LAS ENZIMAS

Estructura de la triosafosfato isomerasa. Conformacin en forma de diagrama de cintas rodeado por el modelo de relleno de espacio de la protena. Esta protena es una eficiente enzima involucrada en el proceso de transformacin deazcares en energa en las clulas. Las enzimas son molculas de naturaleza proteica que catalizan reacciones qumicas, siempre que sean termodinmicamenteposibles: una enzima hace que una reaccin qumica que es energticamente posible (ver Energa libre de Gibbs), pero que transcurre a una velocidad muy baja, sea cinticamente favorable, es decir, transcurra a mayor velocidad que sin la presencia de la enzima. En estas reacciones, las enzimas actan sobre unas molculas denominadas sustratos, las cuales se convierten en molculas diferentes denominadas productos. Casi todos los procesos en las clulas necesitan enzimas para que ocurran a unas tasas significativas. A las reacciones mediadas por enzimas se las denomina reacciones enzimticas. Debido a que las enzimas son extremadamente selectivas con sus sustratos y su velocidad crece slo con algunas reacciones, el conjunto (set) de enzimas sintetizadas en una clula determina el tipo de metabolismo que tendr cada clula. A su vez, esta sntesis depende de la regulacin de la expresin gnica. Como todos los catalizadores, las enzimas funcionan disminuyendo la energa de activacin (G) de una reaccin, de forma que se acelera sustancialmente la tasa de reaccin. Las enzimas no alteran el balance energtico de las reacciones en que intervienen, ni modifican, por lo tanto, el equilibrio de la reaccin, pero consiguen acelerar el proceso incluso millones de veces. Una reaccin que se produce bajo el control de una enzima, o de un catalizador en general, alcanza el equilibrio mucho ms deprisa que la correspondiente reaccin no catalizada. Al igual que ocurre con otros catalizadores, las enzimas no son consumidas por las reacciones que catalizan, ni alteran su equilibrio qumico. Sin embargo, las enzimas difieren de otros catalizadores por ser ms especficas. Las enzimas catalizan alrededor de 4.000 reacciones bioqumicas distintas. No todos los catalizadores bioqumicos son protenas, pues algunas molculas de ARN son capaces de catalizar reacciones (como la subunidad 16S de los ribosomas en la que reside la actividad peptidil transferasa). Tambin cabe nombrar unas molculas sintticas denominadas enzimas artificiales capaces de catalizar reacciones qumicas como las enzimas clsicas.

La actividad de las enzimas puede ser afectada por otras molculas. Los inhibidores enzimticos son molculas que disminuyen o impiden la actividad de las enzimas, mientras que los activadores son molculas que incrementan dicha actividad. Asimismo, gran cantidad de enzimas requieren de cofactores para su actividad. Muchas drogas o frmacos son molculas inhibidoras. Igualmente, la actividad es afectada por la temperatura, el pH, la concentracin de la propia enzima y del sustrato, y otros factores fsico-qumicos. Algunas enzimas son usadas comercialmente, por ejemplo, en la sntesis de antibiticos y productos domsticos de limpieza. Adems, son ampliamente utilizadas en diversos procesos industriales, como son la fabricacin de alimentos, destincin de jeans o produccin de biocombustibles.

Historia
Desde finales del siglo XVIII y principios del siglo XIX, se conoca la digestin de la carne por las secreciones del estmago y la conversin del almidn enazcar por los extractos de plantas y la saliva. Sin embargo, no haba sido identificado el mecanismo subyacente. En el siglo XIX, cuando se estaba estudiando la fermentacin del azcar en el alcohol con levaduras, Louis Pasteur lleg a la conclusin de que esta fermentacin era catalizada por una fuerza vital contenida en las clulas de la levadura, llamadas fermentos, e inicialmente se pens que solo funcionaban con organismos vivos. Escribi que "la fermentacin del alcohol es un acto relacionado con la vida y la organizacin de las clulas de las levaduras, y no con la muerte y la putrefaccin de las clulas".Por el contrario, otros cientficos de la poca como Justus von Liebig, se mantuvieron en la posicin que defenda el carcter puramente qumico de la reaccin de fermentacin.

En 1878 el fisilogo Wilhelm Khne (18371900) acu el trmino enzima, que viene del griego "en levadura", para describir este proceso. La palabra enzima fue usada despus para referirse a sustancias inertes como la pepsina. Por otro lado, la palabra "fermento" sola referirse a la actividad qumica producida por organismos vivientes. En 1897 Eduard Buchner comenz a estudiar la capacidad de los extractos de levadura para fermentar azcar a pesar de la ausencia de clulas vivientes de levadura. En una serie de experimentos en la Universidad Humboldt de Berln, encontr que el azcar era fermentado inclusive cuando no haba elementos vivos en los cultivos de clulas de levaduras. Llam a la enzima que causa la fermentacin de la sacarosa, zimasa. En 1907 recibi el Premio Nobel de Qumica "por sus investigaciones bioqumicas y el haber descubierto la fermentacin libre de clulas". Siguiendo el ejemplo de Buchner, las enzimas son usualmente nombradas de acuerdo a la reaccin que producen. Normalmente, el sufijo "-asa" es agregado al nombre del sustrato (p. ej., la lactasa es la enzima que degrada lactosa) o al tipo de reaccin (p. ej., la ADN polimerasa forma polmeros de ADN). Tras haber mostrado que las enzimas pueden funcionar fuera de una clula viva, el prximo paso era determinar su naturaleza bioqumica. En muchos de los trabajos iniciales se not que la actividad enzimtica estaba asociada con protenas, pero algunos cientficos (como el premio Nobel Richard Willsttter) argumentaban que las protenas eran simplemente el transporte para las verdaderas enzimas y que las protenas per se no eran capaces de realizar catlisis. Sin embargo, en 1926, James B. Sumner demostr que la enzima ureasa era una protena pura y la cristaliz. Summer hizo lo mismo con la enzima catalasa en 1937. La conclusin de que las protenas puras podan ser enzimas fue definitivamente probada por John Howard Northrop y Wendell Meredith Stanley, quienes trabajaron con diversas enzimas digestivas como la pepsina (1930), la tripsina y la quimotripsina. Estos tres cientficos recibieron el Premio Nobel de Qumica en1946. El descubrimiento de que las enzimas podan ser cristalizadas permita que sus estructuras fuesen resueltas mediante tcnicas de cristalografa y difraccin de rayos X. Esto se llev a cabo en primer lugar con la lisozima, una enzima encontrada en las lgrimas, la saliva y los huevos, capaces de digerir la pared de algunas bacterias. La estructura fue resuelta por un grupo liderado por David Chilton Phillips y publicada en 1965. Esta estructura de alta resolucin de las lisozimas, marc el comienzo en el campo de la biologa estructural y el esfuerzo por entender cmo las enzimas trabajan en el orden molecular. Eduard Buchner.

ESPECIFICIDAD:
Las enzimas suelen ser muy especficas tanto del tipo de reaccin que catalizan como del sustrato involucrado en la reaccin. La forma, la carga y las caractersticas hidroflicas/hidrofbicas de las enzimas y los sustratos son los responsables de dicha especificidad. Las enzimas tambin pueden mostrar un elevado grado de estereoespecificidad, regioselectividad y quimioselectividad. Algunas de estas enzimas que muestran una elevada especificidad y precisin en su actividad son aquellas involucrados en la replicacin y expresin del genoma. Estas enzimas tienen eficientes sistemas de comprobacin y correccin de errores, como en el caso de la ADN polimerasa, que cataliza una reaccin de replicacin en un primer paso, para comprobar posteriormente si el producto obtenido es el correcto. Este proceso, que tiene lugar en dos pasos, da como resultado una media de tasa de error increblemente baja, en torno a 1 error cada 100 millones de reacciones en determinadas polimerasas de mamferos. Este tipo de mecanismos de comprobacin tambin han sido observados en la ARN polimerasa, en la ARNt aminoacil sintetasa y en la actividad de seleccin de los aminoacil-tRNAs. Aquellas enzimas que producen metabolitos secundarios son denominadas promiscuas, ya que pueden actuar sobre una gran variedad de sustratos. Por ello, se ha sugerido que esta amplia especificidad de sustrato podra ser clave en la evolucin y diseo de nuevas rutas biosintticas.

MODELO DE LA "LLAVECERRADURA"
Las enzimas son muy especficas, como sugiri Emil Fischer en 1894. Con base a sus resultados dedujo que ambas molculas, enzima y sustrato, poseen complementariedad geomtrica, es decir, sus estructuras encajan exactamente una en la otra, por lo que ha sido denominado como modelo de la "llave-cerradura", refirindose a la enzima como a una especie de cerradura y al sustrato como a una llave que encaja de forma perfecta en dicha cerradura. Sin embargo, si bien este modelo explica la especificidad de las enzimas, falla al intentar explicar la estabilizacin delestado de transicin que logran adquirir las enzimas.

MODELO DEL ENCAJE INDUCIDO:

Diagrama que esquematiza el modo de accin del modelo del encaje inducido. En 1958 Daniel Koshland sugiere una modificacin al modelo de la llave-cerradura: las enzimas son estructuras bastante flexibles y as el sitio activo podra cambiar su conformacin estructural por la interaccin con el sustrato. Como resultado de ello, la cadena aminoacdica que compone el sitio activo es moldeada en posiciones precisas, lo que permite a la enzima llevar a cabo su funcin cataltica. En algunos casos, como en las glicosidasas, el sustrato cambia ligeramente de forma para entrar en el sitio activo. El sitio activo continua dicho cambio hasta que el sustrato est completamente unido, momento en el cual queda determinada la forma y la carga final.

Mecanismos:
Las enzimas pueden actuar de diversas formas, aunque, como se ver a continuacin, siempre dando lugar a una disminucin del valor de G:

Reduccin de la energa de activacin mediante la creacin de un ambiente en el cual el estado de transicin es estabilizado (por ejemplo, forzando la forma de un sustrato: la enzima produce un cambio de conformacin del sustrato unido el cual pasa a un estado de transicin, de modo que ve reducida la cantidad de energa que precisa para completar la transicin).

Estructura:

Reduciendo la energa del estado de transicin, sin afectar la forma del sustrato, mediante la creacin de un ambiente con una distribucin de carga ptima para que se genere dicho estado de transicin. Proporcionando una ruta alternativa. Por ejemplo, reaccionando temporalmente con el sustrato para formar un complejo intermedio enzima/sustrato (ES), que no sera factible en ausencia de enzima. Reduciendo la variacin de entropa necesaria para alcanzar el estado de transicin (energa de activacin) de la reaccin mediante la accin de orientar correctamente los sustratos, favoreciendo as que se produzca dicha reaccin. Incrementando la velocidad de la enzima mediante un aumento de temperatura. El incremento de temperatura facilita la accin de la enzima y permite que se incremente su velocidad de reaccin. Sin embargo, si la temperatura se eleva demasiado, la conformacin estructural de la enzima puede verse afectada, reduciendo as su velocidad de reaccin, y slo recuperando su actividad ptima cuando la temperatura se reduce. No obstante, algunas enzimas son termolbiles y trabajan mejor a bajas temperaturas. Cabe destacar que este efecto entrpico implica la desestabilizacin del estado basal, y su contribucin a la catlisis es relativamente pequea.

ESTABILIZACIN DEL ESTADO DE TRANSICIN:

La comprensin del origen de la reduccin del valor de G en una reaccin enzimtica requiere elucidar previamente cmo las enzimas pueden estabilizar su estado de transicin, ms que el estado de transicin de la reaccin. Aparentemente, la forma ms efectiva para alcanzar la estabilizacin es la utilizacin de fuerzas electrostticas, concretamente, poseyendo un ambiente polar relativamente fijado que pueda orientarse hacia la distribucin de carga del estado de transicin. Ese tipo de ambientes no existen ni se generan en ausencia de enzimas.

DINMICA Y FUNCIN:
La dinmica interna de las enzimas est relacionada con sus mecanismos de catlisis. La dinmica interna se define como el movimiento de diferentes partes de la estructura de la enzima, desde residuos individuales de aminocidos, hasta grupos de aminocidos o incluso un dominio proteico entero. Estos movimientos se producen a diferentes escalas de tiempo que van desde femtosegundos hasta segundos. Casi cualquier residuo de la estructura de la enzima puede contribuir en el proceso de catlisis por medio de

movimientos dinmicos. Los movimientos de las protenas son vitales en muchas enzimas. Dichos movimientos podrn ser ms o menos importantes segn si los cambios conformacionales se producen por vibraciones pequeas y rpidas o grandes y lentas, y dicha importancia depender del tipo de reaccin que lleve a cabo la enzima. Sin embargo, aunque estos movimientos son importantes en el proceso de unin y liberacin de sustratos y productos, an no est claro si estos movimientos ayudan a acelerar los pasos qumicos de las reacciones enzimticas. Estos nuevos avances tambin tienen implicaciones en la comprensin de los efectos alostricos y en el desarrollo de nuevos frmacos.

FUNCIN BIOLGICA:
Las enzimas presentan una amplia variedad de funciones en los organismos vivos. Son indispensables en latransduccin de seales y en procesos de regulacin, normalmente por medio 69 de quinasas y fosfatasas. Tambin son capaces de producir movimiento, como es el caso de la miosina al hidrolizar ATP para generar la contraccin muscularo el movimiento de vesculas por 70 medio del citoesqueleto. Otro tipo de ATPasas en la membrana celular son lasbombas de iones implicadas en procesos de transporte activo. Adems, las enzimas tambin estn implicadas en funciones mucho ms exticas, como la produccin de luz por la luciferasa en 71 las lucirnagas. Los virus tambin pueden contener enzimas implicadas en la infeccin celular, como es el caso de la integrasa del virus HIV y de latranscriptasa inversa, o en la liberacin viral, como la neuraminidasa del virus de la gripe. Una importante funcin de las enzimas es la que presentan en el sistema digestivo de los animales. Enzimas tales como las amilasas y las proteasas son capaces de degradar molculas grandes (almidn o protenas, respectivamente) en otras ms pequeas, de forma que puedan ser absorbidas en el intestino. Las molculas de almidn, por ejemplo, que son demasiado grandes para ser absorbidas, son degradadas por diversas enzimas a molculas ms pequeas como la maltosa, y finalmente a glucosa, la cual s puede ser absorbida a travs de las clulas del intestino. Diferentes enzimas digestivas son capaces de degradar diferentes tipos de alimentos. Los rumiantes que tienen una dieta herbvora, poseen en sus intestinos una serie de microorganismos que producen otra enzima, la celulasa, capaz de degradar la celulosa presente 72 en la pared celular de las plantas. Varias enzimas pueden actuar conjuntamente en un orden especfico, creando as una ruta metablica. En una ruta metablica, una enzima toma como sustrato el producto de otra enzima. Tras la reaccin cataltica, el producto se transfiere a la siguiente enzima y as sucesivamente. En ocasiones, existe ms de una enzima capaz de catalizar la misma reaccin en paralelo, lo que permite establecer una regulacin ms sofisticada: por ejemplo, en el caso en que una enzima presenta una actividad constitutiva pero con una baja constante de actividad y una segunda enzima cuya actividad es inducible, pero presenta una mayor constante de actividad.

Las enzimas determinan los pasos que siguen estas rutas metablicas. Sin las enzimas, el metabolismo no se producira a travs de los mismos pasos, ni sera lo suficientemente rpido para atender las necesidades de la clula. De hecho, una ruta metablica como la glucolisis no podra existir sin enzimas. La glucosa, por ejemplo, puede reaccionar directamente con el ATP de forma que quede fosforilada en uno o ms carbonos. En ausencia de enzimas, esta reaccin se producira tan lentamente que sera insignificante. Sin embargo, si se aade la enzimahexoquinasa que fosforila el carbono 6 de la glucosa y se mide la concentracin de la mezcla en un breve espacio de tiempo se podr encontrar nicamente glucosa-6-fosfato a niveles significativos. Por tanto, las redes de rutas metablicas dentro de la clula dependen del conjunto de enzimas funcionales que presenten.

La coenzima cido flico (izquierda) y el frmaco anti-cancergeno metotrexato(derecha) son muy similares en estructura. Como resultado, el metotrexato es un inhibidor competitivo de muchas enzimas que utilizan folato.

EFECTOS EN EL PH
Todas las enzimas presentan un pH ptimo de actividad. El pH puede afectar de varias maneras: El centro activo puede contener aminocidos con grupos ionizados que pueden variar con el pH. El sustrato puede verse afectado por las variaciones del pH.

Aplicacin

Enzimas utilizadas

Usos

Procesado de alimentos

Amilasas de hongos y plantas.

Produccin de azcares desde el almidn, como por ejemplo en la 80 produccin de jarabe de maz. En la coccin al horno, cataliza la rotura del almidn de la harina en azcar. La fermentacin del azcar llevada a cabo por levaduras produce el dixido de carbono que hace "subir" la masa.

La amilasa cataliza la degradacin del almidn en azcares sencillos.

Proteasas

Los fabricantes de galletas las utilizan para reducir la cantidad de protenas en la harina.

Alimentos para bebs

Tripsina

Para pre-digerir el alimento dirigido a bebs.

Elaboracin de cerveza

Las enzimas de la cebada son liberadas durante la fase de molido en la elaboracin de la cerveza.

Las enzimas liberadas degradan el almidn y las protenas para generar azcares sencillos, aminocidos y pptidos que son usados por las levaduras en el proceso de fermentacin.

Enzimas de cebada producidas a nivel industrial

Ampliamente usadas en la elaboracin de cerveza para sustituir las enzimas naturales de la cebada.

Amilasa, glucanasa y proteasas

Digieren polisacridos y protenas en la malta.

Cebada germinada utilizada para la elaboracin de malta.

Betaglucanasas y arabinoxilanasas

Mejoran la filtracin del mosto y la cerveza.

Amiloglucosidasas y

Produccin de cerveza baja en caloras y

pululanasas

ajuste de la capacidad de fermentacin.

Proteasas

Eliminan la turbidez producida durante el almacenamiento de la cerveza.

Acetolactatodecarboxilasa (ALDC)

Incrementa la eficiencia de la fermentacin mediante la reduccin de la 81 formacin de diacetilo.

Zumos de frutas

Celulasas, pectinasas

Aclarado de zumos de frutos.

Industria lctea

Renina, derivado del estmago de animales rumiantes jvenes (como terneros y ovejas).

Produccin de queso, usada para hidrolizar protenas.

Enzimas producidas por bacterias

Actualmente, cada vez ms usadas en la industria lctea.

Lipasas

Se introduce durante el proceso de produccin del queso Roquefort para favorecer la maduracin.

Queso de Roquefort.

Lactasas

Rotura de la lactosa en glucosa y galactosa.

Digestin de carne

Papana

Ablandamiento de la carne utilizada para cocinar.

Amilasas, amiloglucosidasas y glucoamilasas Industria del almidn Glucosa isomerasa

Conversin del almidn en glucosa y diversos azcares invertidos.

Conversin de glucosa en fructosa durante la

produccin de jarabe de maz partiendo de sustancias ricas en almidn. Estos jarabes potencian las propiedades edulcorantes y reducen las caloras mejor que lasacarosa y manteniendo el mismo nivel de dulzor.

Glucosa.

Fructosa.

Industria del papel Degradacin del almidn para reducir su viscosidad, aadiendo apresto. Las xilanasas reducen el blanqueador necesario para la decoloracin; las Amilasas, xilanasas, celulasas y celulasas alisan las fibras, favorecen el ligninasas drenaje de agua y promueven la eliminacin de tintas; las lipasas reducen la oscuridad y las ligninasas eliminan la lignina para ablandar el papel.
Una fbrica de papel enCarolina del Sur.

Ligninasas

Utilizada para eliminar residuos de lignina.

Detergentes biolgicos

Principalmente proteasas, producidas de forma extracelular porbacterias.

Utilizadas para ayudar en la eliminacin de tintes proteicos de la ropa en las condiciones de prelavado y en las aplicaciones directas de detergente

lquido.

Amilasas

Detergentes de lavadoras para eliminar residuos resistentes de almidn.

Lipasas

Utilizadas para facilitar la eliminacin de tintes grasos y oleosos.

Celulasas

Utilizadas en suavizantes biolgicos.

Limpiadores de lentes de contacto

Proteasas

Para eliminar restos proteicos de las lentes de contacto y as prevenir infecciones.

Industria del hule

Catalasa

Para generar oxgeno desde el perxido, y as convertir el ltex en huleespumoso.

Industria fotogrfica

Proteasa (ficina)

Disolver la gelatina de las pelculas fotogrficas usadas, permitiendo as la recuperacin de su contenido en plata.

Biologa molecular Utilizadas para manipular el ADN mediante ingeniera gentica. De gran importancia en farmacologa, agricultura, medicina y criminalstica. Esenciales para digestin de restriccin y para la reaccin en cadena de la polimerasa.

Enzimas de restriccin, ADN ligasa y polimerasas

ADN de doble hlice.