ca-

pillaire)
En lisant le rsultat, il faut se rappeler que les chiffres de l'chelle de Sahli (qui devraient indiquer 1 quantit d'hmoglobine en pour cent du taux normal) ont t tabLis de telle faon, que 8oo/o rpond au taux normal d'hmoglobine pour l'homme et Toolo au taux normal pour la femme. I1 sera donc ncessaire de corriger ces chiffres dans la pratique. Mais cornnze on trouue galement d,ans le commerce d,es tubes d,e Sahli <<corrigs>>, il faud,ra touiours s'informer aaant d,e s'en seruir, lequel on a d.euant soi. On contrlera les rsultats de l'hmomtre avec du sang de plusieurs individus sains.

IDtermimtlon de Ia, valeur globulaire. (Index colorimtrique). On nomme valeur globulaire le rapport de la quantit d'hmoglobine par globule rouge du sang-examin et de la quantit d'hmoglobine par globule rouge d'un sang normal. On admet qu' l'tatnormal, le sang contient 5 millions de globules rouges par mms et que le-taux de I'hmoglobine est de roo0/o; la valeur globulaire normale sera donc ,gale r. On obtint ce rsultat d'une manire schmatique en multipliant par z les deux premiers chifires exprimant le
22

Song
nombre des globules rouges' puis en divisant le taux de l'hmoglobine (gl roo dans ce cas) par le chifire obtenu (roo: roo - t). La valeur globulaire s'obtient aussi en divisant la
quantit d'hmoglobine par le nombre des hmaties.
Supposons que le taux de I'hmoglobine soit gal 6oo/o et le

nombre des globules rouges gal crire:

4 millions. On pourra

6o:4oooooo:roo: joooooo ou bien

La valeur globulaire sera infrieure r, si I'abaissement de

la quantit d'hmoglobine est plus grand que celui du nombre des hmaties; elle sera suprieure r, si le nombre des hmaties est au contraire plus fortement diminu que le taux de
I'hmoglobine.

roo 4oooooo

Po-*

5 ooo ooo

-3o

40

o,7 s.

Valeur globulaire norrnale.' o,85-o,95 (+ o,o5) Si I'on trouve un chiffre infrieur o,85, I'anmie hypochrome est en cause; s'il est suprieut r, il faut penser de l'anmie
hyperchrome.

Bsistance globnl&ite.
Princi.pe. On dtermine le titre de la solution de chlorure de sodium qui produit la dissolution des globules rouges et la mise en libert de I'hmoglobine. eechnigue. Prendre une srie de z4 prouvettes; dans chacune d'elles verser r cmc. de srum physiologique, puis, en commenant pat la 2me, ajouter de I'eau distille en augmentant chaque fois de o, r cmc. par tube. Le titre de la solution de NaCl dcroit du t er tube (o il est de o,o/o) en passnt par le 6e*" (o,6vo) ( r cmc. * o,-i cmc. d'eau: r,5 cmc.) jusqu'au
23

Z(me tube (o,z7vo). Le titre de la solution de Nacl dans chacun des tubes s'obtient en divisant le chifirs o,9 par le volume du liquide. Par exemple : 016o1o. Prlever avec une pipette r cmc. 2rg: I,5 de chacune des solutions et les ielorter dans 24 nouvelles prouvettes. Recueillir sur le sujet jeun ro cmc. de sang veineux qu'on dfibrine en I'agitant lgrement avec *r pglles de verre dans .rri flaco n { larye goulot. Centrifuger le srgr dcanter le sru- q,t'on remplace par du .srum physiologique, centrifuger nouveau et rejeter le liquide. Emulsionner ensuite dans du sru*. pllyriologique le culor de globules rouges laves (faire une mulsion eov.[ Dans dracun des tubes contenant la solution dilue

de NaCl mettre o,5 cmc. de l'mulsion d'rythrocytes 2oolo; agiter lgrement pour que le m-quelques lange se fasse et laisser ieposer. Aprs heures d'attente, il sera facile de conitater o ihmolyse a eu lieu et o elle ne s'est pas produite. On reconnatra tout aussi facilement le tube o la sdimentation dbute (limite infrieure de la rsistance : rsistance maxima). I1 sera, par contre, plus difficile de distinguer le tube o les globules rouges commencent se dissoudre. (Limite suprieure de la rsistance : rsistence minima). A l'tat nortnalr la rsistance globulaire s'tend de o,3 or46ob de NaCl. Limite infrieure de la rsistance globulaire: o,3_-orJzorc de NaCl. Limite s-unrit*re de la rsistance globulairez o,4z-o,46ob de NaCl.
2+

la,ng
trfeere de

lo vltesse d,e eoaguln,tion du sang'

(uniquement) sur un verr de montre plac d.ans tte ote de "t*t dont le fond a t recouvert d'un papier filtre humide (drambre humide). Toutes.les .ioi-tttinutes plonger dans le sang^une mince baguette de verr ou un cheveu, jusqu'au rnoment o in lament de fibrine y reste adhrant. A l'aide d'une montre dclic, noter le temp aprs lequel ce rsultat est obtenu.
leur absolue. D'aprs MtJLLeR-Sprrenr, la vitesse de coagulation cst normalement de 4 5 minutes (mesure la tempreture de z5o, au bain-marie). On ne peut exprimer le temps de coagulabilit normal en va-

r. Faire tomber quelques gouttes de sang veineux

e. Mthode de \Tnnxnn Sqrulrz. On utilise un tube de vere prsentant r z t5 renflements sphriques trs rapprochs les uns des autres et ie terminant en tige droite (tube coagulation de Sc.hultz). On prend d'autre part .r3 4 prouvettes et 1ton verle dans dracune d'e11es '.*t. de srum physiologique. Le sang recueilli r par Ponction veirreuie est r-{idement aspir dan-s

ie tube coagulation. A I'aide d'une montre

dclic, on enrgistre soigneusement le moment o le sang a t recueilli. Au bout de 5 minutes' on co,rpele tube aprs avoir fait un trait de lime, or enlve la premire boule, on la porte dans- la premire piouvette renfermant le srum physiologique ef I'on agite. On fait de mme des interialles de r miute pour les autres boules et I'on prend note de la prmire qui n9 s9 vidg ph's tout ft de son contenu et o la solution de NaCl ne

25

se colore plus _uniformment. Quand la coagulation sera complte, le sang ne se dplacera plis de la boule. PT ce procd, le remps de coaguiabilit normal est de g r3 rninutes.

Beeherche du tempe de sa,ignement. Faire avec l'aiguille de Fna,Nr (q"i doit dpasser 1, + -q) ,rte petite piqrire l'eitrmit du doigt (p"* au lobule de I'oreille). D. zo secondes en o secondes, appliquer une longue bande de papier filtre sur la goutte de sang q,ri se forme en ayant soin de ne pas toucher la peau, jusqu' ce que I'hmomagie s'arrte.
Le saignemeat ainsi provoqu doit s'arrter normalement aprs rrl, minute zr/2 minutes. on trouve un temps de saignement prolong dans tous les tats o le nombre des hmatoblastes est fortement rduit. (La vitesse de coagulation peut nan-

moins tre normale.)

Etant d'une technique dlicate, la recherche du temps de

saignement rr'a une vritable valeur, que lorsqu'elle est faite par des srologistes expriments.

Vitesse de sdimentation des globule rorlge. r. Mthode de STesrnncREN.

M atri.el ncessai.re.
Une seringue de Ptavaz, d'une capacit de a cmc. Une pipette de Leitz gradue de o zoo.

Une pipette sdimentation. Un porte-tubes en mtal nickel si possible.

Ractil:

Citrate d.e soud,e <<Mer&t>).

(Citrate

d,e sod,ium neutre

D..*p.V.

26

Sang
eechnique.

Prendre dans la seringue calibr^e o'+ cmc. d'une solution de citrate de ioude 3,8 ou 50/0, puis aspirer du sang veineux recueilli sur. le sujet- jeun jusqu' la mrque z. Refouler rapidement le coni.ttn de la seringue dans un tube essai, agiter plusieurs fois et spirer le liquide dans la pipette deLeitz jusqu'au nilreau de la marque 2oo- Placer la pipett vrticalement dans le porte--tubes de Westergren. Aprs r z heures, noter |a hauteur de la .olortte d plasma. Le drifire obtenu au bout d'une heure reprsente la vitesse moyenne de sdimentation e*piime en millimtres. La mthode suivante est plus prcise:
Verser dans une prouvette le sang veineux recueilli evec une aiguille sche et flambe de Strauss en p_l1qne. iridi; en p"?l"o"t trs rapidement 4 cmc- (ou e cmc.) faide d'une pi^pette gradue rigooreosement sche et Pfopfe. Laisser couler rn. tt deuxime tube contenant r crnc. (ou or5 cmc.) d'une solution de citrate de soude 3,8070. Agiter, puis procder
comme ci-dessus.

Calcul.
Lecture aprs

heure: a, lecture aprs a heurest h.

Vitesse moyenne de sdimentation

: rJb.
2

Valeurs normales.
Chez I'homme jeun, Chez

la vitesse de sdimentation estde z4mm.

jeun,

des hmaties
des hmaties

la femme

la vitesse de sdimentation

estdee8mm.

La vitesse de sdimentation est acclre pendant la menstruation et la grossesse.

Remarque.' Si le sang veineux a t, soigneusement mlang avec lJ solution de citrate dc soude et 1ue le tube contenant

27

ce mlange a t, bien bouch et plac I'abri du soleil, on pourra prolonger le temps de repos (3 heures au maximum) an de pouvoir faire plusieurs preuves la fois. Il sera d'ailleurs bon de rpter deux fois toute prcuve dc la vitesse

de sdimentation.

z. Procd de LrNznNil,rErER. Les oprations prp aratoires et la rcolte du sang se font comme pour la mthode de '[fl'usrsncnnu, seuls les tubes sdimentation employs par Linzenmeier sont lgrement modifis: ils portent en -l'autre efiet deux divisions distantes I'une de de r I mm. On note le temps ncessaire pour que la
colonne de plasma atteigne Ia marque suprieure. Valeurs nortnales: Chez l'homme jeun 3jo-rjoo (6-zS)
Chcz la femme jeun

3oo--6oo (S_-lo)

, Ia,

-B,eeherche des oxydases. .lla,etion de trfoscnrowsxr benrldine (.Becherch.e des peroryda,see).

Faire un talement comme pour I'examen du sang. !i1er pendant 3 minutes dans l'alcool 9oo/o', laver I'eau distille pour loigner I'alcool. Recouvrir avec une solution frachement prp are de benzidine-Perhydrol qu'on laissera agi.r pendant 5 ro minutes (au maximum). Laver I'eau distille et colorer par le Giemsa.
Ractils:

dtaude, puis aioutet tlz r goutte d,'eau oxygne r p. cent

(sotruton d,e Perhyd,rol au

pr. anal. <<Mer&>>. Peilrytd,rol'pr. anal. <<Mer&>>. La soluton d,e benzidine se prpare de la faon suiaante: dissoud,re quelques cristaux d,e benzidine dans d,e I, eau
Benzid,ine

Alcool

goolo.

Jo*) par crnc. de liquid.e.

28

Sang
Exdnt'en.
L'apparition d'une granulation jaune- d'o1oy jaune brun cerecteri* la prscnce J'oxydases dans les globules. Les granulations rondcs dcs leucocytes osinophiles nc subissent- pas de moditcations. Les granulations des neutrophiles et de leurs forrnes primaires dcviennent si abondantes qu'il n'est en gnral plus possible de les distinguer les unes des autres. Les quelques granuletions isoles -orrrr r"aires peuvent prsenier

ou des granulatins abondantes, mais ne remplissant toujours -partic du protoplasme. La raction des leucocytes qu'une asophis esr ngaiive. fJ faut viter une action,trop forte d-u ractif (excs dJ Perhydrol; contact trop prolong avec la solution de bcnzidinc).

Substsnees oetoniquel. Dosage d'aprs ENcrnlot. Principe.

Soumettrc le sang dsalbumin la distillation et recueillir la premire fraction du distillat constitue par de I'actonc (prorm ou drivant de I'acide actylactique) dans une solution centinormale d'iode. Traiter ensuite I'acide B-oxybutyrique par le mlange sulfochromique: il se formc de I'actone qu'on recueille tttt oo deuxime tube contenant une solution N/roo d'iode. L'iode, non combin est dos par titration au moyen

de l'hyposulte de soude.

Appareillage.
On emploie le mme appareil distiller que celui qui sert Pgur les dosages de l'ammoniaque et de I'ure dans le sang et I'urine.

Cecbni,que.

Dsalbutniner 5 cmc. de seng oxlet (tg. mgf' d'oxalate de polasse Pour r o cmc. de sang) d'aprs [a mthode e For,rN-\tru. Introduire 20 cmc. du filtrat sanguin (correspondant 2 cmc. de s11g total) dan un allon distiller; ajouter r cmc'
29

d'acide sulfuriqu, ?Sol0. Dans le fl.acon rcepteur verser z cmc. de solution lvTroo d'iode additinne de z cmc. de soude caustique concentre. Chaufier le ballon directement la flamme (et non au bainmarie) tout en chassant un fort courant-d'air travers fappareil distiller. L'actone (actone prform et actone drivant de l'acide actylactique) distille dans la solurion iode. La distillation'esi termine au bout de z5 minutes I enlever le flacon rcepteur et, aprs I'avoir bouch soigneusement, le laisser reposer pendant r5 minutes. Relier L'appareil un deuxime flacon dans lequel on aura plac la mme quantit de solution iod et de soude caustique que ci-dessus. Verser ro cmc. de mlange sulfochromique dans le ballon distillation et distiller nouveau pendant e minutes en faisant passer un courant '^i, dans l-'appareil. Ire liquide distill renferme I'actone proven"nr de l'acide F-oxybutyrique. Aprs avoir 6ouch le flacon rcepteur, le laisser reposer comme le premier pendant r 5 . minutes durant lesquelles s'opre la transformation de I'actone en i-odoforme. Verser z cmc. d'acide sulfurique dans le premier r_cipient et titrer sans dlai I'iode libr au moyen d'une solution centinormale d'hyposulfite de rond.. N'ajouter f indicateur que vers la fin et titrer jusqu' dcoloration du liquide. Mme procd po,ri l. deuxime distillat. Calcul.

r
3o

cmc. de

la solution N/roo d'iode

d'actone total, omgr.

correspond omgr. ro?4 z5 d'aade oxybuiyrique, omgr.zz

Sa,ng
d'acide actylactique.*) Si l'on veut recueillir toutes les substances actoniques en une fois, ajouter ds le dbut la solrrtion sulfochrome. En multipliant la quantit d'iode trouve par o)zz) on obtiendra la teneur du sang en substances actoniques exprime en mgr. d'acide actyl-actique.
Ractifs: Oxalate de potassium neutre Pr. anal. <<Merck>>. Solution d,e tungstate d,e Na 7so1s (Cungstate de sodiurn

pr. anal. <<Merck>>). Acide sulfurique dllu (Acid'e sullurique D - r,84 pr. anal. <<Merck>>r'en prend,re zS ctrrc. et faire arsec d,e I'eau une dil,ution too cmc.). Mlange sulfochromique (, gr. d,e bichromate de potasse crist. pr. anal. <<Mer&>> seront additionns d'e 20 ctrtc. d,'acid,e sulfuri,que D:t,84 pr, anal. <<Merck>>; complter too ctnc. par addition d"eau).
Solution de soud,e caustique concentre (Sod,iun hydrigue

pur en solution D: rt3o pr. anal. <Merck>). Solution centinorrnale d'iode (Soluti.on d'iode uolum. rlrs
normale <<Merck>>, d,iluer au dixitne a.uec d,e I'eau). Solution centinormale d'hyposulfite d,e soue (Soluti.on de thiosulfate de soiurn uolum.tf ,snormale <<Merck>>, iluer au ixime ailec de I'eau). Solution d,'anzid,on tolo (prpare tu moyen d,'amid,on so-

luble sec d,'aprs Zulhowsky <<Mer&n).

Acide lactique (Dosage).

Pri.ncipe. Aprs avoir dfqu le sang au moyen de I'acide mtaphosphorique, on prcipite les hydrates de carbone par addition de sulfate de cuivre et d'hydroxyde de calcium. L'acide lactique contenu dans le ltrat incolore et exempt de sucre est ensuite

*) Pour I'explication des chiffres voir V. Rone, Praktikum der pbysiologischen Chemie tgzg, II, p. ar8.

3r

arlec l'ther dimthylique de la pyrocarchine (vratrol). L'intensit de la coloration cst proportionelle la teneur en
aldhyde,

transform en actaldhyde par l'acidc sulfuriquc conccntr. Cettc aldhydc a la proprit dc donner une coloration rouge

Remarques pr liminaires.
est indispensable que tous les rcipien de vcrre utiliss pour ce dosage soient rigoureusement propres et secs. Le
chauffagc des solutions se fera, si possible, l'lectricit, dans un local bicn ar, I'abri de toute action chimique trangre. Le ltrat du prcipit cupro-calcique peut se conscrver dans Ia glacire jusqu'au lendemain, condition d'tre plac dans un flacon bien bouch. La cuve prismatique du colorimtre d'Autenrieth scra talonne I'aide de la solution aqueuse d'un lactate (sch au pralablc poids constant).

rl

Cechnique.

r cmc. de sang, prlev , p*r ponction veineuse selon les principes tablis plus haut, de 6 cmc. d'eau et de r cmc. d'une solution d'acide mtaphosphorique frachement prpare; agiter, laisser le prcipit se dposer, filtrer. Le filtrat clair ne doit plus donner de prcipit avec I'acide sulfosalicylique (albumines). Dans un tube centrifuger verser 4 cmc. du filtrat, r cmc. d'une solution de sulfate du Cu et r gr. d'hydroxyde de Ca; agiter, laisser reposer tout en agitant vigoureusement de temps autre, centrifuger aprs 3ominutes. S'assurer de I'absence de sucres dans le filtrat clair et incolore pr I'opration suivante: mlanger dans une prouvette o,j cmc. du liquide avec r zgouttes d'une solution de naphtol alpha ro0/0, puis faire couler le long de la paroi jusqu'au fond du verre r cmc. d'acide sulfurique concentr. L'^pAdditionner
32

Sang
parition d'une coloration violette caractriselaprsence d'hydrates de carbone.
Le centrifugat est toujours recouvert d'une pellicule de carbonate de chaux et de cuivre. On la transpercera avec prcaution au moment de prlever le liquide afin qu'il n'en pntre aucune parcelle dans la pipette. La filtration du centrifugat ne doit s'effectuer que sur un filtre en laine de verre

et jamais sur un ltre en papier qui pourrait amener une

coloration rouge de la solution de vratrol tout f.ait indpendante de la teneur du liquide en acide lactique.

filtrat limpide mesurs avec unepipette sont introduits dans une prouvette rigoureusement propre et sche (voir note prliminaire). Ajouter goutte goutte 3 cmc. d'acide sulfurique (voir plus loin) en agitant continuellement et en refroidissnt vec de I'eau glace i porter au bainmarie bouillant et I'y laisser pendant 6'lr7 minutes. Sortir du bain et plonger aussitt le tube dans de l'eau glace. Aprs ?" minutes, ajouter o, r cmc. exactement mesurs d'une solution de vratrol, giter vivement et. maintenir pendant 2o minutes au bain-marie la temprature de z5o. L'intensit des colorations est ensuite comp ar,eau colorimtre.
o,S cmc. du
Ractifs:

Acid.e mtapbosphorique

(Acie phospborique glacial,

d,e

mta- en cyl,indres ?r. anal <<Merck>). Sulfate de cuiure en solution rzolo (Su$ate

cuiare crist.

pr. anal. <<Merck>>).

<<Merck>>).

Hyd.roxyd,e d.e calcium (Oxyd,e d.e calciam hyd,rat pr. anal.

Acid,e sul'furigue (Acid,e suffuri.que

<<Merck>).

D : r,84 pr.

anatr.

Ether dlmthyltque de la pyrocatcbine (uratrol) en soluti.on alcoolique (alcool absolu) o,tz5olo.

n. JJ

Acil,e sulfosalicyligue pr. anal. <<Mer&,>>. Naphtol d.- en soluti.on roalo d,ans l,'alcool absolu. (Naph-

tol s,- recrist. trs blanc pr. anal. <<Merck>>). La concentration de I'acide sulfurique utilis pour ce dosage doit tre absolument fixe. Aussi sera-t-il bon de prendre cer. taines prcautions en vue de sa conservation et de son prlvement. On le placera dans un rcipient muni ( sa partie infrieure) d'un robinet et reli une colonne de chlorure de calcium et deux flacons laveurs H2SO4 qui mettent l'acide I'abd de l'humidit de I'air. 3 cmc. de cet acide, additionns de orr cmc. de la solution de vratrol ne doivent donner une coloration vert jaune qu'au bout de quelques minutes (oe pas utiliser l'acide se trouvant dans le conduit du robinet).

Alcool da,ns le sa,ng (Dosage d'aprs Wlnuenx).

Princi,pe.
Cette mthode se base sur la proprit que possde I'acide sulfurique conc. de s'emparer avec avidit de l'alcool. On soumet cet alcool I'oxydation par le bidrromate, puis on titre I'excs de bichromate par Ia technique iodomtrique.

Matriel ncessaire. r.Un flacon d'Edenmeyer d'une capacit, de 5o cmc., en verre d'Ina, bouchant L'meti. Le bouchon rod est muni sa partie suprieure d'un petit crochet de verrei sa partie infrieure il porte une tige qui s'largit vers le bas en une sorte de petit rcipient. Cette tige doit tre assez longue ,pour que le rcipient se trouve l/s-r cm. au-dessus du fond de la olez. Un support en bois pour maintenir le flacon raction et le bouchon de verre (le crochet doit tre 40 cm. au-dessus du niveau de la table). 3. Un capuchon de caoutchouc pouvant s'adapter au col du flacon. Un mince tube de caoutchouc. 4. Une pipette de verre servant la mesure rigoureusement exacte d'une certaine quantit du mlange sulfochromique.*)
*) Or
seulement une quantit dtcrmine, Sc.hmidt Copcnhague.

sc servira le mieur d'une seringue permettant dc prlevcr tcl que f indique le Docteur Max

34

a,ng
j.Un tube capillaire en forme de S servant au prlvement du sang par aspiration (d'aprs L.ruxeolrn). Ce tube ne doit pas
peser plus de 3oo mgr. et sa capacit

doit tre de roo

r5o mmc.

Ces appareils de verre peuvent tre obtenus chez Gnerrlnn et

FnrBonrcss

Sttitzerbach, Thuringe.

Eechnique.

Aprs avoir fait une piqre l'ex*mit du doigt, qu'on a pris soin de nettoyer vec une solution de sublim (et non d'alcool), plonger le tube capillaire dans la goutte de sang qui se forme et attendre que le sang soit 1/z crri. de I'extrmit libre du tube. Nettoyer soigneusement la partie infrieure qui tait en contact avec le sang et tout de suite aprs peser la capillaire. Faire deux autres prlvements de contrle. A l'aide du tube de caoutchouc, le contenu de la capillaire est chass dans le rcipient reli au bouchon de verre, puis la capillaire vide est pese. Introduire dans le flacon d'Erlenmeyer une, quantit exactement mesure du mlange sulfochromique et adapter le capuchon de caoutchouc au col du flacon que I'on immerge dans un bainmarie la temprature de 5o-6o". L'y maintenir pendant z heures, puis I'en retirer et enlever le capuchon. Introduire zS cmc. d'eau dans le flacon essai, agiter doucement; ajouter or5 cmc. d'une solution d'iodure de potassium, et aprs uneminute au plus, titrer au moyen d'une solution l.tTroo d'hyposulfite de Na (ou tlTroo si le mlange sulfochromique est trs concentr). Un peu avant la fin de la titration, ajouter de la solution d'empois d'amidon. Terminer assez rapidement sans tenir compte d'une rapparition ventuelle de la coloration bleue.
35

Paralllement cet examen il sera bon d'en faire deux autres de faon identique. r cmc. de solution centinormale d'hyposulfite de soude correspond o mgr. r r 3 d'alcool. r cmc. de sol. N/s00 d'hyposulte de Na correspond o mgr. 0565 d'alcool. Le sang contient normalement oroJo/oo d'alcool.
Causes d.'erreurs. Les rsultats ne sont que trs lgrement infl.ucncs pat la prsence d'actone dans le sarigr tant donn que I'actone est beaucoup plus difficilement oxyd que I'alcool par le mlange
sulfochtomique. Le procd de Vidmark ne peut tre appliqu

lorsque le sang prsente une teneur leve en acide actylactique. Bn dehots de ces cas, lcs causes d.'erreurs sont ngligeables.

Ractils:

r. Mlange sulfocbromigue: solution de o gr. ro ou o gr. z j

d,e

bicbromate d,e potassium (Bichromate de potassium cfist.

pr. anal. <<Merck>>) dans roo ctrrc. d,'acid,e sulfurique. Dissoud,re le bichromate d,ans r crnc. d,'eau et complter roo cm.c. par ad,d,ition d,'acid,e sulfuriqae (,4cid,e salfuriquc D : t,84 pr. anal. <<Mer&>>). On emploiera I'a solution forte si le taux e I'alcool contenu dans le sang d'passe zolao, la solution faible, s'il est infrieur ao/oo. a. Solution d'iodure d,e potassiurn exempte d'iodates. (Iodure d,e potassium neutre ?r. anal. <<Merc'k>> en solution
5 p. roo).

dixime ou au aingtime). Pour augmenter la d'ure dc conseruation d,e cette solution, aiouter o gr. ro d,e cyanute d,e mercute pour rooo 6rnc. 4. Solwtion d,'amid.on t ?. cent. (Amid'on soluble sec d,' aprs Zulkowski, <<Merck>>). C,outes ces solutions seront conseraes l'abr d'e la lumirc (d,ans d'es fl,acons en erue d,e coulear fonce). Les

j. Solutiot, Nlno ou Nfroo d,'byposulfite de Na (Solwtion d,cinorntale d,e thiosulfate .e sodiunt <<Merck>; d'iluer au

36

Sang
obiets d.e aerre uti.liss Pour

rigoureusetnent ?ro?res et secs (aoit etnarques ptli'm naires, p. r). Chaqie dtermi.nation d.oit tre r.pte d,ewc

leut ptparation d'oittent tte

fois. On fra en utre un d,osage tmoin, dans les mmes 'conditions mais sans sdng. Le titue d,e la solution sulfutique e bchromate d.oit tre urif, chaque lois par d'es preuoes blanc.
Pri,nci.pe.

Ammonia,que da,ns le snng (Dosage).

On efiectue ce dosage suf le sang oxalat, dsalbuminparl'alcool. L'ammoniaqu mis en libert Par lln alcali est entraln par distillation et recueilli dans la solution N/m d'un acide. On iitre I'excs d'acide au moyen de NaOH. Prendre une trs grande prouvette en verfe d'Ina_ (32 mm dc diamtre ro" t7o-tttm. de-longueur) obture d'un bouchon dc caoutchou" p"tt de deux trous I l'un est travers d'un tube de verfe servant au passage de l'air et allant presque jusqu'au fond de l'prouvette, I'autre d'un tube en forme d'U portantun renflement-sphrique. I1 relie le tube raction un flacon cylindrique muni d'acide sulfurique N/5s dans leq-uel est-rebouchon perfor z fois: paf l'une des ouvertufes Passe le tube

Matriel

ncessai,re.

cueilli lmmoniaque distill. C rcipient est obtur d'un

en

verse

que I'on

il

solution dilue de HgSOn destine retenir l'ammoniaque dont peut tre charg. Un thermomtre dont l'chelle, gradue au diiiame de degi, s'tend de oo 6oo, servira mesurer la
temprature.

"rtt tob" de ,terre se raccordant Ia trompe ' L'air fait passer travers ce dispositif l'aide de la tfomPe denra se rendre art ptalable dans un flacon contenant une

U qui plonge jusqu'au fond du liquide, I'autre est tra-

Cechni.que.

Dans un ballon jatg de z5 cmc.' introd-uire-5 cmc. de sang oxalat (cntenant ro mgr. d'oxalate de potassium), ajoutr une goutte de soude caustiqu n solution N7,, puis complter 25 cmc. par addi37

tion d'alcool 95 v'. Agiter vigoureusement et filtrer sur un filtre plis. A I'aide d'une pipette, prlever ensuite eo cmc. du frLtrat (: + cmc. de sang total) que I'on introduit dans le tube distillation. Pour viter la formation de mousse, ajouter z 3 gouttes d'alcool c prylique ou d'huile de paruffine. Dans Le cylindre rcepteur, mesurer j cmc. d'acide sulfurique N/50 et z 3 cmc. d'eau. fnffoduire dans le tube raction r cmc. (ou plus, si 7a raction est acide) d'une solution sature de carbonate de soude et, aprs y avoir laiss tomber une goutte de sol. de phnolphtaline, runir sans dLai au cylindre rcepteur. Faire fonctionner la trompe et chaufier le
essai 1l'ammoniaque qui se dgageest entran pat I'air dans le rcipient contenant de l'acide sulfurique (veiller ce que les tubes plongent jusqu'au fond des liquides). Distiller pendantenvirn [5mnutes une temprature ne dpassant pas 5o' (rudessus.d 5o", d'autres substances pourraint donner naissance de 1'ammoniaque).

tube

mthyle. Pour le contrle des rsultats, il seia bon de faire une deuxime dtermination ainsi qu'une
preuve blanc.

L'acide sulfurique rest en solution est titr au moyet de NaOH u/uo en prsence de rouge de

Ractifs: Aci.d,e sulfuri.gue N/uo (obtenu par dilution d,e la soluti.on d,'acid,e sulfuri.que aolum. lf ,s normale >Merck>>). Sotd.e caustique Nluo (obtenue par dilution d,e la soluti.on de sodium causti,que uolum. rf ,o normale <<Merck>>). Rouge d,e mtbyle <<Merck>> (d,issoud,re o gr. ro dans un
mlange d.e joo cmc. d.'alcool goolo et d,e zoo cmc. d,'eau).

3B

Sa,ng
Solution sature de carbonate d'e soud,e (prpare auec le carbonate d,e sodium crist. pr. anal. <<Merck>>).

Alcoal g5o1o. Alcool caprylique ou bui.le d'e paraffine (Alcool octyliqu-e normal scnd'al're pr. andl. <<Merck>> ou paraft'ine li'quid'e
D.A.B.6
<<Merck>>). <<Merck>>

Phnolphtali.ne

en solution

rolo.

Calcul.

cmc. d'acide sulfurique N/uo correspond omgr.34 d'am-

moniaque.

Suero sanguin (Dosage d'aprs HlcnooRN-JENSEN). Principe. Le filtrat sanguin

dsalbumin est trt chaud Par une solution alcaline de ferricyanure de potassium. Le glucose contenu dans le sang rduit le femicyanure qui est transform en ferrocyanufe; on prcipite ce dernier par le sulfate de zinc sous forme de ferrocyanure de ziflc. Le ferricyanure non transform est dos iodomtriquement. La taction est feprsente par l'quation suivante: z HaFeCNo -l- zHI : z HaFeCNd + I2

Cecltnique. Verser dans une prouvette r cmc. de NaOH N/'o et 5 cmc. d'une solution de sulfate de zlnc. or+50!rAjuter o, r cmc. de sang recueilli au niveau du digt oudu lobule de I'oreillel'aide d'une pipette capllaire (souffler dans la pipette pour Ia dbarraiser du iang, puis la lavf deux fois I'eau). Plonger le tub dns de I'eau bouillante etl'ymaintenir pendant 3 minutes. Jeter Ie contenu sur un filtre (diamtr de I'entonnoir 3 _ 4 cm.).- Avant de s'en servir, humecter le papier filtre ou le coton avec de I'eau distille. Laver le filtre et l'prou39

vette deux reprises avec 3 cmc. d'eau, recueillir le frLttat, ajouter z cmc. d'une solution trTroo de ferricyanure de potassium (se servir d'une microburette lorsqu'og a un grand nornbre de dosages faire), plonger le tube dans le bain-marie bouillant et lty maintenir pendant r 5 minutes. Faire refroidir rapidement et titrer au plus tard aprs 6 heures. Titration: Ajouter 3 cmc. d'une solution compose de sulfate de zinc, d'iodure de potassium, de ihlorure de Na (voir plus bas), z cmc. d'acide actique 3r!, et une trois gouttes de solution d'empois d'amidon. A I'aide d'une microburette, verser goutte goutte dans le liquide, de la solution NTroo d'hyposultte de soude jusqu' dcoloration totale (poser le flacon sur une surface blanche). Pour contrler les rsultats, il sera bon de faire deux dosages successifs. Paralllement chaque dosage, on fera un essai blanc.
Ractils:
Soud.e caastigue N/rs (Solution e sod,ium caustique uolum.

rfrs normale

<<Merck>). o,45o1o

Sulfate de z.nc en solution pr. anal. <<MercA>>).

(Sulfate d,e zinc crist.

Solution d,e ferricyanure d.e potassium Nlzoo (prendre r gr. 65 de fenicyanure d,e potassi.urn pr. anal. <<Merdk>> et to gr. 6o d,e carbonate d,e sodi.um anhyd,re pr. anal. <<Merck>> ?our rooo gr. d,'eau). Iodure d,e potassium sulfate d,e zinc chlorure d.e sadium en solution (So gr. d,e sulfate de zinc pr. anal. <<Merck>> et z5o gr. d,e chlorure d,e sod,ium pr. anal. <<Merck>>; complter aaec d,e I'eau roeo cmc.). Auant l'emploi,
aiouter
z gr. So d,'iod,ure d.e potassium (Iod,ure d,e potassium trs pur pr. anal. <Merch>) par roo cmc.

+a

amg
Acid,e actique
ti.que glacial

jolo obtenu par d'ilution d,e I'acid'e ac' <<Merck>> 9g-rooolo. Solution d.'etnpois d"ami.d'on. Dissoud're r gr. 'amid'on (Am.don soluble sec <<Merck>) d'ans 3 + cmc. d"eau; con' plter roo cmc. par addition d,'une soluti'on sature d'e

pr. anal.

cblorure de sodum, Solution N/roo d'iodate d,e potassiurn. Prend,re ogt. r78j5 d'iodate de potassium anbyd're pr. anal. <<Mer&,>> et complter tooo ctltc, a.uec d.e I'eau. Solution d.'hyposulf.te de soud'e Nlroo obtenue par d'iluton

d,'une solution normale ou d'cinorm'ale e thiosulfate d'e sodium D.A.B. 6 <<Mer&>.

Vrif.cation d'es solutions auant I'emploi: z ctnc. de la solution d'iodate d,e potassium{2cmc.d,'acid'e

actique jolo { jcmc. d'e solution ZwSO+'KI'NaCl*t j gouttes d,e solution d"empois d"ami'don d,oiuent exiger exactement z cmc. d.e solution d"hyposul,fite d,e soud'e-

CaIcuIs. Pour obtenir la quantit de glucose en mgr. p. cent, on cherchera d'abord dans la table qui suit le chiffre corresPondant au nombre de cmc. d'hyposulte employs pour le premier dosage et le chiffre corresPondant au nombre de cmc. 'hyposultte employs pour le dosage tmoin, puis on fera la difirence des deux chiffres. Celle-ci reprsenteta \a teoeuf du sang en glucose exprime en mgr. Par roo cmc.: cmc. de sol. d'hyposulfite N/em : mgr. de glucose Per roo cmc. de sang. Exemple: Supposons que le premier dosage ait demand r,16 cmc. d'hyposulfi.te, le dosage tmoin r,67 cmc. On trouvera dans la table les chifires corresPondants : r48 et o57. Leur difirence:9r.Le taux de la glycmie est de gr mgr. o/0. Dans les calculs il faudra tenir comPte de tout changement du titre de la solution d'hyposulfite, constat, at moment de sa vrication (voir plus haut).

o
oro

,
350 J27 306 286 266 2+7
228

orr
o12

38t 382 379 376

3tt

o'3
ot4

33r 3ro
290 270

o'I
o16 o17

2rr

or8

232 213 2II

312 329 308 288 268 249 230

348

lnt li tr" 343

l3+t
243

3o4 I 3oz 300 284 i z8z 280 264 z6z z6o

32t i 323 32r

24t

24r

o'9 rro

r9t
r+r r24
088

224 222 2c,6 2c+ t93 19r r90 r88 r86

226 209 208
172

Irr
r12

rt9 rt7

t77 17t 173

Ir3 Trf
T16

It4 r06
470

rt7
rr8

or2
o34

It9 or7

r70 r68 r65 164 | fi3 16r r,o I r52 rto r48 t46 +3 r,r r39 r38 r36 r3+ r32 I3I r29 145 r25 | T",2 lr27 ro8 | r22 r20 rr9 r17 II' II3 rrr r,3 rc4 TQ2 roI 099 og7 09, o93 lrro o9o | r,+ log2 I r,, o86 o84 o83 o8r 079 o77 o7t Io74 o72 I 068 c,66 o6J o63 o6t o59 o57 lo56 o54 | r,6 oto 048 o47 o4t o43 o4r o39 o38 q6 | r,7 o32 03r o29 o27 o2t o24 o22 | or9 | r,8 ort or4 oI2 oIo oo8 o07 oo5 lo2o ooz I r,9 oo3 |

l6z 36al35t 3y8 | o,o 34r :r8 | l:6 333 | o,r 3r8 3t6 | 7t4 3r2 | or2 298 296 | 294 292 o,3 | 278 276 272 | o,4 2r9 2t7 Ilz74 253 | o,5 2tt 2+o 48 234 o,6 22r 2r9 146 2r5 | Or7 | l2r7 202 2oo I rgg t97 | o,8 r84 r8z lrSr V9 | o,9

rtt rt4

Cnleium da,ns le sa,ng (Dosage).

Pri,nci,pe.
Le Calcium est transform en oxalate qu'on dose au moyen du permanganate de potassium (Mthode de Knrurn et Trso,rr,r,).

Cechni.que.

Introduire dans un tube centrifuger (capacit r5 cmc., diamtre au niveau de la marque orr cmc.: 7 mm) rigoureusement propre, z cm. de srum,
cmc. d'une solution d'oxaz cmc. d'une solution sature d'actat Aprs avoir bien a,git le liquide on le :"i.i$laiss -reposer pendnt 3o minutes, puis on agie de nouveau et finalement on centrifuge pendant j minutes, (la vitesse

late d'ammoniaque

z cmc. d'eau distille, r

goto(et

+2

Sla,ng

de rotation doit tre assez leve). On

cante soigneusement

d'

pour loigner le restant de |a solution, on retourne i. ,r.tt. -essai sur un papier filtre (le ct ouvert du tube doit tre sec). A I'aide d'une mince baguette de verre on remet en suspension le prci[ite, puis on le reprend par 3 cmc. d'ammoniaque ilng (z cmc. de- solution ammoniacale concentre + 98 cmc. d'eau) qu:9n fait couler en un mince jet le long des parois d l'prouvette, pour la laver. bentrifu.t, dcanter le liquide surn ageant, laver z fois, cJntrifuger nouveau. Aprs avoir,loign l'eau de lavag, ajouter 2 cmc. d'une solution peu pr, ,rorir"le d'acide sulfuTiq"., (18 .*.. de it'Sn concentr pour un litre d'eu). Plonger le tube centrifugei pendant r minute dans de I'eau bouillante et tit?er chaud u moyen d'une solution N/,,.00 de perm anganate de potassium jugqu' coloration tose persistante (pen dant au moins une minute). Si la ?itration se prolonge, il faudra rchauffer le tube centrifuger au bain-marie.
La solution N/roo de permanganate de potassium doit se prparer avant I'usage par dilution d'une solution Nlro. On la iitr"t" chaque fois au moment de s'en servir l'aide d'ue solution N/*o d'oxalate de sodium. Cette solution d'oxalate de
soude se conserve trs bien pendant quelques mois. Ractifs:

le

liquide - surng eant t,

Solution d"oxalate d'ammoniaque

niunt.

pr. anal. <Merck>).

4o1o

(Oxalate d"ammo'
sod,um

Solution sature d'actate e sodium (Actate de

pr. anal. <<Merck>>). Solution ammoni.acale concentre (Ammoniaque en solution D : o,Qro, pr. anal. <<Merck>).

43

Acie sulfurique D
Solution

N/r"oo d.e permanganate de potassium (Solution de permanganate d,e potassium aolum. rf ns normale <<Mer&>>).

- r,84 (pr. anal. <<Merc,k>>).

l,'oxal,ate d,e sodium pr- anal. <<Merck>> d,'aprs Siensen.

Solution Nlroo d,'oxalate de sodium obtenue parfir e

Calculs.
cmc. de la solution N/r* de KMnOa correspond o mgr. zo de Calcium. Le nombre de mgr. de Ca par roo cmc. de r?rom

roo'o'2
2

'x

(dduire de la quantit utilise de permanga-

furique). roo cmc. de srum humain renferment normalement 9 ro mgr. de Calcium.

nater le nombre de cmc. qui seraient ncessaires pour produire une coloration de la mme intensit dans a cmc. e I'aiide sul-

Chlorures d.arrs le song (Dosage). Principe. En chauffant le sang ou le srum avec une quantit dter-

mine d'azotate d'argent en solution N/so (prpare avec de I'acide azotique concentr et non avec de I'eau) on dtruit les matires albuminoldes du sang; le chlore prcipite sous forme de chlorure d'argent. on titre I'excs de nitrate d'argent au moyen d'une solution de sulfocyanure de potassium.

qg'_ obtention d'une liqueur clairel jauntre. Ce rsultat s'obtient aprs t z heures pur le srum, ?Prs r 2- heures seulement pour le sang. Ajouter 6 cmc. d'eau et 6 cmc. d'alun de fer erisoluiion j p. cent,-puis titrer I'excs d'azotate d'argent par une solution wTuo de sulfocyanure de potassium. Il

Cectnique. Dans un flacon d'Er1enmeyer, mesurer r cmc. de srum ou de sang et B cmc. de la solution N/oo d'azotate d'argelt (prpare vec l'acide azotique). Maintenfu La fiole au bain-marie rg1 roo"lu-

++

Sang
sera bon de faire cette dtermination en double et d'entreprendre paralllement des preuves blanc. Calculs.

r cmc. d'azotate d'argent utilis corresPond omgr'7o9r de Cl. Soustraire o,o4 cc., titre de correction empiriquer-du nombre de centimtt.. cubes utiliss de la solution de sulfocyanure.

Ractifs:
Azotate d"argent (Nitrate d"argent crist. pr. anal. <Mer&>| Dissoud.re ogr.6795 d'azotate d,'argent d.ans un ?eu d"eau et complter 2oo crnc. auec d'e I'acid.e azotique D: rr4' Acide azotique (Acid'e nitrique pr. anal. <<Merck>>, D : tr4)' Solution Nlss d,e sulfocyanure d,e potassiurn (Soluton d'e sulfocyanure d'e potassium aol. tlt normale <<Mer&>> en di' solution au cinqaime). Alun d,e fer en solution 5o1o (Fer [deutoxydeJ-Antnzoniurn

sulfate pr. anal,.

<<Merck>>).

Cholestrine dans le rang (Dosage). (Mimodosage nphlomtrique Par la mthode la digitonine de MtJHLeocK et KnurueNN.)
Pri,ncipe.
Le srum,le sang ou les ofganes sont puiss par I'alcool-ther. La solution actnique de holestrine, obtenue 1laf un procd de purication, est ;dditionne de digitonine et -d.9"": il apperaii un trouble colloidal qu'on comPare au nphlomtre avec celui qui se produit dans une solution talon de cholestrine pufe. AprJ avoir saponifi les thers de la cholestrine, on les dose d la mme manire que la cholestrine non thrite. Cette mthode permet de dterminer des quantits de cholestrine allant de omgr.zo omgr.8o. Si les solutions sont plus concentres, elles devront tre dilues.

Extracti.on.

Dans environ 50 cmc. d'un mlange d'alcool et d'ther (3 parties d'alcool Pour une partie d'ther), laisser tomber

+5

goutte goutte 3 cmc. de srum ou z cmc. de sang oxalat,. Aprs avoir laiss reposer quelque temps, filtrer la solution, puis rincer le filtre trs soigneusement I'alcool-ther. Le filtrat vapor siccit laisse un rsidu, {ui est repris plusieurs fois par I'actone. Cette solution actonique est introduite dans un flacon jaug et complte zj cmc.t elle est alors prte servir pour les dosages de la cholest-

rine libre et thrifie.

Dosage d.e la cholestrine libre.

Verser dans un becher d'une capacit de 5o cmc., 8 cmc. de l'extrait actonique, rduire z,S cmc. environ, ajoutel o,5 cmc. d'une solution alcoolique de digitonine 1o1o et o,j cmc. d'eau. Le liquide actonique est lentement vapor jusqu' disparition de I'odeur de I'actone.
Veiller ce que I'vaporation se fasse lentement (dwe, 1/g heure au moins) pour que la prcipitation du complexe cholestrine-digitonide soit totale. Le liquide ne doit en aucun
cas tre vapor jusqu' siccit complte.

Le rsidu est additionn de zo cmc. d'ther-actone ( t o + 4) aprs au moins 1/, heure de repos, il est "t, fiItr sur un filtre durci. (Laisser le plu possible du prcipit de digitonide dans le ballon). On limine de cette flaon les matires grasses qui pourraient rendre malaise la comparaison nphlomtrique. On dcante encore deux fois, mais sans qu'il soit ncessaire de laisser reposer avec l'theractone. La cholestrine-digitonide reste dans le ballon est dissoute draud dans I'alcool mthylique, (le filtre, lav au mthanol chaud), puis la solutio est vapore siccit. Reprendre le rsidu par S cmc. d'alcool mthylique exactement mesurs et ajouter ro cmc. d'alcool thylique.
+6

Sa,ng
Prparer trois solutions tmoin contenant respectivement omgr.35, omgr. 50 et omgr.65 de cfro-mlange de 5 cmc. d'alcool mlestrine dans un thylique et r o cmc. d'alcool thylique. A chacune de ces solutions ajoutel o,5 cmc. d'une solution de digitonine 1o7o et j cmc. d'eau. Aprs avoir additionn la solution analyser de la mme quantit d'eau, on compare les 4 tubes et I'on cherche celui dont I'aspect se rapproche le plus de celui de Ia solution titrer (cette dtermination peut se faire l'il nu pour commencer). Au bout de 5 minutes, on efiectuerala comparaison aunphlomtre de KI-TTNMANN (viter la formation de bulles d'at en laissant couler la solution sur les parois de la cuvette de I'appareil). La quantit de cholestrine contenue dans la solution doser, se dduit par un simple calcul des chifires lus sur Ie nphIomtre.
Dosage de la cholestrine totale.

Evaporer siccit 3 cmc. de I'extrait ectonique. Dissoudre le rsidu dans r o cmc. d'alcool thylique, aojuter o, r cmc. de lessive de soude concentte et chaufier au bain-marie jusqu' concentration r cmc. Ajouter sans dlai o,j cmc. d'une solution molculaire (3lt normale) d'acide phosphorique et r S cmc. environ d'ther de ptrole, agiter vigoureusement, chaufier bullition (attention ! liquides inflammables !) et dcanter l'ther de ptrole sur un petit filtre. Rpter la dcantation + S fois, vaporer l'ther de ptrole et reprendre le rsidu par z,S cmc. d'actone. Les oprations
+7

suivantes s'effectueront comme pour le dosage de la cholestrine libre. olestrine tbrifi e. Pour obtenir la teneur en cholestrine thrifie, retrancher la quantit trouve de cholestrine libre de la cholestrine totale.
Ch

Ractls:
Mlange d,'alcool et d,'ther (d,'aprs Bloor): J parties d,'alcool 96o1o (obtenu pnr d,ilution d,e I'alcool absolu pr. anal. <<Merck>) et une partie d,'ther pr. anal. <<Merck>>. Actone pr. anal. <<Merck>>.

Solution de dlgitonine (d,issoud.re

<<Mer&,>> d,ans

r gr.

d,e

digitonine crist.

roo cn 6. d,'alcool

96o1o).

Mlange ther-actone rol4.

Alcool mthylique (Mthanol pr. anal. <Merck>>). Chol,estrine <<Merck>>. En d.issoud,re zo ngr. d.ans roo cmc.
d,'alcool.

Solution de soude caustque (Sodium hydrique en solution anal. <<lVlerck>). Ether de ptrole (Benzne d,e ptrole pr. anal. <Merck>). Solution molculaire (J fois normale) d,'acide phosphorique.

ID : rg| ?r.

Eau bid.istille.

Plgments blltoires dons le sang! (Dosage d'aprs Hr,lnamrs ven DEN Bnncn).
Princi.pe.
Les pigments biliaires contenus dans le srum passent dans I'alcool employ pour l'limination des matires albuminoTdes; la liqueur alcoolique donne une diazoraction positive. On compare au colorimtre d'Aursxnrsru la coloration obtenue avec celle donne par une solution thre de sulfocJranure de fer.

48

Song
e echnigue.

Dans un tube centrifuger introduire r cmc. de srum limpide, mesur avec une pipette. Ajouter goutte goutte z cmc. d'alcool g6vo, mlanger nec prcution en balanant lgrement le verre et centrifuger pour que les matires albuminodes se dposent. Porter r cmc. du liquide limpide surnagent, additionn de o,25 cmc. du mlange des ractifs diazo a et b dans la cuve du colorimtre d'Autenrieth. On prpare la solution tmoin en agitant rz cmc. d'ther avec 3 cmc. d'un mlange cmpos d'une solution de sulfocyanure de potassium et de l'talon ferrique dilu. Cette solution th&e, de couleur rougetre, est porte dans la cuve prismatique du colorimtre. L'intensit de sa colortion coriespond celle d'une solution debilirubine r : zoooo (omgr. J% de bilirubine).
Racti.fs:

Ractif diazo
<Merck>).

a (Nitrite de

sodi.unz

en solwtiort

50/oo

Ractif diaxo b (Acid,e sulfanilique <<Merck>>). Dissowd.re J grd.'aci.d'e sulfanilique d'ans d'e l'eau, aiouter 50 gr. d"acid'e cblorbyd,rique, D : rrr24, ?r. anal. <<Merck>>, et comPlter

t litre par addi.ti.on d'eau. Au moment d,e I'emploi., mlanger o'2 cmc. d'u ractif a et ro crnc. d'u ractif b. Le mlange ne doi't pas contenir de l'HNOz en excs et ne doit d,onc pas bleuir un papier
I'amidon et l'iod'ure d'e potasse. Alcool 96o1o, D.A.B.6.
Etber pr. anal. <<Merck>>. Solution talon: Mlanger une solution d'e sulfocyanute d'e potassium zo p. too a.uec une solution ferrique ti.tre (ogr.t5o| d'alun de fer et 50 cmc. d,'acid'e chlorbyd't'ique

+9

concefltr,
Prend,re

ro crnc. d,e la solution ainsi obtenue et I'introduire d,ans une fiole iauge d,e e1o crntc., aiouter zS cvnc. d,'acid,e chlorbyd,rique (D : r,rg) et complter z1o cnzc. par ad,dition d,'eau.

ID : r,rg|;

cofiLplte roo crnc. a.uec d,e I'eau).

Calculs.

Il faudra tenir compte de ce que la solution titrer est une dilution au cinquime du srum primitif (par addition de 1'a1cool et des ractifs). Si, en plaant les solutions la mme hauteur, cllcs prscntaient la mme intensit de coloration, la solution titrer contiendrait la mme quantit de bilirubine que l'talon, soit r p. zoo ooo; la teneur en bilirubine de la solution dilue serait donc de r p.40 ooo. Si, d'autre part, l'galit des teintes ne s'obtient qu'en moditant l'paisseur de la couche liquide, on calculera la teneur en bilirubine de la faon
suivante:

Lecture au colorimtre. qozs roo cmc.

rngr. de bilirubine pour

Exemple: Supposons que la mme intensit de coloration soit atteinte au chiffre 6o de l'chelle. Teneur en bilirubine: 6o X orazs: r rrrgr. .5 p. roo.

Bfltrublrre

d.ans

lo eru.m sangrdn.

Dosage d'aprs la mthode de BAKLTSCHUK.

Introduire dans une srie de tubes essai de mme calibre d'un diamtre d'environ r cm. et Z cm. de hauteur, o,5 cmc. de solution physiologique. Un autre tube est garni de r cmc. de srum (sans solution de chlorure de sodium) : on en prlve avec une pipette o,j cmc. qu'on verse dans le deuxime tube. Aprs avoir bien mlang, prendre aussi dans celui-ci o,S cmc. qu'on porte dans le troisime tube et ainsi de suite jusqu'au dernier, qui doitprsenter une solution totalement incolore. Les o,5 cmc. qu'on en prlve, seront jets.
5o

Sla,ng Verser ensuite dans c;haque tube essai o,5 cmc. d'alcool 96v' puis, aprs avoir agit, y ajouter o,j cmc. de racf. <diazo> (voir ci-dessous) frachement prpe. Le srum normal donne une coloration grise, lgrement rostre; les srums ictriques, forte concentration en bilirubine, dveloppent une belle coloration rouge clair ou pourpre. Dans le dernier tube prsentant une teinte rostre introduire orj cmc. d'ther, puis comparer sur un fond blanc la coloration des deux couc;hes de liquide superposes. On peut admettre pour cette dernire solution (dont la couleur est encore lgrement rose) une teneur en bilirubine de omgr.or6 par centimtre cube de srum ou de r mgr.6o par roocmc. La teneur norrnale est de r mgr. 6o-6mgr. zS par roo cmc. de srum.
Ractifs:
Sel marin (Chlorure d,e sodium tout pur pr. anal. <<Merch>>).

tllcool
<<Merch>).

96o1o,

D.A.B.6

<<Merck>>. o,5o1o

Ractif d.iazo a (solution e ni,trite d.e sodium

b (acid,e sulfani.li.que <<Mer&>>). Di.ssoud,re gr. 'aci,e sufianiligue d.ans d.e l'eau, aiouter So gr. S d.'acie cblorhydriqae pr. anal. <<Mer&,>>, D. : r,r24 et complter r litre auec d,e I'eau.
Ractif diazo
Ces d,eux sol,utions serant m.langes ( raison d,e o,e cmc. d,u ractif a et ro cmc. d,e b) immd,iatement aaant l,eur

emploi. Le rnlange ne d,oit pas renfertner d,'acie HNOz en excs; il ne faut d,onc ?as qu'il bleuisse le papief
d'

iodure d,e potassium-amid,on.

<<Merck>>.

Ether pr. anal.

5,I

Acide uriqne. (Dosage d'aprs Forns-\7u-Npusrunn).

Pri,ncipe.
Cette mthode consiste rduire l'acide phosphotungstique par l'acide urique; on obtient une liqueur bleue. L'intensit de sa coloration est proportionnelle la teneur du sang en acide

urique.

e echnigue.

La comparaison des teintes se fait au colorimtre d'AurnNRrErH. On prend ro cmc. d'une solution talon d'acide urique (voir plus bas) et on les complte roo cmc. (zmgr. p. loo) par additiond'eau.

A I'aide d'une pipette on mesute zo cmc. de cette solution dans la cuve prismatique du colorimtre
et on I'additionne de 9 cmc. d'une solution sature de soude et de r cmc. du acttf. phosphotungstique. On porte dans la cuve d'Autenrieth z cmc de srum dfqu (voir dtermination de la glycmie), o,9 cmc. de la solution sature de soude, o,r cmc. du ractif phosphotungstique (voir plus bas) et l'on fait le mlange. Aprs avoir laiss en repos pendant B minutes, oo compare I'intensit des colmations.
Ractifs: I. Ractif pbosphotungstique : Cungst ate d'e s oud'e (Cungstate d'e s odiurn pr. anal -< M et ck>). Aci.d.e phosphorique ena. 8401o (Aci'de phosphorique Dzl - rtru. rr7, ?r. anal. <<Merck>). Brome (Brome pr. anal. <<Merck>). Carbonate de lithium (Carbonate d'e lithium tout pur D.A.B.6 <<Merck>>).

52

Sa,ng
II.
Solution talon d,'acid,e urique:

Acid,e uri,que (Acid,e uri.que pour I'usage scientifique

<Merck>).

Carbonate d,e soude en solution sature ezolo (Carbonate

de sodi.um crist. pr. anal. <Mer&>). Sol,ution d'acide sul,furi'que 2f s normale (Prend're rooo ctflcd.e la soluti.on d,'aci'd'e sulfuri.que aolum. normale <<Merck>> et les diluer aue6 Soo cmc. d"eau).

Prparation du ractif phosphotungstigue. I.

Dans un Erlenmeyer de 5oo cmc. traiter roo gr. de tungstate de soude (NazTuOnlzHzO) par 16o cmc. d'eau jusqu' dissolution, puis ajouter 50 cmc. d'acide phosphorique 85% en refroidissant avec soin pendant toute la dure de l'opration et, pendant la nuit, y fafue passer un courant de HsS. Au bout de rz heures environ, ltrer (ne pas laver le filtre), f.afte bouillir le filtrat pendant une heure dans un ballon muni d'un
dcolore par du Br qu'on y laisse tomber goutte goutte. Ecarter I'excs de Br en faisant bouillir le liquide. II. Dans un Erlenmeyer d'un litre, faire bouillir un mlange de 2 S gt. de carbon ate delithium, 2oo cmc. d' eau et 50 cmc. d acide phosphorique 85olo jusqu' cessation du dgagement d'acide carbonique. Laisser refroidir. Mlanger les solutions I et II et complter rooo cmc. dans un flacon jaug.

ftf.rig&ant

reflux, et

filtrer nouveau. La solution est ensuite

Prparation de la solution talon d,'acide uriqae.

Dissoudre zoo mgr. d'acide urique dans 5o cmc. d'une solution de carbonate de lithium o,5o/o; diluer par addition de 2jo cmc. d'eau, transvaser le liquide dans un ballon iaug d'un litre et complter rooo cmc. Cette solution peut se conserver sans altration pendant environ 2 semaines condition d'tre place dans une glacire.

Ure. Princi,pe.

r.

Dosage par l'urase.

Aprs avoir dsalbumin le sang au moyen de I'alcool 95 % ou u tungstate de sodium, on trans{orme 1'ure par lourase

53

en carbonate d'ammonium et on libre I'ammoniaque par ad-

dition d'alcali. L'ammoniaque distill est recueilli dans une solution N/6q d'acide sulfurique. On en titre l'excs, non combin, par une solution N/so de NaOH.

Appar eillage nce s s aire. Le mme que pour le dosage de l'ammoniaque. Cecbnique. j cmc. du filtrat sanguin dfqu (mme mthode que pour le dosage de l'ammoniaque, voir plge 3T) (: r cmc. de sang total) sont aspirs dans une iipette, puis transfrs dans un ballon en verre d'Ina. Ajouter r cmc. de la solution de phosphates, z cmc. de la solution d'urase ro0/o et laisser tomber dans le liquid e z 3 gouttes d'alcool caprylique. Aprs avoir bien bouch le tube raction, le maintenir au bain-marie ou l'tuve pendant r 5 minutes la temp rature de 5oo, puis ajouter du carbonate de sodium jusqu' ce que la raction du liquide soit faiblement alcaline. Runir les connexions. Les oprations suivantes s'efiectuent comme pour le dosage de l'ammoniaque.
S

olutions ncessaires..

Acid.e sulfurique Nl6s (prpar auec la solution 'aci.de sulfurgue uolum. tf ,s normale <<Merck>>). Soud,e caustique Nluo (obtenue par dilution de la soluti.on caustique aolum. rf n normale <<Merck>>). Rouge d,e mthyle <<Mer&>> (en d,issoud,re o gr. ro ans Joo cmc. d'alcool goolo et zoo cmc. d,'eaw). Solution sature de carbonate d,e sodiurn (Carbonate d,e so-

dium crist. pr. anal. <<Mer&>). Alcool g5olo. Alcool capryli.que (Alcool octylique normal pr. anal.
<<Merck>).

5+

Sa,ng
Pbnolphtaline
<<Merck>>,

Soia-wase retire d'e

d,e

pare <<Mer&>>. soia avec 5oo crnc. d'enu, puis laisser reposer pend'ant

en solution rolo. la poudre de graines d'e soia, pr(Criturer roo gr. d'e farine d'e granes

z beures efl relrruttnt e temps en temps. Aprs centrifuga' tion, dcanter le liquid,e surnageant. Erait auec ro fois son uolume d,'actone il prcipite et laisse dposer l'urase. Filtrer, essorer puis scher le prcipi.t dans un d.essicateur. Prparer une solution ro p. cent-) Solution d,e phospbates: d,issoudre 44gr.4o d'e pbosphate disodique et J4 gr. d'e phosphate tnono?otassique d,ans zoo crnc. d.'eau.
C alculs.

de la quantit initiale d'acide. Cette difirence, multiplie pur o,24, donne la quantit de NHs dans r cmc. de sang. Duire du chifire obtenu la quantit d'ammoniaque (par cmc. de sang) trouve par dosage de I'ammoniaque dans le sang (voir pag.37). Multiplier le rsultat par 6o/sn: 11765Le chiffre obtenu : quantit d'ure Par mgr. contenue dans

Retrancher

la quantit d'acide sulfurique

reste en solution

r cmc. de sang.

e. Mthode de SePcnsssn. Principe. Cette mthode est base sur la dcomposition de I'ure par
la lessive I'hypobromite de soude en azote, acide carbonique et eau.

L'appareil imagin par SAEGESSER repose sur le mm principe que celui de vAN SLYKE pour la dtermination de la rserve alcaline du sang. Avant chaque dosage s'assurer de l'tanchit absolue et du vide parfait de I'appareil. Eviter I'introduction de bulles d'air dans la colonne de mercure ainsi que dans la partie com'
prise entre le mnisque de mercure et le robinet. En abaissant iuffisamment l'ampoule < niveau de mercure>, on Lat 'gailement baisser le niveau du mercure dans le tube de vere gradu et il sc produit un vide au-dessus de la colonne de Hg- Pour

55

chasser l'air qui se serait introduit dans le tube, il sufiit de soulever I'ampoule et d'ouvrir le robinet. Un vide parfait est reconnaissable au son mtallique que produit le mercure en heurtant I'extrmit suprieure du tube quand on relve brusquement I'ampoule.

e echnigue.

z cmc. de srum sont dfqus au moyen d'un volume ga| d'acide trichloractique. fnffoduire r cmc. exactement mesur du filtrat dans le tube
gradu qui surmonte l'appareil et y ajouter de la soude caustique dilue jusqu' ce que la taction soit faiblement alcaline (phnolphtaline). Aspirer le liquide dans l'appareil en ouvrant le robinet et en abaissant l'ampoule < niveau>, puis rincer le tube suprieur avec environ z cmc. d'eau et faire passer I'eau de Lavage dans I'apparcil. Introduire dans le tube gradu r cmc. de la lessive l'hypobromite de soude (solution datant de 3 jours au maximum) que I'on fait couler comme prcdemment dans la partie infrieure du tube. Le robinet est ferm avec soin et I'ampoule est abaisse pour qu'il ise produise un vide au-dessus du liquide. On observe tout de suite un dgagement gazeux intense. Aprs quelques minutes d'attente, on peut lire le volume gazcux gag. Cela se fait en galisant les niveaux de mercure dans I'ampoule et dans le tube gradu. I1 faut toutefois se rappeler que la prsence de la colonne de
liquide au-dessus du mercure entrane une petite erreur qu'on ne peut viter qu'en faisant couler le liquide (l'appareil imagin par van Slyke facilite cette opration).
C alculs. Le rsultt est calcul I'aide de 1a table tablie pour le

dosage par le brome (voir Kr,opsrocx-Kow,c.nsrr, rg3z, p. ztz).

56

Sang
Si on s'attend un taux assez lev de I'ure, il faut ajouter une goutte d'alcool caprylique titre d'anti-'mousse' Aprs le dosage, l'appareil doil tre soigneusement nettoy; on fela couler le mercure et on le tltrera' Fabricants de I'appareil, Scrennnn S'A-, Berne' Ractifs:
Aci.d.e trichloractique

20olo (Aci,de trichlotactique

D.A.B.6

<<Merck>>).

Sotin de sowd,e caustique (Sodium hyd'rique Pur en solution pr. anal. <<Merck>> D : t,t68). Lessiu ci t'hypobromi.te de soud,e (dissoud.re Io gr. d,e _sod,iwm hydrryu pur, en cylind'res, pr. anal. <<Merck>> dans d'eau t aioutet en refroidi'ssant 3 cmc' deBrome t"5

Phnotphtaline

pr. anal-

<<Merck>>.

"*t. pr. anal. <Merck>>). 'Alcool' caprylique (Atcool octyliclue norneal <Merck>)'
Pri.nci.pe.

Ora,tinitte.
dosage- de la cratinine repose suf la proprit qu'elle possde ?e donner avec I'acidt pic.rique .en milieu alcalin

Le

irre coloration brun-roug ee dont f intensit est pfoportionnelle sa quantit' App ar ei.llage n ce s s air e.
Colorimtre d'AurPNRIErH.

jaug, or introduit z cmc. de la Dans un flacon -de -cratinine et on complte solution talon aspire avec une piroo cmc. avec de I'eau. On pette Zo ctrrc. de cette solution qq'ol transfre dans l^ cuve prismatique du colorimtre; on ajoute r 5 cmc. d la solution d'acidq picrique e! 5 .clc.t de sude caustique. z cmc. du filtrat sanguin d_salburnin, additinns de r,5 cmc. de solution d'acide picrique (voir plus loin) et de o'5 cmc. de NaOH iont ports dans la cuvette du colorimtre. Aprs
57

Cechni.que.

avoir mlang, oil laisse au repos I r o minutes, puis on compare I'intensit de la coloration des deux liquides.
Ractifs:
(Aci.d.e picriqae crist.

Solution sature ( froid) d.'acide picrique

pr. anaL

<<Merck>>).

(r,z ?. cent)

complter too cmc. aaec de I'eau).

solution normale d.e NaoH (solution de sod.ium caustique aolum. norm ale <<M erch>). Solution talon d,e cratinine (d,issoud,re o gr. ro d,e cratinine <<Merck>> dans zo cmc. d,'acid.e chlorhyd.rique Nf , et

Cratlne et cra,tinine (Dosage global).

cratine contenue dans le tltrat sanguin dsalbumin d'aprs la mthode habituelle est traite par un acide minral dilu et se transforme sous son action en Cratinine. Le dosage de la cratinine totale se fait ensuite selon la technique dcriie
ci-dessus.

La

Principe.

Le ltrat sanguin additionn de son r/, volume d'acide chlorhydrique N/, est chaufi pendant
nutes l'autoclave r 1o'. Aprs refroidissement de la solutionr o la netralise avec le volurne de soude caustique correspondant I'acide chlorhydrique N/r. Le filtrat sanguin primitif est donc dilu de moiti. Les oprations suivantes sont efiectues comme cidessus.
Ractils: Solution normale d,' aci,d,e cbloyd,rique. (Solution d,' acid,e chlorhyd,rique uolum. normale D.A.B. 6 <<Merck>t). Solution normale d,e soud,e caustique (Solution d,e sod,ium caustique uolum. normale D.A.B.6 <Merck>). Les autres solati.ons se prparent comn e ci-dessus.

e echnique.

5 heures au bain-marie bouillant ou pendant zo mL-

58

Song
Azote rsidner (Azote total non protinique).
Remar ques pr liminaires
.

L'azote rsiduel est constitu par les substances azotes (ure, acide urique, cratine, cratinine etc.) qui restent en solution dans le sang oo le srum aprs la prcipitation des matires albuminoides. Etant donn que l'ure entre Pour plus de la moiti dans la composition de L'azote rsiduel, on peut dduire de son dosage la vleur approximative deL'azote rsiduel.

La raction de'lTnlriue,Nx-BA,RRENscHEEN donne galement cefrsiduel: taines prcisions sur la teneur du sang e

^zote cmc. de srum, dsalbumins au moye11 de l'acide trichlor-

d'Ehflich. I1 ne se produit une coloration jaune veft que lorsque la quantit d'azote rsiduel atteint 36 4o mgr. Par
roo cmc. Comme le sang contient I'tat normal zo3om$r.o/o

actique (5 cmc. de srum, 5 cmc. d'acide trichloractique zoolo) soni additionns d" 4 gouttes du ractif aldhydique

d'azote rsiduel, une raction

de'$TnlrrumtN-BnnnENScHEEN

positive sera le signe d'un tat pathologique'

qui consiste dtruire les matires organiques et laire passer I'tat de sulfate d'ammoniaque les substances formes par la raction. Le sulfate d'ammoniaque est trait par la Potasse caustique et l'ammoniaque libr est dos par titration-

Pri.nci.pe. Le dosage se fait suivant le procd bien connu de K.rnr,ne.nr.

Cechnique. cmc. de srum et 2 cmc. d'une solution d'actate z d'uranyle r,J% sont mlangs avec 5 cmc. d'eau, puis filtrs sur un petit filtre (rincer avec 5 cmc. d'eau). On mesvre T cmc. du filtrat clair dans un ballon de Klnr,DAHL; ott y ajoute 2 cmc. d'une solution de sulfate de cuivre rooio et z cmc. d'acide sulfurique concentr (acide sulf. pour le dosag. 4. I'azotepar le procd de K.lnlDAHL)' puis on chaufie. Lorsque la destruction des matires organiques est
59

termine, on transvase quantitativement le contenu du ballon de Krnr-oeur dans un ballon distiller contenant un peu d'eau, on I'additionne de 5 cmc. de lessive de soude (pour le dosage de L'azot selon le procd deK.rproeHr,) puis on ielie rapidemenrle ballon un rfrigrant descendant et a un vase titrage renferm ant J cmc. d'acide sulfurique N/sor u_n peu dleau et quelques gouttes de rouge-de mthyle. Distiller jusqu' ce que le distillt ne renferme plus de NHs (s'en assurer l'aide d'un papier de tournesol tenu l'extrmit du tube distillation). Rincer le tube distiller et recueillir I'eau delavage, dans le vase titration. Titrer au moyen d'une solution trTuo de NaOH jusqu' coloration jaune persistante. Il est importanf que le tube distiller pfonge aussi profondmenr que possible dans l'acide sulfurique.
Calculs. Soient N le nombre de centimtres cubes de NaOH N/us ncessaires et n le nombre de centimtres cubes d'acide sulfurique N/uo utiliss pour recueillir le distillat; La diffrence ("-N) multiple par orzS donne l'azote rsiduel en mgr. dans

cmc. de srum.

Ractils: Actate d.'uranyle en solutian r,5olo (Actate d'uranium crist. pr. anal. <<Merck>>, exempt de soud,e). Acid,e sulfuri.que concentr (Acie sulfuri.que, D : r,84,

sulfurique fumant pour le dosage e I'axote d,'aprs Kieldahl <Merck>). Sulfate de potassiunz crist. pr. anal. <<Merck>> (il n'est pas ncessaire d,e I'aiouter si. l'on emploie I'acid,e sulfuri.que
aci,de
<<Merck>>

pr. anal. <<Merck>> ou bien aci.de sulfurique tout pwr !

pour le dosage de I'azote d,'aprs Kield.abl).

6o

Song / I-,iquide duodna,l

Solution de sulfate d,e cuiure roolo (Sulfate d,e cuiure crist'
d,'aprs Kieldaht (Sod,ium ltyd'rique en solution, exefttpt d'e N,

pr. anal. <<Merck>>). Solution de soud.e caustigue pour le d'osage d.e I'azote

D : r,35, Pr' anal'

<<Merck>>)'

Acid.e iit1"rtq"u Nlss Gotution 'acie sulfurique polum. rf ,s normale <<Merck>r, en d'ilution a tlil' Soud,e causti.que Nlss (Sotution de sod,ium caustique uolum. Lf ,, norrnale <<Merck>>, en dilution rlfl. Rouge de mthYlc <<Merck>>.

Exa,men du liquide duod'na'l.

Remarque s Pr li'minair es L'examen du liquide fetif du duodnum Pf la sonde duodnale (voir ce sujet les traits s'y raPPortant), Porte sur a teneur en bilirubine, en trypsine, en diastase' sur la quantit de rsidu sec et sur la prsence d'lments microscopiques. 11 faut notef aussi la couleur du liquide et sa quantit. Si la sonde est bien place, le liquide duodnal s'coule en g,n&alspontanment, mais il y a des cas, o il sera ncessaire d'avoir rcoors aux cholagogues. Pour apprcier la quantit6 de bile produite dans l'unitC de temps' on recueille le liquide duodnal, ds qu'il commence s'couler, dans des tubes essai qu'on change toutes les 5 ou ro minutes'

Examens chintiques-

Bilirubine
(Dosage par le procd de Hr.rnaANS vAN
DEN BERGH.)

crnc, de liquide duodnal avec utant d'eau distille qu'il e faut pour obtenir une solution lgremenf jaune citron. Prendte tlz cmc. de cette slution et l-'additionner d'un centirntre cube d'alcool absolu et de o,?5 cmc. d'une solution ,rdazo, frachement prpaie. Il se Produit rlne teinte violette que lton comPare au colorimtre

Diluer

6t

d'AurprvRr'r' _evec Ie prisme-talon au sulfo cyanure de fer (fabriqu pr la firme Hnrrrcn de Fribourg en B.).
Calcals.
Le chiffre lu au colorimtre est converti en milligr. de bilirubine I'aide dy graphique qui accompage I'afpareil. En multipliant-la valcur fournie pr ra cooibJ d'talo;nage pat eoo et par le taux de dilution, on obtient la conccntraorien bilirubine du suc duodnal n mgr.0/0. Normalement, la bilc hpatique renferme 3o 3z mgr.% de bilirubine, la bile vsiculaire par contre roo 4oo mgr.%. La teneur en bilirubine peut atteindre 8oo r4oo mgr.% dans les cas pathologiques.
Ractils:
Ractifs dazo a et b
<<Merck>>

(aoir ?. 4.

Sdiments du liquide duodnal et de Ia btle vslculalre. E xamen mi.croscopique. Aprs cenmifugation du liquide duodnal frachement prlev, on examine rapidement le dp t au microscope. Les rec.herches doivent porter ur les cristaux de cholestrine et de bilirubinate de chaux, sur I'augmentation du nombre des leucocytes et sur-la prsence de micro-organismes (par eiemple de lamblia intestinalis). En ce qui concerne I'identitcation de ta cholestrine, voir
Rounrsr,,Caschenbuch d,er mikroskopiscben Eechnih,,, rzme

dition, p.862 et 868.

6z

BiIe
Eprerrves d'oppreiotion des lonctions de la, vsicule et des voies bilia,ires.
lo Epreuve de trf.Lr,n et ScnonrDrIBE. A l'tat normal, I'injection de 2 cmc. d'un extrait hypophysaire actif provoqu e zo 3o minutes aprs la piqre, l'coulement de bile vsiculaire de couleur fonce. Afin d'avoir un point de comparaison, on dtermine la teneur en bilirubine d'une quantit dtermine de bile avant et aprs I'injection de I'extrait d'hypophyse. Si l'preuve est ngative, il Laut en conclure une obstruction des yoies biliaires (calcul, tumeur, menque de contractilit de la paroi vsiculaire, atrophie vsiculaire, adhrences) l'absence de bile dans la vsicule, I'incapacit de concentrer la bile, I'absence d'une rponse nerveuse ou musculaire.
3o

Dpreuve de Irrror au sulfste de rnagnsinnr. L'injection par la sonde duodnale de 40 6o cmc. d'une solution de sulfate de magnsium z5vo amne aprs 5 r 5 minutes l'vacuation de La vsicule biliare.
La valeur de cette preuve est attnue par le fait qu'elle prngatifs dans un essez grand nombre de

:r*ffi:u'"

Ractifs: Sulfate d,e magnsium D.A.B.6

<<Merck>>.

63

Exa,men de ltur.irre.
Remarques prliminaires. Les recherches s'efiectueront de prfrence sur un chantillon de la totalit des urines mises au cours d'une journe. Suivant lue I'urine a t recueillie le matin ou le soir, certaines constantes peuvent en effet prsenter des variations (allant jusqu' zoru pour le taux de la glycosurie par exemple). I1 est important de connaltre le volume total de I'urine de z4 heures pour pouvoir y rapporter la quantit des lments pathologiques que I'on a dcels. Pour assurer la conservation des urines, on y ajoutera du thymol ou du chloroforme. L'examen des dpts urinaires, la recherc.he du pus et des bactries ne peuvent se f.afue que sur de I'urine frachement mise.

I)ensit. Elle oscille normalement de r,oo3 r,o4o.

Couleu.r. La couleur de I'urine normale peut varier du jaune citron au jaune ambr (en une couche de S cm. d'paisseur); celle de I'urine peu concentre est plus ple. Une coloration allant du vert jaune au brun jaune et I'apparition d'une mousse colore revlent la prsence de pigments biliaires; une coloration variant du rose au brun rouge fonc fait penser l'existence possible d'hmoglobine; une couleur bleue, enfin, peut tre due la prsence

d'indoxyle (d'indican). Dans les afiections fbriles aigus, les urines troublent et prennent une teinte rouge brique.
64

se

Il

IIrine
ne faut pas oublier que certains produits pharmaceutiques peuvent aussi dterminer une coloration de I'urine: le pyramidon, par exemple la colore en rouge clair, l'antipyrine, I'antifbrine en rouge sang, 1 santonine lui confre une teinte allant du jaune safran au jaune verdtre; te phnol, le thymol, la rsorcin, la naphtaline, le tanin, le salol, le pyrogallol produisent une couleur brune ou noire (". p. ro9, pourla caractrisation de ces substances). Boctlon de lturine. Normalement elle prsente une raction faiblement acide; la prsence de phosphates monoacideg PeY! dterminr .tne lgre alca-linit (et un trouble). Si L'alcaLinit, ou le lrouble sont d'origine pathologique, I'urine dgage une odeur ammoniacale. spect d.e I'urine. Les urines normales fraichement mises sont limpides; elles peuvent devenir troubles La suite d'une aliment ation exclusivement v gtal'e. Mme les urines normales prsentent un lger dpt (nubecula) au bout d'un certain temps. On ne peut faire le diagnostic de phosphaturie que si I'urine est trouble ds son mission. Les troubles qui se produisent dans I'urine lorsqu'on l'abandonne elle-mme ou quand on la chaufie, et qui disparaissent par addition de quelques gouttes d'acide actique, ne sont pas d'origine pathologique. Albutnine. I. Recherdte gualitatiue. Dpreuve por l'bullition. r o crnc. d'urine filtre et limpide sont ports l'bullition (la raction de I'urin e analyser ne doit
65

est d aux phosphates terreux. Dpreuve per t'bultltlon modflfide.

tre ni trop aci,4e, ni alcalir.). S'iI se produit un rouble qui ne disparat pas ia suite d l'addition de z ro gouttei d'acide actique roo/0, I'urine contient de l'albumine. Mais si-l'urine se clarie qual{ on l'additionne d'acide actique, le trouble

T''preuve par l'bullition donne en gnral des rsultats satisfaisants. r1 impote, cependant, de iemarquer quc l'albumine ne se coagule par la chaleur [u'en prsence d'un certaine concentration en ions H. It peut arriver que le prcipit nc sc produise pes, quand les urines sont trs peuvres n sels et Iorsqu'elles contiemeot peu d'albumine. Le coagulum se forme d'autant moins que le ps s'carte davantage de Ia neutralit, soit vers le ct acidc, soit vers le ct alcalin. on remdiera I'absence de I'efiet tampon des urines peuvres en sels en les additionnant de la solution tampon de SneusEN, constitue per un mlange d'acide actique et d'actate de sodium.

teneur en albumine est infrieure o,r p. rooo, d'abord qu'un louche oplescent; aprs quelques minutes de repos ou apri avoir t pgrtp encore une fois 1'bullition,-1a liqueur se clarite et il se dpose un prcipit floconnux. Les phosphates terreux et les uratCs ne prcipitent pas par cette mthode; l'acidit des urines n favoiise pas leur coagulation. SeuI les urines raction alcaline doivent tre acidules.
on ne constate tout

Cecbnique. ro cmc. d'urine sont additionns de r cmc. de solu,tlor tampon; on porte Ie liquide l'bullition et on l'y maintient pendant r/p minute. Si I'urine contient plus que des traces d'albumine, il se produit un coagulum compos de ns flocons. iorsque la

66

IIrine
Ractif s:

tate d.e sod,ium crist. pr. anal,. <Merck>>) et d,e 56 gr.5o d,'acid.e actique glacial (Acide actique glacial pr. anal.
<<Mer&>>)

a) Acide acti.que toolo (Acide actique dtlu joop pr. anal. <<Mer&>>, r partie pour a parties d,'eau). b) Solution conpose d,e tr9 gr. d,'actate de soud,e (Acpour rooo gr. d'eau (solution tampon),

Bactlon de H.nr.r,nn. Dans un tube essai on superpose soigneusement

une couche d'acide azotique concentr, une couche d'urine filtre, ne prsentant pas de trouble quand on l'additionne d'acide actique (voir p.7r psudoalbumine). En prsence d'albumine, ii rL t"*e un disque blanc, nettement dlimit la surface de sparation des deux liquides.
Ractif :

Acide azotigue concentr (Acid,e nitriqae D.

anal.
<<Merck>>).

- r,4 pr.

Si I'urine est concentre (urine du matin) et trs charge en ure, il peut se montref une zone compose non pas d'albumine, mais d'azotate d'ure. Si I'urine ne contient que peu d'albumine, cette zone n'apparait parfois qu'aprs quelques minutes. Il sera donc bon d'attendre au moins z minutes avant d'interprter le rsultat de cette preuve.

Boctlon d'Dsracu (ractif picro-citrique). On ajoutg 5 cmc. d'urine filtre et limpide j cmc, du ractif d'FsBAcH (ou la solution obtenue par dissolution de r comprim du ractif d'Esslcn <Merck> dans 5 cmc. d'eau). La prsence d'albumine est rvle par I'apparition graduelle d'un
prcipit.
Ractif :

Ractil d,'Esbach
solution.

<<Merckt> sous

lorme de comprims oa en

67

xlprenve prr lo roctif de B,rnelnn

sulfonique).

(acide naphtaline-

Dissoudre + comprims de ractif de Rtool,en <Mercku dans 5 cmc. d'eau et ajouter cette solution 5 cmc. d'urine limpide. Lorsque l'urine contient de I'albumine, des albumoses ou des peptones' on voit se former un trouble ou un prcipit. Ce prcipit est d des albumines s'il ne se redissout pas pr la ejhaleur; s'il se dissout, il est compos d'albumoses ou de peptones. Ractif :
Ractif d,e Riegler
<<MercA>j,

en camprims.

Ilpreuve ptr le ferrocytrrure de potaslum. On acidule fortement l'urine avec de I'acide actique, puis on y verse goutte goutte une solution de ferrocynure de potasse J-ro0/0. I1 est cependant plus pratique d'utiliser les (comprims A et B uMercko pour I'examen de l'urineo. Un comprim A est dissout dans ro cmc. de I'urine et la liqueur obtenue est additionne de la solution d'un comprim B dans r cmc. d'eau. S'il se produit un trouble ou un prcipit, c'est que I'urine est albumineuse. Quand elle ne contient qu'une trs f aible quantit d'albumines, Ie trouble n'app atalt
qu'au but de quelques minutes. Lorsque_les urines sont trs concentres, il convient de les diluer avant de procder cette raction.
Ractifs: Acid,e actique dllu joolo pr. anal. <<Mer&>>. Ferrocyanure d,e pota.ssiun pr. anal. <<Merck>> ou <<Comprltns A et B <<Merck>' ?our la recberche de I'albumi.ne.

68

Urlne
Dpreuve Ba,r I'oold.e sullosa,licylflque.
Cette preuve est trs sensible; elle I'est mme trop pour la

pratie

courante. La raction est encore positive Pour ororJol'o

de substances albumineuses.

cmc. d'urine filtre, timpide, . raction faiblement acide, sont additionns de 6 gouttes environ d'une solution zoon d'acide sulfosalicylique ou de sulfosalicylate acide de Na. La prsence d'albumine est indique par le trouble qui se produit immdiatement ou aprs quelques instants de repos et qui persiste l'bulliiion; un trouble soluble clraud caractrise les albumoses. L'existence d'albumine ayant t ftvle par ces ractions, il convient ensuite d'examiner le prcipit au microscope.
Ractifs:
Acid,e sulfosalicylique pr. anal. <<Merck>>, d'e prfrence sous forme e comprms o gr.40 que ie fournis sous le nom
<<ractif d'e Ceuscher>>. Sod.ium sulfosalicylate acide crist. <<Merck>> (Ractif du

de

D.A.B.6).

II.

Dosape de l'albumine dans l'urine. trlthode d'Dsrcn pour la dtermination quantitative

1'albumine.

de

Remplir I'albuminimtre d'EssA,cu jusqu' la marque IJ avec I'urine analyser, puis ajouter j.tttion de r o gr. d'acide picrique * eo gr. d'acide citrique dans r litre d'eau. Agiter doucement pour
qu'au trait R le ractif qui se compose d'une solu-

viter qu'il se produise de la mousse, laisser rePoser et, au bout de z4 heures, lire la hauteur du dpt sur la graduation marque la partie infrieure de 69

I'albuminimtre. Les chifires indiquent en grammes La quantit d'albumine contenu dans un litre d'urine.
Les urines trop concentres (dont la densit dpasse r,or8) et celles qui renferment plus de 4 pour rooo d'albumine doivent tre dilues. (cette mthode ne permet pas de dterminer une

quantit d'albumiqe infrieure o,5 p.looo). Si un premier

essai a montr que la quantit d'albumine dpasse cett limite,

on fera un nouveau dosage avec de I'urine dilue. 11 est indispensable de toujours faire cet essai la mme temprature, tant donn que le volume du sdiment dpend beaucoup de la temprature ambiante.
Ractil:

Ractif d,'Esbach <<Mer&>>, en soluti.on ou sous forme d,e comprim's. Dissoud,re z compri.ms ddns ro crrr6. d,'eau
d,istille.

trfthode de dosoge gravimtrique. 50 cmc. d'urine pralablement additionns de ro cmc. d'une solution tampon compose d'acide actique et d'actate de sodium (voir p. 66) sont chaufis r ooo, puis maintenus cetie temprature .pendant r/, heure. Filtrer pr un filtrs tar sec (scft jusqu' poids constant), laver l'eau d'abord, puis I'alcool et l'ther et scher roo-ro5"lusqu' poids constant. La difierence de poids indique la quantit d'albumine contenue dans 50 cmc. d'urine.
Ractifs: Actate d,e sod.iutn toat pur pr. anal. <<Merck>>. cid.e actique glacial pr. anal. <<Mer&>>.

Altamoses de BnncsJonns.
Cette varit d'albumine a une grande importance pour l'tablissement du diagnostic parce que son apparition est rur

7o

Urine
signe presque certain de l'existence d'un osto-sarcome ou de mylomes multiples.

Le recherche qualitative de cette albumine est base sur la curieuse faon dont elle se comporte Ia c,haleur: L'urine contenant des albumoses de Bnxcn-JoNES et qui doit tre action franchement acide, est
chaufie avec prcaution au bain-marie; vers 45 55" il se produit un louche laiteux, puis un prcipit adhrant aux parois du tube essai qui se dissout l'bullition pour rcpar*ltre par refroidissement. Si I'on ajoute de I'acide drlorhydrique tz,5o1o de l'urine contenant des albumoses de Boxcn-JoNcs' il se forme un coagulum. Pseado-albanlne. (Yetit d'albumine prcipitable froid par I'acide actique). .5 cmc. d'urine filtre sont additionns de 5 - io gouttes d'acide actique 3ovo; biel agiter le mlnge, puis diluer ro-r j cmc. Si l'urine contient une substance albumineuse prcipitable par I'acide actique, il se produit un trouble apparaissant immdiatement ou au bout de quelques minutes. Pour se rendre compte de son intensit, on compare la liqueur sur un fond fonc de l'urine non cidite mais tendue du mme volume d'eau.
Ractil: Acid.e actique

<<Merck>)

joolo (.cid'e

actique dtlu

F.

anal.'

sr cres. Remarque s pr liminaires. Il convient de rechercher d'abord la prsence d'albumines dans I'urine et de les liminer au besoin; a,prs addition de
7r

quelques gouttes d'acide actique, on fera donc bouillir I'urine, puis on sparera le prcipit par ltration. I1 faut galement dbarrasser l'urine des autres substances (telles que l'acide urique, la cratinine, les drivs de l'acide glycuronique) qui pourraient gner la raction de rduction du glucose: on I'agite dans ce but avec du charbon adsorbant (charbon animal <Merck> pour l'analyse de I'urine). Pour empcher que le charbon ne fixe aussi du sucre, il convient

d'ajouter un peu d'alcool I'urine. Donc, agiter 18 cmc. d'urine dsalbumine avec 2 cmc. d'alcool 96o1o et une pince de charbon, puis filtrer.

Io

gaalitatiue. Principe des ractions eTr.ovrMER et d,eFpnr,rN : Le glucose contenu dans I'urine rduit chaud les sels de cuivre (le sulfate, pat exemple), en solution alcaline, et les fait passer l'tat d'oxyde cuivreux. B,actflon de Tnomlxn. On a{ditionne l'urine dsalbumine d'un dixime, d'un ti.rr ou d'une partie entire de lessive de soude ro.h, puis on ajoute goutte goutte une solution de sulfate de cuivre 5vo jusqu' ce que Ie prcipit form ne se dissolve plus par ^gitation. Tenir le tube obliquement dans la flamme, de faon ne chaufier que la couche suprieure du liquide. La raction s'engage dans cette couche et il s'y produit un prcipit d'oxydule de cuivre rougetre ou d'hydrate d'oxyde cuivreux jaune; eprs avoir retir le veme du feu, Ie prcipit continue se former spontanment et gagne progressivement le bas du tube.
I'urine contient beaucoup dc sucre, il convient d'augmenter la proportion de sulfate de cuivre.
cette I'addition - L'une des causes d'erreur de fortesraction, est de cuivre. de quantits trop faibles ou trop de sulfate Si

I. Reerche

Olttcose.

72

Urlne
avec trop d'intensit, I'excdent de sucre - Lorsqu'on chaufie peut donner du caramel qui maintient l'oxydule de cuivre en iolution: oil coft donc 1 risque de conclure I'absence de glucose, alors que I'urine en contient. 1 Si le sulfatJ de cuivre est en excs, il peut se produire l'bullition de I'oxyde de cuivre noir, mesqunt le prcipit

Poui ces diffrentes raisons, il est prfrable d'avoir fecoufs la raction de Fnnuuc o le sulfate de Cu est toujoufs en excs. L'excdent d'oxyde de cuivre ne prcipite pas,- meis reste en solution sous forme d'un driv complexe de l'acide
tartrique.
Ractifs:
Sol,uti.on d,e soude

d'oxyde cuivreux.

caustique roolo (Sod,iutn hyd.rique en so<<Merck>>.

lution pr. anal. <<Merch>>. Sutfate d'e cuiure crist. pr, anal.

-Btrction de tr'rnr,ruei. Aprs avoir mlang 5 cmc. de dracune des solutins A et B de Frnr,rxcr portr l'bullition, puis verser lentement le racaif dans ro cmc. d'urine chaufis l'bullition. Eviter de faire bouillir le mlange. Si l'urine contient du sucre, il se produit, suivant le degr de glycosurie, un prcipit plus ou moins important d'oxydule de cuivre rougetre. Les urines trs concentres doivent tre pralablement dilues.
Ractifs:

Liqueurs d.e Febling

<Merek>>).

A et B (Ractif d'e la Pharm- all. 6

est une solution d,e 3 gr. 5o de sulfate e cuiare d'ans So crn6. d,'eau. -B est une soluton d'e ry gr.5o e tartrate de sod,ium et d,e potassiurn (sel de Seignette) * 5 8r. de soude caustique d,ans So crn6. d'eau,

73

Sactlon de lTfyr,eunnn. ro parties d'urine dsalbumine et dbarresse de substances rductrices, I'exception du sucre, naturellement (voir plus haut), sont additionnes 9lll. partie de ftaitif de Nvr.awpen, puis porres l'bullition. si I'urine conrient beaucp d sucre, il se produit instantanment une colo""iion bnrne qui-passe ensuite au noir (fgrmation d'un prcipit de bismuth mtallique). 'si I'urine ne ienferme -de qu'une faible quantit glucose, la raction ne devient nettement positive qu'aprs deux minutes d'bullition. La cloration -noiie peut encore se p19d-1ire avec ogr. or de sucre (limite de sensibilit).
Ractifs: Ractif d'e Nylander D.A.B.6 <Mer&>. .ge prpare en d.issolpant 4 gr. d,e sel e sei.gnette (sod,ium-potassium tartrate crist. pr. anal. <<Merck>>) et z gr. d,e sous-nitrate e bismuth

pr. anal. <<Mer&>> d,ans roo gr. d,'une solution d.e soud,e caustiqueSpourroo.
Ba,etion de llarrn. verser 4 cmc. de ractif de Frermr dans un tube essai, porter l'bullition, ajouter sns tarder r e gouttes d'urine limpide et faire bouillir nouveau. rl se produit une coloration jaune rouge ou un prcipit d'oxyde cuivreux si I'urine contient beaucoup de sucre. La limite de sensibilit de cette raction est de 4 centigr. p. r oo.
Ractifs:
Ractf d,e Haine D,A.B.6 <<Merck>>. Se compose d.e zparties d,e sulfate e Cu en solution d,ans t5 parfis d,'eu.u, i5 portes d'e glycrine et r5o parties d,e lessiue d,e potass"-

so/'.

74

Urlne
II. Doso$e da plucose. volurntrdques. trlthodes to LJne mthode de dosage relativement simple et sufiisamment exacte pour la pratique courante utilise les ocomprims <Merck> pour la recherche du sucre urinaire d'aprs le procd de FBsunc>. La dissolution de c.hacun des comprims cuivrique et alcalin dans zr St cmc. d'eau donne une liqueur de Fpnr-rNc d'un titre dtermin; cette solution correspond ogr. or de glucose. Si donc, aprs avoir fait bouillir ro cmc. d'urine, additionns de J comprims de chaque espce, Ia liqueur Prend u_ne leinte jaune rougetr et si le filtrat est absolument limpide, la rduction du sulfate de cuivre a t complte et l'urine contient o,soh de glucose. On trouvera des indications supplmentaires sur cette mthode dans ma brodrure intitule <Surl'emploi des ractifs sous forme de comprims poul le dosage du sucre et la recherche de I'albumine dans I'urine.> zo Si I'on utilise la mthode habituelle Pour le dosage volumtrique, iI convient de faire un essai prliminaire pour dter-

miner la quantit approximative de sucre contenue dans l'urine. Dans ce but, mettre dans une capsule de porcelaine zo cmc. de la liqueur de Fehling (soit ro cmc. de chacune des solutions AetB) que I'on porte l'bullition. Puis ajouter immdiatement de I'urine contenue dans une burette graduc; verser l'urine jusqu' ce que le sel de cuivre soit compltement prcipit,. Connaissant approximativement la quantit d'urine ncessaire Pour la rduction totale de la liqueur de Fehling, le dosage proprement dit Pourra tre efiectu trs rapidement. Ceci est trs important, cat les solutions ne doivent pas tre maintenues trop longtemPs l'bullition. 11 sera bon de diluer I'urine a.vant la raction: oo l'tend de 5

75

son volume d'eau si elle est suprieure rro3.

fois son volume d'eau si sa densit est de r,o3, et de ro fois

Ractils: Pour la tre mthod,e' Comprims pour le osage d,u sucre dans l'urine d,'aprs Fehling, <<Mer&>>. Pour la z" mthode: Une solution de 34gr.6jg d,e sulfate

de cuiure crist. pr. anal.

<<Merck>>

dans

(sol. A).

"m".

d.;eau

une solution d'e r7J gr. d,e tartrate d,e sodium-potassium crist pr. anal. <<Mer&>> d,ans 4oo cntc. d,'eau et too cntc. de lessiue de soud,e 5r,6o1o (sol. B).

Ilosoge pa,r fermenta,tion d.u glucose.

termine, dterminer la quantit de guz c rbonique dgag. T a teneur en glucose expiime en pour cent se lit sur la graduation de l'appareil. 11 est indispensable de faire les rechercheJ iur de I'urine frachement mise et ne contenant aucune substance stabilisante, ajoute pour assurer sa conservation. La rection du liquide doit tre franchement acide; si elle est faiblement acide ou alcaline, on ajoutera de l'acide tartrique. A la temprature du laboratoire, la {ermentation ne se fait que lentement et incompltement I aussi fera-t-on bien de placer l'appareil. dans un thermostat o il sera maintenu pendant 6 heures la temptature de 36.. Avant son utilisation il faut dbarcasser la levure de bire de toute autre substance fermentescible; cet efiet,
76

a) d'aprs LonNsrErN. I-e glucose de l'urine est mis fermenter par le levure de bire dans le saccjrarimtre de prcision imagin pat LoHNsrErN; une fois la fermentation

Urlne
elle est lave I'eau, puis exprime. Introduire dans le ballon mercuie o)r-.orz cmc. d'une suspension de z gr. d9 levure dans-6 gr. d'eau, puis jouter o,5 cmc. d'urine msur trs exactement et boudrer le rciPient.
Pour toutes autres indications concernant ce procd, on reportera la notice explicative jointe l'appareil'
se

b) d'aPrs RoBnnt. r oo cmc. d'urine filtre, dfque et de densit connue (noter la temp1atur9 laquelle celli-ci est dtermie.; sont aditionns de ro-gr. de levure sche. On iaisse reposer pendant 6 heures dans un rcipient }grement couvert, la temp tature de 36". hu bouid. ce tempg l'9t filtre et I'on dtermie nouveaula densit ( la mme temprature que prcdemment). La difirence entre D' et D' "ttipti e par z3o donne la quantit de sucre exprime en pour cent. IDosage pola,rimtriqne. Le pouvoir rotatoire spcifique du glucose P.o"t la lumire jaune, donne pai les sels de sodium (t"] ff ) est de * 52,8'. Connaissant la dviation de tube polari" * degrs d'arc et la longueur du peut en den dcimtres, on mtriqu exprime duire'p"" un simple calcul le taux du sucfe urinaire. La teneur en glucose exprime en pour -ceqt se lit directement sur le cercl gradu du polarimtre. I1 est important que I'urine analyser soit absolu-incolore. A cet efiet- on- I'agite menr linipide et avant l'essai avec du charbon ou de I'actate de 77

tre exempte d'albumines; si 1l en renferme, on la fait bouillir: on prcipite les albumines par I'acide actique et I'on filtie.
Ractils: charbon animal pour anaryse d,e I'urine, Actate d.e plomb pr. anal. <<Merck>>.
<<Mer&,>>

plomb (og".r^9 ou r gr. par roo cmc.), puis on ltre sur un filtre double -en papier. ti.tritte doit

ou bien

20 livulose (fractose). Bactlon de Snr,rmuoFr. on chaufie I'urine avec un gal volume d'acide chlorhydrique zJoto, dans lequel on a fait dissoudre qu.elqugs granules de rsrcine. si la liqueur contient du lvulose, il se produit une colortion Lolg. jolc er un prcipii rouge soluble dans I'alcool. rl faut que 1a coloration-soit trs intense et qu'elle apparaisse instantanment. cette mthod e a t perfectionne par RosrN qui verse dans la solution, ds I'apparition de la .oilgur lorrg:, du carbonate de sodi.rm jusqu' cessation du dgagement de gaz carboniq.. ia liqueur neutre, de couleur orange, est agite avec de I'al::ol amylique: le colornr pass dans I'alcool et il se produit une lgre fluorescence verdtre. Additionne de quelques gouttes d'alcool absolu, la solution prend un teite rose. Elle prsente un spectre. caractristique (raies dans la igion verte au voisinage de E jusqu' b, parfois ausii dans la rgion bleue, au voisinge de F). Le glucose cst aussi susceptible de donner la raction de seliwanoff par suite de sa transformation partielle en lvulosc
78

Urtne
lorsqu'on le chauffe avec de I'acide chlorhydrique. Il faut donc viter dc faire bouillir trop longuement I'urine avec l'acidc chlorhydrique. I1 sera bon de faire une preuve de contrlc evec une solution de glucose Pufe, en maintenant les conditions de la raction. Le galactose, le mannose' le maltose et les pentoses ne donnent Pes la raction de Scliwanoff.

Acie chtorhydrique z5o1o (Acide dtlorhyd'rique, D. : r,r24, pr. anal. <<Mer&>>). Rsorcine (Rsorcine resublime trs blanche pr. anal.
<<Mer&,>>).

Ractifs:

Carbonate de sodium crist pr. anal.

<<Merck>>.

Alcool arnylique tout pur pr, anal,. <<Met&>>. Alcool absolu (Alcool absolu pr. anal. <<Merck>>).

.Erletion de Bl.ne.

,r-z gouttes dlure. (go. o'2 cmc. au maxlmum) une parcelle de fiel de buf dessdr (ou bien one qundt correspondante de fiel conentr) et 3 cmc. d'acide chlorhydrique fumant, puis faire bouillir le liquide pendat Llz r minute feu ouvert. S'il contient du lvulose, on obtient une belle coloretion violette devenant de plus en plus intense et se maintenant pendantlongtemps sans s'attnuer lorsqu'on laisse la solution se refroidir. Cette raction est trs sensible; elle peut rvler vec prcision jusqu' o mgr. oz de lvulose'
Ajouter
Les autres sucres tels que les pentoses, le galactose, le glucose et les disaccharides correspondants ne la donnent Pes I'elception du saccharose. (Si I'on maintient le glucose pendant assez longtemps l'bullition, il fait aussi apparaitre une lgre coloration violette. Mais comme celle-ci ne se dveloppe

pas instantanment

et qu'elle est beaucoup moins

intense

qu'avec o mgr. oz de fructose, elle ne peut tre confondue avec

celle que donne ce dernier)

79

La prsence de fructose est encore vle par le. manque d'accord entre les chiffres fournis par le polarimtre et par le dosage volumtrique. Mais il ne faut pas perdre de vue que d.'autres substances actives (telles que I'acide oxybutyrique, les acides glycuroniques conjugus) peuvent tre la cause de
ces rsultats divergents. I1 est donc essentiel de

faire une ana-

lyse polarimtrique avant et aprs la fermentation. Le pouvoir

rotatoire du fructose est t"]

Ractfs:

3"

Fr7o.

Fiel d"e buf sec ou paissi D.Ap.V.5 <<Merck>>. Acide chlorhydrique fumant D. : rlrQt pr. anal.

<<Merck>>.

30 Lactase (sacre dc lalt). B,a,ction d.o Bunnnn-Bucmnn. ro cmc. d'urine sont additionns de I gouttes de solution ammoniacale et de 4 gouttes d'une solution d'actate de plomb. Porter le tout au bainmarie 8o'. Le sucre de lait produit un prcipit blanc; en prsence de glucose il se forme par contre un dpt rouge drair.
Ractif s:

Soluton ammoni,acale (Ammoniague en salution) pr. anal.

<<Merck>>).

Soluton d,'actate d,e plomb (Actate d,e plomb

<<Merck>>).

pr.

anal.

B6a,ctlon de Tlrorr,r". Additionner j cmc. d'urine de e-J cmc. d'ammoniaque concentr et d. j gouttes environ de lessive de potasse, puis chaufier u bain-marie (mais pas 1'bullition). Si I'urine renferme du lactose, il se dveloppe au bout de quelques mintrtes une coloration rouge; le glucose donne une coloration brune.
8o

(londitionnernent oliginal d'une prparation pourl'analyse avec tiquettc <lriginale et certificat de garantie.

Urine
Lepouvoir rotatoirc spcitquc dulsctoss est: []
RactJs:

ff: + Szr13o.
pt.
anal.

Solution ammoniacale (Atnmoniqrc en solution

<Mer&*).
Lessiae de potasse (Potassfum ltydque en solurion anal. <Mer&>).

F.

40 Pentoses. Baction de Brer, I'orolne. Porter l'bullition 4 S cmc. du ractif de Bial, puis, sans continuer de chaufier, ajouter goutte goutte r cmc. environ d'urine (au maximum). Lt prsence de pentoses est rvle pr une coloration verte qui se dveloppe instantanment ou au bout de quelques instants. L'acide glycuronique ne
donne pas cette coloration.
Ractil: Ractif de Bial pour la rccherche des pentoses uMer&;. Ce ractif se com?ose d,'une solation de r gr. d,'orcine pr. anal. <<Merch> et de z5 gouttes d,'ufle solution d,e chlorure de fer (D.A.8.6) d.ens Soo cffic. d,'acide chlorhyrique joolo (Acide chlorlrydrique ?r. anal. <tMerck>, p : t,r6).

-Eecherehe

prr les mthodes de rduetion.

La rduction des solutions de sulfate de cuivre

(Tnounrnn-FrnrrNo) ou de la solution bismuthique (Nvlaunnn) ne se produit pas instantanment, mais seulement au bout de quelques minutes, mme si l'on fait bouillir pendant quelques secondes le mlange de I'urine et du acti[.
Ractifs:

Les mmes que ?our les ractiots de Crommer ou d,e Nylaner (aoir ?. ZJ et 7.

8r

Dbfu*.
Dosage d'aprs la mthode de \ilonlcnMuru. Le passage dans le sang de la diastase pancratique confre I'urine une grande activit fermentative.

Principe du d'osage. La diastase du pancras produit la dsagtgation molculairc de I'amidon. On rcconnait l'amidon non transform se coloration blcue par I'eau iodc.
Mod,e opratoire.

Aprs avoir numrot r z tubes essair oil verse dans le premer z cmc. d'urine et dans chacun des autres r cmc. d'une solution de chlorure de sodiurn
Dans le premier tuber or prlve r cmc. d'urine qu'on porte dans le deuxime, on mlang-e, on prlve r cmc. de solution dans le ehc tube, on le verse dans le troisime et ainsi de suite. Finalement, on enlve r cmc. de la solution du r 2me tube. Dans dracun des tubes, l'exception du premier, on verse 2 cmc. d'une solution d'empois d'amidon r p. rooy'(prpare par dissolution au bain-marie de famidon'oluble <Merckr). Cette opration doit s'efiectuer aussi rapidement que possible pour que l'action de la diastase puisse s'exercer pendant la mme dure de temps dans tous les tubes. Les tubes sont maintenus au bain-marie 38' pendant 3o minutes, puis plongs pendant quelqugs minuts dans de I'eau trs froide pour arrter le processus de fermentation. Verser dans c,hacun des tubes z gouttes de solution iode N/60 et mlanger. IJne coloration bleue rvIe 8z

r p.cent.

Urtne
la prselce d'amidon non transform. L'amidon, qui a dj subi l'action de la fermentation diastasique' ne se colore plus en bleu. L'rythrodextrine donne une coloratin bleu rouge o.r bl..t violet et I'achroodextrine (q"i ne ragif plus du tout avec liode) une coloration rougeJ"rrn. ou jaune. On note le premier des tues e la qui pr""nje sente la raction colore de l'rythoaexirine (teinte bleu rouge) : il constitue la limiie infrieur..i. L'ectivit diastasique et servira de base pour le calcul des units d,iastasi,qaes.
C alculs.

Dterminer -la ryantite d'amidon transform par un cmc. d'urine pendant la dure de r'preuve. ce n'est pas le tubelimite qui donne la mesure de- l'activit fermeniative, mais

que Ie 9-me tubc prsente une loloration bleu'rouge, ctst alors le 8me qui servira de base aux calculs. on obtient la quantit de ferment diastasique en multipliant degr de t?" ? Ienormale dilution de la solurion (ili zxrzg :*zs6). L'urine contient jusqu' 64 units de diastase. L,ictivit de r cmc. lique-ur diastasique est rendue par la lettre -d'ol" d, accompagne des chifires indiqunt,re dure d'e l'preuve temprarure laquelle elle a it efiectue (exmple, "t k
aRo

celui qui le prcde dans la range. supposons par exemple

= -

256).

Ractifs:

d.ilaer au cinquime).

Amidon soluble D.A.B.6 <Merch>. solution iod.e N/ss (sotution d'iode aolutn. tfrs normale,

Acide glycuronlgue. Redter dte gualitatiue. Boction de Tor,r,nrus.

L'acide gly."{-olique est rarement prsent dans I'urine l'tat libre; on le rencontre le plus souvent
83

sous forme de drivs conjugus; ceux-ci sont gnralement lvogyres. L'acide glycuronique dvie droite le plan de la lumire polarise. Pour caractriser l'acide glycuronique dans les urines d'aprs ToLLsxs (raction la naphtorsorcine et I'aide chlorhydrique), on additionne 5 cmc. d'urine de o,5 r cmc. d'une solution alco-olique de naphtorsrcine r p.roo et d.5 cmc. d'acide chlorydrique concen* 1O : r,r9l. On po.rte le tout au bain-marie bouillant pendant r 5 minutes (jusqu' coloration noire). 4p1t rejroidissement, n agite vec de l'ther ou du benzne. Si l'urine condent de l'acide glycuronique, il se dveloppe dans l'ther (ou le benzne) une coloration bleu violet; si elle'renferme des pentoses, il se produit galement une coloration noire P9 chaufiage au bain-marie, mais aucune matire colorante ne passe ensuite dans l'ther (ni dans le benzne).
Ractifs:

Naphtorsorcine (t,j-d.iaxynephtaline) en solution alcoo-

lique

rolo.

.cd.e chlorhyd'rique

pr. anal, uMer&,n, D : rgg.

Actottc.

Rechercle qualitative. Boction de L,relrr, (preuve au nitroprussiate de Na). On ajoute env. 2 cmc. d'urine -J gouttes d'une solution roo/o de nitroprussiate de soude fraement prpa,e, puis on lcalinise avec de la lessive de soud. rJ'/0. La prsence de cratinine fait apparaltre une loloratin rouge ou jaune rouge; lors84

Urine
qu'el[e s'attnue, ajouter un excs d'acide actique glacial: il se produit alors une teinte rouge violet plos au moin fonce selon la teneur en actone. bette raction ne donne un rsultat positif que si la quantit d'actone est suprieure 8 mgr.
Ractils: Nitroprassiate d,e soud'e pr. anal. <<Merck>t. Lessiue de soud,e r5o1o (sodium hyd.rique en sol,. pr. anal.
<<Merck>>).

Acide actique (cid,e actique glacial pr. anal.

<<Merck>>)'

-Bactflon de Irrnnnn. Ajouter quelques cmc. d'urine ou' encore mieux, au liquide distifl, quelques gouttes de NaOH concentre et de la teintuie d'iode aqueuse (solution de Luoor). On reconnat la prsence d'actone l'odeur dtiodoforne qui se dgage par agitation.

L'examen microscopique rvle un prcipit jaune soufre, gn&aLement compos de tables hexagonales, parfois amorphe. Si la teneur en actone est gale u infrieure o mgr. or le prcipit se ' frme u bout de quelques minutes I il apparut instantanment si le taux de I'actone est suprieur omgr.or. L'alcool (et I'aldhyde actique).donnent la mme baction, mais il ne se produit un prcipit que pour une quantit d'alcool beaucoup plus leve (7^gr.5o).
Ractifs: Soud,e caustique (Sod'ium hyrique en solution

D : r,3o,

pr. anal.

<<Mer&>).

Solution d'e Lugol dilue, tactil d'u D.A.B.6 xlbierck>.

85

.Roetlon de Fnolnlna-Eurr/Ewrcz.

Ajouter 5 cmc. d'urine r cmc. d'une solution alcooliqu.e r ooro d'aldhyde salicylique, puis, aprs avoir mlang doucement, r g". d. roud caustique. chaufier le lout au bain-m#ie vers zoo sans mlanger.. En prseqcg d'actone, il se'prod"it coloration ro..lge violet la limite de separatioo"* J. l_aldhyde salicylique er de la lessive de soude. cette raction est trs sensibre et spcifique de I'actone.
Ractils: Acid.e salicyleux (Salicytatd,hyd.e),
<<Merch>>.

reactf d.u D..8.6

pr. anal. <<Merck>>).

Soud.e caustique (Sodiutn hyd,rgue

tout pur, en pastillet

Baetion de tG*nrnnnl, et TFnrss. La fi,*ction de Lncrr- tant positive aussi bien en prsence

d'actoae que d'acide actylactique, I'actone seul e peut tre mis en vidence par cette mthode. 11 en est de mm de la raction I'iodoforme de H. Klrspn et E. verznl, qui donne des rsultats positifs avec les sels de I'acide actique. i'identitcation de I'actone existant ct de I'acide actylactique, est par contre ralisable au moyen de la p-nitrophnylhydrazine (mthode tablie par Gnrrenl, et \Vuss).

Cecltnique.

Dans un petit becher de verre (ayant zl mm. de haut et r 5 mm. de large) bords pi"nir, itrt"oduire 2 cmc. de l'urine examiner, aprs I'avoir neutralise, si ncessaire. RecouvriC ensuite le verre d'une lame portant sa face infrieure, eu centre d'une couche mince, annulaire, de vaseline, une
86

t
t

Urine
goutte d'une solution sature et tltre de p-nitroihnvlhvdrazine dans I'acide actique r5ortn' A l'"id. d"rn dispositif spcial imagin par KArssn et \flnt zrlL, on uspend- le microbecher dans un vase essai rempli-d'eau 4o' de telle sorte que son bord suprizur dpasse ie niveau de l'eau de ( mm. nn sence d'ctone' on observe dans la [outte de iactif des cristaux d'actone-p-nitroaune d'or, fihenyllr y dr azone sous forme d'aiguilles-j iottgo.ti en gnral droites, pointues o pointes mJuss.t, t.onnaissables au microscope. L' ectaldhyde donne des aiguilles analogues mais qui sont le plus souvent courbes
Ractifs: Nitrophnylhyd,razine, pata-, ?r. anal. <<Mer&,>. Acid.e actique t5o1o obtenu par dilution d'une partb d"acid'e actique joolo pr. anal. <Merck>> naec une partie
'eau.

Litterat: Sd'd'. Apoth.'Ztg. r93o, No.

rl,

S.

ro8.

Dosage de l'actone. Additionner zo cmc. d'urine de r 50 cmc. d'eau et de z cmc. d'acide actique 5oolo, puis soumettre le mlange Ia distillation (utiliser un rfrigra.t:ttr

de Lrnerc). Recueillir 6o cmc' env. du distillat dans une fiole d'EnIENMEYER de 5oo cmc.' contenant r 50 cmc. d'eau glace (dure de la distillation: 2,5 minutes environ). Aprs avoir ajout au liquide distill 30 cmc. d'une solution de NaOH 33'lo, on y verse eu

moyen d'une burette une quentit dtermine d'une solution dcinormale d'iode (celle-ci doit re en 87

:lf9r) e-t gn. agite avec prcaurion. HCI doit

I'endroit o elle tbmbe dans le liquide. Il se produit un prcipit cristallin d'iodoforme. Au bout d. 5 minutes, aciduler per de I'acide chlorhydrique 2Jo1o et titrer l'ide d'une solution {]hypo:u.f{te de soude N/ro jusqu' l'apparirion d'une faible coloration jaune, ed, aprs- ddition d'une solution d'empois- d'amidon, Jusqu' dcoloration. La diffrence entre les quantits utilises de solution iode et de solurion 'hyposulte, multiplie par o,967, donne la teneur ri actone en mgf.
cette raction n'a de la valeur que si l'urine ne contient pas de phnol: celui-ci passerait dans le distillat, puis ragirait avec I'iode en donnant du triiodophnol. on o6tiendraii par consquent un rsultat trop lev. Les acides phnolsulfoniques peuvent tre prsents. La lessive de soude ne doit pas contenir de nitrites, tant donn qu'ils ragissent galemenf avec I'iode. Lorsque l'urine renferme des nitrites, il convient de I'additionner d'un peu d'actate de Ca avant la distillation.
Ractils:
.cid,e actique

faire apparaitre une coloration brune

Une goufte de

5oo1o (.Ade actique glacial, D - r,o5; t,o6o pr. anal, <Mer&>>, tend,re d.e son polume d.'eau). Solution d,e soud,e caustique jjolo (Sod,ium byd,rique en solution, exem,pt d,'azote, D - tr77 ?r. anal. <<Merck>>), Solution d'iode Nl.' (Solution 'iode aolum. tf' normale
<Merdk>>).

Solution d,'byposulfite d,e soud,e Nlrs (Solution d,e tbiosulfate d,e sodium aolum. tf.-6 flormale <<Merck>). Acide chlorhyrique zsoto (Acid,e chlorbyd.rigue, D rrre4-r,rz6 pr. anal. <<Mer&>). Solution d,'empois d,'amidon (prpare aaec I'Anti.d.on soluble d,' alpr s Zalhon s hy, <M er&>>).

88

Urine
trfodificatlon de eette mthode d'oprs I/JUtrGtI)aFr'Etant donn qu'il s'agit d'un micro-dosage' cette mthod. soi la prdente, l'evantage de nces", siter moins de substance et de s'efiectuer en un temps beaucouP Plus court. On introduit dans un micro-ballon deK.rnr,nltrl t 2 cmc. d'urine, 15 cmc. d'eau et 5 gouttes d'acide actique dilu. L tube rfrigrant reli au ballon

destiliatoire plonge dans .tn. fiole munie de on fait 50 cmc. d'eari. A f'aide d'un second tube,

de la vapeur d'eau dans le.liquide du ballon e KTpTDAHL: l-'actone est entrane et distille en I'espace d" 4 minutes. Le distillat est additionn de 2,5 cmc. de solut de soude caustique ZJo6 et d'un excs de solution iode N/,00. Apis quelques minutes de rePos'. on

f"rr."

acidule avec de l'acide hlorhydrique et I'on titre par a mthode en retour I'aide d'une solution io/r* d'hyposulfite de soude (utiliser I'empois d'amidon lomme indicateur).
Ractif s:

icide

actique ditru (Acid,e actique ditu

joolo

pr. anal.

<<Mer&>>).

Solution d'e soud,e caustique z5o1o (Sodlum hyd'tique en solution, exenpt d,'ainote, D : r,Jo, pt. anal'- <<Merck>t)' Solution d'iode N/roo (Solution d'iode uolum.
<Merck>>).
Lf

,oo

normale

Solution d,'hyposulfite de soue N/roo (Solution de thiosulLf fate de sod,ium uolutn. $s florfilale <<Merrh>>). Solution d'empois d,'amid'on ( prparer a)ec l'Amion so'

luble

d"

aprs Zulhopshy, <<Merck>}

89

Aclde actylaattqrc,
La-prsence d'actone ayznt t rvle daos I'urine, on procdera la recherche de I'acide actylactique. cette op-ration doit tre effectue avec de I'urine aussi fialchement Emise que- possible, tant donn que I'acide zctylactique se ddouble facilement en actone et en COt.

tr[thode d'Annneurlnn. Principe.

En prseuce de corps dshydratants, I'acide actylacaque
condense avec

la rsorcine en produisant I'umbeliiferone

se

p.

Cecltnique.
dans un verre essai, Lorsque 1; rsorcine est dissoute, ljouter lenteme nt z cmc. d'acide sulfurique qu'on fait glisser le long des parois du verre.- Il se produit aussitt une coloration rougetre la surface de sparation des liquides. Mlanger ensuite le contenu du verre essai en refroidissant avec de l'eau; diluer le mlange avec 2oo cmc. d'eau, alcaliniser lgrement par l.ammo41qy. La prsence d'acie actylctique esr dcele par une intense fluorescence-bleue.
Ractils:
Rsorcine (Rsorcine resublirne trs blancbe
<<Merc,k>).

fnffoduire 5 cmc. d'urine et ogr. zo de rsorcine

pr. anal.

Acid.e suffurique, D : t,84, pr. anal. <<Mer&>>. .mmoniaque (Ammoni.aque en solution org6o pr. anal.
errA>>).

Baetion de (6}nnulnnr. S-cmc. eqv. d'urine sont additionns gouttegoutte d'une solution de perchlorure de fer roolo. Les premires gouttes font toujours appratre un pr9o

Ilrine
cipit blanchtre de phosphate de fer, les suivantes dterminent une coloration rouge violac en Prsence d'acide actylactique (examine en lumire directe, la coloration est plus visible que par transparence). Si I'urine ne conticnt que des traces d'acide actylactique, la coloration est peu visible. Mais si I'on fait dans ce cas la
sence ou

mme raction avc de I'urine normale et que l'on compare les

fer aprs I'absorption de certains mdicaments (coloration violette par I'acide salicylique et ses drivs, coloration rouge par l'antipyrine et la phnactine, coloration bleu noir par le tanin) apparaissent Par contre aussi dans I'urine que I'ot a fait bouillir pendant quelques minutes. I1 sera donc facile de reconnaitre la teinte due I'acide actylchlorure de
actique.

teintes des deux solutions, il sera facile de conclure la pr l'absence d'acide actylactique. La raction au chlorure ferrique ne se produit Pas avec des urines pralablement portes l'bultition. Les colorations que donne le per-

IJne autre mthode consiste aciduler fortement I'urine avec de I'acide sulfurique, puis I'additionner d'ther et agitert vigoureusement (s'il se produit une mulsion, elle disparaitra
avec quelques gouttes d'alcool). Cet

extrait th&t donne avec

une solution trs dilue de perchlorure de fer une coloration rouge violac. L'antipyrine ne Passe pas dans l'ther.
Ractifs: Soluti.on d'e percblorure d,e

lution pr. anal. <<Mer&>>,

d'eau).

ler (Percblorure
tend,re d,e

fet en so' son aolume fois

d'e

Plgments blllalres.
L'urine normale ne contient pas de pigments biliaires. Ils ns s'y rencontrent que dans les cas de stase biliaire accompagne dlctre. Les urines ictriques fralchement mises sont colores en jaune rouge par la bilirubine; aprs avoir t, abandonnes elles-mmes pendant quelque temps' elles ptsentent une teinte verte ou brun vert (due la biliverdine, produit de dcomposition de la bilirubine).

9r

a) Beeherohe de lr blllrubine. Raction de Grnrsr,rx. Au-dessus d'une couche d'acide nitrique fort (p1e1dre de prfrence I'acide nitriqoe nbn purifi du commerce), on verse quelquei centimftes -Si cubes de I'urine examiner. celle-ci renferme de la bilirubine, il se produit la surface de sparation des deux liquides une srie d'anneaux colors. L'anneau vert est seul caractristique des pigments biliaires.
Ractif :

Acid,e nitrique brut.

Raction de Rosnxucr. La raction de GMrLTN a t modifie par RosnxBAcH de la faon suivante : Aprs avoir filtr l'urine, taler le filtre sur une surfae blanche, puis y laisser tomberune goutte d'acide nitrique brut. Comme prcdemment, il se produit une srie d'anneaux colors, dont le dernier, en partant du centre, prsente une teinte verte.
ces ractions ne peuvent tre appliques quand les urines sont trs fonces, ni guand elles sont riches en urobiline et en indoxyle, mais pauvres en pigments biliaires. Dans ces cas, il faudra oprer sur les pigments pralablement isols.

Raction

d'H.r,nrMARSTEN.

Additionner ro cmc. env. d'urine de quelques goutgouttes de lessive de soude, puis filtrer. Aprs avoir lav le prcipit l'eau distille, le dissoudre dans le mlange d'acides et d'alcool qui constitue le ractif d'H,rrvrMARSrEN (voir ci-dessous). Lorsque
92
tes d'une solution de chlorure de Ca t de quelques

Urine
la solution ainsi obtenue est chaufie, il se produit immdiatement une coloration verte qui passe ensuite successivement par toute la srie des colorations dj observes (voir ractions de Gunux et de Rosnxr^r.ur).
Ractils:

Cblorure d,e calcium crist. pr. anal. <Mer&*. Solution de soude caustique (Sodium lrydrque en salation D : 11168 pr. anal. <<Merch>>). Ractif d,e Hantmarsten (un ml,ange constitu par r partie
d.'acid,e

nitrique

z5o1o (.cid,e

anal. <<Merckn) et rg parties d.'acid.e chlorhyd,rique (Acid.e

chlorhyd.rique

nitrique, D

- r,rJo pr;

D: rJ24-r,tz6

pr. anal.

aprs aaoirrepos quelquetempsrle mlcnge s'est color en iaune, ofl en prend, un uolume et on l'ad.d,itonne d,e S g aolutnes d,'alcool zgolo (zg parties d,'clcool absola pr. anal. q.Merck> *7r parties d,'eau),

<<Merckt>). Quand,,

b) Becherehe de I'urobilinogne. Aldhyde-raction d'EHRLTcH-BI usn. 3 j cmc. d'urine pralablement refroidie sont additionns de 3 gouttes du ractif d'Esnrrur. Si la quantit d'urobilinogne est trs abondante, il se produit mme froid une belle coloration rouge qui n'est obtenue dans une urine normale qu'aprs I'avoir chaufie. Si cette teinte n'apparat pas dans I'urine mme porte l'bullition, n peut en conclure avec certitude I'absence d'urobilinogne. Ractif : Ractif d'Ehrl;ch, <<llIer&>> cot?rpos e d,eux parties d,e d,imtbyl-p-amino-bennald.hyd,e (ractil d.e Ia Pharrn. all. 6) <<Mer&>> et de 98 parties d'acid.e chlorbydrique zoolo (4 partes d,'acide chlorhyd,riqu.e z5olo, D : r,tzlt pr. anal. <<Mer&> | t partie d,'eau).

c) Becherehe de I'uroblllne. Raction de ScnrnsrxcnR.

L'urobiline qui

ractif de

se forme sous I'action dc I'eir ct de le lumire, dans I'urinc-abandonne elle-mme, est dcele I'aide du
Scnr,nsrNGER.

Additionner une portion de l'urine examiner d'un volume gal de ce ractif et filtrer. L'apparition d'une fluorescence verte indique la prsenc d'urobiline.
Ractif

Ractil d,e Schlesinger, <Mer&>> (solution alcoolique d,'ectate d,e sinc toolo).

Dlaso-reactlon. Cechnique. Mettre dans un tube essai zt g gouttes du ractif dtazo e, ro cmc. du ractif dlaLo b et ro cmc. d'urine. Agiter vivement: - il se produit de la mousse; y ajouter sans tarder j cmc. de solution ammoniacale. La raction est positive, si le liquide et la mousse se colorent en rouge. Il est plus pratique d'utiliser les <tubes diazoractionu qui sont pourvus de divisions, indiquant La quantit de chacun des ractifs ajouter (b" y verse le ractildiazo a jusqu'Iamarque N,le racti[. diazo b jusqu' la marque S, l'uiine jusqu'au niveau de U et I'ammoniaque jusqu' celui d A). Pour liminer les substances qui poumaient gner la raction, mlanger l'urine avec un volume gal de sulfate d'ammonium, puis ltrer. L'urine ainsi traite et claircie peut servir pour la recherche de l'urochromogne par le procd suivant: Diluer I'urine jusqu' doloration presque complte, puis y ajouter 3 6 gouttes d'une solution de 9+

Urine
permen ganete de potasse r pour cent (ou bien une grenule de permanganate). Quand la iaction est positive, on observe une coloration iaune d'or due I'urochrome qui s'est form pa" o*ydation de I'urochromogne.
Ractils: Ractif diazo a d,'Ebrlch, constitu par ane solution de nitrite d,e sod,itm o,5o1o (Nitrite d,e sod,iumpr. anaL <Merch>>).

d,e l'eau

Rectf diazo b d,'Ehrlich: s'obtient ?ar dissolution de ogr.So, d.'acide saQanilique (Acid,e sulfanil,ique pr. anal. <<Mer&>) dans S ctnc. d;acid,e chlorl4t.riquc a1oJo (Acide cllo1hyd.rique pr. anal. <<Merch>>, D.: r,r:24). Eien,re aaec

too cmc.

Solution ammoniacale (Anmoniaque en solttion pr. anel. <Mer&>) Sulfate d,'ammonium pr. anal. KMer&rl Permanganate d,e potassium pr. anal. <<Merck>.

Indo4rle.

zS cmc. d'urine acidule sont additionns d'une solution d'actate de plomb roo/0, puis fils. Recueillir ro cmc. du filtrat, y aiouter ro cmc. d'acide chlorhydrique z;vo (cnte-nant o,z o,{o/o de chlorure ferriqu) et z 3 mc. de chloroforme ; agiter. Le chloroforme prend graduellement une coloration bleue plus ou moinJintense suivant la quantit d'indoxyle contenue dans l'urine. S'il se produit un prcipit de chlorure de plomb, recommencer La raction en utilisant un peu moins d'actate de Pb. It e.s! important de ne prputet le ml-ange d'acide chlorhydrique et de peichlorore de fer qu'au moment de s'en servir.
Ractils:
So

Actate d.e plotnb pr. anal. aMer&>>, en solation toolo. lution d,' acid,e cblorbydriq ue e j olo ( Acide ch lorhydri.que

95

orz-or4olo (Percblorure d.e fer crist. pr. anal. <<Merckn). Chloroforme pr. anal. <Illerckt>.

: rJ24, ?r. anal. <<Mer&'>>) et d,e petchlorute d,e ler

Ammonlaque urlnalre (Dosage). Principe.

Aprs dfcation de I'urine par I'alcool, I'ammoniaque est mis en libert per un alcali, puis distill et recueilli dans de I'acide chlorhydrique N/r. L'excs d'acide est titr cn retour I'aide d'une solution normale d'alcali.

Cechnique.

On opre comme pour Ie dosage de l'ammoniaque dans le sang. L'appareillage et les ractifs sont les mmes. Pour viter toute emeur due la dcomposition de I'ure, il est indispensable de n'utiliser pour ce dosage que de l'urine frachement miseUre dans liarlne lDosage). Connaissant la densit de I'urine, il est possible de faire une estimation rapide du taux de I'ure (exception faite naturellement des cas o I'urine contient du sucre). Lorsque la densit est de rroro la teneur en ure est approx. de I lOo/o

r,or 5 rro2o
I>O22

rr$olo
t rB o/o
2rQolo
2r8o1o

l ro25 r,o28 I ro3o Tro3z (d'aprs Tuous). gb

3tZolo
3,8o/o

4&olo

flrine
dosage prcis de I'ure urinaire s'efiecfue d'aprs les mmes mthodes que celui de I'ure -technique de Slnr"ngr-titt. c'est--dire selon la cEssER ou pat Ia mthode l'urase (voir le dosage de lture dans le sang), avec la seule diffrence, gue, pour I'urine, la dose d'essai doit tre bien plus petite que pour le sang. Ainsi dans la mthod par I'urase, on n'utilisera que r cmc. de I'urine tendue de ro fois son volume d'eau (: o,r cmc. d'urine). Actd'e arQue (Dosa.ge). Principe.

Le

L'acide urique donne avec I'acide phosphotungstique (ractif de For,tx-Dnr*rs) une coloration bleue, dont f intensit est Proportionnelle sa concentration dans l'urine. Sur cette base, il a t possible d'tablir un dosage colorimtrique. L'acide urique est pralablement trait Par une solution de lactate

d'argent et isol
For.rr-'Sfu).

t'tat d'urate

argentique (mthode de

Cechnique. z S cmc. d'urine sont introduits dans un tube centiifuger contenant 3 cmc. d'eau. Ajouter 3 cmc. d'une solution limpide de lactate d'argent, mlenger et centrifuger. I1 faut que le lectzte d'argent soit en excs. Aprs avoir dcant le liquide clair surnageant, agiter le culot de centrifugation avec 2 cmc. d'une solution de cyanure de sodium l5'i' jusqu' ce que l'on obtienne une solution limpide. Celle-ci est verse trs exactement dans un ballon jaug de roo cmc. (rincer le tube zo cmc. ^vec zooto). d'une solution de carbonate de sodium Introduire dans un second ballon jaug, d'une contenance de roo cmc., J cmc. d'une solution-talon

97

d'acide urique (correspondant o mgr. 5o d'acide urique), puis z cmc. d'une solution de cyanure de Na et zo c-rc. d'une solution de carbonate de Na, Verser ensuite dans chacun des matras J cmc. du ractif de For,rN-DoNrs; aprs avoir laiss reposer pendant 5 minutes, agiter et complter le volume jusqu'au ffeit de jauge. Agiter encore avec soin, puis laisser reposer une seconde fois. Les solutions limpides surnageantes sont compares au colorimtre.
Calcals. Hauteur de la solution-talonXorj
Ractifs:

quantit d'acide urique en mgr. contenue dans

la prise d'essai.
Solution d,e carbonate d,e sod,ium 2so1s (Carbonate d,e sod,lum crist. pr. anal. <<Mer&>>). Sol. d.e cya.nure de sod,ium t5o1o (Cyanure d.e sodium
<<Merck>>).

<<Merck>>).

Ractil au lactate d,'argent (Lactate d'argent D.Aq,V. s En d,issoure j gr. d'ans 5 ctflc. d,'acide lactiqae (Acid.e lactique tout pur, trs bl,anc D.A.B.6) et 5 cmc. diune

solution de soud,e caustique roolo, puis complter aaec d,e I'eau too cmc. Ractif d,e Folin-Denis, <<Merck>> pour le d,osage d,e l'acid'e

arigue.

Il

tungstate d,e sod'iurn

se prpare d.e la laon suiaante: rco gr. d.e pr. anal. <<Merck>> sont ad'd,itionns

aerser quelques gouttes d,e brotne (pr. anal. <<IVIer&>), puis fare bouitrlir nouveau pour en liminer I'excs de Br. prs auoir lass refroiir, complter I'e uolume d,e la solu-

d.e 8o cnc. d,'acid,e phosphorique (cid'e phosphorqae D - ernt. r,7 pr. anal. <<Mer&>>) et d,e 7oo cn c. d,'eau; le tout est ensuite port l'bullition pend,ant z heures. Lorsque le liquid,e a pris une coloration trs fonce, I

tion

libe.

98

flrine
Solution-talon I'acid'e urique:

Poar prparer cette solution-talon, porter rooo mgr.

'acid'e urique (Acid'e urique <<Il'Ierck>>, Pout l,'usage scierr' tif.que) sur un entonnob plac sur I'ouuerture d,'un ballan d,e 3aa cmc. Vercer d.ans le rcipient, en enttanant I'acide urique, une sol'ution chauffe 6o" e o9r.6o de carbonate de lithium d,ans r7o rnc. d"eau, Aprs d,issolution d'e I'actd'e urique, le liqude est transfr d'ans un matras iaug d,e r litre; tend,re le volume d'e Ia soluton 4oo ou 5oo cmc.' pus y aiouter ro crnc, d'e fortnalhyd'e 4oo1o et j cmc. d'acid.e acti.que glacial (agiter). Aprs auoir li.min I'acie carbonique en agitant nergiquement, camplter le aalume

tooo ctnc. Prend.re zS crnc. d'e cette solution et les tend.re z5ocmc.''

on obtient ainsi une solution d,ont on gr,rc d"acide urique.

cmc. correspon

Azote total, Dosage dlaprs Kfiwtnt. On opre exactement comme pour le dosage de I'azot rsiduel du sang (srurn). Dans un petit matras jaug., on.tend.r cmc. d'urine ro cmc.; puis on incinre dans le ballon de Klpln.rHI, r crnc. de la liqueur dilue. Pour la suite des oprations voir plus haut.
AcMe phosphortqae.

I. Recherche qualitative.
Les urines additionnes d'un lger excs d'ammoniaque et du <mlange de magnsio (voir-ci-dessous) donnent un gr.egiplt de phosphate ailrmoniaco-magnsien soluble dans les acides.
Rectifs:

Solution ammoniacale (Ammoniaque en solution, ?r. anal.

<<Mer&>>).

phorique

Mlange de magnsium ?oilr la rccbercbe de I'acide phos-

pr. anal.

<<Mer&>

(liqueur contenant du cblor-

99

hyd,rate d.'ammoniaque, d,e l"'ammoniaque en excs et cblorure d,e magnsium).

d.u

II.

Dosage volumtrique.
Princ'pe. Les phosphates secondaires prcipitent totalemcnt les scls d'urenyle cn donnant du phosphate d'uranyle. Si I'on ajoutc l'urine de la teinture de cochenille, lc moindrc cxcs de la solution du sel d'urane fait prendre la liqueur une coloration verte. On transfoffne les phosphates primaires et tertiaires en phosphatcs secondaires per I'actate dc Na.

Cechnique.

Ajouter So cmc. d'urine dsalbumine 5 cmc. d'une solution actique d'zctate de soude roo/o
cmc. de teinture de coctrenille. Chauffer la liqueur une temprature voisine de l'bullition, puis y faire tomber goutte goutte et en agitant constanrment une solution titre d'ectate d'uranyle (voir plus bas) jusqu' ce que le mlange ait pris une teinte verdtre persistante. 11 faut que la temprature soit constante pendant la dure de la titration. La dLcation se fait au moyen de charbon adsorbant, qui sert en mme temps dcolorer les urines ictriques.
Ractifs:
Solution d,'actate d,e Na roolo (obtenue par d,issolution I,e I'actate de sod,um crist. pr. anal. <<Mer&,t) additionne d,e jolo d,'acid.e actique glacial, D : r,055-r,o6o pr. anal.
<<Mer&n.
d,'

(renferm a.nt Jolo d'acide actique)

.t o,j

Solution titre d,'actate d,'uranyle: issou,re ag gt. 969 actate d,' uraniunt crist. exentpt d" alcali pr, anal,, <Mer&>t d,ans da l,'eau. Il ne sufflt pas de complter ensute l,e aoIutne d,e la solution rooo ctrrc. mai,s il, faut encare en d-

roo

flrine
termner l,e

titre exact. A cet eftet on a. recours une solutio*-talon prpare apec d,u blpborphate de potassi*m

pur d"aprs Situensen (KHzPOa); 9,5785 gr- d'e ce sel sont issous d'ans rooo crnc. d.'eau. Chaque cmc. de I,a solution ainsi obtenue correspo.nd _ 5 ngr. d'e P2O6. On en prend 50 cmc. (: tso ffigr--d"acid'e ptroipt orique anhydre) et on les titre au rnoyen- d'e ls so'lufion d'aitate d.'uranyle. Etend,re ensuite auec la quantlt ncessaire d'eau Pour qu' t cmc. d,e la liqaeut d'utctrc correspovrd'ent 5 mgr. d,e PO6.
Eeinture d.e cochenille
arb on anirn
<<Merck>>.
Ch

al

(Ch

arb

on m'icin al M erck>> ).
<<

Parphyrlncs.
On peut conclure la prsence de porphyrines dans I'urine, quand la raction de Hnrr.rn est positive (alcaliniser I'urine par NaOH et faire bouillir sans agiter: le prcipit est,roug iang; en l'absence de porphyrines, il est gris) et que les- ractins la benzidine et la teinture de gaac sont ngatives. Les urines qui contiennent des porphyrines prennent une teinte jaune-bnrn ou brun-rouge, parfois mme Presque noire, mais lles peorrent aussi prsenter une couleur peu prs normale.

Oaroctrlratlon de lthmatoBolph5rrlne. Ajouter 5 cmc. d'acide actique concentr pendant e jours. r o cmc. durine et laisse t ^urepos u bout de ce L'hmatoporphyrine se retrouve temps l'tat d'un dpt rouge. En e qui concerTre la recherche des porphyrines par la ipectroscopie, voir Ron.r., Praktikum d'er phystoligiscben Chemte> vol. II (sang et urine),
P. 583Ractifs: Lessiae d.e soad'e (Sodium fuyd'rique en salution,

pr. anal. <<Merck>>).

C

D - r,i
<<Mer &>>.

Acide actique (Acide actique glacial

<Merckn).

omprim s d'e b enzidine pour I,a re c her che d'u s ang

g6o1a

pr.

ancl.

IOI

Acldc sulfurlque.

On trouve I'acide sulfurique dans l'urine

z formes:
r

sous

" Sulfates minraux

zo

Sulfo-thers (sulfates conjugus).

a) IDosage do I'aolde snlfurique det snlfa,tes mlnrarnx. Pri,nci,pe. La benzidine tant une base faible, donne des sels fortemcnt dissociables par hydrolyse, ce qui permet de faire un dosage trs prcis de l'acide sulfurique dissoci. (On prendra Ia
phnolphtaline comme indicateur).

Cecltni.gue.

Dans un verre expriences, zS cmc. d'urine filtre sont additionns goutte goutte d'acide chlorhydrique zJoto jusqu' franche coloration bleue d'un papier imbib de rouge Congo. Ajouter ensuite lentement r oo cmc. d'une solution de benzidine, agiter et laisser reposer pendant quelques minutes. Le prcipit, constitu de tnes aiguilles soyeuses, est filtr. Laver le verre expriences et le flltre avec de I'eau sature de benzidine, puis replacer le prcipit et le filtre dans Ie verre. Additionner de zo 30 cmc. d'eau et porter l'bullition. Aprs avoir laiss refroidir, ajoutet tlz r cmc. de solution de phnolphtaline et titrer au moyen d'une solution dcinormale de potasse caustique jusqu' coloration rouge. r cmc. de Ia solutin alcaline N/ro correspond +g mgr. d'acide sulfurique.

to2

flrlne
b) Ilosoge do I'oclde sulfurique des sullo'ther.
(acide sulfurique ccnjugu).

Principe.
La teneur de I'urine en acide sulfurique conjugu est donne par la difirence entre I'acide sulfurique-to?l et I'acide suliurique des sulfates. 11 convient donc de faire, pour commener, le dosage de l.'acide sulfurique total. Cechnique.

On procde d'abord I'hydrglyse des sulfo-conjugus: prendre 25 cmc: d'urine,.ajoutet 2o cmc'icide chlorhydrique dilu et faire bouillir pendant r 5 zo minutes. Agrq refroidissement' doser liacide sulfurique total d'aprs la mthode expose ci-dessus por l'acide sulfurique seul.
Ractifs pour les d,osages a et b: Papier d,e Congo D.A.B.6 <<Merck>>. AcTde chlorhyd'rique zJolo (Acid'e chlorhyd'tque,

D:

rrr24 pr, anal,. <<Merck>)Sotutin d'e benzid'ine: solution d'e 4 gr- de benzd'ine pt' anal. <<Merck>> d'ans de l,'eau q.s. pour zooo cnc. (Broyer

c4rrc. d'eau, puis aerser la tritutation additionne d'e 5oo cmc. d,'eau d'ans un ballon d.e e litres; aiouter 5 cmc. d" aci'd,e chlorhydriqne concentr. Lorsque la issolution est acheue, cotnplter le aolume zooo cmc. auec d,e I'eau). r1o cn6. d,e cette solution sont suffisants Pour prcipiter totalement o gr- to d,'acid'e sulfuriqu-e. Sotutin alcoolique d'e phnolphtal'lne tolo KMer&l,. Solution d,e potasse caustique N/n <<Merck> (oa solution d'e

la benzid,ine auec ro

soue caustique

N/r. Soufre neatre (Dosage).

On dsigne paf soufre (neutre> diffrentes combioaisons ofganiques du soufre urinaire, dont quelques unes sont encgre peu connues. Le soufre (neutfe) tant dos l'tat de sulfates, il

convient tout d'abord de l'oxyder. Dans ce but, on traite I'urine avec de l'acide nitrique fumant et de L'azotate de potasse.

r03

Cecltnigue.

5 cmc. d'urine). Ajouter ensuite un volume d'cide ezotique fumant g*1 celui de I'urine et clraufier le mlange dans un ballon de Kjeldahl maintenu en position incline. L'opration est termine, lorsqu'aprs dgagement des oxydes nitreux, on n'observe plus de gouttelettes dans le col du ballon et qo'il reste danl le fond du rcipienr un rsidu de couleur blanche. Dissoudre ce rsidu dans un peu d'eau, ajouter de I'acide chlorhydrique et cirauher l'bullition jusqu'1 limination totale de I'acide azotique. Tout le soufre urinaire a t transform par c traitement en acide sulfurique -que I'on dose d'aprs le procd la benzidine (voir au dosage de I'acide-sulfurique des sulfates). Pour obtenir la teneur en soufre <neutre>, on retranchera du chifire obtenu le chifire de I'acide sulfurique des sulfates et des sulfo-conjugus.
Ractifs:
Soluton d,'azotate d,e potasse

ro zo cmc. d'urine sont additionns d'une solution d'azotat* d. potassium zoolo (t z cmc. pour

r,5z).

nitrate de potassium cfist. pr. anal. <<Mer&>>). Acide nitrique famant pr. anal. <<Mer&>> (D : au moins

zoolo (prpare auec Ie

Chlarures, Agiter zo cmc. d'urine avec r gr. de charbon activ, puis, au bout d. -5 minutes, filtrer. Prlever S ou r o cmc. de l'urine dcolo re et limpide, ajouter 3 gouttes d'une solution de chromate

r04

Ilrtne
de potasse et titrer pat L'azotate d'argent. N/ro jy:q.r'i coloration brune. r cmc. de la solution dcino"male d'azotate d'argent correspond 5 mgr. 8+6 de chlorure de sodium.
Ractils:

Solution d,'axotate d,'argent Nlro (Solution de nitrate d'argent ttolum, rf $ ,toflmale <<Merck>)Solation de chromate d.e potassium 7a1o (Chromate de pota.ssium iaune pt. anal. <<Met&t>). Cbarbon actiu (Cbaon aninal poar l,'analyse d,e urine
<Mer&>),

Sang.

Ba,otlon Principe.
,

lo benzidine.

La bcnzidine, dissoute dans I'acide actiquc concentr et additionne d'eau oxygne, fait apparaitre une colorationbleue
en prsence des pigments sanguins. (Labetzidine chimiquement Pufe ne donne pas cette raction; on emploiera de prfrencelabeizidine <<Merdr> qui se prte

particulirement bien

cet usage.)

Cecbnique.

Dissoudre quelques cristaux de benzidine dans z cmc. d'acide actique glacial, puis ajouter la solution limpide 2 cmc. d'eau oxygne 3olo

(ro volumes). D'autre part' agiter I'urine examiner avec un volume gL d'ther ettl, de son volume d'acide ac-

tique gIacial. Dcanter la coue thre et la faire glissei avec prcaution la surface de la solution benzidinique. Une mthde pratique repose sur l'emploi dl a9tif en comprims uMerck, Pour la recherche du

r05

sng dans I'urine. Ecraser un comprim et dissoudre la poudre {ans r o cmc. d'aide actique 5ovo; filtrer, puis laisser couler lentement La solution sur un papier filtre imprgn de l'urine
examiner.
Ractifs: Benzid.ine poar la recherche d,u sang <<Mer&>>. Eau oxygne (Perbyd,rol, pr. anal. <Merck>>, en fare une

solutontpourto),

ces d.eux ractils peuuent tre remplacs par le ractif en colt prims <<Mer&>> pour la recherche du sa"ng. Acide actigue glacial pr. anal, <<Mer&>>.

Etber pr. anal.

<<Merck>>,

D:

o,7zo.

Boction la, potasse ea,nstique. L-a p1sence de sang en assez grande quantit est
rvle par des flocons brun rouge qui apparaissent dans I'urine refroidie lorsqu'on la- fait iralablement bouillir avec un tiers de son volume de lessive de Potasse. B,a,ctlon colore. Etaler sur une lame recouverte de blanc d'uf le culot de centrifugation de I'urine, scher, fixer l'alcool, p,ris colorer pendant zo 3o minutes par la solution de Giemsa (voir coloratin des globules rouges) Calculs arinalres. Les calculs urinaires peuvent provenir du rein et de la vessie. Les calculs rniux issus des voies urinaires, sont en gnral de trs petite taille et prsentent une surface rugueuse. Le sable urinaire est constitu par de trs petits calculs runis en grand nombre.

r06

Urine
Aolde urique. Les calculs constitus par de I'acide urique ou des urates sont frquents. Chaufis suf une lame de platine ils brlet *"nt laisser de rsidu ou en laissant un trs lger rsidu de carbonte de Ca ou de Mg. Le caliul pulvris, donne Ia raction la mrriexide: placeila poudre analyser dans une capsule de porcelaine, verser un peu d'acide azoti{ue dessui, puis vaporer siccit. Aprs refroidissement, ajuter un goutte d'ammoniaque: il-se dvelopp. oi. coloration poorpre virant au violet de quelques gouttes de lessive de pr

"dditiott soude.

Cyrtlno. On reconnatt au microscope les cristaux cef ectristiques de cystine; ils s'obtiennent en traitant le calcoi pulvris pat un peu d'ammoniaque, Poit en abandonnant l'rrapdration dans un verre de montre la solution ammoniacale filtre. Chaufis avec de I'acide chlorhydrique dilu, les calculs de cystine et de xanthine se dissolvent facilement.

Ctrbonttes. Additionns d'acide chlorhydrique, ils se dissolvent avec efiervescence.

Acide oxollque (oralate de Ca). On le dtermine paf 1a mthode habituelle: dissoudre le calcul dans I'acide chlorhydrique. Ajouter un excs d'ammoniaque et aciduler par l'acide actique. Le prcipit ne se redissout pas chaud.
ro.7

Phospha,tes. Se reconnaissent eu prcipit jaune dtermin par I'action chaud d'une solution de molybdate d'mmonium sur leur solution dans I'acide azotique. Ir'xamen mioroscoplquo des sdiments urinalres ost bien plus important falre qo-leur analyse ohimique, surtout ilans les'cas
oir les urines sont &Ibumineuses.

Sdlments urlnalres. Pour Que la sdimentation se produise, laisser reposer I'urine pendant quelques heures dans un vase de forme conique. Le dpt qui s'est constitu, est ensuite prlev avec une pipette et soumis la centrifugation pendant 5 minutes. Lorsqu'on souponne une afiection rnale, il convient de centrifuger mme les urines limpides et non albumineuses, tant donn que dans ce cas, elles peuvent aussi contenir des cylindres et d'autres lments organiss.

fait l'aide de bonnes reproductions comme lments de comparaison. L'examen microscopique perrnet de distinguer: Des cylindres uri,naires hyallns forms par une substance homogne et transparente ; graraleax, dont la matire fondamentale est finement gt+nule 1 cireux., de couleur jauntre, rfringents, prsentant des sinuosits irrgulires ; plthIiaux, constitus pat l'pithlium desquam des rubes urinifres. Des dtritas pithliaux (granulations albumineuses) : pithliums de la partie infrieure des vores urlnalres,

L'identification des lments cellulaires isols se

ro8

Urlne
es globules rouges, des leucocytes, d,e la muciite (cylindroides muqueux), des graisses.. iin.r gouttelettes reconnaissables par Ia coloration au Soudan III' des urafes.' fines granulations jauntres, de l'acid.e uriquel cristaux isols ou agglomrs sous forme de rosettes. L'examen physique et chimique des. sdiments urinaires fouinil $alement des renseignements Prcieux sur leur nature: L'acide urique et les urates se dissolvent par addition d'acides c"haud. Les phosphates se dissolvent dans l'acide actique. Les *ahtes sont dissous pat L'acide cJrlorhydrique. Le pus s'agglomre chud et surtoyt par. addition I'urie de quelques gouttes de lessive de
Potasse.

Rdterdte de mdlcaments funs llurine. otantllde.

phnol

L'urine, aprs absorption d'ectani-1ide, renferme du p-aminosulfurique et I'acide glycuronique' i'acide "t

" I'acty1-p-aminophno1, tous deux

conjugus avec

On fait bouillir ro 20 crnc. d'urine avec 2 cmc. d'acide chlorhydrique concentr: les drivs conjugus de-facid! giycuronique et de l'acide sulfur1que se ddoubleni en leurs constituants. Aprs reiroidissement de l'urine, additionner quelques
centimtres cubes d'une solution aqueuse de phnol 5 vo et y faire tomber- goutte 1 gontt. une solud;n filtre de c]rlorure dchaux io,t. Une coloration violet rouge se dveloppe par a,gitation dans

r09

I'urine en plg.sence de p-aminophnol et vire au bleu par addition d' d'ammoniaque. Si I'urine est fortement colore, il convient e I'asiter avec de agiter l'ther aprs I'avoir fait bouillir *nc de l'acide {lgthydrique. L'ther esr ensuite vapor er Ie rsidu, repris par de I'eau, est trait omme cidessus.
Ractils: anaL <<Mer&>>, D - rJg). Phnol (Phnol liqufi D.A.B.6 <<Merck>>). Chlorure d,e chaux D.A.B.6 <<Merck>>. solution ammoniacale (ammoniaque en solutior,
<<Mer&>>).

Acide chlorbydrique concentr (Aci.e chlorhyd,ri.que pr.

?r.

anar.

Ether pr, anal.

<<Merck>>.

.Lolde sa,lieyllque et snlleylotes. L'acide salicylique se retrouve en partie dans les urines , I'tat libre. Agiter l'urin acidule par I'acide sulfurique avec -un mlange compos - de deux parties de chloroforme et 3 -partieJ d'ther de ptrole; aprs avoir filtr la- cbuche thre, l'additionner d'eau et d'une goutte de perc;hlorure de fer dilu. Une coloration violette se produit.
Ractifs:

Chlorcforn e ?r. anal. <<Mer&>. Etber e ptrole (Benzine d,e ptrole D. A.8.6 <<Merchr). Cblorure ferrgue (Perchlorure d,e ler pr. anal,. <<Merck>-).

Alcdofdes. Les alcalodes sont mis en libert d'aprs le procd de Sres-9Tto (voir $oNe, PrakfiEum derbhysiologischen Cltentie, p.668 et Scrru:.or, Pharniareuti.scbe Chentie,II, rgzg, p. r656). Leur identi-

IIO

Urtno
fication se fait I'aide des ractions habituelles (voir aussi loc. cit.).
Anthraquinonos.
Les drivs de I'anthraquinone entret dans la composition d'ungrand nombre de purgatifs d'usage courant: sn, rhubarbe etc. Ils sont dcels dans I'urine par la teinte vert jaune

qu'ils lui confrent quand sa raction est acide etpar.Ia coloration tongetre qu'ilr y font apparaltre en prsence d'alcalis.

On fait bouillir l'urine evec une goutte'de lessive

de potasse, on

acidule bvec de I'acide c.hlorhydrique' ap;s refroidissement on puise pr de l'ther et

finalement on dcante. Si I'on agite la couche thre avec une solution aqueuse dilue d'ammoniaque, il s'y dvelopPere une coloration carmine en prsence d'anthraquinones.
anal. <<Mer&>t).
Acid.e chlorlryd'rique

Ractifs: Lessue d'e potasse (Potassium hydrigue en solution pr-

pr. anal.

Merch>>.

Ether pr. anal.

<<Merckn).

<<Merck>.

Solution ammoniacale (Ammoniaque en solution ?r. at al.

ntlpSrrlne. La majeure partie de I'antipyrine Pesse ,dans les - I'tt libre. Aprs avoir alcalinis quelurines ques centimtres cube {'yring per de I'ammoniaque, on puise par le chloroforme. Celui-ci est ensuite soutir, puis vapor; le rsidu est rePris par de l'eau. Si l'on ajoute la solution ainsi obienne du percJrlorure de fer, il se produit une coloration pourpre qui se maintient l'bullition. On obtient par contre une couleur verte si I'on additionne 1 liqueur d'acide actique et de nitrite de sodium.

III

Ractifs:

solution ammoniacale (mmoniaque en solution pr. anar.

<<Mer&n).

Chloroforme pr. anal. <<Merck>>. Percblorure d,e fer pr. anal. <<Mer&>>. cid,e actigue pr. anal. <<Merck>>. Nitrite de soud,e (Ntrite de sodium pr. anal.

<<Merck>>).

IDrlvs barbflturlque. Les drivs barbituriques peuvent tre extreits des urines, du con_tenu gastrique etc. d'aprs le procd de Sre.s-Orro. La liqueur suspcte est acidule, puis puise pat ltther. Po,rr I'extraction, employer de prfrence un appareil marche continue (appareil de SoxHrnr). -L'extrait th& contient, en dehors des drivs barbituriques, ,des grisses et des acides gras, qu'on limine piesqu'entirement en agitat Ia liqueur vec de l lessive de soude r 0/0 refroidie dns de Ia glace. Le driv barbiturique passe alors l'tt de sel sodique dans la solution aqueuse. Sparer les deux solutions; aciduler la solufion aqne,r^se (vrifier au papier de Congo), filtrer le prcipit et puiser par I'ther. Aprs vaporatio de l'ther, dn obtient un rsidu constitu par le barbiturique et des acides gras-.^ On loigne ceux-ci en faisant digrer le tout par l'ther de p*ole. Le barbiturique-isol par cette mthode I'tat presque pur, est identifi par les ractions habituelles. On peut galement employer la mthode de vnn Irallrn et de Srnnnsa.unn-KunN: roo cmc. d'urine sont aciduls avec de l'acide sulfurique, puis additionns d'une solution sature de perm aiganete de potasse jusqu' apparition d'un prcipit persistant.
tT.2

Ih{ne
Aprs avoir laiss reposer pendant r o rninutes lJtemprature de 2oo, on ajoute avec prcaution de l'eau xygne jusqu' disparition du prcipit. Puis on concentre l'urine dans le vide zS cmc. Le rsidu est agit 3 fois (chaque fois pendant r 5 minutes) avec 30 cmc. d'ther; les. .solutions ihres sont runis et abxrdonnes l'vaporation I le nouveau rsidu est repris par un peu d'eau chaude. On le purifie par bullition avec du charbon animal, per concentration et sublimation. Le point de fusin du Vronal ainsi isol est entre r88 t r9r" (le Vronal pur fond lgr"). Le Luminal fond de r73 rT+". Ces prparations se distpg,t.ot microscopiquement par leurs formes cristallines.
Ractif s:

Ether pr. anal. <Mer&>>. Sodium byd'rique tout pur en pastilles pr. anal. <<Mer&t. Ether de ptrole (Benzine d'e ptrole pr. anal. <Merck>). AciCe sulfurique pr. anal. <<Merdk>t.
Permanganate d.e Potassiam pr. anal. <<Merck>. Eau oxygne (Perhyd'rol pr. anal. <<Mer&>).

Charbon attlmal pr. anal.

<<Mer&'>>.

La dtermination de la nature barbiturique du produit ingr peut encore se faire l'aide de la

iaction colore de Zw.m:KER: On agite une portion du liquide examiner ( r o cmc. d'urine sont sufiisants) vec de l'therl s'il se produit une mulsion, on dshydrate avec un peu de gomme adragante. La solution thre est vapore siccit et le rsidu trait per r cmc. d'alcoolmthyliqueexempt d'eau. Ajouter du c,hlorure de cobalt en poudre ou en solution dans I'alcool mthylique jusqu' faible coloration rose, puis alcaliniser la liqueur en y lais-

II3

snt tomber goutte goutte une solution sature d'oxyde de barium dans I'alcoolmthylique. Si l'on se trouve en prsence d'un barbiturique, il se produit instantanment une coloration d'un bleu profond.
Ractils: Etber pr. anal. ql|tt.erch>>. Alcool rnthylique (Mthanol pr. anal. <Mer*,>>). Chlorure d,e cobalt (chlorure fprotoJ d,e cobalt, tout pur,
etcem:pt d,e <MercA>>).

ni&el, <<Mer&>>).

Oxyd,e d.e bafiutn (Oxyde d,e barium anhyd,re, ?ur,

Dueodal. I1 est possible d'identifier I'Eucodal dans l'urine des animaux d'expriences en ajoutant de I'ammoniaque en excs l'urine concentre dans Ie vide, puis en puisant par l'theroulecihloroforme. Par vaporation du dissolvant, on retrouve I'Eucodal sous forme cristalline. Chez I'homme, la prsence de ce mdicament dans I'urine n'a pas encore pu tre mise en vidence (il est possible que les doses ingres aient t trop faibles). Hexa,nthyl ne-tt'rtmine. Les urines qui contiennent de I'hexamthylnettramine donnent avec l'eau brome un prcipit jaune orang. Si I'on distille I'urine vec de l'acide sulfurique, il se produit de Ie formaldhyde l't*t gazeux qui peut tre identifie par la rsorcine (ajouter ogr.o5 de rsorcine et 3 cmc. de lessive de soude jooh pour 3 crnc. de distillat). En prsence

II4

Urlne
d'hexamthylne-ttramine, il se dveloppe 1'bullition une coloration d'abord jaune, puis
rouge.
Ractifs: Eau brome pr. anal.
<<Mer&>>.

Aci.e sufiuque pr. anal. <<Mer&>. Rsorcine resublitne trs blanche pr. anal. <Merc,k>>. Sol. e soud,e caustique 5oo1o (obtenue par issolution d.e soium hydrique tout pur, en pastilles, pr. anal. <<Merck>>).

trlteux lourds.

Plomb. L'urine est fortement coflcentre, puis traite par le chlorate de potasse et I'acide chlorhydrique jusqu' destruction complte de la matire organique. Aprs avoir filtr, on peut dceler le plomb I'aide de l'hydrogne sulfur. Mercare. Porter des rognures de cuivre ou de laiton dans I'urine acidule par I'acide chlorhydrique, puis laisser reposer pendant e4 heures en agitant de temps autre. Le mercure se dpose sur le cuivre ou le laiton. Introduire les rognures de cuivre dans un tube de verre de diamtre trs rduit dont I'une des extrmits est soude, ajouter quelques lamelles d'iode et chaufier: en prsence de mercure une zone jaune ou rougetre d'iodure de mercure se forme sur la partie froide du hrbe.
Racttls:

Chlorate d,e patasse (Chlorute d.e potessiafn crist. pr. anal.

uMerch>).

Rognure| de cuiare (Cuiare metallque er, touittures *Mer&n).

Iod.e (Iod,e resuhl,im

?r. anal.

<Merck>).

II5

Ph6rratlle.
La phnactine s retrouve dans I'urine principalcment sous la forme d'un driv actyl-p-amino conjugu ct aussi, mais en
plus petite quantit, l'tat de phntidine.

Faire bouillir I'urine, pour que les drivs conjugus se ddoublent en leurs constituants, puis, aprs I'avoir refroidie dans de la glace, ajouter z t 3 gouttes d'une solution de ,nitrite de soude
caline aqueuse de naphtol p et un excs de lessive de soude. Il se dveloppe une coloration rouge qui vire au violet en prsence d'acide chlorhydrique. Si la quantit de phnactine absorbe tait importante, I'urine est fortement colore en jaune et donne une teinte violette avec le perchlorure de fer.
Ractifs: cid.e chlorlryd,rtque pr. aral. <Mer&n. Nitite d,e soud,e (Ntrite d,e sod'ium pr. anal. <cMer&>). Sol. d'e soude caustique (Sodium lryd,riqrc en solution pr. anal. <Mer&n). Naphtol I p. anal. <<Mer&n.

r Vo, lluelques centimtres cubes

d'une solution al-

Phnol. En prsence de phnol, il se dveloppe dans l'urine une coloration violette par addition de chlorure ferrique. Chaufi e avecle ractif de MrlLoN' I'urine se colore en pouqpre.

Pyrlntdotn.
Lc pyramidon passe dans I'urine sous forme d'un acide.glyorronique conjugu. D'autres produits de transfornation y ont t dcts: ce sont l'acide rubaeonique, auquel est due l,t coloration rouge que prcnd l'urine aprs absorption du mdicatnent et 1'antipyryl-ure.

TI6

flrine
L'urine des personnes qui ont absorb du pyramidon donne avec une solution de perihlorure de fer
zoto une coloration variant du bnrn fonc au violet (raction de 1'antipyry1-ure). Si l'on superpose I'urine une solution iode r vo (obten re par dilution de r:{J parties de la teinture d'iode dgurant la Pharm. all. 6 avec 8,57 parties d'eau)- on obtient une zone violette virant petit petit au brun rouge.
Ractils: Chlorure femque (Perchlorure e f", Y. anal. <<Mer&>). Ceinture d'iode (Ceinture d'iode brune D.A.B.6 <Mer&>).

lr,ntonine.

L'urine des personnes ayant absorb de La santonine se colbre en rouge en prsence de soude

ou de potasse caustique. Si on I'agite avec de I'alcool amylique, la matire colorante Psse dans la couche alcoolique (difirence avec les anthraquinones qui ne communiquent pes la coloration rouge I'alcool).

r17

Sxa,men du fiquide cpha,lo-r,Ghidien.

Remarque s prIiminai.r es. La ponction lombaire (faite dans le but de faciliter le diagnostic) se pratique toujours sur le malade ieun. Ir faut en mme tempi faire une prise de sang veineusJ. on soumettra le liquide la centrifugation aussitt aprs en avoir prlev la quantit ncessaire pour la numration des lcucocytes. Nurnrati,on des leucocytes. Dans une pipette compte-globules blancs, on spire la solution colorante suivante jusqu'au niveau de la division r : Acide actique glacial . 2rO Violet de mthyle orI

q. s. pour 5o,o Puis, on charge la pipette du liquide cphalo-rachidien fraichement recueilli jusqu' affleurement du trait roetl'on mIange evec soin. On utilise pour la numration la chambre compte-globules de FucnsRosnxrnu,. Les premires gouites qui s'coulent de la pipette ne doivent pas tre employes: on en rejettera_ donc quelques unes avant de procder au remplissage de Ia cavit,. On compte tous les globules blancs compris dans le quadrillage et I'on multiplie par '/o le drifire obtenu. A l'tai normal, le liquide cphalo-rachidien renferme r j leucocyteg pa1 millimtre cube. La prsence de plus de ro globules blancs par mmc. est dj le signe d'un tat pathologique. 6 g leucocytes reprtsentent une quantit limite. Si I'on veut faire un exatnen cytologique du liquide cphalorachidien, il faut le soumettre au pralable une centrifugation rapide pendant zo minutes.

Eau distille

II8

I,iquide cpha,lo'rachldlen
Aprs avoir dcent,le liquide clair surnagent' on -aspire le dpt dans une pipette fine; le contenu de cette pipette est eniuite rparti sur plusieurs lames, On l'tale aprs I'avoir
mlang a"ec one goutte de srum sanguin' Ractifs:

Acide actique glacial pr. anal' <<Met&'>>' Violet d'e mtbyle pr. anal. <<Mer&>t.

Exarnen d'u sd'inxeflt. Le sdiment tal sur les lames doit tre sch aussi rapidemlttt^ que possible (.l'tuve s'il en exisre une) puis {e pndant e minutes paf I'alcool mthylique. 1re prpitation : Colo ration pM Lt mthode de Gtrtso, de PnppENHETM ou de Lntstrue" (p. 5-7). 2me prparution: Coloration par La mthode de Gurra (p.t68). des bacilles tuber3me piep*""fion: Coloration culeux (p. r7o). Xlxemen du liquide cloir. Raction l'or colloidal (d'aprs Lrncn). Cette raction exige de la verrerie d'une propret
absolue. Tous les rcipients doivent tre rincs trs soigneusement avec de l'eau i1ge chaude (4 parties d'acide chlorhydrique pouf une partie d'acide azotique. Utiliser Io cmc. du mlange poot le dettoyage de 5 tubes essai au maximum)' (Travailler sous la hotte. Attention la projection des gouttes de liquide ! Eviter de respirer les vaperrrs.) La verrerie est ensuiti lave trs soigneusment l'eau bidistille jusqu',disparition de toute traJe d'acide. Puis on Passe les vases ltrer it les tubes essai la vapeur: c.--d. qu'on y chasse de le vapeur I'aide d'un tubc deux fois coud angle droit dont l'e des extrmits communique avec un ballon dans lequel on fait bouillir de I'eau. Lorsque cette dernire opration est

I19

les porte l'tuve o ils sont schs et conservs jusqu' leur utilisation. I_1, n'est possible 'obtenir une solution colloid,ale parfa;te qa' la condition d'e sournettre les obiets d,e aerrerie ncessires
_on

effectue, on entoure les obje de serviettes ou de papier et

ce nettoyage rigoureux.

Prparation d,e la solution d,'or collod,al. Tenir prt dans un ballon de 5 litres, en verre d'Ina, de I'eau frachement bidistille. Dans un
matras tar de roo cmc., prparer une solution de carbonate de potasse zolo; dans un second matras, une solution formole r olo. Utiliser pour ces oprations de l'eau bidistille. L'eau bidistille, 1es solutions de formol et de carbonate de potasse ne doivent tre conserves plus de z4 heures. Dans un petit flacon en verre d'Ina bouch

l'meri, dissoudre r gr. de chlorure d'or dans r o cmc. d'eau bidistille. Puis prlever I'aide

d'une pipette or2 cmc. de cette solution et la verser dans un vase filtrer en verre d'Ina sans en toucher les parois. Ajouter zoo cmc. d'eau bidistille, agiter avec soin et additionner de r ,z c:rnc. de la solution de carbonate de potasse zoto. On dternrine la quantit ncessaire de carbonate de potasse
(celle-ci dpend du degr d'acidit dc la solution de chlorure solutions avec des doses de carbonate variant entre clles de * oro5 cmc. La dose ncessaire est reconnue pa comparaison des hydrosols d'or obtenus. C'est la mthode la plus simple pour trouver la dosc optima: celle-ci oscille en gnral entre rrz et rr3 cmc. (* o,t).

d'or) en prparant plusieurs

Aprs avoir agit vec prcaution les solutions de c,hlorure d'or et de carbonte de potesse pour efiechrer le mlange, celui-ci est ra.:pi.d.enzent port 1'bullition.

lzo

Liquide cpha,lo-ra,chidlen
An d'obtenir un hydrosol d'or utilisable, il est trs important de faire bouillir pfomptement le liquide et de se conformer eo tout trs exactement aux prescriptions donnes. 11 est ncessaire eussi de suivre fidlement 1es instructions e ce qui concefne la dimension des rcipients employer et de s'en tenir
aux quantits prescrites de ractifs'

Ds {ue des grosses bulles commencent crever la s,riface du liquide, on y verse trs vite' l'aide d'une pipette jauge de z crnc.' par Petites quantits ia fois, c*c. de formol r p. cent. Eloigner aussitt le becher de la flamme. Agiter d'un mouvement lent et rgulier de faon soumettre le liquide une rotation continue.
(Faire teindre le gaz paf un aide aprs avoir ajout la solution de formaldhyde; entourer le verfe d'une serviette plie et agiter d'un mouvement prcis, si possible tudi l'avance). Au bout de 3 + minutes, il se produit une lgre

coloration rse; on continue agiter : f intensit de la couleur augmente. L'opration est termine quand la couleot-.tt devenu stable et d'un rouge rr'itr.or. fonc (au bout de 6 ro minutes environ).
Une solution d'or collodal bien prpare doit prsenter une coloration rouge vineux; examine par rflexion, elle aura u aspcct lgrement trouble, par transParence elle paraitra d'ua fouge clatant. Lcs solutions colloidales bleues et jaune rouge sont inutilisables. Si I'hydrosol a un lger reflet bl.eutre, il est hypersensible (hydrosol mou); il est hyposensible (hydrosol dur), lorsqu'il possde une coloration vermillon.

Il

aines. L'tablisseent d'une courbe ncessite

6o cmc. de solution.
rzT

convient de ne prparer de cette solution que la quntit ncessaiie pour une dure d. 4 6 9e-

Cech ntque.

Le liquide centrifug limpide (il ne doit conrenir aucune trace de sang) est rparti dans une srie de tubes essai, de la faon suivante : orZ cmc. de liquide cphalo-rachidien sont verss dans le premier des verres, puis additionns de r,B mc. dtune solution de chlorure de sodium o,4oto. Dans chacun des tubes suivants, on dpose r cmc. de la solution de chlorure de Na o,+rt'. Prlever ensuite dans le premier tube r cmc. de Ia" solution du liqui{e rachidien au dixime er Ie reporrer dans le deuxime tube. Prendre dans le duxime tube r cmc. de la solution et le reporter dansletroisime et ainsi de suite . La gamm des dilutions dans les tubes de r ro est en progression gomtrique: r er tube : dilution du liquide raclidien : r lro zmetube: ,, t lzo ,, ,, ,, : ,t ), ), r l+o ), 3-"fube

4httube: )'

"

))

Le dernier tube sert de tmoin et ne contien que r cmc. de la solution de chlorure de sodium. On prlve dans le flacon contenant l'hydrosol d'or, 6o cmc. du liquide que I'on verse dns un petit flacon de roo cmc. (ne devant servir qu'il cet usage). A l'aide d'une pipette de ro cmc. (uniquement destine cet emploi), or verse ensuite d'un seul goup rapide, dans chacun des tubes, 5 cmc. de la solutibn Colloidale. Puis on agite fortbment et, aprs ro minutes de repos, on lit le rsultat de La r,action. La lecture dfinitive ne se lait que z4 heures aprs. r22

.t lirrri o"tfit".

I,iquide

eph

a,lo-ra,chidien

Les courbes reproduites ci-aprs sont purement

scJrmatique s et-de dimensions exagres. Elles sont

uniquement destines montrer 1 faon d'obtenir une illustration graphique de la raction. Il est vident qu'on peut galement y faire figurer toutes les forrnes d tranJition et tous les tats intermdiaires. Sur ces graphiques' les courbes de la sclrose en plaques e1 de la poliomylite n'ont pas t reproduites; de mme, il n'a p eg tltenu cgApte de I'importance de I'examen du liquide rachidien pour le diagnostic de I'hmorragie et des tumeurs crbrales. La courbe de I'hydrosol d'or peut encore tre exprime par
des chifires, par exemple,

oLlzr rL/zLl+oooooo otl' rllz z trlttlz o o o o o o Syphilis crbro-siirr"t" Paralysie progressive 5 5 5 5 5 5 5 4 3 2 r o oooor255+32| Mningite purulente . oooor 222rooo Mningite tuberculeuse . o:rotlg r:rouge violet 2:violet : bleu 4: bleu clair 5 : blanc 3 Tabes
Syphilis

latente

.) '.1

Ractifs: Carbonate d'e potassium pr. anal. <<Merckn. Formald.byd.e D. A. B. 6 <<Merck>>Chlorure d) or (Chtorure d" or crist. iaune D.Ap-V.

<Merch>>)'

En ce qui concerne la valeur et le sens des diagnostics qui se basent sur I'examen du liquid^e c[halo-rachidien, on se reportera avec intrt au drapitres dus au Prof. LeNcp dans le ttait' de Knius et Bnucscn, <Spezielle Patbologi.e und Che'
rapie innerer Krankhei.ten>>. Pour les mthodes de sio-diagnostic avec le srum sanguin et le,liquide cphalo lradridien (dviation du complment:

r23

Courbes f,e I'hydrosol d'or (schmatflqu.es).

rouge bleu
f1 0

1:10 eO 40 80 ,60 JeT An*

I

ss$$
'\r br s a
'\l

I l}

rcuqe

\
-

7
/

violet bleu

btru I clair
blanc
5

I
160
I

I{ningite purulenre [00000141j24112 2100] : susuuuuH - Mningite tuberculeuse [0 0 0 0 0 1'tft Lrla rl, tlr-O O O1

--r

t^tlo zo 40 to
v

I a a

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$ \i) S R R \ { S S s
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I

\ \

I
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,,

J J

,I
',,\

t;
I
Paralysie progressive
[18[+

r2+

Syphiliq u/m i0 0 111r tlft 00 0 0 0 0 0J Tabes lTabes [0 1 3% 3t/s 2 0000000] ISyphilis crbro-spinate[21l* 2rl+ 4"rlt lrltSrla 2 1 0 0 0 0 0]

Itl+

18le 48lt 481* 48fu 48lt

$lt 2\O

A Ol

Liquide cpha,lo-ra,chidien
Bonoer -GeNcou -\TIssERMANN -Nussrn -Bnucr et raction de floculation: Slcrs-WITEBsKY [raction citochol]Kn uN) auxquelles on attribue actuellement une valeur absblue, on se rfrera aux dispositions prises P la Commission sanitaire du i{eich et 1 Burea d'hygine de la Socit des Nations. Ces mthodes sont soumises au contrle de l'Etat; on trouvera toutes prcisions les concernant dans les manuels, trait et autres publications correspondantes. Ractfs ncessaires pour Ia technique d.e Wassermann: uoir aux ractifs pur le srod.iagnostic d,e I'a syphilis
(pan;e iaune
d,e cet ouurage).

Baotion tu mastic (EuLnurr,, J,Lconsrxraa.r Klrr.l).

Raction (normomastic> d'aprs Kafka.

Principe.
Le tiquide cphalo-rachidien pathologique dont les caractrcs normau:r sont modis, dtermine I'apparition d'un trouble ou d'un dpt dans des solutions de mastic d'une concentration dtermine.

Prparation de la solution

d,e tnasti.c.

On dissout chaud et cn agitant Io gf. de mastic dans roocrnc. d'alcool absolu. Cette solution est maintenue pendant 48 heures dans la glacire, puis ltre. Elle doit tre conscrve zo' dans un icipient e couleur fonce. Au moment de l'emploi, on prpare avec de I'alcool absolu une dilution r/ro qu'on ajoute ensuite goutte goutte, daas I'espace de 6o secondes, 4o cmc. d'eau ftaichement bidistille. Avant d'utiliser cette

solution, on la laissera reposer de la solution).

Ess ai.s

1/2

heure zoo (<maturationr

prliminaires.

On dtermine la sensibilit de la solution de mastic <mrie> en la diluant avec un volume gal d'une solution de chlorure de

125

moins

sodium aux concentrations de orr r o/o et au del. Il ne doit se produire un prcipit qu'avec une solution de Nacl d'au
or8o7o.

tl$'/e.etcJ ggnt ports en abscisse. Comme $our la raction I'or colloidal, ces courbes p.ont ffe exprimes par des chifires, par exemple: Syphilis crbro-spinale : r, I, 2t 4t J, J, 41 2, It rro

cit produite au bout de ce temps s'exprim.^.r, -est degrs (t, z, 3, 4, 5 dont chacun subbivis en a. et b) que I'on porte dans un graphique sur la ligne des.ordonnes; les raux dJdiiutin ('tr, ,/,,

tubes or5 cmc. d'une solution de normosal ou d,une solution de sel de cuisine o,8o7o lgrement alcalinise avec du carbonate de soude (,oo5'lo). Dans les tubes r et zr Tjoyter o,.5 cmc. de liquid cphalorachidien limpid (non h-morragiq"e). $p"et avoir bien mlang, pr-lever' o, cmc. de la solution contenue dan--s le tube 2 eti., ,r.rr." dans le troisime tube. Prendre ensuite o,S cmc. dans ce troisime tube, les porter dans le {aot" r, ainsi de suite. Les derniers o,s cmc. provennt du v2me tube sont jets. un tube-renfeant uniquement de la solution saline ou de nornosal serf de tmoin. A I'aide d'une pipette, introduire dans chacun des tubes o,5 cmc. de la solution de mastic, mlanger en ant I fois, puis laisser reposer I'abri-de -secou la lumire directe u soleil. La lecture des rsultats se fait apr-s 24 heures. L'intensit de l'opa-

Cechnigue d,e la raction. Prendre re tubes essai. verser dans

rr

de ces

bbb

e,a

abb

tz6

Liquide cpha,lo-raehidlen
Sclrose en plaques:

r, (2,) + babb

J,

bbb

Jtf'3

2lr

bb

1C

ti
s$
Lgende

du grapbique: Hu=ru=ruEtH courbe normale

r-ataaaaaataaaa -a-a-a-a-a

syphilis crbro-spinale
tabes

paralysie progressive

Ractils:

lllastic d,u Lepant D.A.B.6 choisi Alcool absolu pro anal. <<Mer&>.

<<Merck>>.

Dosage de I'albumine dans le liquide cphalo-rachidien. l.lProedd de Borrenrs-Baailrlnnn,c-gTorrrxow. Princpe. Lorsqu'un liide ne renferme que ogr.o33 d'albumine par litre, la raction de HsLLpn ne devient positive qu'aprs z
3 minutes. On effectucra donc cette raction sur une gmme de dilutions du liquidc cphalo-rachidien.

Cecbnique.

Diluer le liquide rac.hidien au dixime, au vingtime etc. cornme pour Ia raction 1'or collodal.

r27

Avoir une srie de tubes essai; dans chacun d'eux, placer r cmc. des difirentes dilutions. A I'aide d'une capillaire pas trop efiile, faire glisser dans chaque tube, sous la couc.he de liquide dilu' 1/g crnc. d'acide azotique concent. (La capillaire doit tre soigneusement essuye avec du papier filtre aprs chaque prlvement d'acide azotique). Aprs r minute d'attente, examiner les tubes contre un fond sombre et rechercher celui qui ne prsente pas encore de trouble. Celui des tubes dans lequel l'anneau n'apparatt qu'au bout de z 3 minutes, contient o,o33o7* d'albumine. Ce chifire multipli par le taux de la dilution efiectue dans le tube donne la valeur de I'albumine pour r ooo. A L'tet normal, le liquide cphalorachidien renferme orz o,3ol* d'albumine. Cette raction ne peut se faire qu'avec un liquide totalement dpourvu de toute trace de sang. Avec les modifications appropries, cette mthode est aussi applicable aux dosages de I'albumine dans I'urine et d'autres liquides. Elle donne des rsultats sufiisamment prcis pour la clinique.
Ractils: Srum pbysiologique o,4olo (Chloture de sodium pr. anal,.
<<Mer&>).

Acide azotiquc (Acid'e nitrique D

r,4o pr. anal. <<Mer'>.)

P. Bactlon de Pri.ncipe.

lTortrn-Arnlt.

Lorsqu'on dpose la surface d'une solution sature de sulfate d'ammonium une couche de liquide cphalo-rachidien, il se produit un prcipit de tbrine-globuline.

r28

Iriquide cpha,lo-ra,chidien
Cecbni.que.

Faire glisser soigneusement r cmc. de liquide cphalo-radridien la surface de r cmc. d'une solution sature de sulfate d'ammonium en vitant tout mlange. Dans les tats pathologiques, il se produit aprs 3 minutes, au point de contact des solutions, une zone trouble ou une opalescence nette. Al'tet normal, il ne se dveloppe pas de trouble; on observe tout au plus une trs lgre opalescence.
La solution de sulfate d'ammonium doit tre sature chaud; aprs I'avoir laiss refroidir, oa la ltre. Cette solution ne doit pas prsenter une raction acide. Si elle devient acide aprs un repos prolong, il faut y laisser tomber quelques gouttes de solution ammoniacele pour lui faire reprendre soq
caractre amphotre. Ractifs: Suffate d,'ammonium pr. anel. KMer&rr. Ammonieque en solution pr. anal. .Mer&t>.

t. Ba,ction

d.e

P.nrov.
aqueuse,

Principe.
Les globulines sont prcipitables per une solution
sature, de phnol (ractif de Pruor).

Cecbnique.

Porter une petite quantit du ractif sur un verre de montre, puis, l'aide d'une pipette que l'on appuie sur le bord du verre, y laisser couler une goutte du liquide examiner. Un trs lger louche, peine visible, peut encore tre considr comme normal; dans les tats pathologiques, le trouble est plus net. Le degr d'opacit peut tre exprim par
les signs *,

**

et

+++.

t"9

Le taux normal de I'albumine dans le liquide est environ dc

orJoloo. Les ractions dcrites ci-dessus ne donnent dcs renseignements valables que quand le liquide ne contient aucufle

trace de sang. Ces ractions pcuvent cependant se pratiqucr (sous toute rserve) avec du liquide rachidien hmorragique, s'il a t soumis pendant une heure une centrifugation d'abord lente, puis trs rapide; il est indispensable, dans ce csr que le liquide soit fraichement prlev.
Ractif

Phnol lqufi D.A.B. 6 <Mer&> ( solution aqueusc, s atar e ).

Exa,men du guc ga,str.ique.

Acldc chlarhydrlque ttat llbre, Recb erch e qualitatiue. lo Par le rouge Congo. Un papier ractif au rouge Congo humidifi vire nettement au bleu quand le suc gastrique contient de l'acide chlorhydrique libre. S'il ne prend qu'une teinte lgrement bleu tre,l'acidit du liquide peut tre due la prsence d'acide lactique.
Ractif :

Papier ractif au rouge Congo

D.A.8.6 <<Merck>>.

Par le ra,etif de (ituznrrne.

Dans une cpsule de porcelaine, 3 + gouttes de ractif sont additionnes d'une quantit gale du contenu gastrique filtr, puis Ie tout est vapor siccit au bain-marie. La prsence d'acide drlorhydrique se manifeste encore la concentration de oror o/o pat Ia formation d'une pellicule brillante rouge sur le fond de la capsule.

r30

Suc ga,striqne
Ractil: Ractif d,e Gnzburg <<Merdk>. Ce ractil se corn?ose d'e

gr. de pbloroglucine (exempte de d,i-rsarcine) pr. anatr. et d,e r gr. d,e aanilliae D.A.B.6 (<<Merck>>)t en solution ans 30 gr. d"alcool absolu pr. anal. <<Mer&n.
<<Merck>

Actdtt totalc, Acide lorhyd,rlqa,e llbre

et combin.

Dosage.

Ajouter ro cmc. du contenu gastrique filtr

z gouttes de dimthyl-aminoazobenzol (en solution alcoolique o,ro/o)r puis 3 gouttes de phnolphtaline et titrer l'aide d'une solution dcinormale de soude caustique. Le virage du rouge I'orang est considr comme rer terme de la raction: le nombre de centimtres cubes employs, multipli par 0,0365, donne la quantit d'acide chlorhydrique libre contenu dans roo cmc. de suc gastrique. Continuer de titrer jusqu' ce que la teinte orange passe au jaune citron et que la goutte suivante du actil ne change plus I'aspect de la solution (e*e terme du dosage).

Continuer l'addition d'alcali jusqu' I'apparition de La teinte rouge de la phnolphtaline (3me

terme du dosage). Le nombre de centimtres cubes de NaOH employs en un point intermdiaire entre ls 2meet le 3meterme, multipli par 0,0365, donne la somme totale d'acide chlorhydrique libre et d'acide chlorhydrique combin contenue dans r oo cmc. de suc gastrique. La totalit du nombre de cmc. employs, multiplie par o,o36j, donne I'acidit totale.

I3I

En cas d'absence d'acide drlorhydrique libre, on titre par I'acide chlorhydrique N/ro. Le dficit d'acide c,hlorhydrique s'exprime en pour cent de
suc gastrique.
Ractls:

Dimthylam.noazobenzol (tndicateur <<Merck>). Solution d,e phnolphtaltne r +gg <<Merch>.

Acde lacllqae.
RecJrerche qu alitative.

e) 5 cmc. de suc gastrique ltr sont agits- dans un entonnoir robinet avec 20 30 cmc. d'ther (exempt d'alcool). La solution thre est ensuite abandonne l'vapor ation. Reprendre le rsidu par une petite quantit d'eau et ajouter la dissolution une quantit gale de c.hlorure ferrique queux ( I gouite de solution de perchlorure de fer *zo cmc. d'eau). Comparer la coloration obtenue vec celle de la solution initiale de perchlorure de fer. Si la concentration de I'acide lactique est leve, il se produit une coloration vert-clair due au lactate de fer. b) On peut aussi ajouter l'extrait thr le raaif dtUrrnlMANN (constitu par 25 cmc. de solution de phnol r o/o * r goutte de la solution de perZlorure de fer ofiicinale). La teinte vire alors au jaune vert. La, dcoloration de la' solution peut dj se produire par l'acide chlorhydrique.
Cette raction permet de reconnaltre tous les acides fonction alcobl, mais dans le suc gastrique I'acide lactique seul entre en considration.
r32^

Sue ga,strique
RactiJs:

a) Ether, D. - o,720, pr. anal. <<Mer&>>. Solution d'e perchlorure d,e fer pr. anal. <<Mer&'>> pour zo ct c. d'eau, b) Phnal D.A.B.6 <<Merck>> en solution toloSoluti.on d'e perchlorure de ler pro anal. <<Merck>.

goutte

Sang.

Neutraliser la bouillie gastrique non filtre, mais bien mlange, par du carbonate de soude en solution ro./' (contrler au papier de tournesol); agiter t, aprs quelques minutes, puiser Pal l'ther. Efiectuer sur Ia solution filtre \a raction la benzidine dcrite dans les chapltres ffaitant de La recherche du sang dans les fces et I'urine.
Ractifs: Carbonate d.e soud.e (Cerbonate d'e sodium crist
<<Merck>>).

pr. anal.

Etber pr, anal. <<Merck>>, D:ot7zo. Benzidine pour la rechercbe d,u sang aMerc&>> ou cornprims e benzid,ine <<Merck>>.

Pepsine. La recherche de la pepsine est base sur le pouvoir digestif du suc gstrique sur la fibrine ou le blanc d'uf . On prend z petits tubes essai: dans cfracun d'eux on introduit , cmc. de suc gastrique et un petit fragment de fi'b"ine ou de blaic d'uf coagul. On verse en outre dans I'un des verres z q gouttes d'acide chlorhydrique 3vo. L'albumine est dissoute clans les deux tubes quand le suc gastrique est normal. Si la pepsine f.ait dfaut, I'albumine (ou la brine) n'est digre dans r33

Fertnents.

aucun des _tube!; si c'est I'acide chlorhydrique qui manque, elle n'est digre que dans le tub adi-

tionn d'acide chlorhydriqu.

Ilrblerment.

ro cmc. de lait frais, non bouilli, sont mlangs vec ro gouttes de suc gastrique filtr et exactement neutralis par de la lessive de soude. Porter le tube dans une tuve rgle 37.. La raction est positive, si le lait se coagule enmoins de 3o minutes. Vrifier encore une fois Ia, raction du liquide: elIe doit tre resre neutre. Iripaso. La recherche de Ia lipase est base sur sa propr.it d_e ddoubler les graisses: les acides gras
mis en libert colorent en rouge la teinture de
tournesol. Placer dans deux tubes essai du suc gastrique, faire bouillir le contenu de I'un afrn d'y dtruire le ferment. Verser ensuite dans chacun- des tubes une. petite quantit d'une mulsion neutre de graissesr luelques gouttes de teinture de tournesol, et de la solution alcaline, jusqu' I'apparition d'une lgre coloration bleue. Abandonner l'tuve 37". La prsence de lipase se manifeste par le passege de la teinte bleue au rouge.
Ractifs: chlorbyd,rique, D : rtr24 pt. anal. <<Mer&>). Solution de soud,e caustique (Sod,ium hyd,rique pur, en soluz4.cid.e

chlorhyd.rique Jolo (prpar par dilutton e l'acie

<<Merckt>).

tion, pr. anal.

<<Merckt>).

Ceinture d,e tournesol, ind,icateur <<Merch>>. Carbonate d.e soud,e (Carbonate d,e sodium crist. pr. anal.

r34

Liquides de ponetion
Exa,men des liquides de Ponction'
(Liquide cphalo-rachidien v.

p' rr8.)

Transsu.dats.

Ils

possdent une coloration jaune clair lgrement verdtre et sont le plus souvent transparents. Abandonns eux - mmes, ils forment aprs quelque temps un lger dpt glatiniforme fibri-densit est relativement peu leve; ."n*. Leur elle oscille entre r'oo5 et r'or5. Par rapport aux exsudats, leur teneui en albumine est faible, ne dpassant gure' en gn&e\ Z1Jolo. Exsudats. On distingue, selon leur composition, les exsudats sreux, hmorragiques, purulents, sanieux. Leur densit est suprfu,tre r,or8; leur teneur en albumine dpasse toujours 2,Jo/o (mais il n'est pas Possible, d'prs le iaux de I'albumine, de distinguer un exsudt d'un transsudat). Dtffrence entre les exsudats et les transsudats. Contrairement aux transsudats les exsudats, contiennent une substance albumineuse prcipitable par I'acide actique; elle se manifeste dans le liquide filtr et acidifi par un loucfre accentu ou pi, un prcipit. On la reconnat au moyen_de ia action de RrvaLrA qui consiste laisser tomber une goutte du liquide examiner dans de l'acide actique fortement dilu (z gouttes - d'acide ectique glaciaL pour r oo cmc. d'eau). S'il s'agit dlun exsudt, L^ goutte produit en descendant des

r35

tralnes blanches nettement visibles; s'il s'agitd'un transsud at, la goutte se dissout immdiateent.
Racti.f: cid,e actgue glacial pr. anal. <Mer&>.

Bactlon de T.Lxru-AnL.
Principe.
La stabilit de I'oxyde dc mercure colloldal en solution fuchsine est influence par la quantit et la nature des matires albuminoldes contnues dans le srum.

eecbnique de la raction. 8 petits tubes essai sont garnis d'un centimtre cube d'une solution de chloiure de sodium o,90/0. Verser dans le premier de ces tubes r cmc. - de liqujde d'ascite.(d. srum sanguin, de liquide cphalo-rachidien), puis prparr des dilutions tlz-tl27o comme pour la raction au mastic. Introduire ensuite dans chacun des tubes o,z5 cmc. d'une solution de carbonate de sodium io'1, .t or3 _cyc.- du ,actil de T,lr,lre fraichement prpa (voir plus bas).

Interprtation

d,es

rsaltats.

Faire la lecture des rsultats {c'est--dirc l'apprciation du trouble ou du prcipit) aprs une demi-heurg-puis aprs a heures et, enfin, au bout de z4 heures, Le ftaction doit tre considre conrme fortement -positive, si le prcipit se produit immdiatemenr; elle n'cst q" t"iutement positive lorsque le floculat n'apparait qu'au bout d'un certain temps. La lecture peut aussi se faire en une seule fois, aprs e4 heuresi on appcie dans ce cas I'intensit de la raction,d'aprs la hauteur du dpt. si les tubes ne prsentent tive. Pour que le rsultat soit positif,
que de l'opacit, l'preuve peut tre considre comme ngail faut gue trois tubes

r36

Liquides de ponction
au moins renferment un prcipit et que la floculation n'ait
cormenc qu' la ditution de

t/, ou

une concentration encore

plus

leve.

Ractfs: Soluti.on d'e chlorure de sodium

pr. anal-

<<Mer&'>>

o,go1o'

Solution d'e carbonate de sodium pr. anal. <<Merck> toolo' Ractif d,e Cahata.' un mlange parties gales d,'une solu-

tion d.e sublitn o,5o1o (prpare auec le chlorure rnercurique conosi'f pr. anal. <<Mer&'>>) et 'une solution d'e fuchsine o,ozolo (obtenue par dissolution d,e la fucbsine <<Mer&>t, ractif D.A.B. 6). Littrature: Jnzrnn, Schu. med'. I7scbr. r93o, P. 52 et 1934' p. 1276; S*ouct, Ktin. IPscht. 1933, p. 9o5. Voir aussi les Annales d'e Merck, r93+-

pseudo-mucine se rencontre dans le contenu des .kystes onaiiqoes. Elle est mise en vidence Par la technique suivante:

Reerdte de la Pseudo-firacine-

La

Additionner 25 cmc. du contenu kystlque de quelques gouttes d'acide rosolique en solution alcoolique;-chaufier et ajouter goutte goutte de I'acide soifurique N/ror jusqu' ce que Iar,actionduliquide soit lgrement acide, ce qui se manifeste par le passage de la coloration au jaune. Porter encore ,rne fis l'bullition, puis filtrer. En prsence de pseudo-mucine, le filtrt est trouble; I'absence de iseudo-mucine est rvle par la limpidit du liquide filtr.
Ractifs: Acide rosolique pr. anal. <<Mer&>. Acid.e sulfurique Nlrs \olution d,'acid'e sulfurique uolum.
Lf

n flormale <<Merck>). Reer.e de liacid,e saccnique. L'acide succinique libre et ses sels sont caractristiques du liquide de ponction du kyste hydatique.

\37

liquide examiner est vapor jusqu' consistance sirupeuse, puis acidifi pai d I'acide chlorhydrique et puis -par I'alcool-ther. L'acide zuccinique passe dans I'extrait thr, qui l'abandonne pM vapotation sous forme d'rine masse cristalline. Si on la chaufie sur une lame de platine, elle met des vapeurs odeur particulire, qui irritent fortement les muqueuses. L'examen microscopique monfre des cristaux hexago.naux ou des prismes monocliniques. On ne peut faire un diagnostic cerrain de kyst hydatiqoei q,re lorsqu'on a trouv au microscope dei croihets bu des membranes de 1'chinocoqu-e. Aujourd'hui le diagnostic se fait aussi par un mthoe de dviation du complment; mais un rsultat ngatif n'est pas une preuve certaine de I'absence de lLydatide.
T,e Urates.

Le quide de ponction des cavits articulaires peut renfermer dans les cs de goutte des crisiaux d'urate de soude que I'on identifie par Ia raction de la murexide (vir p.ro7). Pour s'assurer du diagnostic, le liquide sera soumis aux examens microscopique et bactriologique (cultures).

Elxa,men des cra,cha,t.

Remarques prliminaires. Examen chimique. L'examen chimique des crachats se rduit en gnral pratiquementIa recherche de I'albumine. Dans les cas d'dme pulmonaire en particulier,

r38

Cracha,ts
les bronches et les alvoles sont remplies par un liquide forte teneur en albumine. En vue du tritement instituer, il pourrait donc y avoir de l'intrt savoir si des crachats, ilui paraissent

dmateux, contiennent de l'albumine ou non. Les crachats tuberculeux et pneumoniques contiennent naturllement toujours de I'albumine en abondance: leur examen n'ofrtira aucun intrt au point de vue du diagnostic ou du pronostic.

Arbumino-ra,ction. Agiter dans un rcipient clos les crachats avec trois fois leur volume dtacide actique J o jusqu' ce qu'il se produise une mulsion apparence homogne. Aprs filtration, la rec"herche de I'albumine est faite sur le liquide filtr (dbarrass de la mucine par l'opration prcdente) d'aprs l'une des albumino-ractions dcrites au cJrapitre de l'examen de l'urine, c'est--dire par addition de quelques centimtres cubes d'une solution de femocyanure de potassium ou par bullition.
Bsehereh.e du pns ou du sang da,ns ler erochats. I1 n'est pas possible d'identifier le pus ou le sang pet Ia mthode la teinture de gaac , tant donn

qu'une raction positive est en gnral due le prsence de salive dans les crachats.

Globules rouges et <ccellu.les de lslons errdiaquesr On redrercihera sur la prpantion colore la prsence des lments suivants: globules rouges, globules blancs (les leucocytes granulations osinophiles se rencontrent en abondance dans les crar39

chats des asthmatiques), globules de pus et cellules

de lsions cardiaques. Celles-ci sont en gn&al

plus volumineuses que les globules blancs et iouges; leur forme est ronde, ovalaire ou mme car-te, leurs contours sont nets. Elles renferment un noyu vsiculeux, qui est trs souvent cach par des gr^nulations pigmentaires plus ou moins fines. - Le pigment possde en gnral une coloration jaune ou bruntre, ce qui le distingue du pigment nir de

suie qu'on rencontre dans presqrr torrs les crechats. Ce pigment est ferrugineux et donne par consquent la raction caractristique du fer; celleci s'efiectuera sur une prparatin sche: prlever un fragment de crach at avec une aiguill de verre (et non d'acier), taler et laisser scher sur une lame de verre. Truiter ensuite la prparation par une solution de ferrocyanure de potassium zoto additionne de z gouttes d'acide chlorhydrique puT. La prsence de fer est rvele par une coloration bleue, dont I'intensit augmnte pendant les heures suivantes. Si le pigment est vierrx ou s'il vient de se constituer, il ne donne pas cette raction.
Ractifs:

Ferrocyanure d,e potassium pr. anal. <<Merck>>. Acide chlorbyd,rique, D - t,r6 pr. anal. <<Mer&,>.

Fibres la,stiquer. La prsence de fibres lastiques dans les crachats e_st importante au point de vue du diagnostic. Ces lments sont caractriss microscopiquement per leurs doubles contours, leur indice d rfraction lev et, en particulier, par leur rsistance l'action
r40

Cracha,ts
des acides et des alcalis. S'il est impossible de les identiter avec certitude par l'examen microscopique, on les mettra en vidence de La faon suivante: Faire bouillir une cuillere soupe de crachats avec une mme quantit de lessive de soude ou de potasse ro0/o; diluer le mlange avec trois fois son volume d'eau et laisser dposer dans un verre centrifuger. Aprs z4 heures, prlever quelques flocons du dpt pour les examiner au microscope. Les fibres lastiques seront trs faciles reconnaitre. Leur prsence est importante constater dans les cas de processus tuberculeux, d'abcs et de gangrne pulmonaires.
Ractif: Solution d,e potasse caustique (Potessium lrytdrique ?ur, ert solution, pr. anal. uMerck>).

Crlstaux de Cru,ncor-LpYnnf,. La prsence de cristaux de Cnencot-LpyDcN est

caractristique des crachats asthmatiques. Ce sont des octadres allongs, plus ou moins pointus, transparents, de couleur vert-jauntre. Pour obtenir une prp atationpouvant se conserver, durcir uneparcelle de cradrat pendant zominutes dans de I'alcool absolu, puis colorer evec de 1'a1cool additionn de quelques granules de fuchsine et monter au baume de Canada (en solution dans le

xylol).
La prparation ainsi monte est sel'air, fixe par I'alcool absolu et soumise une recoloration rapide par l'osine-bleu de mthylne.

r+r

Ractils:

Alcool absolu pr. anal. qMer&r>.

Fuchsine_ (Danant-fuchsine D. A. B.

Baume de Canad,a en solution d,ans le Xytot <<Merck>>. Solution d,'osine-bleu d,e mthylne d,'aprs Giemsa
<Merck>.

6 cMer&n).

Crlstanx d'a,eldes

gr&. Les cristaux.d'acides grls se dissolvent parchaufiage de la lame; ils sont facilement solubleJ dans l'thr et dans l'alcool chaud, par contre insolubles dans I'eau et dans les acides.

Cholertrlne. La cholestrine est facilement reconnaissable: elle se prsente sous forme de lamelles rhombiques caractristiques, insolubles dans l'eau, les alCalis et les acides. Truite par I'acide sulfurique, la cholestrine se dissout lentement, les bords des cristaux prennent une coloration brun-rouge ; finalement il reste une gouttelette de liquide 6rune. Si l'on a ajout au pralable du liquide de Lugol, on peut observer le passage de la coloration dt brun au bleu rouge puis au vert et au bleu. Les cristaux de cholestrine sont trs facilement solubles dans l'alcool chaud et l'ther.
Aci,de sulfurique, D : t,84, pr. anal. <<Mer&>>. Solution d,e Lugol, dilue, D.A.B.6 <<Merckt>.
Ractif s:

Crista,ux d'hmatofdine. Ils se prsentent sous forme de lamelles brun rouge ou rouge mles de fi.nes aiguilles flexueuses. Celles-ci peuvent tre runies sus forme de pinceux disposs aux coins des tablettes. On les trouve en gnral assez tarement.

r42

Cracha,ts
Beeherche des bacilles tubereuleu.x. On trouvera une description dtaille de la coloration du bacille tuberculeux ur pam,graphe: <Solutions colorantes et mthodes de coloration des bactries>,. p. ,.67. Il .:t donc inutile que nous redonnlons ici des dtails ce sujet. Mais comme il n'est souvent possible de dceler l'existence des bacilles tuberculeux qu'aprs les avoir concentrs dans les crachats, nous allons donner ci-dessous I'explication d'un procd de concentration.
Concentrati.on des bacilles dans les crachats par le procd l'antiformine. L'antiformine est constitue par un mlange de solutions d'hypochlorite de soude et de potsse caustique en proportion dtermine. Mettre dans un flacon strilis r o cnrc: de crachats additionns de zo cmc. d'une solution d'antiformine z5vo; secouer nergiquement, puis laisser reposer jmqu' ce que la solution soit limpide. Celle-ci est ensuite dilue par addition d'un tiers de sonvolume d'eau distille et centrifuge pendant une heure un nombre de tours assez lev. On rejette le liquide surnageant: dans ce but, retourner le verre

centrifuger sur un papier filtre et le maintenir

dans cette position pendant ro minutes. Au moyen d'une anse-de platine, rassembler le lger sdiment en grattant le fond et les parois du tube centrifuger; taler sur une lame en une couche aussi paisse que possible. On peut enduire la lame au pralable d'une lgre couche d'albumine glycrine. La coloration se fait suivant le procd que nous indiquons plus loin (p"g. r7o). r+3

Ractifs:

Solution d'hypodtlorite d.e sod.ium D. Ap.V. 5 <<Merck>>. Solution d,e potasse caustique (Potassium hydrique, en solu-

tion, pr. anal. xMerck>>).

Un succdan d.e I'antformine s'obtient d,'aprs le lotmule d,e K. Felix. (Mnch. med^ l7och. rg74, p. 0e6; Annales d.e E. Merck, d,. franatse rQJJt p.Sz.)

Exa,men deg ma,tires lea,leg.

(d'aprs Bors).

Rechercbe du sa.ng d,ans les matires fcales

Etaler dans le fond d'une petite capsule de porceleine une parcelle de fces de la grosseur d'une lentille en une cou&e aussi mince que possible. Introduire d'autre p#t un comprim de benzidine dans un petit verre gradu contenant ro cmc. d'acide actique . .jovo, l'craser avec une .baguette de verre, puis tltrer etlaissertomber quelques gouttes du filtrat sur l'talement de fces dans la cpsule. En prsence de sang, il se produit une coloration d'un bleu intense (ou verte) virant peu peu au rouge cerise. Suivant la quantit de sang, la coloration apparat aprs quelques secondes ou seulepas de sagr on n'observe pas de teinte bleue et il ne se produit eucune coloration rouge per la suite. La solution du comprim de benzidine dans I'acide actique n'est utilisable que pendant zo 3o minutes aprs sa prparation, c'est--dire aussi longtemps qu'elle demeure limpide; par la suite, elle prend une teinte bruntre. Si I'on n'a pas de capsule en porcelaine sous la main, on peut
faire l'talement sur un morceau de carton blanc ou sur une plaquctte de verre place sur un fond blanc. Il est indispen-

ment au bout de

r z minutes. Lorsqu'il n'y a

r.44

lfotires
sable que la capsule, le carton ou la plaque de verre soient rigoureusement propres. Avant de procder l'talement, il sera bon par exemple de rpartir une goutte de H2Oe sur lo fond de la capsule ou sur le verre, qu'on passera ensuite dans la flamme. Le rcipient utilis pour la prparation de la solution benzidinique doit aussi tre d'une propret absolue. Ractifs:
Comlprims e benzid,ine pout la recherche du sang <<Mer*,>> ci.de actique 5oo1o. Diluer une partie d.'acid,e actique glacial, D : r,oJJ, <<Mer&>> aaec une partie d'eau d,isfille.

fca,les

Eeu oxygne (Perbydrol pr. anal.

<<Merck>>).

Mati.re sche. Certains examens ne pouvant se faire que sur des substances sches, on soumettra une partie des matires fcales la dessication. Dans ce but, introduire une certaine quantit de matire fcale dans une capsule de porcelaine tare, puis concentrer eu bain-marie 5o-6o' jusqu' poids constant, en remunt frquemment vec un; baguette de verre. Axote total. T-e dosage de L'azote qui se fait d'aprs le procd de Kjeldahl, s'efiectuera sur les mtires fraiches ou, de prfrence, dessches. Afin d'viter une perte de NHc pendant la concentration des selles, on les additionn era,, avant de les scher, d'environ ro cmc. d'une solution normale d'acide sulfurique. Aprs l'vaporation au bain-marie, placer la cpsule l'tuve pour rendre la dessicalion plus parfaite. Le destruction de Ia, substance organique -de s'efiectue par la mthode dcrite eu doJage l'azotersiduel dans le sang. Peser r gr. de m"atire siche -et une quantit corrspondante, plus grande, de substance fraic;he.

t+5

L'ammoniaque mis en libert pendant la destillation est recueilli dans une solution N/ru d'acide sulfurique. L'excs en est lu. en retou t pat de la lessive de soude N/zo. On emploie le rouge de mthyle titre d'indicateur. r cmc. d'acide N/ru utilis correspond omgr.56 d'azote.
Ractfs:

Sulfate d,e potassiuttt crist. pr. anal. <<MercA>>. SuQate d,e cuiare crist. pr. anal. <<Mer&>>. Acid.e sulfuri,que (Acide sulfurique D - r,84, pr. anal. <<Merck>>) ou un mlange constitu par J uol. d,'acide sulfur,que trs pur { z uol. d,'acide sulfurique funant pour le d.osage d.e l'azote 'aprs le procd. d"e Kield,ahl. Solution d,e soude caustigue (Sodium byd,rigue en sol,ution, exempt d,'azote pour le d,osage d,e I'azote d,'aprs Kield.ahl, D : r,J5 pr. anal. <<Mer&,>). Acid.e sulfurique N/ru (Solution d,'acid.e sulfwigue aolum. rf ,s normale <<Merck',rr' en prend,te roo crnc. et les tend,re
auec rSo cmc. d,'eau). Solution d,e soud,e caastique Nf26 (Soluti.on d,e sod,ium caustique aolum. Lf n normale <<lllerck)>t n diluer roo cmc. a.Dec rSo cmc. d,'eau). Rouge de mthyle <<Merck>>.

Graisses.

A l'tat normal, les graisses ne s'observent qu'en trs faible quantit dans les matires fcales.,
L'abondance des graisses, qui peut tre une consquence de I'arrt de I'coulement biliaire, se traduit par l'aspect pteux et visqueux des selles. A I'examen microscopique, les graisses se prsentent en gnral sous forme d'aiguilles massives, runies en faisceaux et constitues par des savons de chauxSi I'on ajoute aux fces de I'acide actique concentr et que I'on chaufie ensuite au bec Bunsen,

r+6

llfa,tires fca,les
la graisse est mise en libert sous forme de gouttelettes. Pour le dosage des graisses, on peut recourir la mthode qui consiste puiser per l'ther (dans un ppereil de Soxhlet) ls matires dessches aprs les avoir pulvrises et tritures
au sable. Pigments biliaires. Les selles ne renferment que rrement des pigments biliaires inaltrs; la couleur brune de fcs normales est gnralement due Ia stercobiline. Un bon procd de recherche des pigmenrs biliaires consiste triturer les fces avec ro cmc. d'eau, puis introduire de l'acide nitrique concentr au fond du rcipient contenant la trituration. En prsence de pigments biliairesr on obtient une zone vert-meraude (urobilinogne) la limite de sparation des liquides. on rconnalt l'urobilitte It fluorescence verte que donne le filtrat d'une trituration de fces avec une solution concentre d'actate de zinc.
Ractifs.-

Acid,e nitrique D : r,lo pr. anal. <<Merck>>, Actate d.e zinc, ractif d,u D.A.B.6 <<Mercb>.

Amidon. Triturer gros comme un pois de matires fcales avec ro cmc. d'eau, porter le mlange l'bullition et filtrer. Par addition de quelques gouttes d'une solution iodo-iodure, on ob?ienf oneioloration bleue en prsence d'amidon. r+7

Ferment amylolyti.que (amylase). Triturer dans un mortier 5 gr. de matires fraches avec 20 cmc. d'une solution de chlorure de sodium r o/o jusqu' ce que le mlange soit parfaitement homogne, puis laisser reposer pendant 3o minutes la temprature du laboratoire, tout cn remuant de temps autre. Introduire la trituration parties gales dans z verres centrifuger tars et centrifuger jusqu' ce que les concrtions solides se soient dposes. Le liquide surnageant est dcant et rparti dans 9 tubes essai, de la faon suivante : r crnc. dans le premier tube, orj cmc. dans le deuxime, CIrz1 clnc. dans le troisime et ainsi de suite, ce qui revient introduire dans c;hacun dcs tubes la rnoiti du volume de liquide vers dans le prcdent. Le gme tube ne renferme plus que o,oo3g cmc. de centrifugat. (Ces dilutions se font avec une solution de chlorure de sodium ro/0.) Verser ensuite dans chaque tube 5 cmc. d'une solution d'amidon r e/0, obturer avec des bou&ons de lige ou de l'ouate et maintenir 38" pendant z4 heures. Aprs ce temPs, remplir avec de I'eau jusqu' r doigt du bord du verre et ajouter une goutte d'une solution iode N/ro. La moindre parcelle d'amidon non attaqu est dcele par une coloration bleue.
Ractils: Cblorure de sodium pr. anal. <Mer&r,. Atnid,on soluble, ractil du D,.8.6 qMerv. Solution d'cinorttiale d"iod'e (Solution d'iod,e aolum. tf t6 normale <<Merck>).

r48

lfa,tires fcales
Cancrtions solid,es. Calculs biliaires. Les calculs de cholestrine pure sont blancs, cristallins, surface lisse ou mamelonne. Les calculs forms de couches concentriques de cholestrine, sont colors et prsentent des facettes polies. Les calculs biliaires non homognes sont colors et constitus par des couches superposes; ils ne prsentent pai de structure cristlline nette. Les calculs de bilirubinate de chaux pur sont petits, trs rnous et de couleur fonce. Les calculs non homognes de bilirubinate de c.haux prsentent des couches concentriques et contiennent parfois un noyau central de cholestrine. Les calculs de sels calcaires sont constitus principalement par du carbonate de calcium.

r+9

Il[ode de pr.para,tion des milieux nrrtr.itifs pour lo ba,ctrtologie.

Bonillon e viande. Le bouillon se prpare avec de la viande lralche et dgraisse de jeunes animaux (viande de buf
ou de cheval). Hacher la viand e, Ia faire macrer pendant la nuit dans deux fois son volume d'eau, porter le tout l'bullition pendant une heure et filtrer. Ajouter r litre de bouillon ro gr. (: t'1.) de peptone et 5 gr. (: o,J./o) d. chloruie de sodium. Avec quelques gouttes d'une solution de carbonate de soude, ajuster au pn : /,6. Chaufier ensuite pendant 3o minutes rooo, revrifier la raction du liquide, faire la rpartition dans des tubes essai et itriliser e jours de suite pendant une heure lavapeur.
Ractifs:
Peptone sche pour la bactriologie
<<Merck>>.

Solution normale d,e carbonate d,e soue (Soluti.on d,e carbonate de sod,ium aolum. normale <<Merck>>). Palpier de tournesol bleu, roage, neutre D.A.B.6 <<Mer&>>.
Ind,i,cateurs ?our la d,termi.nation d,e la concentration des ions H I'ai.d,e d"e soluti.ons-tatnpons d,'aprs Srensm
<<Merck>t.

Ind,cateurs (Phnolpbtallne, bleu e bromotbymol, rouge

de mthyle, rouge de phnol) Papiers filtrer <<Mer&>>.

<<Merck>>.

trlilieu nntritif la glose (agaragat). Ajouter r 5 zo gr. d'aga*esar coup en petits morceaux r litre de bouillon nutritif. Faire gonfler pen dant plusieurs heures, puis maintenir pendant r heure l'tuve rgle rooo, alcaliniser, filtrer, rpartfu dans des tubes essai et striliser.
r50

lllilieux nutritifs
Ractif :

Agar-Agar blanc,

sous

forme d'e tuyaux d'e plume <<Mer&n.

llllierr nutritil & la, glatine.

Ajouter roo gr. (rov') de glatine en feuilles minces r litre de bouillon nutritif . Chaufier lgrement pour faire fondre la gIatine gonfle. Alcaliniser le liquide, filtrer, faire Ia ftpartition et striliser.
Ractfs:

Glatine nutritiue Prte l'emploi <<Mer&>*

Glatne en feuilles
<<Merck>>.

Mileut nfirttifis-standard .Mer^ La prp ar*tion de milieux de culture l'aide des produiis-standard <Merck> est la fois facile, coUtiliser les milieux-standard I ou II: Bouillon nutritif-sta,ndord I <<[ferekn.
S'utilise pour la culture du pneumocoque' du strlPtocoque,- de I'agent de l'rysiple et du bacillus abortus. I1 sufiit de dissoudre chaud zS gr. de poudre dans r litre d'eau distille et de striliser pour obtenir un milieu de culture liquide d'une qualit gale celle d'un excellent bouillon' de viande pepton. Boulllon nu.tritil-standa,rd II cctrlerck>. Dissoudre chaud r j gr. de poudre dans un litre -striliser. On obtient de La d'eau distille, puis sorte un milieu liquide trs favorable la culture des microbes peu exigeants, en particulier des germes intestinaux. nomique et sre.

I5I

Agar nutritif-eta,ndord I <trferck>. On obtient un e,g t nutritif perfait par dissolution chaud de 4j gr. de la poudre dans r li*e d'eau distille et strilisation du liquide. En raison de leur haute teneur en matires orgeniques, les milieux de culture-standard I sont recommander pour les bactries de culture difiicile. Par addition de z 5 gouttes de srum pour 5 cmc" de liquide, on obtient avec ces milieux un dveloppement optimum: aussi sera-t-il possible d'y cultiver sans difiicult mme Ie gonocoque. Agar nutrltif-sta,nda,rd II strIerck>. La dissolution chaud d. 35 gr. de poudre dans r litre d'eau distille suivie de la strilisation du liquide, donne un milieu particulirement favorable pour la culture lective des bactries pathognes de I'intestin en <plaques de glose colore>. Pour l'examen des selles, prparer les milieux colors suivants avec I'agar nutritif-standard II : I. Plaques d'ENoo: dissoudre un comprim RagitEndo oMerck> dans roo cmc. de l'agar liquide. II. Plaques de Dnrcnr,srr: dissoudre un comprim Ragit-Drigalski <Merck> dans r oo cmc. de I'agar liquide.
Nous recommandons vivement les plaques d,e glose colore au bleu d,e bromothyntol (de prfrence celles de Dnrcersxr). On les prperc en dissolvant un comprim de bleu de bromothymol dans roo cmc. d'agar liquide. Les milieux au bleu de bromothymol ont une teinte bleu ardoise. Les bacilles du typhus et de la dysenterie y donnent des cultures d'un gris translucide, le colibacille y forme

r52

llilieux
des colonies jaune

nrntrflfffs

d'or (avec diftusion de la teinte dans tout le milieu); les staphylocoques et les
streptocoques ne s'y dvelopPent que maigrement:

leuri cultures prsentent une coloration allant du

blanc jauntreo jaune d'or. Le bouillon ou L'egar nutritif II additionn de glycrine se montre excellent pour la culture du bacille tuberculeux. Iros trlillenx nutrltits <trlorohr prts I'ernploit vitent de nombreuses oprations et simplifient les recherches bactriologiques en supprimant de longs prparatifs. Ces milieux ont une dure de conservation illimite; ils sont I'abri de la dessication et de toute altration et sont absolument quivalents aux milieux de culture fraichement prpars. Ils existent dans le commerce sous les formes suivantes: r. Agar nutritif pour Ia culture en surface inclinez. Bouillon nutritif. 3. Bouillon glucos. 4. Milieu de culture de GmsNER. 5. Glose lactose tournesole de DnrcaLSKI. 6. Glose au vert malachite de Lrplnn. 7. Milieu de culture au ttrathionate. Il existe en outre Pour la prparation des nplaques de glose colore>: r. les comprims d'Er,rpo. z. les comprims de Dnra,q.lsKr avec ou sans violet cristallis. 3.les comprims de bleu de bromothymol. 4. les comprims de rouge Congo. r53

trIilien nutritif de Connlnr-IDnrear/sxr. Prendre de la glose nutritive 3 olo faiblement alcaline (agar nutritif-standard II uMercku) et I'additionner de r % de nutrose ou casine 'sodique. (La nutrose peut tre remplace par de la peptne zv,). Ajuster au-pn : /,6, porter l'bullition pendant r heure et filtrer. Ajouter eoo cmc. de ce milieu strile z6 cmc. de teinture de tournesol et 3 gr. de sucre de lait bouillis.au pralable pendant 15 minutes. La mousse qgi le produit pat agitarion, doit offrir un aspect bleutre:-si ce n'est pas le cas, ajouter quelques gouttes d'une solution chaude et strile d carbonate de soude. Lorsque le liquide a la raction voulue, y verser z cmc. d'une solution de violet
cristallis o,r oto fraichement prpare et strilise pendant 15 minutes.
Ractifs: Peptonc sche pour
Casi.ne soigue

la

bactriologie

<<Mercktt. <<Merckn.

pour la bactriologie

aiolet cristallis <<Merck>>. lGllose laetoso d.'Euno

Ceinture de tournesol d,'aprs Kubel-Cien ann <<Mer&>>. Sucre e lait pour la bactriologe <<Merck>t. Solution d,e carbonate d,e sodiurn uolum. normale (rMer&,n. Violet cristallis tout pur <<Merck>. Compri.ms de Drigalshi prts l'emplo aaec ou sans

la, Iuchsine.

Ajouter r litre de glose nutritive strile ro gr. de sucre de lait et S cmc. d'une solution alcoolique sature et filtre de fuchsine. Par addition r5+

Ifilienx nntritifs
de z5 cmc. d'une solution de sulfite de soude (lo" effleuri) roo/o frachement prpare, le milieu nutritif est peu prs dcolor; il doit prsenter, aprs refroidissement, une teinte chair en couche mince, et rose ple en couche paisse.
Ractif s: Sucre d'e

lait pour la bactriologie <<Mer&>>.

Soluton d'e fuchsine <<Merck>>, alcoolique, sature' Sutf.te de soude (Sutfite d'e so,ium crist. pt. anal- <<Mer&>)' Comprims d"Endo prts I'emplo, <<Mer&>>.

Solution de B.l'nsrnx.ow.
(pour le diagnostic difirentiel des bacilles du groupe colityphique-dysentrique
).

Dissoudre r o gr. de nutrose ou casine sodique <Merck> dans d I'eau, aiouter o cmc. de teinture de tournesol (voir plus tin) etl gr. de sel de cuisine, puis complter r ooo mc. pat de l'eau disti[e. Ajout"t ,rt" petite quantit,-soit t % d'un hydrate de carbone. La technique la plus simple consiste prparer le milieu de BensIEKow avec les comprims de Bn nsrpKoril/ <Merck>. On obtient roo cmc. de ce milieu nutritif par dissolution d'un seul comprim dans r oo cmc. d'eau distille; aprs avoir chaufi lgrement cette solution talon, on I'additionne de l'un des sucres suivants ( raison de r comprim de o gr. 50 Pour 50 cmc. de liquid.) , maltose' mannite, sucie de lait, sucre de canne, glucose. On peut galement utiliser I'arabinose, le lvulose, la dulcite, I'inosite, le rhamnose' la glycrine, l'rythrite, la dextrine, le rafiinose, le mannose, le galactose, I'adonite, le xylose etc. Ces milieux de culture sont
r55

distribus dans des tubes essai et ports l'bullition deux jours de suite pendant z minutes.
Ractifs:
Casine sod,ique <<Mer&> pour la bactriologie. Ceinture d,e tournesol 'aprs Kubel-Cientann <<Mer&>. Chlorwe d,e sod,ium crist. <<Merck>.

Glose eu rorrge nentre. (d'aprs Or,nnrop-Dnrcelsxr). A I'aide du bouillon nutritif standard II, prparer un milieu la glose contenant o,3-o,j% d'egat. Sa raction (contrler au papier de tournesol), oit tre faiblement alcaline. Si ncessaire, neutraliser per le catbonate de soude. Filtrer. Ajouter au filitat 1o7o d'ure solution aqueuse, satuie de rouge neutre et o, r J vo de glucose. Aprs avoir mlang, rpartir la solution dans des tubes essai, raison de ro cmc. ( !) par tube. Striliser la vapeur pendant une demi-heure ( !). Refroidir rapidemeht 1'eau courante pour amener la solidification du milieu (mthode rapide et conomique).
Ractifs:

Agar-Agar
<<Mer&>>.

sous

forme

d,e

tuyaux

d,e plumes ou e btons

Papi.er d,e tournesol rouge, bleu ou neutre <<Mer&>>. Solution d,e carbonate d.e soude aolum. normale <<Merckt>. Rouge neutre <<Mer&>>. Glucose tout pur, anhyd,re <<Merck>>.

"Bonlllon glyerln de Srrnnu la, fuchsine. Ajouter roo cmc. de bouillon de viande j 6 gouttes d'une solution alcoolique, sature, filfre de fuchsine, z cmc. d'une solution aqueuse roolo de sulfite de soude (non effleuri) frachement prr56

Ifilieux nu.trittf
pare et I cmc. de glycrine. Distribuer dans des iobes et striliser. Ia solution refroidie doit avoir une couleur jaune d'or. yr" lgke oloration rose ne^nuit pas la ractron, mals le milieu ne Peut tre employ si IV coloration est plus intens. Ce bouillon est Prserver de la lulniare. 11 ne se conserve en gn&al' pas plus de I l5 jours.
Ractils:
Soluton alcoolique sature de fucbsine' Sutfite d'e sodum crist- pr. anal- <<Mer&>' Gl'ycrine bid.istille D.A.B. 6 <tMer&'n'

lltlieu de Bnrnn &u rhtmnore.

r.

Solution nutritive: phosphate disodique o gr'.50' sulfate d'ammoniaque I gi., citrate sodique tribasique z gr., sel de cuisine 5-F!-, pePtone ogr'?5' rhmnos { Hr., eau distillZe rooo cmc. Faire bouillir juiq"n dissolution, fi1trer, rpartir dans des tubes essai, striliser. z. Le diagnostic des bactries ensemences se fait 1'aide dune solution alcoolique tlroto de rouge de mthyle.
Ractifs:
Phosphate d'isodique (Phosphate de sod,ium ist. Pr. anel.
<Mer&>>). Sulf ate d" ammoniaque (Sulf ate d'ammonum
<<Mer&>>).

"

fr.

anal-

Citrate e soude (Citrate d'e sod.ium ne*tte uMer&>| Chlorure de soude (Cblorure de sodium tout pur crist.
<<Mer&>>.

Peptone sche <<Mer&* pout la- bactriologie' Rhamnose (Isod'ulcite) <Mer&>. Rouge ile mtlryle uffictr.

r57

Illlieu de trlnrssnn-Pnnyelsq-nrlr I'indol.

l'tuve pendant zg heures tout en agitant frquemment. Filtrer le liquide, faire une dilution au quart ,avec du srum physiologique, distribuer dans des tubes essai raison d j cmc. par tube et striliser pendant r heure la vapeur. - pour la recherche de I'indol dans les cultures, additionner le milieu goutte goutte d'une solution renfermant de 5.9T. -paradimthylaminob enzeLdhyde, 50 cmc. d'alcool mthylique er 40 cmc. d'acie chorhydrique. Le bouillon la trypsine peur tre remplc avantageusement-p?r un_ bouillon o,roloo de tryptophane ou par le bouillon-standard II oMerr.
Ractifs:

Prendre du bouillon ordinaire pn : /16r le porter une temprature de 4oo, l'addiiionnr de o gr. eo de trypsine et de r o cmc. de &loroforme. Lisser

Crypsine
D im
tb

<<Merck>>.
d.

y I amino b enz al d, hy

Mthanol pr. anal. <<Merck>. Acid,e cltlorhyd.rique pr. anal.

? ar

a-

<<

M er

ck>>.

<<Merck>>.

Teehnique de I'enrflchlssoment des baollles tubereuIeux d.ans le sang par Ie ffel de buf. On se procurera L'abattoir la vsicule biliaire d'un buf venant d'tre abattu. La perforer vec un couteau et recueillft Ia bile dans un grand batlon. Porter l'bullition pendant r 5 minutes dans l'tuve vapeur, rpartii dans dei tubes essai raison de 6 8 cmc . pat tube et striliser 3 jours de suite pendant zo minutes. Lorgqu'on est dans I'impossibilit de se procurer du fiel de buf et dans certains cas paiticuliers r58

Milieux nuhittfs
(expditions, camPagnes etc.)' on _aura tout intrt ,tiiliser les tube de ublle four la culture d.e bacille typhique> d,'apr,s Ke,vsnn-Coxn mr (<Mercko) prts I'emploi, d'une contenance d. 5 et rocmg. n peut aulsi remplacer le fiel de buf par le boui-llon-standard II <Merck> additionn de 5 o/o de taurocholate de soude. On ensemence aseptiquement dans les tubes de bile 5 B cmc. du sng veineux qu'on laisse s'couler de l'aiguille ponction. On mlange par agitation.
Ractil:
Cubes de bile pour la culture d'u bacille typhique Kayset-Conrad,. Caurocholate d'e soude <<Mercktt.
d"

aprs

lftlleu de Prrnusc[rr

a,u petit lait tournosol (milieu nutritif pour la diffrentiation des germes du glouPe typhique: colibacille, bacilles typhique et dysentrique). Diluer une certaine quantit de lait chaud par addi-

tion de son volume d'eau, puis y laisser tomber goutte goutte de I'acide chlorhydrique jusqu' prcipitetion de la casine. Filtrer, neutraliser Par le carbonate de soude, faire bouillir pendant une
heure l'tuve vapeur. Aprs avoir t frLtre une seconde fois et aprs vrification de sa raction, la solution limpide est additionne de teinture de tournesol strile jusqu' coloration violette. Le liquide est ensuite rparti dans des tubes culture et strilis 3 jours de suite pendant r 5 minutes. I1 est avantageux d'utiliserle miliea a.u' petit laittour' nesol <Merck>> prt l'emploi (conserv dans le chloroforme). On n'aura qu' le rpartir dans des

r59

tubes essai striles et striliser une seule fois la vapeur pendant r 5 minutes.
Ractils:

Petit lait tourttesol

<<Merck>r

Sol,ution yolum, normale d,e carbonate de sodiuttt <<Mer&tt

prt I'emploi.

Solution d,'acid,e chlorlryd,rique uolutn. ?rorma.le

Ceinture d.e tournesol d' aprs Kubel-Ciemann,

<<Mer&t>.

<<Merck>>.

Boulllon de Tll,onnr.
pour la culture dcs germcs anarobies. Couper 5oo gr. de foie en morceaux de la grosseur d'une noisette, ajouter r joo cmc. de bouilin-standard I et chaufter le tout pendant r/s heure dans I'tuve vapeur. Filtrer. Rincer les fragments de foie I'eau courante. Rpartir le bouillon limpide dans des tubes essai raison de 8 r o cmc. per tgbg et ajouter dans chacun, z 3 petits morceux de foie. Striliser pendant, zo minutes la vapeur (*"jg pas plu.s longtemps, de crainte que le foie ne se dsagrge).

lilfllou nutrltll de lronnr/nn. Ce milieu de culture au srum est constitu par

T 8 parties de srum pur de buf, de mouton ou de ciheval et de z 3 parties d'un bouillon glucos
zolo.

Racttf

Glucose tout par, a4td,re <<Mer&D.

Prparation d,u srum strile. 5 ro litres de sang de buf, de mouton ou de cheval sont prlevs I'abattoir aussi aseptiquement que possible et recueillis dans de hauts rcipients d'un litre, couvercle, pralablement stri-

r60

IIilieux nutritifs
liss. Le sang est ensuite abandonn lui-mme jusqu' coagulaqtg.. Dtacher le caillot adhrant ux parors u rcipient l'aide de baguettes de ,rerre strilises et prlever le srum limpide evec une pipette. Il est possible de conserver le srum pendant un temps assez long dans la glacire londition de l'additionner de chloroforrne et de l'agiter frquemment. Prparation des tubes et des botes pour la cul' ture des bactries. Ajouter aseptiquement 30 cmc. de srum glucos go cmc. de srum de mouton strile, mlanger et rpartir dans des tubes essai et des boltes de Pprnr pralablement striliss. Placer le milieu z jours de suite pendant z 3 heures l'tuve p_our coaguler le srum, ftgle la temprature de 8o goo et laisser la solidifi,cation se faire.
_

trfllleu de Cr,^lusEBGl pour la eulture du 6a'sllle dtphtrique. a) un mlange de r partie de sang et de 2 parties
d'eau. b) du sang glos, glycrin d'aprs C.rnraxr. Mlanger z parties de sang de mouton et une partie de glycrine. Conscrver le liquide au frais. Au bout de 5 6 semaines, durant lesquelles le milieu s'est amlior, incorporer ( +S-jo') jo/o du glycrolat strile 3oio de glose nutritive (pn : 7,5). Prendre des parties gales de a et du milieu de culture b fralchement prpar et encore liquide; mlanger 4j-5o". Ajouter roo perties du mlange 4 pa*ies d'une solution mre de tellurite de

rr

potassium roto. Rpartir sur une paisseur de 5 mm au maximum dans des boltes de Pernr. Le milieu de culture prt I'ensemencement doit tre limpide et prsenter une coloration variant du rouge rubis au rouge violac.
Ractifs:

Glycrine bdistille pr. anal. q,Mer&>.

Cellurite d.e potassiam.

trfllleu liqrride de s.Luror pour tubereule^ux. Asparagine 4 gr. Glycrine 6o gr.

lr cnlture

des bncllres

Acide citrique z gt. Biphosphate de potassium o gr. So. Sulfate de magnsie o gr. 50. Citrate de fer ammoniacal o gr. oj. Eau distille rooo crnc. Par addition de quelques gouttes d'ammoniaque, arriener la solution au pn : /&, puis rpartir dane plusieurs petits ballons et striliser.
Ractifs:
Aspdragne <<Mer&>.

Glycrine bid,istitte pr. anal. <<Mr&>>. dcid.e citrique (Acid,e citrique tout blanc, crst.
<Merc,k>>).

pr.

anal-

Biphosphate de potassium tout pur, crist. <<Mer&>>. Sulfate d,e magnsie (Sulfate de magnsium tout pur crist-

D.A.B.6

c<Mer&>>).

Citrate d,e ler ammoniacal (Citrate de fer et d,'ammonium bran, en paillettes <<Mer&). Solution amtnoniacale (Ammotaque en solution pr. anal<<MercA>>).

t6z

Ifilieux nntritifs
.Bouillorl &rl srum. Ce bouillon est employ pour I'hmoculture et pour I'enrichissement des bactries dans le sang. Verser I'aide d'une pipette, ro cmc. de srum actif strile de cheval dans 90 cmc. de bouillon standard I. Striliser j jours de suite pendant r heure la tempratur d* 56" (contrleria stri-

Lit 1' tuve). Le bouillon au srum roo/o se conserve bien, si I'on prend soin de le maintenir dans la glacire. I1 t'y

a pas lieu de s'inquiter des traces de floculation qui peuvent y appantre au bout de quelque temps.
Ractils: Liquid.e d,'ascite (oo chlorcforme) <Mer&>. Srum d,e cheael (au chloroforme) <<Merc.k>>.

tlose

standard I 4j" (au maximum), on y ajoute 5% de sang de cheval dtbrin, on mlange intimement et on tpa*it aussitt en couche mince dans des boites de Pnrnr. Ce milieu doit tre de couleur rouge clair et ne doit prsenter ni tranes, ni coagulum (la glose au sang de chev aL et le bouillon au srum de ctreval sont des milieux trs favorables pour la culture des bacilles particulirement exigeants tels que le mningocoque, le gonocoque, le bacille de Bervc etc.). Le sang de cheval peut tre remplac par du sang humain (en particulier pour la culture du gonocoque), du sang de mouton (pour le bacille diphtrique), dr sang de buf etc.

ru riamg. Aprs avoir laiss refroidir La glose nutritive-

ftj

Prlaement d,u sang. Pour la rcolte du sang strile, dfibrin, prendre des flacons bouc;hant l'meri d'une contenance de 50 cmc., large goulot et renfermant ro zoperles de verre. Le sang retir par ponction veineuse est recueilli dans ces flacons striliss et immdiatement dfibrin par *gitation (dure r 5 zo minutes).
tGlIose

o[ sngi d'tprs linvnrnrAl. La glose liqufie (agar nuitif-standard I) est refroidie 6o-7o", puis additionne petit petit

(agiter!) de 5o de sang strile et dbrin de cheval, de buf ou de mouton. Porter le mlange l'tuve vapeur pralablement chaufie 1'bu11ition et l'y maintenir pendant une dure de temps variable suivant la quantit de liquide: 8 minutes pour un litre, r o minutes pour e litres et r 5 minutes (at maximum) pour 3 litres. La glose c"haude est ensuite filtre sur urr filtre de coton strile prpar de la faon suivante: dans un grand entonnoir de ta capacit d'un litre, garni d'un petit tamis mtallique, placer une couche de coton ordinaire non dgraiss, couvrir avec un couvercle de verre et striliser l'tuve. Pour viter que la glose ne se solidifie pendant le filtrage, on efiectue cette oPration l'tuve, 6oo. I1 sera bon de filtrer une seconde fois la partie du filtrat ayantpass d'abord. On rpartit avc les prcautions d'asepsie usuelles la glose filtre dans des tubes essai raison de r S zo cmc. par tube. Le milieu de culture solide ainsi obtenu est conserv la temprature du laboratoire.

$4

Ifilieux nutritifs
est prf &able de ne plus striliser Ia glose aprs I'avoir distribue. Pour la liquer, on placera les tubes pendant 3 minutes au maximum au bain-marie bouillant, puis on coulera immdiatement en botes de Pnrnr; on peut aussi laisser refroidir en position incline.

lfltleu ltescullne pour la eulture d.es entroeoquea. Milieu d'isolement. Dissoudre o gt. zo d'esculine dans r oo cmc. de

bouillon-standard I (pn :7,4). Faire bouillir rapidement sur une flamme et filtrer. Le mlange est ensuite rparti raison de z cmc. par tube et strilis un quart d'heure r o5" I'autoclave ou bien 3 jours de suite pendant un quart d'heure l'tuve. Aprs z{ heures d'incubation, ajouter Ia culture r z gouttes d'une solution 1o7o de citrate ferrique. S'il s'agit d'une culture pure d'entrocoques, celle-ci prend une coloration noire. Une autre mthode consiste ajouter aseptiquement o,o5 cmc. de la solution strile ( r./') de citrate ferrique aux tubes contenant z cmc. de bouillon l'esculine, puis ensemencer. Soumettre f incubation et examiner pendant plusieurs jours jusqu' I'apparition de la coloration noire.
Ractifs:

Citrate de fer (d,euto) en paillettes D.Ap.V.5

Esculine <<Mer&>.

<<Merck>.

Cultnre des bacilles tuberculeux dant le rcng d.'oprs Lowgrernrrg. Phosphate monopotassique r gr. Citrate de soude r gr.

r6.'

Sulfate de magnsie r gt. Asparagine 3 gr. Glycrine 6o gr. Eau distille rooo cmc. Ajouter rjo cmc. de cette solution 6 g". de fcule de pommes de terre et rz cmc. de glycrine. Porter l'bullition pendant t7n d'heure et laisser u repos pendant r heure j6' jusqu' formation de dextrine. Tout en agitant vigoureusement le liquide avec des perles de verre, I'additionner de 4 ufs entiers et d'un jaune d'uf. (Les coquilles doivent tre pralablement dsinfectes au moyen de savon noir, de carbonate de soude et de sublim en solution r p. rooo). Ajouter galement 5 cmc. d'une solution strile zoto de rouge Congo ou de vert malachite. Filtrer, rpartir raison d. 5 6 cmc. par tube et striliser z fois pendant z heures 8o-85'. r o cmc. de sang citrat du malade sont verss dans une grande prouvette. Ajouter ro cmc. d'acide actique 5vo et laisser agir pendant 5 minutes. Au bout de ce temps, I'acide est loi gn par centrifugation. Le prcipit est lav plusieurs fois; aussitt qu'il a pris une coloration grise, on en prIve or5 r cmc. avec des tubes de verre striliss, trs fins, et l'on ensemence sur le milieu de LwnnsrErN. (Il est quelquefois ncessaire de traiter le sdiment par I'acide sulfurique qu'on laisse agir en solution l50h pendant Io minutes. On l'loigne ensuite par Lavage.) Aprs 2o jours d'incubation, on fera- un premier examen microscopique, puis un deuxime au bout

r66

Colora,tion des baotr{es

se prsentent sous difaspects: elles peuvent tre grasses et humifrnts des comme celles du bacille de la tuberculose aviaire, mais d'ordinaire la colonie se dveloppe <en caillesu.

d" 5 semaines. Les cultures

Ractifs:

ate monop otassiq ae ( Bph o sph ate d,e p otas sium tout pur, cst. <<Mer&>). Citrate d'e soud,e (Citrate d,e sodiurt neutre <<MercA>>). Sutlate d'e magnse (Sulfate d,e magnsium pt. anal.
Ph osph

<<Mer&>>). A sp ar a gine

<<

Glycrine bid,istille pr. anal. <aMerck>>. Subl;m en pastilles D.A.B.6 <<Mer&>.

<<Mer&s>. <<Mer&>>.

M er

c'k>>.

Vert malachite cristalls

Rouge Congo <<Mer&>. Acid,e actique glacial g6olo pr. anal.

Sohntion eolora,nte et mthodes de eolora,tion des ba,ctrieg.

lolutions hydro-alcooliques. I1 est conseiller de prparer I'avance des solutions satures de fuclsine, de violet de gentiane, de bleu de mthylne, de violet de mthyle. Dans des flacons en veffe de bonne qualit, fermeture hermtigue, verser r oo cmc. d'alcool g6v' sur r o r 5 gr. de matire colorante; agiter plusieurs fois par jour. Ces solutions mres ne doivent tre employes qu'aprs dilution. Pour les besoins de la Coloration, on les tend, en gnral, avec de I'eau distille jusqu' ce qu'une couche de l'paisseur d'un tube essai ne soit plus tout fait transparente. Les solutions aqueuses se conservent moins
bien.

rE

Ractils: solutions mres, concentres, alcooliques d,e fuchsinc, brea de mthylne, uolet de ntbyle, uiolt d.e gentiane <<Mer&,>t ou, d.e prfrence' Solution d.e Lfrler au bleu de mthylne
<<Mer&>>.

Solutlon de Lorrr,rcn an blou do mthylne. Elle se compose de 30 cmc. d'une solution mre

alcoolique, sature, de bleu de mthylne, de r cmc. de lessive de potesse r o/o et de i oo cmc. d'eau distille. Dure de la coloration des prperutions microbiennes : r j 45 secondes. Pour obienir une meilleure difirenciation, on peut les traiter par l'acide actique t11-ro1o.

Colora,tion d'aprs le proed do {6[nrul. S oluti,ons ncessaires.r. Violet de gentiane phniqu: Solution alcoolique sature de violet _-de gentiane Phnol li-gufi Eau distille
pare.

rogr. z gt.
roo gr.

La solution phnique doit toujours tre nouvellement pre.

Solution de Lugol: Iodure de potassium . zgt.l dissoudre dans quelgucs , dr.i;i,T:Tjffiu"1""."u:T Eau distille q..s.p. 3oo cmc.

rode :

La solution de Lugol peut tre rcmplace per une solution d'acide picriquc.
:

3. Alcool-actone

Actone

Alcool g6v, .
r68

3'o 97,o

Colora,tion des ba,ctries

C oloration. Laisser agir la solution de violet de gentiane phnique pendant 3 minutes, puis traiter immdietement et sans chaufier par La solution de Lugol (t'lu minutes); laver I'alcool-actone 3oto ou l'alcool thylique pur, jusqu' ce qu'aucune traine de matire colorante ne se dgage plus de la prparation. Celle-ci est ensuite colore par la fuclsine phnique en dilution au vingtime pendant z 3 minutes, puis lave I'eau et sche. (Il est inuiile de rincer la prparation I'eau aprs avoir rejet les z premires solutions colorantes. Scher entre deux feuilles de papier filtre.) Filtrer la solution de violet de gentiane phnique au-dessus de la prparation. Ne pas oublier de filtrer frquemment les solutions colorantes.

Ractifs:

Violet d.e gentane phnique en solution coloration d,e Gram. Solution d.e Lugol, dilue, <<MercA>. Solution d,' acie picrique <<Mer&n.
Actone pr. anal. <<Merck>t, Alcool absolu pr. anal. <<Merck>>.

<<Merc'k>>

pour la

Coloration du baeille diphtrtque. (Mthode de Nussnn).

Solution I: Bleu de mthylne (en poudre) r,o Alcool absolu . zo,o Eau distille . 95o,o Acide actique glacial . 5o,o

fig

l
Solution

II:

Violet cristallis Iro Alcool absolu . I oro Eau distille . 3OO,O Jvvt\ Mlanger, au moment de s'en servir, z pafties de la solution I et r partie de la solution I. Ce mlange ne se conserue que quelques iours. Recoloration la cJrrysoidine: Traiter la prparation pendant 2 secondes par le mlange de I et de If, laver I'eau, recolorer sans tlrdgr, pendant 3 secondes, avec la solution aqueuse de chrysodine, laver I'eau et scher. Suivnt la qualit de la solution colorante, il peut tre ncessaire de prolonger la dure d'application jusqu'

Chrysodine z,o L Eau'distifl 3.;;; I dissoudre rooo et ltrer.

rj

secondes.
Ractifs: BIeu d,e mthylne BB
<<Merck>>.

Violet crstallis <<Merck>. Aci.de actque gl,acial pr. anal. <<Merch>>. Alcool absolu pr. anal. <<Merck>>.
C hrys

od,ine cri.st allise

<<Merck>>.

Coloratlon du baeille tubercnlertx. Etaler les crachats sur une assiette noire, puis en dposer quelques parcelles de la grosseur d'un grain de z sur une lame de verre qu'on a pris soin de bien dgraisser. Recouvrir d'une deuxime lame galement dgraisse. En chaufiant trs 1grement, faire mouvoir les lames l'une sur l'autre dans le sens de la longueu r afrn que le crachat en voie de dessication se rpartisse rgulirement sur
t7C)

Colora,tion es ba,otrles
une moiti de ihacun des deux porte-objets. (Tenir la lame par I'autre moiti quf n'est pa! s-olill-e). Fixer leiprparations en les passant trois fois dans la flamme d'un bec Bunsen.

Coloration. Solutions colorantes: Fuchsine phni.que d'e Znnt-N t4rffit: Eau distille r oo cmc. I agtter' Fr,errot liqufi 5 cmc. i Solution alcooliqu' concenffe de fuchsine IO CmC. Solution de Lrrunau bleu d,e mtbyne(".p.168) ou, de prfrence, ractif d'Esse,cu (acide picriqueacide citrique). Laisser tomber sur l'une des prparutions autant de gouttes de fuchsine phnique qu'il en faut pour la iecouvrir rgulirement, puis chaufier la lame doucement, pai en dessous' I'aide d'un microbrleur ou de la veilleuse d'un bec Bunsen, jotqu' mission de vapeurs. Rejeter la solution colorante et renouveler tout le processus deux ou trois reprises. Sans refroidir, dcolorer soigneusement par une solution alcoolique d'acide chlorhydrique ou par l'acide sulfurique 3o/0, jus[u' ce qu'il ne se Produise plus de tralnes de matire colorante. Laver l'eau. Recolorer par le bleu de mthylne de LfiIer pendant 'lrrminute ou, de prfrence' Par le ractif d'Esba, pendant g S minutes. 17r

Ractils:
Fuchsine phniqae en solution d,'aprs Ziehl-Neelsen. Solution de Lfrler au bleu de mtbylne <<Merch,>>. Ractif d,' Esbach <<Mer&>>.

Coloratlon des ea,psules

d.u Bneumoooqrle.
les

Remargues pr Iiminaires : Le pneumocoque possde la proprit, lorsqu'il vit dans

tissus, de s'entourer de capsules, faciles identifier. Si l'on inocule une parcelle de crachat dans la cavit pritonale ds souris blanches, on retrouvera le pneumocoque encapsul dans I'exsudat pritonal ou dans le sang des souris (de mme que dans le crachat inocul). Le pneumocoque peut aussi tre dcel par examen direct des crachats ou par culture.

Mtbode de coloration: Au moyen d'une ense de platine, taler une parcelle de I'exsudat ou du crachat sur une lame, puis scher rapidement en agitant l'air. Laisser tomber sur la prparation une goutte d'alcool thylique qu'on fait flamber aussitt; teindre aprs une seconde, refaire flamber, teindre nouveau et ainsi de suite jusqu' puisernent de l'alcool. Aprs refroidissement, mordancer rapidement avec de l'acide ctique 3 on et recolorer par une solution de fuchsine dilue. Les pneumocoques eppanissent alors en rouge fonc dans un halo d'un rose trs ple. La capsule du pneumocoque peut aussi tre rendue visible par la mthode l'encre de chine. Mlanger une anse de platine de I'exsudat prlev avec une anse d'encre de ctrine (p"* trop paisse), puis taler sur lame comme pour le sang.
172

Colora,tion des ba,etries

Ractils: Solution de fuchsine alcoolique, sature Acid,e actique glacial, 96010 <<Met&>>
<<Metck>>'

Alcool

absotru

D.A.B.6

<<Mer&>>.

Colorotlon du rplrochte de la bouohe et du baellle lusllorrne. Quand on souPonne une angine de Vincent-(tl' par mesure di prcaution, dans tous les cas d'afiections amygdliennes), il convient de faire sur -des talements avec un fragment de trois lames I'exsudat amygdalien et de pratiquef suf l'une la coloration de Gne,u, sur l'autre celle de Nussen et sur la troisime la coloration p*t La mthode de Grnntsa. Fixer Ia prparation Par les procds habituels, c'est--diie, par I'alcool mthylique ou par la chaleur; puis colorer par le liquide -dilu e Giemsa <Merd<u (voir La. coloration des lames de sang, p. 5) pendant 3o minutes une heureFour ta cbtoiation d'aprs les procds de Gram et de Neisser, voir les paragraphes s'y raPportant.
Ractifs:

violet de gentiane phniqu en solution, ?our la coloration par la mthode de Gram <<Met&>> Solution de Lugol, d'ilue, <<Merck>>. Alcool absolu pr. anal. <<Mer&>.
Solution alcoolique, satare, d'e fuchsne
<<Mer&>>.

Solution aluease d,'osine tah <Merck>t. Solution d,e asuttine d'apts lVersset <<Mer&>.

Liqueur d.e Giemsa (solution d.'azut-osine-bleu d,e m' tlryIne xMer>| Alcool mthyllque pr. enal. <<Met&>>.

173

Colora,tion des coupes histologiques.

f,matoxyline a,lune fls ggu-trrcs.
Formule: r. Solution de r gr. d'hmatoxyline cristallise dans ro cmc. d'alcool absolu. z. Solution de za gt. d'alun dans zoo cmc. d'eau chaude, distille. Filtrer aprs refroidissement. Laisser reposer z4 heures, puis mIanger les deux
solutions. Abandonner le liquide I'air libre pendant 8 jours, dans un rcipient large ouverture. Filtrr de nouveau. C olorati.on: Les coupes sont sorties de I'eau distille et plonges dans la solution colorante o on les maintient durant 3 r o minutes (moins longtemps, si les solutions sont anciennes). Les laver eniuite trs soigneusement pendant un temps variable, allant de 30 minutes quelques heures dans de l'eau ordinaire, qu'on change plusieurs fois. En cas de surcoloration, dcolorer avec de I'alcool chlorhydrique r vo (alcool Jovo) ou vec une solution d'alun t/rolo, puis rincer trs soigneusement I'eau. Le montage se fait la glatne glycrine ou bien aprs traitement par l'alcool et le xylol, au baume de Canada.
Ractifs:

Hmatoxyline en solution 'aprs Bhmer (auec alun)

<<Merc,h>>.

Hmatoxyline pr. andl.

<<Merch>>.

Alun d.e potassium tout pur crist. D.A.B.6 Acid,e chlorhyd,ri.que pr. anal. <Merck>>.

<<Mer&>>.

174

Coupes histologiquer
Alcool absolu pr. dnal. r<Mer&>. <<Mer&>4 ractil D...8.6.
(<<Met&>>).
<<Merck>>.

Xylol

Glycrine-glatine d'e Kaiser

Baume d,e Canad'a neutre

f,.matoxyline olune de IDnr,-Lunr.,nSolution colorante: Mlanger soigneusement +oo cm9. d'une solution aqueuse, sature, d'alun d'ammonium avec une solution d, +gr. d'hmatoxyline dans l'alcool absolu. Exposer le liquide la lumire pendant 3 J jours en vase ouvert, puis filtrer. Aprs addition de roo cmc. d'alcool mthylique et de roo cmc. de glycrin e, Ia solution sera onserve dans un flaon bien boudr. Les solutions anciennes, qui donnent souvent une coloration trop intense, peuvent tre dilues avec de I'a1un zoto La technique de I'application est la mme gue Pour I'hmatoxyline alune de Bhmer.
Ractifs: Hmatoxyline en solution <<Mer&> d) aprs Detrafiel, (aoec

alun ammoniacal).
Glycrine bid,istille toute pure pr. anal. Mtbanol pr. anal. <<Merdht>. H m at o xy line M e rch>>.
<<

<<Mer&>>.

Iilmalun de P. trf.lYnn. Cette solution colorante peut s'employer aussitt prpare. Dissoudre r gr. d'hmatoxyline dans i litre d'eau distille, puis ajouter, Ia temprature du laboratoire (zoa), en agitant' o gr.2o d'iodate de sodium (NaIO') et 50 gr. d'alun ordinaire. La technique de son emploi est la mme que pour les solutions prcdentes, mais I'hmalun donne une coloration plus intense.
17s

En additionnant le liquide de 2o1o d'ecide actique glacial, on obtient I'hmalun acide qui colore de faon trs prcise.
Ractils: Hrnatoxyline crist, pr. anal. <<Merck>>. Iod,ate d,e solum ,ri[erck>r. ,dlun d,e potasse tout pur, crist. D.r4.8.6 <<Merck>. Acid.e actique glacial tout pur 96o1o D.A.B.6 <<Mer&>.

Erratoxyllne oelde d.'Eunnrcn. Prparation de Ia solution: Un mlange compos de r o cmc. d'acide actique
glacial, de r oo cmc. d'alcool, d'autant de glycrine et d'eau est additionn de z gr. d'hmatoxyline et d'un excs d'alun (l gr. environ). Exposer la solution pendant quelque temps la lumire. Elle n'est utilisable qu'aprs avoir pris une coloration rouge fonc et doit tre conserve dans des flacons bien bouchs . La technique de son emploi est la mme que pour la solution d'hmatoxyline d'aprs Bhmer. La solution d,'hmatoxyline d'aprs Ehrlch, <<Merck>>, se
trouue toute prpare d.ans le commerce.

Solutlon d'oslne. Elle est employe en ssociation avec les solutions d'hmatoxyline pour les colorations doubles. Dissoudre r gr. d'osine dans roo cmc. d'alcool govol colorer durant I z minutes, puis laver I'eau pendant 3o-6o minutes.
Ractfs:

Soluti.on aqueuse d,'osine ou bleutre <<Merck>>.

tolo, <<Merck>>. Eosine iauntre

Alcool absolu

<<Mer&>.

176

Conpes histoloEiquee
Colorotion p,r lo nthode de YAlr Grrsou. Aprs avoir fix les coupes par l'alcool, le sublim or, 1" liqueur de Miiller, orrles colore par l'hmatoxyline (de Delateld, si possible). Les prP3t*-

tions rort ensuite laves trs soigneusement l'eau et immerges pendant 3 5 minutes dans un mlange .J-pote de t io *.. d'acide picrique aqueux, concentr et e 3 imc: d'une solution aqueuse) concentre de fuchsine S. Laver l'eau durant 3o minutes, traiter par l'alcool et le xvlol et finalement monter au baume de Canada.
RactiJs:

Solution colorante e uan Gieson, <Merck>>. Acid'e picrique tout pur crist. <Merckt>. Rubine S <<Merck>>.

Xylol' <<Merck>>, r,actif D. A.8.6. Baume d,e Canada neutre <<Merek>>.

Colora,tion des graisses par le Soudan III ou I'Eca,rlote B. Prparati.on de la solution colorante: Dissoudre chaud ogr. zo_.ogr.3o de soudan III dans ro gr. d'alcool Toon Aprs refroidissement, la solutin est filtre (ia couvrir pendantla coloration). Eviter d'employer de I'alcool concentration plus leve qui pou rrait amener la dissolution des graisses. Seules les prparations durcies Par congetation et fixes par le formol ou le liquide de Mtiller, sont utilisables. Les coupes ne doivent pas
tre mises en contact avec les dissolvants de graisses. Les prparations sortant de I'eau sont portes dans

l'alcol Jogo o on les maintient durant 5 mir77

nutes; aprs quoi, on les laisse en contact pendant 3o minutes avec une solution sature de soudan III ou d'carlate R. On peut les traiter ensuite par I'hmatoxyline (voir plus haut).
Ractils:
Soud,an III Merch> ou Ecarlate R. Formald.byde en solution D.tl.B.6 <<Mer&'h. Hmatoxylne en soluton, d,'aprs Delafeld <<Merck>.

Carmln alrnn de (Fnrltl.c[EB. Prparation d,e Ia solution colorante.Faire bouillir r gr. de carmin pend Lnt zo minutes avec roo cmc. d'une solution d'alun de potassium ou d'ammonium 5 vo. Filtrer aprs rfroidissement. Cechnique de la coloration: Cette technique ne russit que si les prparations ont t fixes par I'alcool, le sublim, le formol on 19 liquide de Mller. Aprs avoir sorti les coupes de I'eau distille, on les immerge pendant un temps variable allant de r o minutes plusieurs heurs dans la solution colorante. On les lave l'eau, qu'on change plusieurs fois, on monte laglycrine ou au baume de Canada (aprs avoir dshydrat par l'alcool et clairci dans le xylol). Les noyaux sont colors en rouge bleutre, le protoplsme est incolore. L'alun carmin prsente l'avantage de ne jamais surcolorer les prparations, mme si elles restent en contact avec la solution colorante pendant plusieurs jours.
Ractifs:

Solution

d.e

carmin alun d.e Grenacher <<Mer&>.

Alcool absolu pr. anal. D.A.B.6 <<Mer&>>.

\78

Coupes histologiques
Subllm corrosif (Bchlorure d,e nrcrcure conosf D.A.B.6
<<Merch>>,

Fotmaldhyd'e en solution D.A.B.6 <<Mer&>. Gl,ycrine bidistille pr. anal. <<Mer&>. Xylol <<Mer&>>, ractil D.A.B.6. Baume d,e Canad,a neutre <<Mer&>.

Cormln bora,t de GlnnlYlFEB. Faire une dissolution de 2 gr. de carmin et de + gt. de borax dans r oo cmc. d'eau additionns de roo cmc. d'alcool tendu. Cechniqae d'e la coloration: Fixer per I'alcool, le formol, le sublim ou le liquide de Mtiller. Sortir les coupes de l'eau distille et les plonger pendant 5 zo minutes dans la solution colorante. Rincer I'eau. 'lfraiter par l'alcool chlorhydrique ( r partie d'acide chlorhydrique concenir ei r o parties d'alcool 7ov') poui obtenir une meilleure difirenciation. Laver irs soigneusement l'eau. Dshydrater par I'alcool, c-laircir dans le xylol et monter eu baume de Canada. Les noyaux sont colors e rouge; la structure est en gnral trs nettement visible.
Ractifs:

Carmin borat en solution elcoolique d'aprs Grenacher

<<Merck>.
C arrnin

pour recberches histologiques

<<Merck>>.

Carmin lithique d'OBrE. Prparation d,e la solution colorante: Dissoudre zgr.50 de carmin dans roo cmc. d'une solution sature de carbonate de lithium, faire bouillir, filtrer.

79

Cecbnique de la coloration: Les prparations fixes par I'alcool, le formol ou le sublim sont sorties de I'eau distille et immerges pendant j r o minutes dans la solution colorante (la dure de I'immersion des coupes la paraffine colles sur lame sera un peu plus longue, soit zo 3o minutes). Sans les laver, on les plonge ensuite dans I'alcool cJrlorhydrique pour les diffrencier; les y laisser sjourner de 3o minutes r z heures. Laver trs soigneusement I'eau, monter dans La glycrine ou, aprs traitement par I'alcool et le xylol, dans le baume de Canada. Les noyaux ont une coloration rouge fonc, le protoplasme et les tissus sont incolores ou rose ple. Cette mthode de coloration donne des prparations stables, mais elle a le dsavantage de faire gonfler les coupes, par suite de sa forte concentration en alcali. Cet inconvnient se manifeste surtot, lorsque la prparation est colle: iI arrive alors souvent qu'elle se dtache de la lame ou de la lamelle.
Ractif s:

Carmin litbique en solution 'aprs Orth, <<Merck>>. Carmin pour rechercbes bistologiques <<Mer&>>.
Carbonate de lithium tout pur D.A.B.6 .lcool absolu pr. anal. <<Merc.k>>.
<<LIerck>>). <<Merck>t.

Sublim corrosif (Bicblorure de tnercure corr.

Formald,hyde en solution D.A.B.6 uMerck>>. Glycrine bid,istille pr. anal. <<Merck>>. Baume d,e Canad,a neutre <<Merck>>,

pr.

enal.

r8o

Etiquette originale d'une prparation Pour I'analyse avec tiquette additionnelle indiquant la limite
admise d'impurets.

Natrium bicarbonicum pulv.

pro analusl Natriumbicarbonat, gepulvert. (NaHCOs).

I o'"i,3 I Bicarbonate 'iJi#il !'Ju o,u -33# 1';", 3,,"J'o I o " s Pour analuse ltrdc In oenneny I rabrlcrcln ilomenr | Bicarbonato di Sodio polvere Bicarbonato de Sodio em pd

. Sodium t';lf"ii"1t"

li'

Bicarbonato

pgr anallsi

para analuse

Natriumbicarbonat,
(Cl) Sulfat (SOr) Phosphat (PO4) Calcium (Ca) Magnesium (Mg) . Silikat (SiOr) . Rhodan (CNS) Kalium (K) .
Chlorid
inheit sf o r der un{, e n : Unlslidre Anteile
Re

ftir

Analyse
E4,00

NaHCOs. Molekulargewlt:

hdrstens 0,001
hchstens 0,003 hchstens 0,002 hdrstens 0,002

hchstens

0,02

Ammoniak (NH1) Monocarbonat (Na2CO3)

hchsteos 0,01 hchstens 0,005 hcjhstens 0,005

hc-hstens 0,0015

o/o 0/6 ojo 0/o o/o 0lo o/n

olo
oio

JodverbraudrendeVeruureini{ungen derVorschr.entspr.
Schwermetalle (Pb) Eisen (Fe)

der Vorschr, entspr,

0,000e-o1o
o/o

hchstens

ou*:t;:-0,000s

E.

MERCK, DARMSTADT

porlt les exa,meng

Ba,ctifs
d.e

la,bora,toire.

Choix de ractifs tir du catalogue gnral de E. Merck avec indication des petits conditionnements.
Actone pr. anal. Actyle chlorure tout pur, exempt de phosAcide actique go0lo (rro7r) pr. anal. )) )) glacial g6olo(t,o64) pr.anal.
Pnore,
roo gf., 25o gr.
5o

pr.

anar.

gr.r Ioo gr.

))

-r,g{o.) rsiste I'essai par le bichromate, pr. anal. (pour

99-rooo/q (t,o5s

z1o gr., r kgr. roo gf., 25o gf.

la

) D > > >

pr. anal. arsnieux entier et en poudre

benzolque

)) D

anhydre v. Anhydride
actique

dtermination de I'indice d'iode d'aprs \fijs) .

roo gr., 25o gr.

dilu 3oolo (rro4o-r,o4z)

Soo

gr., r kgr.
Ioo gr.

roogr.,25ogf.

boriqu fondu pour I'analyse

silicdtes

25 des
50 50

grt

bromhydrigue
c4rmrnrque

>
>
D D

chlorhydrique rrrg (fumant)

D: IrIe4, frf6
la dtermination

et du

8r.r roo gf. sr.r loo gf. r gr., 5 gr.

chromique pour

Soo 50 50 50

gr., r kgr.

>

tout pur crist.,

carbone

gf., Ioo gf.

exempt

citrique tout blanc crist.

fluorhydrique 4ools hydrofluosilicique

d'acide sulfurique

))

)
D

)
))

))
))

D : rr5o, rr7o, r$6 . 25 gf.r roo gr. iodique, crist., anhydre en poudre et anhydre granul ro gf., 25 91. molybdique, pur, tolf pur 25 gr, roogr. ) en solution 25o gr., 5oo gr. nitrique D: rrrJo, rr2o, rr3or rr4o 5oo Br.r r kgr. oxalique crist. roo gf., 25o gt. perchlorique D : rrr2, rr2e, rr54 et 1167 (zor 3o, 6o-7oole) Ioo gr., 25o gr. phosphomolybdique crist. 25 8r., roo gf. phosphoriqss P:rrr2 5oo gr., r kgr.
iodhydrique

8r.r Ioo gf. gr., Ioo gr. roo gr., 25o g1'. Ioo gr., 25o gr.

Ractifs pour les exernens de laboratoire

Acide phosphorique

D: r,7o (sirupeux) > anhydfe tres Dr4nc D D D glacial, mta- en cylindres > phosphotungstique crist., absol. exempt de NHs et de NzOo D plcrrque cflst. n rosolique . r succinique trs blanc > sulfanilique crist. > sulfosalicylique > sulfureux- en- solution, 5-6010 SOt ' > sulfurique D : rrr ro-rrr r+ )) l> rrSzo-rr8z5 pour le
dosage des corPs gras
d'aPrs Gerber
rrSzo--rr8z51 dosage des corPs
et

roogr.,250gf. roogr.,25ogr.
roo gr., 25o gr.
25 25
25 50

$ft 50 gr. gtt roo gr.

gr. gf.r roo gr. 25 gr.' 50 gr. 50 gr.r Ioo gf. r kgr., zLl2kgr, r kgr., ztlskgr.
5oo

>

>> tout pur

gr., r kgr.

pour le gras d'aprs Gerber au lait

c1alfe

dtermination des nitrates

en mme temPs Pour la

) ) ) D

)) D ) ))

rr84, pour I'usage judifumant et fumant tsuf nur fumant I'acide phosPho-

5oo 5oo 5oo

gr., r kgr. gr., r kgr. gr., r kgr. gr., r kgr. gr., r kgr.

rique anhydre 5 ou

roo/e

tout pur l'acide Phosphorique anhydre enY.

ro ou
r5o/e PzQo

de

PeOo

5oo

D )) pur I'acide sulfurique -fumant 3 vol.:2vol. > tannique > tartrique crist. ' Alcool absolu > amylique pur P.E. tzg-J3zo (pour le dosge-des corps gras) > amylique tout pur > mthylique v. Mthanol Alliage mtallique de Devarda en btons )tD)>poudre
Aluminium oxyde pour I'analyse d'absorp-

5oo

5oo gr., r kgr. 50 8r.r roo gf.

roogr.,25ogr. roogr.,25ogr.

25a gt.r 5oo gr. Ioo gf., 25o gr.

roo gr., 25o gr. 50 gr.r roo gr.

25 8r,, roo gr.

Amidon en solution avec iodure de zinc ' 25ogf.,5oogr. Ammoniaque en solution D:o1960r or925 et
or9ro

tion quantitative d'aprs \0islicenus

Ammonium actate crist.

5oo gr., r kgr. 25o gr., 5oo gf.

Ractifs pour les examens de laboratoire

Ammonium carbonate

) > ll > ) > > ) D >l > > >

chlorur chromate neutrc crist.

citrate en solution
fluorure neutre molybdate crist. nitrate crist.
oxalate perchlorate Persulfate crist.
phosphate

rro83 d'aprs

D:

rroSz

roo gr., 25o 8t. roo gf., 25o gr. roo gf., 25o 8t.

Petermann

sulfate

sulfocvanure crist.

sulfur (sulfhydrate) en solution

gr., r kgr. roo gf., 25o gr. 50 gf.r roo gr. roo gf., 25o gr. roo gr., 25o gr. 50 gf.r roo gr. roo if., 250 8t. roo gf., 25o gr. roo gl., 25o 8t, roo gr., 2,5o 8t.
5oo 25o gt.r 5oo

gf.

Anhydride actique exempt d'homologues

suprieurs

Aniline

roo gr., 25o 8t. roo gl., z5o gr.

50

Antimoine oxyde Argent mtallique cn lames D nitrete crist. D ll en solution r+r9

Azolithmine

gf.: 25o gf.

Baryum actate

> carbonate >r chlorure > nitrate . > oxyde hydrat crist. ) peroxyde anhydrc Benzidine pr. anal. et pour
sang

roogr.,5oogr. gt. roo gf., 25o gt. roogr., z5ogt. roogf., 2.5o81. 25ogfr 5oogr. roogf.,25ogf.
5 gt.r 25 25o gt.r 5oo

ro gf., 25 8r. ro gf., 25 8f .

gr.
.

I'examen du

Bcnzine dc Ptrole pr. anal. roo gf., z5o gf . > exmpt de Benzne pt. anal. z5o gr., r kgr. Benzonoxime, o- (Cupron) 5 F.' 25 8t' Benzol (Benzne) cristallisable exempt de thiophnc Ioo gr., 25o gr. Benzyldioxime, s,- (Diphnylglyoxime,o-) 5 gr., ro gf.

ro gr., 25 gf

Bismuth sousnitrate
Brome

z5 gr., roo
25 gr.r 5o

gf.

Borax v. Sodium biborate gr. Brucine crist.

Cadmium actete ) sulfate exempt d'arsenic

Calcium carbonate prcipit

drlorure crist. et sec, grains

508r.r roogr. roo gf., 2-5o gf .

IO$f .r258t. 50 gr.r roo gr.

gros, moyens et fins fondu en plaquca

250ff.t 5oogr. r 5r., 25o gf.

Ractifs pour les examens de laboratqire Calcium oxyde caustique (du marbre) >l ) hydrat
25o

Collodion 4o7s 25o.9f., 5oo gr. Coton de verre lav, I'acide, exempt de plomb roogf., 25o gt. Cubcs pour la production du Chlore. 5oo gr.r r kgr. Cuivre mtallique par voie lectrolytiquc, gfanure roogf.,25ogr. > chlorure (bichlorurc) roogf.,25ogt.

roo gr., 250 gr. tribasique sec roo gf., 25o gr. sulfate prcipit roogf.,25ogr. Carbone ttrachlorure exempt de soufre . roo gf., 25o gr. Carmin (Nacarat) ro gr., z5 gr. Carminfibrine d'aprs Grtzner z5 gr.t roo gf. Charbon animal pour l'analyse des urines roo gf., 25a gr. )) ) sec 50 8r.: roo gf. Chloroforme (conten. env. r0lo A1cool absolu) roo gf., 25o gr. Cobalti-Sodium nitrite ro gr., 25 gt. )) ) > en solution roo gf. Cobalt nitrate (proto) et tout pur exempt de ni&c 25 gr.r roo gf. r oxyde exempt de soufrc 25 fft roogf.

) ) >

gf., 5oo gr. roo gf., 25o gr.

phosphate acide

>

> ) > >

-Ammonium chlorure

D (monochlorure) blanc oxyde, en tl, en poudre et granul sulfatc crist.

50gf., roogr. roogr.,25ogr.

Ioo gf., ?,5o gr. 25'f., roo gr.
5

50

8f"

roo gr.

Dicyandiamidine sulfatc (Ractif du Nickel) Dimthvlaminobcnzvlidnerhodanine (Ratif d'Argent'd'aprs Feiglt

Dimthylglyoxime (Rctif au Uict<el)

gr. gf., 25 gr.

Dimthylparaphnylnediamine c,hlorhvdrate Diphnylamine crist. Diphnylcatbazone (Ractif du Mercure

ro gf., 25 gf.

25

$t

'

50 gr.

d'aprs Stock)

:' . ) bfomee . . > calcairc l chlore > oxygne v. Perhydrol Etain mtallique granul > chlorure crist. D > en solution (Ractif d'Arsenic d'aprs Bettcndorf)

Diphnylthiocarbazone (Ractif du Cobalt) Eau barytique

I9f.,.5 gf.
r gf.r 5 gr. 25ogf.r 5oogr. 5oo gf.r r kgr. r kgr. 5oo Br., r kgr.
5O

50

gf.r roo gr. gf.r roo gf.

roo gr., 25o gr.

Ractifs pour les exmens de laboratoire

Ethcr D:or7zo et Ether exempt d'eau, disz|a gt.r 5oo gr. till sur le Sodium

Fer mtallique en

Glycrine bidistille
Hmatine

> en poudre, rduit Par > I'hydrogne > chlorure (proto) > oxyde d'aprs Brandt > perchlorure crist. D D cn solution > sulfate (proto) crist. > sulfure f-ondu granul, en cylindres et en plaques > (dedtoxyde)-Ammonium sulfatc crist. ' )) ' ) > (orotoxvde) D forrtAenye tt solution 35Vo dt poids . Furfurol ) cn solution aolo

roo gr.

roo gf., 25o 8t. roo gr., 25o gf. ro gr., 25 gt, roo gr., 25o gf.
5oo

gr., r kgr.

roo gf., 25o

gf.

5oo

gr., r kgr.

roo gr.) 25o gf. roo gf., 25o 91.

25.o 5

gf., 5oo gr. gf., ro gf.

roo gr. roo gr., 25o

tffr58t'
5

gt.

Hmatoxyline crist. Hydrazine hydrate

Hvdroene peroxvde v. Pcrhydrol

gf., ro gr.

>

sulfate

gt. rogf.r "5 259t.

ro 8r.,

Hydroylaniine cirlorhydrate' tndigo iatur. et Par synthse (Indigotine) Iode resublim

Lacmolde cn paillettcs Lacmus v. Tourncsol Magnsite granul Magnsium carbonatc trs lget

)) >r

en solution r :4o -Carmin v. Carmin d'Indigo

ro gf., a5 gt. t5 ff\ roogf. 25(,gf. ro gr., 25 gr. ro gf., 2s gr.

5oo gr., r kgr. 25o gr., 5oo gr. Ioo gr., 25o gr.

D >> )

CnIOfUre

oxyde (Magnsie calcinc) ) ) Dexempt

roogf.,25ogr.
50

> -Ammonium cihlorure Manganse chlorure crist. l> )

dosage de I'oxygne

en-solution pour le

gr., roo gf. roogr.,25ogr. roo gr., 25o gt. roo gl., 25o gr.

5oo Br., r kgr. pcroxydc (Pyrolusite) 5oo gr., r kgr. Mlange d Eschka pour le dosage du soufre dans le drarbon r 8f., 25o gr. r kgr., zlskgr. > de Magnsium.

Mercure

> >

vif pr.

anal.

roogr.,25ogf.
gr.r roo gr. gf., roogr.

bichlorure corrosif nitratc (proto) crist.

50

25

Ractifs pour les exiunens de laboratoire Mercure oxyde jaune par voie humide

Mthanol (Alcool mthylique)

Naphtol, o- recrist. trs blanc.

fouge

25 $r.t 50 gr. 25 gr.t 50 gr.

50 gf.r roo 50 gr.r roo

r@gf.r 25o91.
gr.

Naphtylamine, o- P. F. env. 5oo 25 $t 50gf. ' Naphtyloxychlorophosphine (pour la dtermination d'H d'aprs Lindner) r gr.: 5 sr. Nitrobenzaldhyde, ortho- P. F. env. 440 . rogf., 25 gt. Nitrobenzhydrazide, para- (Ractif pour la recherche d'Oxymthylfurfurol) r gf., 5 gr. Nitron (Ractif de I'acide nitrique) 5 gf., ro gr. Nitrophnol, ortho- (P. P. env. 4S0) et p^td.- ro8f., 25 91. Nitroso-p-Naphtol ro 8f., 25 gf.
8-Oxyquinoline
ro gr., 25 gr.

Dp-

gf.

Palladium mtallique, en fil; en lame ct noir or25 gr., r gt. I rr }) cnlorufe sec or25 gr., r gf. ) D en solution r + (oo oour l'analyse du gaL d'clai50gf.r roogf.

D
> > >

>

Jltlt',to' i, * :
r litre)

en solution (5 g Pd dans
:

"a'a"",

50 5

gr.r roo gf.

nitrat"r"loo 9'. : : : : : :
-Sodium chlorure

gf., ro gr.

or25 or25
50 25

gf., r gf.
gr., r gr.
50

Perhvdrol
Phn'olphtaline Phnylnediaminc, mta-

8r.r 2Oo gr.

Phnylhydrazinc Phloroglucine cxempte de dirsorcine Phloro[lucinol (Rattif de la ligninc) Pierre ponce bouillie dans la lessivc dc soude ct calcinc ou sature au sulfate de cuivre Platine mtalliquc, cn fiI, en lame et noir . _ )) chlorurc (perchlorure) sec

>

chlorhydrate, mta-

ro gf., 25 gr.
5

rogf., 25 gt. ro gf., t5 8t.

gr., rogf.
roo gr.

8f.,

gr.

25o gf., 5oo gr. or25 gr., r gf.

Plomb mt4liqu cxempt 'argent,

feuilles

q25 gf., r gf. z1ogr., r kgr.

25o gt.r Soogf.

en

), mtallique exempt d'argent, granul > actate > chromtter,gelement pour reclerches microanalytiques > oxvde u peioxyde exempt dc manganse et pour I'analyse Imentaire ) sous-actate en solution

roogf,., z5o8t.

roogf.,25o9.
50

gf.r roo gf.

gf.r loo gf. 25o8r.r 5oogf.

50

Ractifs pour les exarnens de laboratoire

Potassium
D

antimoniate (pyroantimoniate
acide) bicarbonate crist. bic.hromate crist. bisulfate crist. mtabisulfite

50

>

)
))
D D

bisulfite, mta- v. Potassium bitartrate

bromate
carbonate
rooo/o

8f., roo gr. roo gr., 25o gr. roo gr., 25o gt. roo gr., 250 gt.
roo roo roo roo roo
50

gr., 25o gr. gr., 25o gr.

bromure crist. chlorate crist. chlorure crist. chromate jaune

cyanure

!\
D D D

gr., 25o gr. gr., 25o gr.

gr., 25o gr.

roogr.,25ogr.
gr.r roo gr.
50 50

))

)
))
D ))
D

ferricyanure ferrocyanure crist.

>l

en poudre
en

8r.r roo gr. 8r.r roo gr. roo gr., 250 gt. r kgr., 5 kgr.

25 8r.t 50 gr.

hydrique pur en cylindres '

JA

I,

) )

) ) ll >r

en

25o gr., 5oo gr.

pur en cylindres et
pastilles

Praques

roo gr., 25o gr.

r kgr., 5 kgr. Pur en plagues tout pur en morceaux

noix, tout Fur en cylindres et tout Pur en

de

la

grosseur d'une

)
))
D D
>)

pur en solution D: rrr38-rrr4o et r,3o

pastilles

Ioo gr., 25o gr.

iodate

iodure et iodure neutre

mtabisulfite

nitrate crist.

nitrite
oxalate neutre perchlorate permanganate crist. et exempt

joo gr., r kgr. ro gf., 25 gr. Io gr., 25 gt. roo gf., 25o gr. roo gf., 250 91. roo gf., 25o gr.
roo gr., 25o gr. roo gr., 25o gr.

))

)
)) )) )) D

d'acide sulfurique persulfate crist.

roogf.,25ogr.
25o gr., 5oo
50

sulfate crist.
sulfocyanure crist.

gr.

exemPt d'azote

gr.r roo gf. roo gr., 25o gr.

)
))
D

sulfure crist. anal. (pour

) >

8r.r 25o gr. granul exempt d'azote roo gf., 25o gr.
50

50

gt., roo gr.

d'aprs Kjeldahl)

en solution 5o/o pr. le dosage d'szote

5oo

gr., r kgr.

Ractifs pour les er(amens de laboratoire

Poudrc de Peau
chrome

Potassium ttra-oxalate

pr. anal. et

faiblement

50

gf.r roo gf.

Pyrogallol bisublim
Quartz (Sabte) lav et calcin Quinhydrone Rsorcine resublime trs blanche Sable de mer purifi par l'acide et calcin Salicylaldoxime
Sodium mtallique >> actate tout crist. biborate calcin et crist.

25 gt,, roo
25o
5

gf.

gf., 5oo gr. gr., ro gr. 25 gr.r roo gf.

.

50gf" roogr.

25o gf.r 5oo gr. ro gr., 25 gf.

25

> ) D fondu > bicarbonate crist. et en poudre > bismuthate > bisulfate crist. > bromate > carbonate crist. et anhvdre >> chlorure, aussi fondu' . > hydrique pur en cylindres )) D ) )plaques > ), pur en cylindres et en pastilles )) )) puf elr plaques D D tout pur (du Sodium m,r D D
avec chaux

pur

gf.r roo gf. roo gr., 25o gr.

Ioo gf., 25o gt.

50

gf.r roo gr. roo gr., 25o gr. ro gf., 25 gt. Ioog1., z5og1.

50gfr roogf.

16 gf., 25o gr. 25o gr.r 5oo gr.

r kgr.,
S

r@8r.,25Ogr.
kgr.

roo gf., 25o gr.

r kgr.,

kgr.

talligue) en cylindres, en rnorceaux de le grosseur

d'une noix et en lastilles

,, > > > > > > > > >

mlcf oa,n4lytlques 25o gt.r 5oogf. pur en solution, exempt de N, D : r,35 (pour le do-

fiqr et poyr

grains gros, moyeris et

reclierc,hes

(Chaui sode)

roogf.,25ogr.

sagg de. I'azote d,aprs Kjeldahl)

en solution conten. iodurc qotassique pour le dosage e I'oxyghe

5oo

gr., r kgr.

hydrosulte

hyposultte
mtabisulfite sec molybdate crist.
naphtoguinonesulfonate, B-, Ractif

roogr.r 25ogf. roo gr., 25o gr.

roo gr., 25o gf. roo gr., 25o gr. 25 8r" 50 gr.

pour acides arnino d'aprs Folin. 5 81.r 25 91. nitrate roo gr., 25o gf. nitrite en cylindres et en cvlindres absolument exempt de potatse Ioogf., ?.3a91.

Ractifs pour les examefls de laboratoire

Sodium nitroprussiate crist.

> > > > > >l > > > >

>>

25
.

oxalate d'aprs Srensen

peroxyde

50

gf., 50 gr. gr., roo gr.

gt.r 5oo gr.

phosphate crist. pyrophosphate crist. sulfate crist.

roo gr., 25o gr. roo gr., 250 8t. roo gr., 25o gt. roo gf., 25o gr,

2-5o

sulfure crist. > en solution 5o/o (pour le dosage de I'azote d'aprs r kgr. Kjeldahl)
tungstate

-Ammonium phosphate
-Potassium carbonate en poudre

50

gr., roo gr. roo gr., z5o gr, gr.

Ioo gr., 250 gt.
ro gr., 25 gr.

l>

'Itraoxyanthraquinone i, zr 5, 8 (Ractif de Magnsium d'aprs Hahn)

Thiosemicarbacide Thvmol crist.

nette) crist.

tartrate (Sel de

Seig-

250 gt.r 5oo

Toiuol (Tolune) exempt de

soufre
.

Uranium actate crist. exempt de soude

gf., 25 gr. Io gf., z5 gr. Ioo gr., z5o gt.

5

Zinc mtallique pur exempt d'arsenic,

>

nitrate cdst.

25 8r.r 50

gf.
gr.

en

25 Sr., 50

D )) D D D
r>

> ) D > ll
oxyde

puf

cylindres de

8 et

de 6 mm.

z1o
25o

gr, r kgr.
gf., 5oo gf.

exempt d'arsenic, gra-

tout pur en cylindres de 8 et de 6 mm. et gra-

nul

nul zSo gr., r kgr. chimiquement pur en cylindres de 8 et de 6 mm. z;o gr., r kgr. chimiquement pur granul 25o gf .) 5oo gf .

en poudre (Poudre de
Zirc)

Zinc chlorure sec.

roo gf ., z5o roo gf., 250

gt. gt.

>

sulfate crist.

roogr.r 25ogf. Ioo gf., 25o gt.

Ractifs pour les recherches microanalytiques.

Actone

Acide actique 9ools

25o gf.r 5oo

) cafmrnlque > chlorhydrique rrr6 > chromotropique > fluorhydrique 4oolo > formique z4-zJolo u hypophosphoreux 5oo/q

gf. z;o gt., r kgr. I gr., 5 gf.

5oo gr., r kgr. 5 gr.,25 91.

roo gf., z5o

25o gt.r 5oo gr. 50 gr.r 25o gr.

8t.

Ractifs pour les examens de laboratoire

Acide iodhydrique trTo et

> > > > ) > D ) >

1196

nrtrrque rr2o et rr4o

25 9r.t
5oo
5

roogf.

gr., r kgr.

nitro.phnolarsinique oxalrque phosphomolybdique Prcngue

gf.

2So gr,r 5oo gf. 25 8r.r roo gr.

silicique prcipit sullurrque IrI ro-IrII4

25 8r., roo gr.

.

25o gr., 5oo

gf.

r kgr., zrlskgr.

rr8+

tartrique

Soo

25o

Alcool absolu
Alizarinesulfonate de sodium Alloxane Amiante pour creusets de Gooch

gr., r kgr. gf., 5oo gr. roo gf., 25o gt. 25 gt.r 50 gr. Io gf., 25 gr.
5

Amidon de pommes de tere Ammoniaque en solution orgro

Ammonium actate

)) -argent . > -oxyde de cuivte ) -peroxyde de plomb > -sodique D )

D

25

gf., ro gf.

$rt

50 gr.

ro gr., 25 gr. ro gf,., 25 gr.

Ioo gr., 25o gr.

z;o gt., r kgr.

5oo gr., r kgr. 25o gr., 5oo gr.

catbonate

z5o gr., r kgr.

chlorure

sulfur en solution Aniline Argent drlorure

> > > > > >

iodure molvbdate
nrtrate persulfate sulfocyanure

> nitrate Auramine

#t 5oo gr. gr., 25o gr. roo gt., z5o gt. Io gr., 25 gr. 50 gr.r roo gr. 25o gf., 5oo gf. 250 gr.r 5oo gr. Ioogr.r 25ogr. z1o gt., r kgr. roo gf., 250 gr. ro gr., 25 gf. ro gf., 25 gt.
25o
50

Baryum actate
chlorure oxyde hydrat Benzidine

>

Benzolnoxime,
Brenzcatchine

25 gr., roo gr. roo gf., 25o gr, z5o gr., r kgr. z50 g1.r 5oo gf. ro gr., 25 gr. 25 8t., roo gf . 25 8tt roo gf. 25 $tt roo gr.
5

s,-

Benzopurpurine Bismuth sousnitrate Brucins

gr., 25 gr.

Calcium actate

>

chlorure fondu granul de Ia grosseur d'un grain de millet

Io gf., 25 gr. 250 gr.r 5oo gr.

roo gf., 25o gf.

Csium chlorure

-rgf.r5gf.

Ractifs pour les exalnens de laboratoire Cinchonine chlorhydrate

ro gr.
50

Cobalt actate
Cuivre actate Cuivre oxyde en > sulfate
Curcumine Cymol, pa-

tl

et en Poudre

gf., Ioo gr. gt. 50 8r.r 25o gf.

roo gf., 25o roo gf., 250 8r.
5

gr.

Dithvlaniline Dimthyiaminobenzylidnerhodanine Dimthylglyoxime

Dimthylparaphnylnediamine

ro gf., 25 81. roo gr., z5o gt.

Diphnylamine Diphnylcarbazide
Diphnylcarbazone
D i p h ny

ro gr., z5 gt. o,5 gr., 5 gf. 25 8f .r 50 gr.

gf.

lth io catb azo ne

ro gf., 25 gr. r gf., 5 gr. r gr., 5 gf.

5oo

Eau brome

> distille Etain mtallique en feuilles >r chlorure

Ether orlzo

Fer mtallique

gr., r kgr. kgrroo gr., 5oo gr. roo gr., z5o gr. r5o gf., 5oo gf. 50gf., roogr. 2So gr., r kgr. 5oo gr., r kgr.

Glycrine r,z3

sulfate (proto) Formaldhyde 3jo/o du poids

> >

perchlorure

Hexamthylnettramine Hydrazine sulfate Iode Isatine

Kupferrone

Lanthane nitrate

Lut pour verres lenticulaires

Magisium mtallique en rubans, 2,75 mm.

>>

actate

Manganse drloture

25o gr.r 5oo gf . z5o $t.r 5oo gr. roo gr., 250 gr. ro gr., 25 gt. ro gr., 25 gr. ro gr., z5 gr. ro gr., 25 8t. 5 gr., z5 gt. roo gf. r2r5 gt., 25 gr. 50 gr., roo gr. 25o

Marbre de Carrare, rognures

Mercure bic.hlorure

Minium
Morine p-Nitrobenzol-azo-o-Naphtol Nitroso-o-Naphtol Nitroso-B-Naphtol

gf., 5oo gr. 5 kgr. roo gr., 5oo gr. roo gf., 25o gr. r gf., 5 gf.
r kgr., gr., 25 gf. gr., 25 gr. ro gr., 25 91. ro gr., 25 gt. or25 gr., r gr.
5 5

Palaium chlorure
Perhydrol
Phnol Phnolphtaline

8-Oxvquinoline

50 50

gf., 2oo gf. 250 gr.r 5oo gr. gr., roo gr. ro gf,., 25 gr.

Phnylhydrazine
74

Ractifs pour les examens de laboratoire Phosphore amorphe roo gf., 25o 91. Platine c,hlorure (perchlorure) or25 8t., r gr. Plomb actate 25o gf ., 5oo gr. > chromate de la grosseur d'un grain roo gr., 25o gr. de millet > peroxyde d'aprs Dennstedt 50 gr., roo gr.

))

> > > > > > ) ) , > > ;, > ) ) > l ))

> >

granul pour I'analyse

microlmentaire

-Minium

sulfate bichromate bioxalate chlorate

chromate

Potassium antimoniate

cyanure

efrlcyanure ferrocyanure

25 8t., roo gf. roo gr., 250 8t.

roo gr., 25o gr. 50 8r., roo gr. 25o gr., 5oo gr. 50 8f., 25o gr. 250 gr.r 5oo gf. 25o gt.r 5oo gr. 250 gr1 5oo gr. 250 g1.r 5oo gr.

Ioogr.,25ogr.

hydri{ue
iodure

nitrate

nitrite
oxalate perchlorate
permanganate

Ioo gr., 25o gr. ro gf ., 25 gr. 25o g1.r 5oo gr. Ioo gr., 25o 8f . roo gf.) z5o gt. roo gf., 25o gr.
roo gf., 25o gr. 25o gt.r 5oo gr. roo gr., 25o gt. Ioo gr., 25o gt.

sulfate

sulfocyanuie
xantognate

Purpurine Fvridine Pyrogallol

Quinoline Rsine de Gaac

8t.,50 gr. gf.r roo gr. z5 gt.r 50 gr. Ioo gf., z5o gt.
25
50

25 8t., roo gf.

Rhodamine B Rubidium chlorure Rubine S Salicylaldoxime

roo gr., 25o gr.

5

gr., 25 gr.

25 gr.t roo gr.

Sodium actate
')
))
>)

-aztde bicarbonate carbonate crist. > anhydre

ro gf., 25 gt. 250 gt.r 5oo gr.

ro gr., 25 gr. 25o g1.r 5oo gr.

hydrique

))

en solution exempt de D: r:3o ' avec chau>1, de la grosN,

z;o gr., r kgr. roo gf., 25o 8t.

r kgr., ztlzkgrroo gr., 25o gr.
25o

5oo

gr., r kgr.

seur d'un grain de millet

hyposulfite

gr., r kgr.

Ractifs pour les examens de laboratoire

Sodium mtabisulfite

> > > > > > >r

nitroprussiate
peroxyde
phosphate slnite

sulfate

tattrate
tungstate

z5o gr., r kgr. 25 gr.r 50 gr. roo gr., 250 g. 25o gr.r 5oo gr. ro gr. joo gr., r kgr. r Kgr.

Strontium atate
Strychnine nitrate
Sulfo-ure

roogr.r 5oogr.
5

ro gr., 25 gr. gr., ro gr.

Ttraoxyanthraquinone Thallium nitrate

>> -Zinc actate Vert Diazine > Malachite crist. t>

actate

Uranium-Ammonium actate

Zinc mtallique granul

gr., 25 g1gr., 25 gr. 25 gf., roo gr. 25 Er., roo gr. z;o gt., r kgr.
z5o

ro ro ro ro

5o

gr., 250 gr. gr., z5 gr. gr., 25 gr.

Zitcon drlorure (ttrac.hlorure)

gr., r kgr. r gr.

Ractifs pour I'examen micro anaLytique du sng.

Acide actique rro+o-rro+z . > chlorhydrique trtz4-r,rz6

> ))

1/ro

normal

et

5oo

gr., r kgr. r L. kgr. L. gr.

sulfurique rr84

l>

Amidon soluble Ammonium chlorure Benzine de Ptrole Potassium chlorure

1/ro flofmal sec d'aprs Zulkowsky

So/ot zoo/o

de volume

et

5oo cmc., 5oo gr., r

5oo cmc., r 250

ro gr., 25 gr.

z;a gr., r kgr.

2So gt., r

#.r

5oo

> >r )

iodate iodure

kgr.

sulfurique Sodium hydrique n solution

pefpanganate exempt d'acide

ro gf., 25 gr. ro gr., z5 gr.

roo gr., 25o. gr.
5oo cmc., r L. 5oo gr., r kgr. 5oo cmc., r L. 5oo cmc., r L.

purexempt
T

+o/o

solution

>

) , > > )
14r

d'acide chromique phosphomolybdique

alcatine

.o:'?

t:t:

culvflque concentre z5o cmc., d'hyposulfite de soude 1/ro normale 5oo cmc., d'iodate conten. du cuivre . 5oo cmc., de potessium caustique binormale 5oo cmc., uranlque

z5o cmc., r L.

r L. r L. r L. r L. 5oo cmc., r L.

Ractifs pour les examens de laboratorre

Ractifs spciaux.
Auteur:
Aufrecht
Benedikt Racti.f:
roo gr.' Ractif de l'Albumine ) pour la recherche et
5oo gr.

Ie

Bettendorf Bial Denigs Dragndorff Ehrlich

))
>>

)
>>

>>

des Urines pathologiques. Sodium.. ni-

cose de l'Arsenic des Pentoses de I'Actone des Alcalodes

dosage

du Glu-

roo gf., 5oo gr. roo gr., 25o gr.

roogr.
roo gr.
.5o

Br., z5o

gt.

) Ehrlich Esbach ) Fehling Folin-Denis ) Griess-Ilosvay ) Gnzburg )

D

trtte en sorutlon. roo gr., 5oo gr. Acide sulfanilique roo gf., 5oo gr. en solution de I'Urobilinogne roo gr., 5oo gr. zso gt.r 5oogr. de I'Albumine
du Sucre aetb)
(Solutions
de I'Acide urique

de l'Acide nitreux

) Haine t, Hayem ll Mayer Millon Morres ) Nessler Nylander Obermayer > Pavy Schiff Sc;hlesinger )) Schweitzer ) Tanret
D
>>

25 $tt 50 gr. suc gastrlque z5ogr., r kgr. du Sucre pour la numration

de l'Acide chlorhydrique libre dans le

roo cmc., 25o cmc. Ioo gr., 5oo gr. roo gr., 5oo gr.

des
de

des globules rouges roogr.) 5oogr.

))

des sels d'arnmoroogr., z5ogr. niaque 25o gr., 5oo gr. du Sucre de 1'Indican Solu. roo gr. tions I et II) du Sucre (Solutions I roo gf., 25o gt. et II)
des ldhydes de I'Urobiline du Cellulose de l'Albumine

pour l'examen de la itabilitg' du lait

Alcalodes I'Albumine

roo gr. roo gr., z5o gr.

25o

gr., r kgr.

roogrs 5oogf.
50

))

Trommsdorff

Viesner

>

50 gf., 25o gr. nitreux (Amidon en solution avec iodure de zinc) z5o gr., 5oo gf. pour reconnatre le poli du bois 50 gf., 25o gr.

roo gf., 5oo gr.

Br.r Ioo gr.

de l'Acide

Ractifs pour les examens de laboratoire

Solutions pour Ia Volumtrie.

Solution d'acide actique normale et 1/ro normale 5oo cmc., r L. arsnieux normale, 1/10 normale acide et r/ro normale alcaline (Solution de Penot) 5oo cmc., r L. arsnieux pour le dosage de I'Hypochlorite de Chaux.

(r cmc. : o,or+z gr.

de
5oo cmc., r

chlorhydrique

Chlore)

L.

male, 1/+ normale, 1/5 normale, r/to rrotmal, 1oo oofmale

binormale, normale, 1/s normale t7/t or5oo cmc., r 5oo cmc., r 5oo cmc., r 5oo cmc., r 5oo cmc., r

lactique normale
nitrique normale et
male
1/ro

L. L.

nor-

oxalique normale, L/z rrormale et r/ro nofmale .

L.
L. L.

phosphorique trinormale,
normale et Un normale

sulfurique binormale, nor-

male, 1/z normalet L/+ frotma1e, r normale et Vro nor-

male 5oo cmc., d'Ammonium sulfocyanate normale et 1/ro normale 5oo cmc., d'Ammoniaque caust. normale 5oo cmc., d'Argent nitrate normale et 1/ro normale 25o CmC.,

r L. r

L.

r L.
5oo CmC.

de Baryum clorure normale

1o

et
5oo cmc., r

>

chlorure pour le ti-

normale

L.

trage des

de savon

solutions
d'aprs
5oo cmc.,

>

un litre)

Clark (ogr.5z3 dans r L.

nitrate pour le titrage des solutions de savon d'aprs Boutron

, >

et Boudet

oxyde hydrat
norrnale

d'"prsClark(ogr.559 dans un litre)

Llrc

5oo cmc., r 5oo cmc., r 5oo cmc., r

L.

L.
L.

Ractifs pour les examens de laboratoire

Solution de Cuiwe tartrate sodique (Liqueur de Fehling) roo cmc., > > Fer perchlorure r cmc. :

25o cmc.

l> > > > ))

ogr.or de Fe > > (proto)-Ammoniumsul-

5oo cmc.,

r L.

fate pour le dosage de la Glycrine d'aprs Hehner zL. d'Iode binormale et normale . 25o cmc., 5oo cmc. D Vro nofmale 5oo cmc., r L. de Potassium bichromate normale et 1o normale 5oo cmc., r L. > Potassium bichromate ?+gt.56
KsCreO? et r50 cmc. d'acide sul-

furique dans un litre pour le

>l )) D D )) > D ))

> Potassium bromate

loga-ge de Hehner

la

glycne'd'aprs normale,
5oo cmc., 5oo cmc., 5oo cmc.,

r L. r L. r L. L.

bromure de potassium > Potassium bromate r gt.67oz KBrOs dans un litre : . D Potassium bromure 6 gr. KBr . : dans un litre
Potassium caustiquebinormale, normale, Llz rtorrnale, 1/s nor-

r/ro ofmal., t/to normale avec

5oo cmc., r

) Potassium caustique alcoolique t/z normale t 1/10 nor> Potassium chromate

1/ro ormale

et

male, t1a notmale, t/5 notmale

1/ro normale 5oo cmc., r

L.

male

neutre

25o cmc., 5oo cmc. 5oo cmc., r

) Potassium palmitique pour le dosage de la duret de I'eau, ) Potassium permanga.ate notVro nofmale d'aprs Blacher et {23 nofmale .

L.

5oo cmc.,

r I-.

male, r/s noimale, {ro normale, titre par la solution d'hyposulfite e soude 1/ro normaie, et 1/16 normale, titre par la solution d'acide oxaliqire 1/ro normale
r/:.0

> >>

> Potassium sulfocyanate

normale

5oo cmc., r
5OO CmC,,

L.

) Sodium arsnite normale env. 1/e normale (D.A.B.6) et Ll1

normale

r L.

5oo cmc.,

r L.

Ractifs pour les examens de laboratoire Solution de Sodium carbonate notmale et

1o

> 9 )> D ) > )>

) Sodium caustique
et Vro normale
1/ro normale

norrnale

normale, r/s normale, 1/s normale, r1n normale, {r normale

alcooligue
et

binormale,

5oo cmc.,

r L.

) Sodium caustique
1o normale

5oo cmc.,

r L. L.

)) Sodium chlorure normale

z5o cmc., r 5oo cmc., r 5oo cmc., r 5oo crnc., r 5oo cmc., r 5oo cmc., r

)) sodium nitrite rlro notmale . ) Sodium thiosulfate normale et Vro normale d'IIrane actate (deuto) r cmc. : )
o

L. L. L. L.
L.

nitrate (deuto) r cmc. :

o

gr. oo5 PeOo gr. oo5 PzOo

Indicateurs. 25 Sr., roo gr. rosolique ' roo gr.r 5oo gr. )) en solution l> rogr.r 258t. Alcannine concentre 25 #.r 50 gr. Alizarine 25 Et.,so gr. Alizarinesulfonate de Sodium Azolithmine S gt., zS gt. Bleu d'alcali 6 B en solution alcool. roo gr. (env. zols) rogr., z5gr. >r de Poirrier C4B 15 gr., roo gr. Cochenille pulvrise r gr,, 5 gr. Dichlorphnol-indophnol, 2,6ro gr., zS gt. Dimthylaminoazobenzol rogr., z1gr. Eosine iode Hmatoxyline 5 gr., ro gr. Togr., z1,gt. Lacmoide toute pure en paillettes
Acide
4-Mthyl-umbolliferone pour I'analyse
fl.uorescente

Naphtolphtaline,
Palitzsch

o-

d'aprs Srensen et

5
5 5

gf.,
gf"

25

gr.

gf., ro gf.

Nitramine

Nitrophnol, ortho-

>>

Orange de Mthyle

Pata-

>

>

en solution
I:
IOOO

aqueuse

ro gf ., z5 8t. ro gf., 25 91. ro gr., 25 8t.

25

Phnolphtaline

Racine d'Orcanette coupe

>

en solution r:

roo

. . .

25o

roo gt.r 250 gt.

5oo gr.

gf. 8r., roo gr.

Ractifs pour les exarnens de laboratoire Rouge Congo r de Mthyle

25 8r., roo gr.

D ),

>

soluble dans I'eau (Sel

5 5 5

gr., ro gf.

D Curcuma roog1.,25ogr. d'Orcanette . . roo gf. de Tournesol (Solution de Tournesol d'aprs Iiubel et Tiemann) 250 gr.r 5oo gr. Tournesol tout pur Io gr., 25 gt. ) en solution d'aprs May z5o gt.r 5oo gr. Tropoline oo 25 gr.

> de Propyle Teinture de Chenille ) I >

D neutfe . :"1tq:r.) .u':n:u: l*:

gr., ro gr. ro gf.r 25 gt. gf.

25o gr.

r>

ooo no I

25

gr.

Indicateurs pour la dtermination de la concentration des ions-hydrogne.

Acide benzylanilino-azo-parabenznesulfonique (Sel potassique)

>

r gr.,
5

cr-naphtylamine-azo-parabenznesulfonique (Sel sodique)

gr.

Bleu de Bromochlorophnol (Dibromodi-

gr., ro gr.

l> l> D )

)) Bromophnol(Ttrabromophnolsulfonephtaline) )) Bromothymol (Dibromothymolsulfonephtalin) )) Thymol (Thymolsulfonephtalirie )) p-Xylnol(p-Xylnolsulfonephtaline)

chlorophnolsulfonephtaline)

r gr.
r gf.,
5 5 5

gr.

r gf.: r gf.r r gf., r gf., 9f.,

8f. sr.
gf.

Crsolphtalini orthoDinitrophnol, oJaune d'Alizarine GG (Acide m-nitroben-

>F)Y-

gr. ro gr., 25 gr.

5 25

5 5

r gr., 5 gf.

8f.

>

))

R (Acide
;:otq:"J

zne-azo-salicylique, Sel sodique)

25

p-nitroben-

Sf., roo gf.

zne-azo-salicylique, Sel

Naphtolphtatine, Nitramine

Nitrophnol, mta*

5 5 5

r gf., 25 gr. gr., 25 gf. gr. gf., ro gr.

Para-

ro gr., 25 gt.

Ractifs pour les examens de laboratorre Orange de MthYle Phnolphtaline

ro gr., 25 gf
25
.

8f.: roo gf .

Pourpr de Bromocrsol (Dibromo-a-ct'

> )) )

D Mtacrsol

solsulfonePhtaline) (Crsolsul-

rgf., rogf.
r gr. r gr.

fonephtaline, mta-)'

Rouge de Bromopnol. (Dibromophnolsul- fonephtaline)

r gr. fonePhtaline) : ' D > Crs1 (Crsolsulfonephtaline, r gr., ro gr. ortho-) )) > Mthyie (Acide p-dimthylarninoazob enzne- o- carbo niq ue) r gr., 5 gr. )) )) > soluble dans I'eau (Sel r#"581' sodique) ro gr., z5 gr. >r neutre > dePhnol (ehnolsulfonephtaline) r gf.r 5 gf. ) D Propyle-(Acidep-dipropylaminoazobenzne-o-carbonique )

Chloiophnol'(Didrlorophnolsul-

Thymolphtalinc Tropoline oo

r gf., 5 gf. r gf., 5 gr.

25

8t. gr.

Veri

de Bromocrsol (Ttrabromo-m-crso1-

sulfonephtaline)

p-Xylnolphtaline indicateur universel avec gamme et mode d'emploi

r gr. r gf.,

25 Cmc., 50 cmc.

Indicateufs pour la dtefmination de la concentration des ions-hydrogne d'aprs srensen I'aide de solutions-tampon donnant la valeur des pn dans les limites

de Tr?--rz)T.
Bleu de Thymol (Thymolsulfonephtaline) r gt.

Acide benzylanil

nique (Sel potassique) Bleu de Bromophnol (TtrabromophnolRouge de Mthyle (Acide p-dimthylamino-

ino- azo-p arabenznesulfo-

r gr-

sulfonephtaline)

r grr gr.

az-obenzne-o-carbonique)

Pourpre de Bromoctsol (Dibromo-o-crso1-

sulfonephtaline)

r gr.

Ractifs pour les examens de laboratoire Bleu de- Bromothymol (Dibromothymolsulfonephtaline)

Rouge de Phnol (phnolsulfonephtaline)

(Crsolsulfonephtaline,' ortho_) (Thymolsulfonephtaline P"j 9". Tl-rymol' orthCrsolphtaline, :

l> )) Crsol

r grr grr gf.

)

r gr.

Thymolphtaline

r gf.
r gr.
r gf.

Jaune d'Alizarine R (Acide p-nitrobenzneazosalicylique, Sel sodiqu)

Substances-tampon pou
Acide borique crist. d'aprs Srensen > citrique d'aprs Srensen -d'apri Glycocolle

de la concentration des ions-hydrogne.

Srensen roo gr., 5oo gr. gr.r roo gf . 5 gr., ro gr. 25 gr., roo grro gf., z5 gr.
50

r la dtermination

Potassium biphosphate d'aprs Srensen o biphtaiate d'aprs Clark er Lubs

Sodium biborate

>

crist. .- .

phosphate crist. d'aprs Srensen

25ogr.,5oogr.
.

25 gt.,

roogf.

Matires colorantes, combinaisons de matires colorantes et d'autres ptparations pour la microscopie

ordonnes d'aprs les noms des auteurs.
Behrens .(Solution de chlorure de zinc) Bhmer_(Solution d'hmatoxyline et d'alun)

50gf., roogr.
roo gr.
5

Delateld (Solution d'hmatoxyline

ammoniacal)

Burri (Encre de drine)

gr.

et

d'alun

ration des microbes (Thionine: Violet de Lauth) Ehrlidr-Biondi (Mlange tricolore,'solution tri-acide)'

Ehrlich (Solulion d'hmatoxyline, d'alun. d'acide actique et 'osine) : > (Ractif I, II-et III) pour la colo-.

roo gr. roo

gf.

,)

roo gr.
5

gf., ro gf.

mique-actique) Flesch (Solutin d'hmtoxyline et d,alun)

roo gf. Flemming (Solution d'acide chromique actique) roo gf. > (Solution - d'acide chromique os25
.

25 gt.t roo

9f" roogr.

gf.

Ractifs pour les examens de laboratoire

Friedlnder (Solution d'hmatoxvline

d'alun)

et roo gf.
5 gt.r 25 8f
50
.

Giemsa (Azur-osine-bleu de mthylne) . > (Solution d'azur-osine-bleu de mthylne) Gieson, van (Solution colorante)

gr., roo gf.

roo gf.
IOo $f. r

Gram (Solution de violet de gentiane

phnique)

25 81., roo gf. Grenacher (Carmin alun) (sotution de carmin alun) roo gf. > (Solution alcoolique de borax> roo gr. carmin) (Solutin alcoolique, chlor> hydrique de carmin) 50 gf.r roo gr.

Hayem (Solution pour compter les globules rouges) Heidenhain "(Solution d'hmatoxyline) Hertwig (Solution d'acide osmique actique) Hoyer (Solution de gomme-chloral hydrat) Jenner (Eosine-bleu de mthylne) > (Solution d'osine-bleu de mthylne)
roo gr., 5oo roo gf.

gf.

Ioo gf.
roo gr. ro gr. roo gr. roo gr.
25o $t.r 5oo gr.

Kaiser (Glycrine-glatine) Kleinenberg et Mayer (Acide picriquesulfurique) Klemensiewicz (Solution de picrocarmin) . Koch-Ehrlich (Solutiofi de bleu de mthylne)

roo gr.

Krnig (Lut pour la microscopie) Kiihne (Solution de bleu de mthylne

phnique)

roo gf. roo gr. roo gr. ro gf. roo gr. roo gf.
25o

Leishman (Eosine-bleu de mthylne) > (Solution d'osine-bleu de mthylne)

Lfiler (Solution de bleu de mthylne) Lugol (So1ution d'iode iodur)

Manson (Solution de bleu de mthylne
borate)

gf.

May-Grriwald (Eosine-bleu de mthyine) D ll (Solution d'osine-bleu de

mthylne)

roo gf. ro gr., 25

50 50

8t.

May:r. (Solution acide, alcoolique de carm1n/

8r., roo gr.

gr.r roo gr.

Neisser (Solution de vsuvine) Nicolle (Solution de thionine phnique)

roo gr.

Ioo gr.

Ractifs pour les examens de laboratoire

Nikiforoff (Solution de carmin

borate)

roo gf.

Otth (Solution de carmin lithique)

Pappenheim-Ifnna (Solution de vert de mthyle-pyronine phnique) Ranvier (Picrocarmin) > (Solution de picrocarmin)

roo gr. Ioo gf. Io gr., z5 gr.

roo gf,. roo gf. roo gf. roo gr. roo gr.

Sahli (Solution de bleu de mthylne

borate)

rsorcine-fuchsine p.our colorer les bres lastigues) _ Wid<ersheimer (Liquide de conservtion pour prparations anatomiques)

Strasburger (Solution de coralline) Unna (Solution de polychrome - bleu de mthylne) S7eigert (.Solution d'hmatoxyline I et II) . > -(Solution de picrocarmin) > (Solution

de-

Ioo gr.
50

tt

Ioo gr.

Ziehl-Ne,elsen (Solution de fuchsine phnlguee

25o gf .r 5oo gr.

roo gr.

Matires colorantes, combinaisons de matires colorantes et d'autres prpantions pour la

mlcroscople.
Acide ?cto-osmique en solution
Hertwig
d'aprs
roo gf.
5 en

Agar-Agar (Colle du Japon) blanc laments, en btons et

> >>

carminique osmique en solution

zolo

r gr., 5 gr. gr., rogr.

en

))
Azur

poudre grossire
r
o/o

fine

(Colle du Japon) en poudre

roogr., z5ogr.
25 $r' roo gr. roo gr.

Alizarine en solution

-Bleu de Mthvlne en solution d'aprs Giemsa 50 gf., roo gr. Baume du Canada pur, neutre, chaufi jusqu' la duret du verre et dissout ensuite dans le Xvlq,l zSV.t roogr. Bleu cle Crsyle bi.illant 25 gr., roogr.

> )) ))

Il-Eosine -Bleu de Mthylne d'aprs

Giemsa

I et II ) ))

r gr.,

5 91.r 25
5

gf.
gr.

gr., 25 gr.

Ractifs pour les examens de laboratoire

Bleu de Mthylne B extra

BB

ro gr., z5 8r. 25 gt.

en solution d'aprs Ehrlich 3: roo (Rac-

tif d'Ehrlich III) en solution d'apr's Koch-EhrlicJr boriqu en solulion d'aprs Manson boridu en solution d'a-prs Sahli
Blu de' Quinoline (Cyanine) Brun de Bismardr (Brun Manchester)

phniqu en solution d'prs Khne

roo gf. roo gf. roo gf. roo gf. roo gf. r gr., 5 gr.

> )) o D , > > >> > > > >

>

Carmin pour

en solution aqueuse concentre rec,herches histologiques

25 8t., roo

gf. gf.

roo gf., 5oo

ro gr., 25 gr.

n solution alcoolique acide d'aprs Maver 50 gr.r roo gr. en 'solution alcoolique c-hlorhydrique d'aprs Grenacher 5o 9f., roo gr. 25 8t., roo gr. aluri d'aprs Grenacher ) en solution d'aPrs Grenacher roo gr.

borat en solution alcool. d'aprs

Grenacher

roo gr.
roo gr. roo gr.

borat en solution d'apts Nikiborat en solution, actique ' lithique en solution d'aprs Orth d'Indigo en Pte

foroff

roo gr.
50

>>

solution r: roo

roo gf.

9r., roo gr.

Chloral hydrat

roo gr. Hoyer Chrome-Acide actique en solution d'aprs roo gf. Flemming ) acto-osmique en solution ) 25 gtt roo gr. d'aPrs Flemming r D osttiiqoe en solutin d'aPrs 25 gt,, roo gr. Flesch Coralline en solution d'aprs Strasburger' roo gr. Encre de Chine d'aPrs Burri 5 gr. 25 St.r roo gf. Eosine bleutre

en solution gomme d'aprs

> iauntre > t solution aqueuse to/o > -Bleu de Mthylne d'aprs Jenner > -BIeu de Mdhylne en solution > -Bleu de Mthylne d'aPrs Leishman

25 gf. roo gr.

ro gr.

roo gr. d'aprs Jenner a) Eoslne en solution b) nleu de Mthylne en solution ro gr'

Ractifs pour les examens de laboratoire

Eosine-Bleu de Mthvlne en solution d'aprs Leishinan

Grnwald ro gr. > -Bleu de Mthylne en solution 5ogr.r roogr. . d'aprs May-Griinwald Erythrosine
ro gr.

>

-Blu de Mthylne d'apr, M;r-

roo

gt'

) > Glatine >> nutritive strilise Glycrine-Glatine d'aprs Kaiser Hmalun

Hmatoxvline en solution

Fuchsine, Diamant- gros

cristaux z;gr.t roogr. en solution alcoolique zo/o roogr. )) > ) sature roo gr.
roo gf., 5oo gr. ro cmc., roo cmc.

roogr.
25

gr., roogr.

d'apriBhmer (avec Alun). roogr. > Delafield. (avec Alun ammoniacal) too [r. > Ehrlich (avec lun, Acide ac-

Sogi.,25ogr. Lut pour verres lenticulaires d'aprsKrnig roogr. Mlange des trois couleurs d'aprs EhrlichBioni (Solution triacide) roo gf.
Orcine
r gr.,
5

Friedlnder (avec Alun) Heidenharn \Teigert I (avec carbonate lithiqle) > 'Weigert II. a) Hmatoxyline en solution . b) carbonat de Li en solution . Huiie volatile d'Anis. vulgaire (Anthol) )) )) de Cajeput blanche pour . l'clairage )) ) de Cdre paissie ) > d'E"c.alyptus )) )) de Fnouil >> de Girofles > ) )) de Lavande > ll d'Origan de Crte )) >> de Santal du bois occidental > de Thym ) Indigo par synthse (Indigotine) }} en solution r:4o !1q"-" l'alcool noire Lvulose sirupeuse

> > >

!q.""-.et Eosine)

roogr.
roo gr.
roo gr.

rooIr.
50

roo gr.

5ogr., roogr.

g;.

ro gr., 25 gr. gr., roo gr. gr. 25 gr.r 50 gr. 25 gr., roo gr.
50 50

,i gt.

25 Hr.,

roogr.

5ogr. zS gr.

zlogr.

roo gr.

gr.

Ractifs pour les examens de laboratoire

Paraffine P. F. env. 55-56o Picrine-Acide sulfurique d'aprs Kleinen-

roo gf., 35o gr.

25o

berg et Mayer Picrocarmin d'aprs Ranvier

>

en solution

ro gf., 25 gr.
roo gr. roo gr. roo gr.

gr., 5oo gr.

d'aprs

) l>>)Dltreigert
d'aprs lInna
Rsine de Dammar

Klemensiewicz en solution d'aprs Ranvier

Polychrome-Bleu de Mthylne en solution Ioo gr.

roo gr.,
25
2

Rosaniline Rouge neutre Rubine S (Fuchsine d'acide)

gt. rogf.r z5gt.

50

gr.

25 8r., Ioo gr.

Safranine

> )) en solution aqueuse, Solution pour colorer les prparations microscopiques d'aprs Ehrlich (Ractif
d'Ehrlich I)
f

259r. concentre oo gf.

Ioo gr.

Solution pour colorer les prparations mi-

croscopiques d'aprs van Gieson roo gr. Solution pour la conservation des prparations anatomiques d'aprs Ifickersheimer 250 gr.,5oo gr.

Solution triacide pour la coloration des bactries d'aprs Ehrlich (Ractif d'Ehr-

lich II)

roogr.
5

Thionine d'Ehrlich (Violet de Lauth)

>

phnique n solution d'aprs

Ni-

gr., ro gr.

colle

roo gr. ro gr. Pappenroo gr. ro gr., z5 gr, roo gr.

25

Vert de Mthyle . . > >l

>

-Pyronine phniqu en so-

Iution d'aprs

heim-Unna Vsuvine ooo extra > en solution d'aprs Neisser

Violet de Dahlia (Violef d'Hofmann)

)) )

> Gentian > )

gt.

l> >

) Mthyle 5 B, 6 B, KB pur )) > en solution (solution

coolique

en solution alcool. sature

de

ro gf., 25 gr.
roo gr.
25

gr.

Violet en ciistaux) alroo gr.

.

:"T"."". . . ) en cristaux Zinc chlorure iod en solution d'aprs

Behrens

25

gr. gr., roo gr.

50

Ractifs pour les examens de laboratoire

Papiers actifs.
Papier
,,
))
))

I'actate de plomb u I'amidon et l'iodate de

de I'azolithmine
Congo

>l > I'iodure

potasse

de iotasse (Papier ozonomtrique)

))

))

)
))

l'orange de mthyle la phnolphtaline pour recherher I'eau dans le benzne, I'huile, etc. ractit des ples de tournesol b1eu, rouge et neutre
la tropoline

Curcuma

Les papiers ractifs <<Merck>> se trouvent dans le commerce sous forme de feuilles zzX45 cm. ou de carnets cont. de z5 roo bandes et, dans certains cas, sous forme de tubes de roo bandes. Il y a des divisions standardises de Sr ro, 25, So et roo pices.

Ractifs pour la sero-raction de la syphilis

(Contrls par l'tat).

WnssnnulNn:
Ambocepteur (Srum de lapin dissolvant le sang de mouton)

Extrait de foie lutique Extrait d'organe I Extrait d'organe II

SlcHs-GroRcr:

flacon flacon flacon flacon flacon

de t et de
de ro et de de ro et de de ro et de de ro et de

5 cmc. 5o cmc. 5o cmc.

(Merck (Merck (Merck

5o cmc. (Merd<

5o cmc. (Merck)