FACULTAD DE CIENCIAS FARMACUTICAS Y BIOQUMICA

ASIGNATURA: PRCTICAS N 1 : A CATALIZADORES ALUMNA: CICLO: DOCENTE:

BIOQUIMICA II ACCIN COMPARATIVA DE LAS ENZIMAS FRENTE NO BIOLGICOS

ROJAS RVOLO ROSARIO DIANA VII TURNO MAANA Q.F. JAVIER JACK CALDERN GMEZ

LIMA PER 2012

UNIVERSIDAD INCA GARCILASO DE LA VEGA Facultad de Ciencias Farmacuticas y Bioqumica

PRCTICA N 1 ACCIN COMPARATIVA DE LAS ENZIMAS FRENTE A CATALIZADORES NO BIOLGICOS

OBJETIVO: Producir la Hidrlisis del Sustrato Problema (Solucin salina de Almidn). La Hidrlisis va a ser efectuada por los catalizadores Biolgicos y No Biolgicos. Realizar la comparacin de catalizadores Biolgicos (Amilasa) frente a otros Catalizadores de tipo no Biolgicos (H20 dest., y el HCl 10 %.). Determinar cules de los Catalizadores produce cada tipo de Hidrlisis.

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PRCTICA N 1 ACCIN COMPARATIVA DE LAS ENZIMAS FRENTE A CATALIZADORES NO BIOLGICOS OBSERVACIONES: No enjuagar la boca con agua para luego botarlo y volverse a enjuagar nuevamente, ya que de sta manera se reduce la concentracin de amilasa que es la Solucin madre que queremos obtener para el ensayo, ya que si enjuagamos y desechamos va a tener menor actividad. Agitar por inversin con diferentes dedos los tubos para homogenizar. La muestra siempre debe estar bien cubierta por el agua para que el calor sea homogneo. La Reaccin slo dura hasta observar cambio de coloracin. Muestra.- Va a ser el catalizador Biolgico. Amilasa en condicin de Ayuno. Trabajamos con Acido Muritico en vez de HCL 10%: 20 ml de Ac. Muritico en 100 ml de H20 destilada.

RESULTADOS: Tubos N 4 y 7: 1. HIDRLISIS NEGATIVOS NULOS.- El Sustrato est intacto, se observar el color azul Marino Intenso; por eso se dice el Producto de Hidrlisis Negativa sigue siendo el mismo Almidn. El Lugol reconoce el Almidn, mediante la coloracin caracterstica: Azul Marino Intenso. Tubos N 5,6 y 8: 2. HIDRLISIS PARCIALES INCOMPLETOS.- El Sustrato ha sido Hidrolizado de manera parcial, por partes desordenada de la estructura del Polisacrido (Almidn). En ste Tipo de Hidrlisis se pueden encontrar hasta tres Productos distintos: a) Glucosas (En baja proporcin) b) Maltosas (Disacrido) c) Dextrinas (Trozos grandes de Carbohidratos) ( En mayor proporcin) Tubos N 9: 3. HIDRLISIS TOTALES COMPLETAS.Todo el Almidn ha sido destruido por completo, aqu los enlaces glucosdicos tanto alfa 1,4 como alfa 1,6 han sido rotos por completo, es por eso que el nico producto que se forma en ste tipo de Hidrlisis son las Glucosas. La Glucosa (Azcar reductor) obtenida se identific con los siguientes reactivos: Benedict y Fehling A+B. Rvo. Benedict.- pp. Rojo- Anaranjado ladrillo. Rvo. Fehling A + B.- pp. Rojo ladrillo.

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PRCTICA N 1 ACCIN COMPARATIVA DE LAS ENZIMAS FRENTE A CATALIZADORES NO BIOLGICOS CONCLUSINES: - Se cumpli con el objetivo de la prctica slo con la observacin de la Revelacin del producto final con la amilasa que aparentemente sala Hidrlisis Parcial con el sustrato, pero con el Producto + Rvo. (Benedict Fehling) obtuvimos una hidrlisis Total. Tanto con Rvo. De Benedict y Fehling hay una oxidacin del Cu+2 (color azl) a Cu +1 (rojo) Fundamento: Reaccin con Rvo. Benedict. Fundamento: - El Reactivo de Benedict identifica azcares reductores (aquellos que tienen su OH anomrico libre), como la lactosa, la glucosa, la maltosa, y celobiosa. En soluciones alcalinas, pueden reducir el Cu2+ que tiene color azul a Cu+, que precipita de la solucin alcalina como Cu2O de color rojo-naranja. El color azul de Cu++ es negativo para sustancias reductoras. Con Rvo. De Benedict y Fehling se corrobora que la amilasa es el mejor catalizador que el agua y el cido.

Reaccin con Rvo. Fehling. Fundamento: El Reactivo de Fehling, resulta al mezclar una solucin de CuSO4 con una solucin alcalina de tartrato de sodio y potasio, formndose un complejo del in Cu++ de color azul intenso, que oxida a los aldehidos, reducindose a Cu2O de color rojo ladrillo. La reaccin de Fehling est basada en la accin reductora que tienen los azucares sobre los iones cpricos en medio alcalino.

HC=O R + 2 Cu
++

+ 5 OH

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C=O O R

Cu2O

+ 3 H2O

Sustrato Problema: Solucin Salina de Almidn (Bien Transparente): Solucin Conservadora de Almidn. El Cloruro impide que el almidn se hidrolice con facilidad

Diluda

PRCTICA N 1 ACCIN COMPARATIVA DE LAS ENZIMAS FRENTE A CATALIZADORES NO BIOLGICOS COMENTARIOS Por ser la primera prctica de laboratorio, hubo mucho alumnado presente, lo que origin mucha aglomeracin. El asistente de Laboratorio nos entreg un Beacker de 100 ml rajado, el cual no lo revisamos al encontrar los materiales en nuestra mesa. El tiempo de prctica es muy corto por lo que debemos ganar tiempo lavando nuestros materiales apenas ingresemos al laboratorio y tomar nota de los procedimientos a realizar.

CRTICAS: El Lugol proporcionado para la prctica fue muy concentrado, muy puro, por eso lo diluimos agregndole agua destilada hasta obtener una coloracin caramelo para poder observar la coloracin Azul Marino Intenso. El Almidn utilizado y proporcionado por el Laboratorio no es Almidn puro, es almidn de trigo ya que cuando colocamos el tubo a contra luz nos es translucida como si lo es el Almidn Reactivo.

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PRCTICA N 1 ACCIN COMPARATIVA DE LAS ENZIMAS FRENTE A CATALIZADORES NO BIOLGICOS DIGESTIN: TUBO N 1 1 ml H20 destilada TUBO N 2 1 ml HCl 10% TUBO N 3 1 ml Amilasa (Muestra)
1 2 3

+
5 ml TUBO Salina Solucin N 4 0,5Almidn de ml de 1 I gota Lugol B.M. 38C x 15 Azul Marino min. Intenso Hidrlisis Negativa (Por que proviene del Digerido 1 el en cual hay H20.

+
5 ml TUBO Salina Solucin N 5 0,5Almidn de ml de 2 I gota Lugol B.M. Hervir x 15 Rojo Concho de min Vino Hidrlisis Parcial Incompleta (Hay Glucosa en baja proporcin con Maltosas y Dextrinas en mayor proporcin)

+
5 ml TUBO Salina SolucinN 6 0,5Almidn de ml de 3 I gota Lugol B.M. 38C x 15 Azl min Violceo Aparentement e Hidrlisis Parcial Esperamos encontrar la Hidrlisis Total, con una coloracin pardoso amarillento translcido, color caramelo

DETERMINACIN DE SUSTRATO:

+ +

+ +

+ +

DETERMINACIN DE PRODUCTO: Con sta prueba se corrobora la Hidrlisis Parcial, de la Hidrlisis Negativa y de la Hidrlisis Total Observacin con la Revelacin del producto: TUBO N 7 0,5 ml de 1 TUBO N 8 0,5 ml de 2 TUBO N 9 0,5 ml de 3

+
2 ml Rvo. Benedict Azul Marino Intenso Hidrlisis Negativa No hay formacin de pp porque no hay azcar Reductor libre

+
2 ml Rvo. Benedict pp. Rojo ladrillo (muy poco pp.)

2 ml Rvo. Benedict pp. Rojo ladrillo (en mayor cantidad) Hidrlisis Hidrlisis Parcial Total. Poca glucosa, es Productos decir poco formados: azcar reductor Glucosas. libre

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PRCTICA N 1 ACCIN COMPARATIVA DE LAS ENZIMAS FRENTE A CATALIZADORES NO BIOLGICOS DETERMINACIN DE PRODUCTO: TUBO N 7 0,5 ml de 1 TUBO N 8 0,5 ml de 2 TUBO N 9 0,5 ml de 3

+
2 ml Rvo. Fehling A +B Azul Marino Intenso Hidrlisis Negativa No hay formacin de pp porque no hay azcar Reductor libre

+
2 ml Rvo. Fehling A +B pp. Rojo ladrillo (muy poco pp.)

+
7 8 9

2 ml Rvo. Fehling A +B pp. Rojo ladrillo (en mayor cantidad) Hidrlisis Hidrlisis Parcial Total. Poca glucosa, es Productos decir poco formados: azcar reductor Glucosas. libre

Con stas pruebas se corrobora que la amilasa es el mejor catalizador que el agua y el cido.

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