APLICAO DE TCNICAS DE ENGENHARIA GENTICA RELACIONADAS BIOCINCIA FORENSE Janine Machado Nbrega 1; Izabel Cristina Rodrigues da Silva2

(1) Autor: Biloga. Faculdade da Terra de Braslia, FTB, Brasil. janinejmn@gmail.com (2) Orientadora: Biomdica. Doutora em Patologia Molecular pela UnB. Professora do IFAR/PUC-GO e Faculdade LS. e-mail: belbiomedica@uol.com.br

Resumo
As pesquisas nas reas da Cincia Forense esto cada vez se desenvolvendo mais para buscar solues nas investigaes criminais por meio de vestgios biolgicos, pois a extrao do DNA pode ser a principal prova contra o autor do delito, bem como a identificao legal da vtima. O uso de tcnicas de biologia molecular como ferramenta para determinar o perfil gentico individual tem mostrado grande eficincia nos casos de paternidade assim como em investigaes criminais como culpabilidade dos criminosos, identificao de corpos e restos humanos. Para fins forenses, a anlise de DNA mitocondrial, que carrega a herana exclusivamente materna, tem auxiliado nas identificaes de parentes de vtimas e na identificao de corpos de difcil identificao como, por exemplo, nos casos de corpos carbonizados. O cromossomo Y, de origem masculina, tambm tem grande importncia no reconhecimento de suspeitos de crimes de estupro, por exemplo, e no reconhecimento da excluso de paternidade. Palavras-chaves: Perfil Gentico. Identificao humana. Tcnicas biomoleculares. Cadeia de custdia.

Application of Genetic Engineering Techniques Related Forensic Bioscience

Abstract
The research in the areas of Forensic Science are increasingly developing more to seek solutions in criminal investigations by means of biological traces, because the extraction of DNA may be the main evidence against the offender and the legal identification of the victim. The use of molecular biology techniques as a tool to determine the individual's genetic profile has shown great efficiency in paternity cases and criminal investigations as culpability of criminals, identification of bodies and human remains. For forensic purposes, the analysis of mitochondrial DNA, which carries the exclusively maternal inheritance, has aided in the identification of relatives of victims and identifying bodies difficult to identify, for example, in cases of fire victims. The Y chromosome of male origin, also has great importance in recognition of suspected crimes of rape, for example, and in recognition of paternity exclusion. Keywords: Genetic Profile. Human identification. Molecular techniques. Chain of custody.

INTRODUO

As pesquisas nas reas da Cincia Forense esto cada vez se desenvolvendo mais para buscar solues nas investigaes criminais que possuem relao com materiais biolgicos. Muitas vezes, para se esclarecer um inqurito policial, um nico vestgio em que se possa extrair DNA, pode ser a principal prova contra o autor do delito, bem como a identificao legal da vtima (MATTE, 2007). Para isso, necessrio seguir alguns cuidados na cadeia de custdia e na preservao do material biolgico. As amostras devem ser corretamente acondicionadas no transporte, coleta e armazenamento, pois isto dar a integridade do exame do corpo de delito (SILVA; PASSOS, 2006). O uso de tcnicas de biologia molecular como ferramentas para determinar a identificao individual tem mostrado a eficincia de identificar perfis genticos humanos em casos de paternidade assim como em investigaes criminais como culpabilidade dos criminosos, identificao de corpos e restos humanos (PENA, 2005). Estas anlises so realizadas por meio da coleta de ossos, dentes, unhas e fludos corpreos como sangue, smen, saliva, urina entre outros fludos e tecidos biolgicos que possam ser utilizados como fonte de DNA (BENECKE, 2002). Alm disso, os estudos dos polimorfismos de DNA, que so regies que existem variaes entre indivduos, permitem que se construa um perfil gentico absolutamente indivduo-especfico (PENA, 2005). Uma grande vantagem de obter o DNA para estes estudos a sua capacidade de possuir uma alta estabilidade qumica mesmo aps um longo perodo de tempo e estar presente em todas as clulas nucleadas dos organismos, inclusive o humano, o que facilita a obteno do mesmo at para anlises em tecidos que estejam mortos h anos (MALAGHINI et al., 2000). Outros estudos surgiram tambm com o seqenciamento do DNA mitocondrial (mtDNA) que ampliou as tcnicas utilizadas hoje. Para fins forenses, a anlise do mtDNA tem sido aplicada situaes de identificao de linhagens maternas e em situaes em que no possvel a anlise do DNA nuclear (fios de cabelo sem bulbo), isto , quando no h material

gentico adequado ou suficiente para tipagem de regies polimrficas do DNA genmico, ou quando o material apresenta alto grau de degradao como, por exemplo, ossos antigos (WALLACE et al, 1999) . Nas ltimas dcadas, muitas tcnicas de biologia molecular foram desenvolvidas para a determinao gentica por meio de estudos das regies polimrficas, onde h variao entre pessoas normais. Dentre elas, as mais significativas so RFLP (Restriction Fragment Length Polymorphism) e PCR (Polimerase Chain Reaction), no qual se pode escolher a mais adequada para solucionar o caso (ALBUQUERQUE, 2004). Assim, o objetivo deste artigo mostrar, por meio de reviso de literatura, a utilizao das tcnicas relacionadas s Cincias Forenses aplicadas identificao humana, assim como a determinao dos procedimentos legais da cadeia de custdia no levantamento dos vestgios biolgicos de um crime.

METODOLOGIA

Para a elaborao deste trabalho de reviso foram pesquisados diversos artigos na base de dados do LILACS por meio dos servios da Medline, Scielo, CAPES e Bireme. Foram selecionados alguns artigos na lngua portuguesa e inglesa, e utilizados tambm como fonte de pesquisa livros, revistas e monografias na rea de gentica e biologia molecular. As publicaes foram selecionadas mediante busca com os seguintes descritores: DNA Forense, Identificao Humana, Tcnicas Biomoleculares, Bioinformtica, Cadeia de Custdia, Biological Evidence, Forensic Analysis, DNA Fingerprint, Mitochondrial DNA. Os critrios utilizados na seleo de publicaes para esta pesquisa foram baseados em trabalhos relacionados com o tema escolhido.

DISCUSSO

3.1

Identificao Humana (DNA Fingerpritting)

A primeira vez que um exame de DNA serviu como prova foi no caso das duas jovens inglesas, que foram assaltadas, violentadas sexualmente e assassinadas na dcada de 1980. Como as caractersticas dos crimes eram as mesmas, a polcia suspeitou que teria sido o mesmo homem a cometer os crimes (CHEMELLO, 2007). Com objetivo de solucionar o caso, mais de 3.600 homens na vila de Narborough, em Leicestershire, Inglaterra, foram convocados a fazerem exames de DNA. Os resultados dos exames foram utilizados para comparar com os resultados das amostras de smen coletadas das vtimas. Um ano mais tarde, um empregado de uma padaria pediu a um colega que doasse sangue em seu lugar. Sabendo disso, por intermdio de um informante que trabalhava no mesmo estabelecimento, a polcia procurou e prendeu o homem que no queria doar sangue. Este, posteriormente, confessou a autoria dos crimes, e sua ligao com as evidncias coletadas nas vtimas foi confirmada pelos exames de DNA (CHEMELLO, 2007). A tcnica de identificao pelo cido desoxirribonuclico (DNA) a partir de ento se disseminou por todo o mundo, chegando ao Brasil na segunda metade da dcada de 80 pelo Prof. Alec Jeffreys que descreveu certas regies do genoma humano que apresentavam um padro nico para cada indivduo, podendo ser utilizadas como impresses digitais do DNA desse indivduo (JEFFREYS, 1985). A identificao humana por DNA fundamenta-se na individualizao biolgica que cada ser humano representa na exclusividade do seu perfil gentico e na igualdade e invariabilidade deste em todas as clulas do organismo ao longo da vida (PINHEIRO, 2004).

3.2

Marcadores Genticos de Interesse Forense As regies escolhidas para a anlise do DNA so aquelas que apresentam maior

variao individual e facilidade de estudo. Essas regies so denominadas de marcadores genticos ou moleculares.

Os marcadores moleculares podem ser utilizados para caracterizar o DNA de um indivduo em um padro ou perfil de fragmentos que lhe particular. Neste caso, so utilizados marcadores polimrficos, cujos alelos so definidos como variaes na sequncia gentica que ocorrem na populao com uma frequncia igual ou superior a 1% (SHASTRY, 2002). O mtodo mais utilizado nos dias de hoje o estudo de regies repetitivas de DNA, chamadas de Minissatlites (VNTRs) e Microssatlites (STRs) que podem ser detectados pelo mtodo de STR (Short Tandem Repeats) por meio de PCR, como vem sendo feito em maior escala ultimamente (PENA, 2005). De uma maneira geral, aceito internacionalmente que os testes de DNA mais informativos em investigaes de individualidade humana sejam os que analisam os minissatlites individualmente, com reagentes ou sondas sintticas especficas para cada loco, marcadas com substncias que possa identificar o alelo presente (JOBIM et al, 2006). Alm destes, h tambm os Polimorfismos de Substituio de Nucleotdeos nicos SNPs (Single Nucleotide Polymorphism) e ainda os polimorfismos de insero ou deleo de um ou mais nucleotdeos (Ins/Del). Ambos polimorfismos apresentam a grande vantagem de que podem ser estudados em produtos de amplificao muito curtos (50 pb ou menos) e, assim, apresentam distintas vantagens sobre os microssatlites no estudo de DNA extremamente degradado (PENA, 2005). Esses polimorfismos foram detectados por tcnicas que possuam como base a eletroforese cujos fundamentos permitiram o desenvolvimento de novas tcnicas.

3.3

Tcnicas Moleculares Utilizadas na Identificao Humana

3.3.1 Eletroforese

A eletroforese uma tcnica bioqumica verstil, relativamente simples, rpida e de grande poder informativo. A partir da ampla variedade de estratgias de separao de protenas disponvel, a eletroforese tornou-se o primeiro princpio explorado para separao de fragmentos de DNA e RNA (VIEIRA, 2006).

Estas molculas migram em suportes (gis de agarose ou acrilamida) por ao de uma corrente eltrica, com diferentes velocidades, dependendo do seu tamanho e forma. Quando submetidas a um campo eltrico, as molculas de DNA migram para o plo positivo, pois so carregadas negativamente, e como fora oposta a migrao existe o atrito com o suporte (gel). Quanto maior a molcula, maior o atrito e mais lenta a migrao (ZAHA et al, 2003). Portanto, molculas de tamanhos diferentes tero migrado uma distncia diferente depois de algum tempo. A distncia que o fragmento percorreu a partir do ponto de aplicao comparada com a distncia que outros fragmentos de tamanhos conhecidos percorreram no mesmo gel (VIEIRA, 2006). O DNA pode ser visualizado na presena de compostos intercalantes, sendo que o mais utilizado o brometo de etdio.

3.3.2 Reao em Cadeia de Polimerase (PCR)

O PCR (Polymorphism Chain Reaction) um mtodo extremamente eficiente na avaliao de individualidade humana (JOBIM et al, 2006). Essa metodologia revolucionria, baseada em uma reao de replicao in vitro, consiste em uma reao de polimerizao em cadeia, na qual se obtm cpias de um fragmento especfico de DNA por meio de sua duplicao em modo exponencial (JOBIM et al, 2006). O princpio do PCR envolve trs etapas bsicas, requeridas na reao de sntese de qualquer fragmento de DNA que so repetidas por vrias vezes, em ciclos. Na primeira fase ocorre a desnaturao trmica do DNA molde; na segunda, h o anelamento de primers a cada uma das fitas do DNA molde; e na terceira fase ocorre a polimerizao das novas fitas de DNA a partir de cada primer (FERREIRA; GRATTAPAGLIA, 1998). Para fins de identificao humana, os STR mais importantes so aqueles com maior nmero de alelos (polimorfismo), menor tamanho (entre 100 e 200 pares de base) e maior frequncia de heterozigotos (JOBIM et al, 2006).

3.3.3 Sourthern Blotting

Esta tcnica baseia-se na hibridao entre molculas de DNA, fixas em um suporte, com sondas, molculas de DNA ou RNA, marcadas, visando localizao de sequncias especficas de DNA (VOET et al., 2002). Primeiramente, realizada uma eletroforese com o DNA genmico total, geralmente aps a clivagem com uma ou mais enzimas de restrio. Aps a eletroforese do DNA fita dupla, o gel embebido em NaOH para converter o DNA a sua forma de fita simples. O gel ento recoberto por uma folha de nitrocelulose (FERREIRA; GRATTAPAGLIA, 1998). As molculas no gel so foradas a deslocarem-se para a nitrocelulose por capilaridade que retira o lquido usando uma pilha de papel absorvente pelo outro lado da nitrocelulose. O DNA de fita simples liga-se a esta membrana na mesma posio em que estava no gel. Este procedimento consiste numa reao de hibridao, em condies qumicas e de temperatura que asseguram que a sonda hibridize apenas com o fragmento complementar (VOET et al., 2002). A sonda consiste em uma seqncia de DNA conhecida, que pode incluir uma parte de um gene de interesse para alguma patologia ou, simplesmente, uma regio polimrfica se a inteno for somente a discriminao entre indivduos (ZAHA et al., 2003). Outra caracterstica desta sonda o fato de a molcula de DNA fita simples estar ligada a um istopo radioativo. A nitrocelulose umedecida mantida em uma temperatura adequada por algumas horas para permitir a renaturao, isto , a hibridizao da sonda s seqncias alvo (VOET et al., 2002). A membrana lavada para remover a sonda radioativa no-ligada, secada, e feita uma autoradiografia pela exposio a um filme de raio X. A posio das molculas complementares a sonda radioativa indicada pelo surgimento de manchas escuras no filme revelado (VOET et al., 2002). A tcnica de Southern Blotting pode ser utilizada na identificao de polimorfismos que determinam a alterao do padro de clivagem, devido mutaes pontuais em stios de restrio, obtidos a partir de uma determinada regio do DNA. Esses diferentes padres so detectados utilizando-se a prpria regio potencialmente polimrfica como sonda ((ZAHA et al., 2003). Padres de RFLP obtidos com uma determinada sonda, usualmente de uma regio de DNA repetitivo, podem ser utilizados no estabelecimento de uma impresso digital de DNA, que permite a diferenciao entre dois indivduos quaisquer (ZAHA et al., 2003).

3.3.4 O DNA Mitocondrial na Identificao Humana

Diferente do DNA nuclear que forma longas fitas, constitudas cada uma por dupla hlice e que codificam aproximadamente 100.000 genes, o DNA mitocondrial (mtDNA) representa de 1 a 2% do DNA celular, em duplo filamento circular, codificando 37 genes. Ele codifica aproximadamente 10% das protenas constitutivas das mitocndrias, como conseqncia, para um bom funcionamento destas, necessria uma boa cooperao entre o DNA nuclear e o DNA mitocondrial (THOMPSON et al., 1993). So os genes, de origem mitocondrial, que carregam a herana exclusivamente materna (THOMPSON et al., 1993). O mtDNA um marcador gentico de interesse em investigaes criminais tanto por estar presente em cinco mil cpias dentro de uma nica clula, mas tambm por possuir uma resistncia degradao de digesto enzimtica devida a sua estrutura ser circular conferindo maior estabilidade molcula. Este DNA j est completamente seqenciado, e a regio que possui variaes de sequncia chamada de regio controle (JOBIM et al, 2006). Assim, em grandes desastres como incndios, exploses, queda de avies, em que mais difcil a identificao dos corpos, utiliza-se o mtDNA para comparao com as seqncias de possveis familiares maternos (JARRETA, 1999). Devido sua grande variabilidade, a regio controle a que normalmente se analisa. Mede aproximadamente 1.100 pares de base e se subdivide em duas regies maiores: a regio hipervarivel I (HVI), que compreende as posies 16.024 16.035, e as regies hipervariveis II (HVII) e III (HVIII), que compreendem as posies 73 a 340 (CANN, et al., 1987). A metodologia utilizada na anlise do DNA mitocondrial a amplificao da regio controle do mtDNA pelo PCR, seguida de seqenciamento automtico dessas regies (JOBIM et al., 2006). As anlises so realizadas por meio da comparao do polimorfismo encontrado nas regies HVI e HVII com aqueles encontrados na linhagem materna,ou a partir de um banco de dados evolucionrio, biolgico ou antropolgico da populao, quando se deseja enquadrar um suspeito em algum grupo tnico, uma vez que cada populao de origem distinta possui um conjunto especfico de SNPs nesta regio (KASHYAP et al.,2004).

Por meio do conhecimento adquirido sobre a estrutura do mtDNA, o estudo da evoluo humana experimentou enormes avanos, tendo em vista a possibilidade de se analisar com xito, restos humanos antigos, como tecido cerebral de 7.000 anos de idade e ossos de at 5.500 anos (VIGILANT et al, 1991). Como exemplo de estudos de evoluo, a anlise das variaes do mtDNA permitiu a reconstruo de eventos migratrios de mulheres ancestrais e a conseqente diviso de hapltipos, tendo sido proposto que a espcie humana surgiu na frica a aproximadamente 150.000 anos (VIGILANT et al, 1991). Na anlise forense, o caso Pitchfork, na Inglaterra, foi o primeiro em que se empregou a tipagem gentica para relacionar crimes em srie e identificar criminosos, alm de provar a inocncia de suspeitos. Desde ento, as tcnicas de genotipagem passaram a ser disseminadas por todos os continentes (FIGUEIREDO; PARADELA, 2006).

3.3.5 O Cromossomo Y na Identificao Humana O cromossomo Y est presente no DNA nuclear e devido falta de um cromossomo homlogo, no existe recombinao durante a meiose. Sendo assim, s identificamos alelos de origem masculina, herdados em bloco dos antepassados masculinos (KASHIAP et al., 2004). Estudos apontam um baixo ndice de mutao, podendo os mesmos hapltipos serem encontrados em vrias geraes de homens, alcanando talvez centenas de anos. Os STRs do cromossomo Y permitem reconhecer a excluso de paternidade quando o possvel pai falecido, analisando-se o pretenso filho e homens aparentados com o suposto pai (KASHIAP et al., 2004). Em casos de estupro, tambm possvel a anlise desses marcadores presentes nos espermatozides da secreo vaginal da vtima, sem que o seu DNA possa ser confundido, pois somente o do agressor estar sendo identificado (JOBIM et al, 2006).

3.3.6 Sequenciamento de DNA e a Bioinformtica

Para identificar a seqncia de uma molcula de DNA necessrio adicionar a essa reao altas concentraes de nucleotdeos que interrompam a polimerizao da cadeia, que

so denominados didesoxinucleotdeo (ddNTP). So nucleotdeos em que a pentose perdeu o grupo hidroxila da posio 3 (OH) necessria continuidade da polimerizao da cadeia (CARRARO; KITAJIMA, 2002). Durante os ciclos de polimerizao, os ddNTPs vo sendo incorporados aleatoriamente, produzindo fragmentos de tamanhos diferentes. A mistura de fragmentos submetida a uma eletroforese para separao por tamanho. Os diferentes ddNTPs apresentam marcas passveis de reconhecimento (CARRARO; KITAJIMA, 2002). Em seqenciadores automticos, os diferentes ddNTPs so ligados a molculas fluorescentes denominadas cromforos, que quando estimuladas por raio laser, emitem diferentes comprimentos de ondas, sendo reconhecidas por programas apropriados e convertidas a determinada base nitrogenada (A, T, G ou C) (WEBER; MYERS, 1997). Com a automatizao da tcnica de seqenciamento e com o advento da Bioinformtica foi possvel automatizar a fase de gerao de seqncias, produzindo-as em larga escala e digitalizando-as para o computador. Programas apropriados, capazes de processar os dados, montar e anotar os genomas, foram desenvolvidos para facilitar o acesso e a disponibilizao de todas as informaes durante o processo (CARRARO; KITAJIMA, 2002). A Bioinformtica trouxe avanos significativos no que tange disponibilizao de novos softwares adequados para a manipulao de uma vasta quantidade de dados genmicos. O pipeline de tratamento de dados de genomas pode ser organizado como um sistema. As entradas mais importantes so as leituras (reads) do seqenciador de DNA (SANTOS; ORTEGA, 2002). Concretamente, essas leituras so arquivos que contm informaes analgicas, que caracterizam as diferentes bases lidas pelo equipamento seqenciador. importante ressaltar que esses arquivos no contm as bases explicitamente e, sim, medidas analgicas. Ser necessrio um primeiro programa, fundamental no pipeline, para converter estas medidas em bases ACGT propriamente ditas (WEBER; MYERS, 1997). Um programa bastante utilizado o PHRED [PhredPhrap]. Este programa pode ser encarado como um digitalizador de leituras de DNA. Utilizam-se algoritmos complexos de tratamento de sinais e atribui o que chamamos de qualidade da base (SANTOS; ORTEGA, 2002) .

3.3.7 Cadeia de Custdia e Preservao de Vestgios Biolgicos

Para fins judiciais e para manter a integridade das provas, os vestgios de um crime devem preencher os requisitos legais e cientficos para serem admitidos num tribunal. Todos os procedimentos relacionados evidncia, desde a coleta, o manuseio e anlise, sem os devidos cuidados e sem a observao de condies mnimas de segurana, podem acarretar na falta de integridade da prova, provocando danos irrecuperveis no material biolgico coletado, comprometendo a idoneidade do processo (LEE; LAAD, 2001). Todas as amostras so recebidas como evidncias, as quais sero analisadas e o seu resultado, apresentado na forma de laudo que ser utilizado no processo judicial. Estas devem ser manuseadas de forma cautelosa, para evitar futuras alegaes de adulterao ou m conduta que possam comprometer as decises relacionadas ao caso em questo. Nesta situao, a cadeia de custdia permite ao perito garantir e provar a integridade do processo ao qual a amostra foi submetida (LOPES et al,. 2006). Os laudos periciais de anlise de DNA devem conter a descrio minuciosa de o que foi examinado, citar a metodologia empregada na coleta e armazenamento de materiais e, se necessrio, esclarecimento dos cuidados empreendidos para manuteno da cadeia de custdia destes materiais. Para complementar, os laudos devem conter, ainda, informaes bibliogrficas sobre as metodologias utilizadas para a extrao, quantificao e amplificao do DNA, forma de identificao dos alelos obtidos nos testes e fundamentos empregados para os clculos estatsticos. As freqncias estatsticas utilizadas como base para os clculos tambm devem ser mencionadas (MORETE, 2009).

CONCLUSO

Considerando que o estudo de DNA obtido de vestgios biolgicos uma ferramenta de grande importncia nas percias criminais, o DNA est sendo utilizado como um instrumento de identificao no combate criminalidade e impunidade, uma vez que geram

provas materiais, na grande maioria das vezes, evidentes, possibilitando a identificao ou eliminao de suspeitos por meio de amostras de uma cena do crime. Em estudos de identificao, como em crimes sexuais, pessoas desaparecidas e estudos de paternidade, possvel relacionar os restos mortais de uma pessoa e seus familiares, utilizando para isso o DNA nuclear, o Cromossomo Y ou o DNA mitocondrial. Logo, estes podem ser encontrados em fludos corpreos e tecidos biolgicos por meio de tcnicas biomoleculares e marcadores genticos que possuem alta capacidade de caracterizar o perfil gentico de cada indivduo. Este processo tornou possvel exonerar suspeitos logo no incio da investigao sendo uma forma de economizar recursos para a justia, alm da capacidade de armazenar o perfil de DNA em bancos de dados informatizados e cruzar informaes, facilitando deste modo a identificao de criminosos em srie. No entanto, os procedimentos para coleta e manipulao dos vestgios biolgicos durante o processo da cadeia de custdia devem ser padronizados, evitando a contaminao das evidncias criminais, pois a integridade das amostras determinante para a validade das anlises. Portanto, a aplicao de tcnicas de engenharia gentica para as anlises de DNA um progresso para a justia criminal, uma vez que a aplicao apropriada das tcnicas biomoleculares nos testes de DNA est se tornando uma ferramenta indispensvel na investigao criminal, pois os resultados de identificao gentica pelo DNA j so rotineiramente aceitos em processos judiciais em todo o mundo.

REFERNCIAS

ALBUQUERQUE, T. K. Identificao humana atravs de marcadores moleculares. Caderno La Salle XI, Canoas, v. 2, n. 1, p. 265 - 270, 2004. BENECKE, M. Coding or non-coding, that is the question. EMBO reports, v. 3, n. 6, p. 498 - 502, 2002.

CANN, R.L.; STONEKING, M. WILSON, A.C. Mitichondrial DNA and Human Evolution. Nature. 325 p. 31-36.1987. CARRARO, D. M.; KITAJIMA, J. P. Sequenciamento e Bioinformtica de Genomas Bacteriano. In: Revista Biotecnologia Cincia & Desenvolvimento N 28, p. 16-20. 2002.

CHEMELLO, E. Cincia Forense: Exame de AND. Revista Qumica Virtual. Edio Maro, 2007.

FERREIRA, M. E.; GRATTAPAGLIA, D. Introduo ao uso de marcadores moleculares em anlise gentica. 3.ed. Braslia: EMBRAPA-CENARGEN,1998.

FIGUEIREDO, A.; PARADELA, E. Pode a prova de DNA induzir um veredito? 2006. Disponvel em <http://www.amb.com.br/?secao=artigo_detalhe&art_id=254> . Acesso em 07 Jun. 2010.

JARRETA, M.B.M. La puebra Del ADN em Medicina Forense. Masson. 1999.

JEFFREYS A. J., BROOKFIELD J.F.Y., SEMEONOFF R. Positive identification of an immigration test-case using human DNA fingerprints. Nature, v. 317, p.818-19, 1985.

JOBIM, L. Identificao Humana pelo DNA in: Identificao Humana. Volume 2. Milenium, 2006.

KASHYAP, V.K.; SITALAXIMI T.; CHATTOPADHYAY P.; TRIVEDI R. Dna Profiling Technologies in Forensic Analysis. Int. J. Hum. Genet, v. 4, n. 1, p 11 - 30, 2004.

LEE, H.C.; LADD, C. Preservation and Collection of Biological Evidence. Croatian Medical Journal. v. 42, n. 3, p. 225 - 228, 2001.

LOPES, M.; GABRIEL, M.M.; BARETA, G.M.S. Cadeia de Custdia: Uma Abordagem Preliminar. Universidade Federal do Paran. 2006. Disponvel em: <http://ojs.c3sl.ufpr.br/ojs2/index.php/academica/article/viewFile/9022/6315> Acesso em: 10 mar.2010.

MALAGHINI, M.; ALONSO, C.A.M.; DALLSTELLA, R.; SCHNEIDER, V.J. Anlises de Material Gentico na Investigao Criminal Um relato sobre a evoluo dos processos de padronizao. Revista Laes & Haes. Edio 125. 2000.

MATTE, C.H, F. et al. A utilizao da anlise de DNA em desastres em massa: participao brasileira na identificao dos corpos do incndio no Paraguai. Instituto Geral de Percias. Revista do IPG, R.S, ano 3, janeiro 2007.

MORETE, T. Identificao Humana: Uma proposta metodolgica para obteno de DNA de ossos e implementao de banco de dados de frequncias allicas de STRs autossmicos na populao de Santa Catarina. Dissertao de Mestrado. UFSC. 2009.

PENA, S. D. J. Segurana Pblica: determinao de identidade gentica pelo DNA. In: Seminrios Temticos para a 3 Conferncia Nacional de Cincia, Tecnologia e Inovao. Parcerias Estratgicas, v. 20, p. 447 - 460, 2005.

PINHEIRO, M.F. Gentica e biologia forense, e criminalstica. In: Faculdade de Medicina da Universidade do Porto. In: Noes Gerais sobre outras cincias forenses. MEDICINA LEGAL, 57p.2004.

SANTOS, F.R.; ORTEGA, J. M. Bioinformtica Aplicada Genmica. UFMG - Biowork IV. 2002.

SHASTRY, B. S. SNP alleles in human disease and evolution. Journal of Human Genetics, v. 47, p. 561-566, 2002. SILVA, L. A. F.; PASSOS, N. S. DNA Forense Coleta de Amostras Biolgicas em Locais de Crime para Estudo do DNA. Macei: UFAL, 84p.2006.

THOMPSON, M. W.; McINNES, R. R.; WILLARD, H. F. Thompson & Thompson. Gentica Mdica. 5.ed. Rio de Janeiro: Guanabara Koogan 339p.1993.

VIGILANT, L.; STONEKING, M.; HARPENDING, H.; HAWKES, K.; WILSON, A.C. African populations and the evolution of mitochondrial DNA. Science. 253 p. 1503-1507. 1991.

VIEIRA, D. P. Tcnicas de PCR: Aplicaes e Padronizao de Reaes. Disponvel em: <http://www.etall.hpg.ig.com.br> Acesso em: 01 mai. 2010.

VOET, D.; VOET, J.; PRATT, C. W. Fundamentos de Bioqumica. Porto Alegre: Artmed 931p.2002.

WALLACE, D.C.; BROWN, M.D.; LOTT, M.T. Mitochondrial DNA variation in human evolution and disease. Gene 238. p. 211-230. 1999.

WEBER, J. L., MYERS, E. W. Human whole-genome shotgun sequencing. Genome Research p. 401-409.1997.

ZAHA, A.; SCHRANK, A.; LORETO, . S.; FERREIRA.; HENRIQUE B.; SCHRANK, Irene S. Biologia Molecular Bsica. 3.ed. Porto Alegre: Mercado Aberto 421p.2003.