Propiedades fsico-qumicas de los cidos nucleicos

DENSIDAD DE LOS CIDOS NUCLEICOS

Densidad: existe una relacin lineal entre el contenido en G+C y la densidad del ADN determinada en un gradiente de densidad. A mayor contenido en G+C mayor densidad posee el ADN. Meselson y col. (1957) desarrollaron una tcnica de centrifugacin en gradiente de densidad. Cuando se centrifuga a alta velocidad un solucin densa (saturada) de un soluto de bajo peso molecular (ClCs 7,7 M, sucrosa, etc.) se produce un equilibrio entre dos fuerzas opuestas, la de difusin del soluto y la fuerza de sedimentacin, como consecuencia se produce un gradiente de densidad que aumenta en la direccin de la fuerza centrifuga (aumenta a medida que avanzamos hacia el fondo del tubo de centrifuga). Si aadimos al centrifugar una molcula de ADN, est migrar hacia el fondo del tubo hasta llegar al punto en que la densidad del soluto de bajo peso molecular (la densidad del ClCs) coincide con la densidad del ADN centrifugado (densidad de flotacin). Posteriormente, es posible aislar las molculas de ADN de diferente densidad practicando un orificio en el fondo del tubo y sacando varias fracciones diferentes. Tambin es posible pinchar el tubo con una jeringa, justo en la posicin de la banda y extraer el ADN contenido de esa zona del tubo.

DESNATURALIZACIN: TEMPERATURA DE FUSIN

Desnaturalizacin: la proporcin A+T/C+G est relacionada en primer lugar con la estabilidad de la molcula de ADN de doble

hlice Cuanto mayor es el contenido en G+C de una molcula, mayor cantidad de pares G-C presentar, como consecuencia tendr una mayor cantidad de triples enlaces y, por consiguiente, ser necesario suministrar una mayor cantidad de energa a esa doble hlice para separar sus dos hebras (desnaturalizacin o fusin del ADN). Cuanto mayor es el contenido en G+C mayor cantidad de calor que hay que suministrar a un ADN de doble hlice para desnaturalizarlo. La temperatura de fusin (Tm) necesaria para desnaturalizar la mitad del ADN de una mezcla (punto medio de la reaccin ADN doble hlice ADN hlice sencilla) est directamente relacionada con el contenido en G+C, a mayor contenido en G+C mayor temperatura de fusin (Tm).

ABSORBANCIA A 260 nm.

Esquema efecto doble hlice, la absorcin aumenta cuando se produce la desnaturalizacin pasando a estado de hlice sencilla (efecto hipercrmico, aumento de la absorbancia) y, por ltimo, si degradamos este ADN de hlice sencilla a nivel de nucletidos libres, de nuevo aumenta la absorbanciabrusco de la absorbancia al llegar a una temperatura determinada, la hipercrmico Por tanto, la absorbancia a 2.600 se puede utilizar como una medida del estado fsico de la molcula de ADN. Las curvas de fusin tienen forma de S observndose un aumento Absorbancia a 2.600 : El estado fsico de los cidos nucleicos est relacionado con su capacidad de absorcin de la luz ultravioleta (UV) a 2.600 .

CINTICA DE RENATURALIZACIN: CURVAS CoT

Velocidad de renaturalizacin: la velocidad de renaturalizacin del ADN de un organismo est relacionada con su complejidad.

La complejidad se define como la suma del nmero de nucletidos que tiene cada tipo de secuencia sin tener en cuenta el nmero de veces que esta repetida. El ADN de los virus y las bacterias en su mayora slo tiene secuencias que estn una sola vez en el genoma (secuencias nicas). Sin embargo, los organismos ms complejos, como los eucariontes, presentan distintos tipos de secuencias en su genoma. Los eucariontes tienen secuencias nicas (SU), secuencias de bajo nmero de copias (SBNC, 2-10 copias), secuencias repetidas (SR, alrededor de 102 copias) y altamente repetidas (SAR, 103 a 106 copias).

HIBRIDACIN DE LOS CIDOS NUCLEICOS

Las tcnicas de desnaturalizacin y posterior renaturalizacin se utilizan para conseguir la hibridacin de cidos nucleicos, es decir, una vez separadas las dos hebras del ADN doble hlice, es posible volver a formar una doble hlice con una hebra de ADN que sea complementaria (hibridacin de ADN con ADN) o volver a formar una doble hlice con un segmento de ARN que contenga la secuencia complementaria (hibridacin de ADN con ARN).

Endonucleasas de restriccin
Las tcnicas de hibridacin (desnaturalizacin y posterior renaturalizacin) permiten, por ejemplo, identificar el gen que ha dado lugar a un determinado ARN-mensajero. Si se asla un mensajero determinado en una clula, es posible hibridar este ARN con el ADN de la clula previamente fragmentado mediante el uso de endonucleasas de restriccin. Las endonucleasas de restriccin de tipo II son enzimas que reconocen secuencias cortas de ADN (de 4 a 6 pares de bases) de

tipo palindrmico y cortan por el interior de la secuencia diana a la misma altura en las dos hlices de ADN (corte simtrico) o a distinto nivel en cada hlice (corte asimtrico).

Material gentico de los nucletidos

El 'material gentico' se emplea para guardar la informacin gentica de una forma de vida orgnica y est almacenado en el ncleo de la clula. Para todos los organismos conocidos actualmente, el material gentico es casi exclusivamente cido desoxirribonucleico (ADN o DNA). Algunos virus usan cido ribonucleico (ARN o RNA) como su material gentico. Se cree generalmente que el primer material gentico fue el ARN, inicialmente manifestado por molculas de ARN que auto replicaban flotando en masas de agua. Este perodo hipottico en la evolucin de la vida celular se llama la hiptesis del mundo de ARN. Esta hiptesis est basada en la capacidad del ARN de actuar como un material gentico y como un catalizador, conocido como una ribosoma. Sin embargo, cuando las protenas (que pueden formar enzimas) llegaron a la existencia, la molcula ms estable, el ADN, se convirti en el material gentico dominante, una situacin que contina hoy. La naturaleza de la doble cadena del ADN permite que las mutaciones se corrijan, y tambin el ARN es intrnsecamente inestable. Las clulas modernas usan el ARN principalmente para construir protenas de las instrucciones del ADN, en la forma

de ARN mensajero, ARN ribosmico y ARN de transferencia. El ARN y el ADN son macromolculas compuestas de nucletidos (Son Polinucletidos), de los cuales hay cuatro en cada molcula. Tres nucletidos componen un codn, un tipo de "palabra gentica", que es como un aminocido en una protena. La traduccin codn-aminocido se conoce como

ARN
Es el cido ribonucleico que contiene la informacin gentica procedente del ADN para utilizarse en la sntesis de protenas, es decir, determina el orden en que se unirn los aminocidos. El ARN mensajero es un cido nucleico mono catenario, al contrario que el ADN que es bicatenario de doble hebra helicoidal. Todos los ARN eucariticos son monocistrnicos, es decir, contienen informacin para una sola cadena polipeptdica, mientras que en los procariotas los ARN son con frecuencia policistrnicos, es decir, codifican ms de una protena. El ARN mensajero obtenido despus de la transcripcin se conoce como transcrito primario o ARN precursor (pre-ARN), que en la mayora de los casos no se libera del complejo de transcripcin en forma totalmente activa, sino que ha de sufrir modificaciones antes de ejercer su funcin (procesamiento o maduracin del ARN). Entre esas

modificaciones se encuentran la eliminacin de fragmentos (splicing), la adicin de otros no codificados en el ADN y la modificacin covalente de ciertas bases nitrogenadas. Concretamente, el procesamiento del ARN en eucariotas comprende diferentes fases: Adicin al extremo 5' de la estructura denominada caperuza o casquete (o CAP, su nombre en ingls) que es un nucletido modificado de guanina, la 7-metilguanosina trifosfato, que se aade al extremo 5' de la cadena del ARN transcrito primario (ubicado an en el ncleo celular) mediante un enlace 5'-fosfato 5'-fosfato en lugar del habitual enlace 3',5'-fosfodister.1 Esta caperuza es necesaria para el proceso normal de traduccin del ARN y para mantener su estabilidad; esto es crtico para el reconocimiento y el acceso apropiado del ribosoma. Poliadenilacin: es la adicin al extremo 3' de una cola poli-A, una secuencia larga de poliadenilato, es decir, un tramo de RNA cuyas bases son todas adenina. Su adicin est mediada por una secuencia o seal de Poliadenilacin (AAUAAA), situada unos 1130 nucletidos antes del extremo 3' original. Esta cola protege al ARN frente a la degradacin, aumentando su vida media en el citosol, de modo que se puede sintetizar mayor cantidad de protena. En la mayora de los casos, el ARN mensajero sufre la eliminacin de secuencias internas, no codificantes, llamadas intrones.

Universidad nacional Pedro Henrquez Urea

Mara stephanie

Aguilera telleria

11-0963

Gentica general

Seccin martes Miguel taveras