UNIVERSIDADE FEDERAL DE SO CARLOS

Laboratrio de Bioqumica e Biologia Molecular Roteiro N 1 Titulao Potenciomtrica de Aminocidos.

Grupo 3 rica L. Maral 404403 Guilherme K. Zanini 404535 Guilherme N. Giusti 404262 Jssica H. Bonomo 404454 Marcos P. Santos 404560 Rafael A. L. Franco 404551

So Carlos 2012

INTRODUO ................................................................................................................................ 1 OBJETIVOS ..................................................................................................................................... 5 METODOLOGIA.............................................................................................................................. 5 Materiais ................................................................................................................................... 5 Determinao do pka de um cido fraco .............................................................................. 5 Titulao potenciomtrica de aminocidos .......................................................................... 5 Mtodos .................................................................................................................................... 6 Determinao do pka de um cido fraco .............................................................................. 6 Titulao potenciomtrica de aminocidos .......................................................................... 7 RESULTADOS E DISCUSSO ........................................................................................................... 8 Procedimento 1 : determinao do pKa de um cido fraco. .................................................... 8 Procedimento 2 : titulaes de aminocidos ............................................................................ 8 CONCLUSO ................................................................................................................................ 16 REFERNCIAS ............................................................................................................................... 16

INTRODUO
As protenas so macromolculas com inmeras funes nos

organismos vivos, tanto estrutural como funcional. Elas so formadas por pequenas unidades chamadas de aminocidos, cuja caracterstica individual influencia nas propriedades das mesmas. Eles so constitudos de um grupamento amina, de um grupamento carboxila e de uma cadeia lateral, que especfica para cada um dos 20 aminocidos. Tais unidades so ligadas pela peptidil aminoacil tranferase, cujo produto uma ligao sem mobilidade formando um grupamento amida. A ligao ocorre pela remoo dos elementos constituintes da gua de um grupo alfa carboxila e de um grupo alfa amino de dois aminocidos, caracterizando-se em uma reao de condensao. Os polipeptdeos, para desempenharem suas funes biolgicas, devem tomar conformaes especficas, provenientes das interaes entre os resduos de aminocidos com o meio e com eles mesmos, ou seja, sua sequncia fundamental para o correto enovelamento proteico. Tem-se, portanto, que a cadeia lateral dos aminocidos desempenha um papel primordial para que as protenas cumpram suas funes. Os aminocidos so divididos em grupos que levam em considerao sua cadeia lateral. So eles: No polares e alifticos, apolares aromticos, polares no carregados, polares carregados negativamente (cidos), polares carregados positivamente (bsicos). Estes grupamentos so ligados ao

carbono alfa, que realiza suas quatro ligaes com o grupamento amina, carboxila, cadeia lateral e hidrognio, configurando-se como um centro quiral. Sendo assim, observa-se estereoismeros na conformao L, no s nos polipeptdeos, mas em quase todos os compostos biolgicos quirais. Para que o organismo mantenha suas funes biolgicas devidamente ajustadas, o meio em que elas ocorrem deve estar adequado. O potencial hidrogeninico, ou pH, um fator que influencia diretamente no seu bom funcionamento, pois este determina as condies que as protenas estaro,

cataliticamente ativas ou conformacionalmente corretas. pHs inadequados podem levar a desnaturao proteica e a consequente perda de atividade. O termo pH indica a quantidade, mediante a uma escala logartmica, de ons hidrognio na soluo em estudo. Ele definido como sendo o co-logaritmo da concentrao de H+ e nos permite saber tambm a concentrao de OH -. Seu valor neutro igual a 7, considerando concentraes iguais de H+ e OH- , baseado no produto inico da gua, variando at 14, configurando um meio bsico, e at 1, configurando um meio cido. Sua aferio pode ser feita atravs de corantes como a fenolftalena, que muda sua colorao atravs da perda de prtons, mas existem maneiras mais precisas e eficientes para fazlo, como os pHmetros. Estes equipamentos possuem um eletrodo de vidro sensvel a ons de hidrognio, que, ao se associarem ao mesmo, emitem um sinal eltrico, comparado com o sinal enviado de uma soluo com o pH precisamente conhecido, ento o equipamento amplifica estes pulsos e os transforma em valores. Devido a isso, importante que o pHmetro esteja calibrado corretamente dentro da faixa de pH que ser utilizado, pois os valores so obtidos basicamente por comparao. As protenas so sintetizadas no citosol celular e depois seguem para seus respectivos locais de ao. Observa-se que desde o incio elas esto imersas em solues, sejam citosolicas ou no. Isso quer dizer que esto constantemente sob ao da concentrao de ons hidrognio e como so essenciais para a sobrevivncia do organismo, mtodos foram desenvolvidos para que os danos aos polipeptdeos pudessem diminuir caso a concentrao de H+ mudasse de forma prejudicial. Sobretudo, as enzimas possuem condies timas de funcionamento, ento o pH no a nica varivel importante para evitar a desnaturao, mas tambm necessrio um ambiente favorvel atividade enzimtica. Tudo isso garantido baseado no equilbrio entre a concentrao de um cido fraco e sua base conjugada. A definio de cido e base aqui utilizada a desenvolvida por Bronsted Lowri, na qual os compostos capazes de doar prtons so os cidos, e os capazes de receb-los so as bases. Assim sendo, um sistema tampo aquele capaz de minimizar as mudanas de pH caso pequenas quantidades de H+ e OH- sejam adicionadas. Um tampo , portanto, constitudo por um cido

fraco e sua base conjugada, e a reao de converso entre esses dois compostos reversvel. Quando as concentraes de cido e base forem iguais, ento teremos o mximo poder tamponante, pois caso seja colocado ons de hidrognio ou hidroxila, estes reagiro com seu respectivo composto no ficando no meio ocasionando alteraes no pH. Cada par cido-base conjugada possui uma regio de pH onde h o tamponamento. Um experimento para evidenciar as regies tamponantes a titulao cido-base, na qual adicionado o devido on (H+ ou OH- ) a uma soluo contendo o equilbrio cido- base. Seu grfico caracterstico e a regio tamponante evidenciada pelo plat formado. O plat se encontra na regio de pH numericamente igual ao pKa do cido (constante de dissociao cida). Percebe-se que estas curvas se comportam de modo igual, e podem ser descritas por uma relao matemtica desenvolvida por Henderson e Hasselbach, que calcula o ph fazendo uso do pk respectivo e das concentraes de cido e base conjugado. Nos seres humanos, fluidos como o sangue fazem uso das propriedades de atenuao da variao de pH de certos pares cido e base conjugada. Os principais tampes biolgicos so o fosfato, bicarbonato e as prprias protenas. Os aminocidos tambm se comportam como cidos e bases e consequentemente podem configurar regies tamponantes. Um aminocido monoamnico e monocarboxilico cuja cadeia lateral no apresente

grupamentos ionizveis, possui duas regies nas quais a variao do pH amenizada caso adicione-se pequenas quantidades de cido ou base. Isto acontece, pois os grupos carboxila e amina, quando protonados, so capazes de perder esses prtons configurando um equilbrio acido e base conjugada. Essa desprotonao ocorre em diferentes faixas de pH para cada aminocido, e na regio do plat tem-se que o pKa igual ao pH. Isto significa que h um valor limite de pH o qual abaixo dele o grupo funcional no perde seu prton, levando ento diversidade de regies tamponantes pelos diferentes aminocidos. Alm disso, a forma com carga total nula, ou seja, o grupamento carboxila desprotonado (carga negativa) e o grupamento amina protonado (carga positiva), chamada de Zwitterion e evidenciada pelo ponto de inflexo entre os dois plats do grfico de titulao. Trata-se de um anftero e

comporta-se tanto como base quanto como cido e no exerce qualquer tipo de tamponao, esta s ocorre no plat referente s dissociaes (valor do pKa do respectivo grupamento 1). O pH nesta inflexo central chamado de pI ou ponto isoeltrico, ou seja, o pH necessrio para tornar o aminocido com carga lquida nula. Sendo ele definido matematicamente pela mdia aritmtica dos pKas dos quais ele est entre. Existem tambm aminocidos cuja cadeia lateral pode se ionizar, e o grfico de titulao destes aminocidos deixa de se assemelhar com o da glicina como no caso dos monoaminicos e monocarboxilicos, e possuem um terceiro plat tamponante referente a ionizao deste grupamento presente na cadeia lateral do aminocido. Isto implica tambm em um novo valor de pKa e na mudana do pI. Esta mudana no pI utilizada para a identificao do tipo de grupo ionizvel presente na cadeia lateral. Se este for uma carboxila, o pI ser mais baixo pois seu pKa mais baixo, ou seja, mais facilmente ionizvel. O nico aminocido com capacidade tamponante prximo a neutralidade a histidina que possui no seu grupamento R o imidazol com pKa aproximadamente igual a 6, e seguindo a regra de que a regio tamponante aquela na qual o pH igual a 1 do pKa, tem-se que ela tampona desde o pH 5 at o pH 7. A solubilidade de uma molcula depende da interao entre os grupos polares dos aminocidos, ou de cadeias laterais, quando estas so polares, com as molculas de gua atravs de pontes de hidrognio. Vrios fatores podem modificar a ionizao destes grupos e, logo, a interao da molcula com o meio. Concentraes de ons, altas temperatura, valores extremos de pH e exposio a raios UV alteram as interaes dos grupos reativos entre si e com o meio, diminuindo-as e podendo precipitar aminocidos e protenas. Pode-se dizer ento que a presena de cargas ao longo da molcula um dos principais fatores que afetam a solubilidade das mesmas, logo deduz-se que no ponto isoeltrico, no qual as cargas positivas e negativas esto em equilbrio, a solubilidade da molcula mnima, pois as foras de repulso das molculas e

a fora de interao com o meio ficam muito fracas e com isso o composto tende-se a precipitar.

OBJETIVOS
A atividade realizada foi dividida em dois procedimentos: Procedimento 1 : determinao do pKa de um cido fraco No primeiro o objetivo era encontrar o pKa do tampo cido actico/acetato em diferentes volumes de ambos os reagentes em cada uma das cinco solues preparadas utilizando a equao de HandersonHasselbalch, com as concentraes do cido e da base conjugada previamente calculadas. Procedimento 2 : titulaes de aminocidos Para o segundo procedimento pretendia-se titular quatro aminocidos: um neutro (glicina), um carregado positivamente (histidina), um carregado negativamente (glutamato) e um desconhecido; e obter seus grficos, nos quais possvel observar seus pKs e pontos isomtricos.

METODOLOGIA

Materiais
Determinao do pka de um cido fraco Soluo de acetato de sdio (0,1 mol/L) Soluo de cido actico (0,1 mol/L) pHmetro 5 Flcon 50ml 2 provetas de 10ml

Titulao potenciomtrica de aminocidos

Soluo de Glicina (0,1 mol/L) Soluo de Histidina (0,1 mol/L) Soluo de cido Glutmico (0,1mol/L) Soluo de aminocido desconhecido (0,1 mol/L) Soluo de NaOH (0,5 mol/L) 3 Bqueres de 150 ml 3 provetas de 100 ml Phmetro Agitador magntico Barra magntica Bureta de 25 ml

Mtodos
Determinao do pka de um cido fraco As solues de acetato de sdio e cido actico foram adicionadas em cada um dos flcons de forma a obter volumes de 20ml de soluo final, conforme valores na tabela abaixo.Para tal procedimento, as provetas foram utilizadas como aparelhos de medio.

cido Flcon actico (ml) 1 2 3 4 5 4 8 10 12 16

Acetato de Sdio (ml) 16 12 10 8 4

Tabela 1 Volumes do cido fraco

O prximo passo consistiu na medio dos Phs das solues preparadas, sendo o pHmetro devidamente limpo antes de cada medio. Posteriormente, foram realizados os clculos (anexo1) referentes s concentraes de acetato de sdio e cido actico em cada soluo de 20ml presente nos flcons, bem como os referentes ao pka do composto. Esses ltimos clculos foram efetuados utilizando-se a equao de HandersonHasselbalch.

Titulao potenciomtrica de aminocidos As solues de aminocidos, em volume de 50ml, foram retiradas de bqueres (presentes sobre a bancada) com auxlio de provetas, sendo colocadas, individualmente, em bqueres de 150 ml. Posteriormente, foi realizada a calibrao da bureta, com a soluo de NaOH 0,5 mol/L. A barra magntica foi posta no bquer, contendo a soluo do aminocido a ser titulado, sendo este submetido a agitao. Na mesma soluo, introduziu-se os eletrodos do Phmetro, para incio da leitura dos Phs. A primeira medio foi realizada sem a presena de NaOH, sendo as demais realizadas a cada adio de 0,5ml do hidrxido de sdio. A titulao prosseguiu at que o pH da soluo dos aminocidos atingisse o valor aproximado 12, salvo a do aminocido desconhecido, cujo valor chegou a cerca de 13. Por ltimo, os dados obtidos foram utilizados para confeco de grficos (anexo 2), com o intuito de analisar se as curvas de titulao desses aminocidos, bem como seus respectivos pkas e regies tamponantes; alm da identificao do aminocido desconhecido. As titulaes foram referentes aos aminocidos: cido glutmico, aminocido desconhecido e histidina, sendo realizados os mesmos passos para todos. Os dados presentes neste relatrio referentes titulao da glicina foram obtidos de outrem.

RESULTADOS E DISCUSSO
Procedimento 1 : determinao do pKa de um cido fraco.
Calculadas as concentraes de acetato e cido actico nas solues, aferidos os pHs das mesmas e calculando seus pKas, obtivemos a tabela abaixo: Falcon 1 2 3 4 5 [Acetato] mol/L 8 x 10-2 6 x 10-2 4 x 10-2 5 x 10-2 2 x 10-2 [cido Actico]mol/L 2 x 10-2 4 x 10-2 5 x 10-2 6 x 10-2 8 x 10-2 pH 5,24 4,85 4,66 4,51 4,09 pKa calculado 4,64 4,67 4,66 4,69 4,69
Tabela 2 - Reao tampo

Os pKas encontrados tiveram valores prximos entre si e semelhante ao j conhecido para o tampo cido actico/acetato (4,76), o que era esperado. Apesar do pKa de um tampo no se alterar, obtivemos esses resultados com leves divergncias por conta de escolha de protocolo. Utilizamos, para medir os volumes dos reagentes, materiais que podem abrir maior margem para erro de medida. Alm disso, um maior N amostral apresentaria melhor preciso.

Procedimento 2 : titulaes de aminocidos

Atravs das titulaes j descritas obtivemos dados suficientes para construo dos grficos relativos aos aminocidos. Os dados so apresentados nas tabelas a seguir:

Glicina
NaOH (ml) 0 pH 1,13 NaOH (ml) 6,5 pH 1,38 NaOH (ml) 13 pH 1,86 NaOH (ml) 19,5 pH 3,03 NaOH (ml) 26 pH 10,18

0,5 1 1,5 2 2,5 3 3,5 4 4,5 5 5,5 6

1,14 1,15 1,17 1,19 1,2 1,22 1,25 1,27 1,29 1,31 1,33 1,36

7 7,5 8 8,5 9 9,5 10 10,5 11 11,5 12 12,5

1,4 1,43 1,46 1,49 1,52 1,56 1,59 1,63 1,67 1,71 1,76 1,81

13,5 14 14,5 15 15,5 16 16,5 17 17,5 18 18,5 19

1,92 1,99 2,06 2,13 2,21 2,29 2,39 2,47 2,57 2,67 2,77 2,88

20 3,17 26,5 20,5 3,36 27 21 3,64 27,5 21,5 4,53 28 22 8,6 28,5 22,5 9,02 29 23 9,3 29,5 23,5 9,5 30 24 9,65 24,5 9,8 25 9,92 25,5 10,04 Tabela 3 - Dados da Glicina

10,3 10,44 10,63 10,86 11,19 11,56 11,87 12,07

Histidina
NaOH (ml) 0 0,5 1 1,5 2 2,5 3 3,5 4 4,5 5 5,5 6 6,5 7 7,5 8 8,5 9 9,5 10 10,5 11 pH 0,8 0,8 0,8 0,81 0,83 0,84 0,85 0,87 0,88 0,9 0,92 0,94 0,96 0,98 1 1,02 1,04 1,06 1,09 1,11 1,14 1,17 1,19 NaOH (ml) 11,5 12 12,5 13 13,5 14 14,5 15 15,5 16 16,5 17 17,5 18 18,5 19 19,5 20 20,5 21 21,5 22 22,5 pH 1,22 1,25 1,28 1,31 1,34 1,37 1,42 1,43 1,48 1,51 1,55 1,59 1,63 1,67 1,71 1,76 1,8 1,85 1,91 1,96 2,02 2,09 2,16 NaOH (ml) 23 23,5 24 24,5 25 25,5 26 26,5 27 27,5 28 28,5 29 29,5 30 30,5 31 31,5 32 32,5 33 33,5 34 pH 2,23 2,31 2,41 2,51 2,66 2,85 3,16 3,78 4,76 5,11 5,32 5,48 5,6 5,7 5,8 5,89 5,98 6,06 6,13 6,2 6,28 6,37 6,42 NaOH (ml) pH NaOH (ml) pH 9,46 9,53 9,6 9,68 9,75 9,77 9,93 10,03 10,14 10,31 10,44 10,69 10,93 11,29 11,51 11,72 11,84 11,96 12,04

34,5 6,49 46 35 6,58 46,5 35,5 6,67 47 36 6,76 47,5 36,5 6,87 48 37 6,99 48,5 37,5 7,13 49 38 7,32 49,5 38,5 7,56 50 39 7,86 50,5 39,5 8,1 51 40 8,31 51,5 40,5 8,49 52 41 8,62 52,5 41,5 8,74 53 42 8,84 53,5 42,5 8,93 54 43 9,01 54,5 43,5 9,09 55 44 9,16 44,5 9,24 45 9,32 45,5 9,38 Tabela 4 - Dados na Histidina

Glutamato
NaOH (ml) 0 0,5 1 1,5 2 2,5 3 3,5 4 4,5 5 5,5 6 6,5 7 7,5 8 8,5 9 9,5 10 pH 0,8 0,82 0,84 0,86 0,88 0,9 0,92 0,94 0,96 0,98 1,01 1,04 1,06 1,09 1,12 1,15 1,18 1,21 1,25 1,28 1,32 NaOH (ml) 10,5 11 11,5 12 12,5 13 13,5 14 14,5 15 15,5 16 16,5 17 17,5 18 18,5 19 19,5 20 20,5 pH 1,35 1,4 1,44 1,48 1,54 1,58 1,63 1,68 1,73 1,8 1,85 1,91 1,97 2,04 2,1 2,16 2,24 2,31 2,38 2,45 2,53 NaOH (ml) 21 21,5 22 22,5 23 23,5 24 24,5 25 25,5 26 26,5 27 27,5 28 28,5 29 29,5 30 30,5 31 pH 2,61 2,7 2,79 2,9 3,02 3,13 3,25 3,36 3,49 3,6 3,69 3,79 3,89 3,97 4,06 4,14 4,23 4,31 4,42 4,51 4,62 NaOH (ml) pH NaOH (ml) pH 10,03 10,11 10,2 10,3 10,4 10,52 10,67 10,87 11,12 11,4 11,62 11,8 11,93 12,03

31,5 4,74 42 32 4,89 42,5 32,5 5,06 43 33 5,28 43,5 33,5 5,62 44 34 6,22 44,5 34,5 7,87 45 35 8,39 45,5 35,5 8,73 46 36 8,95 46,5 36,5 9,14 47 37 9,2 47,5 37,5 9,3 48 38 9,39 48,5 38,5 9,49 39 9,56 39,5 9,64 40 9,71 40,5 9,79 41 9,87 41,5 9,95 Tabela 5 - Dados do Glutamato

Desconhecido
NaOH (ml) 0 0,5 1 1,5 2 2,5 3 3,5 4 4,5 5 5,5 6 6,5 pH 0,81 0,82 0,83 0,85 0,87 0,88 0,91 0,93 0,96 0,98 1,01 1,02 1,06 1,08 NaOH (ml) 20 20,5 21 21,5 22 22,5 23 23,5 24 24,5 25 25,5 26 26,5 pH 2,37 2,46 2,54 2,65 2,78 2,88 3,05 3,29 3,67 5,78 7,44 8,01 8,34 8,55 NaOH (ml) 40 40,5 41 41,5 42 42,5 43 43,5 44 44,5 45 45,5 46 46,5 pH 10,61 10,69 10,75 10,82 10,88 10,94 11,01 11,08 11,14 11,21 11,29 11,36 11,44 11,53 NaOH (ml) 60 60,5 61 61,5 62 62,5 63 63,5 64 64,5 65 65,5 66 66,5 pH 12,65 12,67 12,68 12,69 12,71 12,72 12,73 12,75 12,76 12,77 12,78 12,8 12,81 12,82 NaOH (ml) 80 80,5 81 81,5 82 82,5 83 83,5 84 84,5 85 85,5 86 86,5 pH 13,01 13,02 13,02 13,02 13,03 13,03 13,04 13,04 13,05 13,05 13,06 13,06 13,07 13,07

7 7,5 8 8,5 9 9,5 10 10,5 11 11,5 12 12,5 13 13,5 14 14,5 15 15,5 16 16,5 17 17,5 18 18,5 19 19,5

1,11 1,14 1,17 1,2 1,23 1,26 1,29 1,33 1,36 1,41 1,43 1,49 1,53 1,58 1,63 1,69 1,74 1,8 1,85 1,91 1,97 2,02 2,1 2,16 2,23 2,3

27 27,5 28 28,5 29 29,5 30 30,5 31 31,5 32 32,5 33 33,5 34 34,5 35 35,5 36 36,5 37 37,5 38 38,5 39 39,5

8,68 8,8 8,93 9,02 9,1 9,18 9,21 9,33 9,41 9,44 9,54 9,61 9,68 9,74 9,81 9,88 9,94 10,01 10,08 10,17 10,22 10,3 10,35 10,42 10,49 10,55

47 47,5 48 48,5 49 49,5 50 50,5 51 51,5 52 52,5 53 53,5 54 54,5 55 55,5 56 56,5 57 57,5 58 58,5 59 59,5

11,61 67 12,83 87 11,7 67,5 12,84 87,5 11,77 68 12,85 88 11,85 68,5 12,86 88,5 11,92 69 12,87 89 12 69,5 12,88 89,5 12,06 70 12,89 90 12,12 70,5 12,89 90,5 12,15 71 12,9 91 12,19 71,5 12,91 91,5 12,23 72 12,92 92 12,28 72,5 12,93 92,5 12,31 73 12,93 93 12,35 73,5 12,94 93,5 12,38 74 12,94 94 12,41 74,5 12,95 94,5 12,44 75 12,96 95 12,47 75,5 12,96 95,5 12,49 76 12,97 96 12,52 76,5 12,97 96,5 12,54 77 12,98 97 12,56 77,5 12,98 97,5 12,58 78 12,99 98 12,6 78,5 12,99 98,5 12,62 79 13 12,64 79,5 13 Tabela 6 - Dados do desconhecido

13,07 13,07 13,08 13,08 13,09 13,1 13,1 13,1 13,11 13,11 13,12 13,12 13,12 13,13 13,13 13,13 13,13 13,13 13,13 13,13 13,13 13,14 13,14 13,14

Com esses dados construmos as seguintes curvas de titulao para cada aminocido, nos quais a regio tamponante est evidenciada:

Glicina

Imagem 1 - Curva de titulao da glicina

Histidina

Imagem 2 - Curva de titulao da histidina

Glutamato

Imagem 3 - Curva de titulao do glutamato

Desconhecido

Imagem 4 - Curva de titulao do aminocido desconhecido

Apesar de algumas pequenas diferenas, os resultados obtidos foram prximos dos tericos. O que esperado levando em conta um possvel erro experimental. Durante as curvas de titulao as dissociaes dos aminocidos manipulados foram:

Imagem 5 - Dissociao Glicina

Imagem 6 - Dissociao Histidina

Imagem 7 - Dissociao Glutamato

Imagem 8 - Dissociao Arginina

Os dados tericos para comparao foram os seguintes: Aminocidos Glicina Glutamato Histidina Arginina pK1 2,3 2,2 1,8 2,2 pK2 9,6 4,3 6,0 9,0 pK3 9,7 9,2 12,5

Tabela 7 - Dados tericos. FONTE: Lehninger - Princpios de Bioqumica

Atravs da observao das regies tamponantes e de certa similaridade com a curva terica pudemos descobrir qual era o aminocido desconhecido. Primeiramente eliminamos os aminocidos com apenas dois pKs, pois o grfico obtido experimentalmente apresentava trs plats. E a partir da anlise comparativa dos pHs referentes aos plats com os pKs dos aminocidos restantes identificamos que o aminocido desconhecido era arginina. Adicionados aproximadamente 10 mL de NaOH, a soluo de arginina apresentou opacidade. Aps discusso deduziu-se que esse fenmeno davase devido ao fato da arginina ser pouco solvel iniciando assim precocemente sua precipitao. O efeito foi observado com mais intensidade perto do pI, isso se deve ao fato de a carga lquida total do aminocido nesse ponto ser zero, diminuindo ainda mais sua interao com a gua.

CONCLUSO
Conclumos que: Por se tratar de um tampo, mesmo com concentraes diferentes de cido e base conjugada, o pKa permanece constante e o pH tem pouca variao . As curvas obtidas pela titulao potenciomtrica de cada aminocido esto prximas do esperado e descobrimos por anlise que o aminocido desconhecido trata-se da arginina.

REFERNCIAS
NELSON, D. L.; COX, M. Lehninger Princpios de Bioqumica. 3ed. MARZZOCO, A.; TORRES, B. B. Bioqumica Bsica. 2ed.

Anexo 1

Anexo 2