Study of growth of Escherichia coli under conditions of UV irradiation in the presence of the catalyst P25

Escobedo-Bretado M. A.1, Sifuentes-Rosales I. A.1, Lpez-Chipres E.1, Ponce-Pea P.1,

FAC

L U

E CI EN CIAS Q DD UI TA M

I
CA
S

Lpez-Ortiz A.2, Collins-Martnez V.2 ,

Gutirrez-Martnez A.3
1Facultad

J E D

de Ciencias Qumicas, Universidad Jurez del Estado de Durango, Av. Veterinaria s/n,

Circuito Universitario, C.P. 34120, Durango, Dgo., Mxico. 2Depto. Qumica de Materiales, Centro de Investigacin en Materiales Avanzados, S. C., Miguel de Cervantes 120, C. P. 31109, Chihuahua, Chih., Mxico. 3Cecyted, Blvd. Armando del Castillo Franco No. 107, C. P. 34100, Durango, Dgo., Mxico. Tel: (618) 1301120, fax (618) 1301111, e-mail: miguel.escobedo@ujed.mx

INTRODUCCIN
La fotocatlisis es una reaccin cataltica que involucra la absorcin de luz por parte de un catalizador o sustrato. En la desinfeccin de aguas de consumo, el uso de UV/TiO2 aparece como una tcnica muy prometedora, ya que: a) evita la formacin de compuestos halogenados (clorados), que pueden ser peligrosos (carcinognicos o mutagnicos) o malolientes; b) no es una tcnica cara; c) parece actuar sobre todos los tipos de bacterias, incluyendo Gram (+) y (-), y sobre otros microorganismos. Aunque el mecanismo de accin es an desconocido, se cree que la actividad bactericida se debe a la oxidacin directa de la coenzima A. Los radicales HO y probablemente otras especies activas como O2, HO2 y H2O2 provocan daos sobre los microorganismos.

OBJETIVO
Determinar el efecto de la adicin del catalizador P25 sobre el crecimiento de E. coli irradiada con luz UV a 365 nm de .

Resultados
El mtodo de conteo en placa arroj los siguientes resultados: Tiempo en horas Media del nmero de colonias para T2 (luz UV) 1583.5 1245.33333 1540 1263.33333 1053.33333 252 0 0 0 0 0 0
Tabla 1. Resultados del conteo en placa.
10000 10000

MATERIALES Y MTODOS
Materiales
1. TiO2 P25 en fase anatasa 2. Escherichia coli cepa DH5a 3. Lmpara de luz ultravioleta a 365 nm. 4. Agar nutritivo 5. Caldo nutritivo 4 2 3 0 1

Media del nmero de colonias para T3 (luz UV) + P25 1483,66 1613,66 1950 2000 706,66 0 0 0 0 0 0 0

Metodologa
El proceso de fotocatlisis con el binomio UV/TiO2 fue estudiado a escala de laboratorio utilizando la especie P25 del TiO2 en fase anatasa y la cepa DH5 de la bacteria Escherichia coli. Se someti la cepa a una cintica de crecimiento en 3 tratamientos: 1. Se acondicion una incubadora con agitacin para facilitar los medios propicios para el proceso de fotocatlisis: a) Se cubri con papel aluminio para maximizar el aprovechamiento de la luz ultravioteta. b) Se introdujo una extensin a fin de conectar la lmpara de luz ultravioleta dentro de la incubadora. c) Se fijo la lmpara a una distancia de 10 cm de la posicin de los matraces. 2. Se prepararon matraces con 500 ml de caldo nutritivo 3. Se adicion uno de los matraces con 0,2 g de TiO2 por cada 100 ml de medio de cultivo. 4. Cada matraz fue inoculado con una muestra de la cepa DH5 de la bacteria Escherichia coli 5. La incubacin se llev a cabo en la incubadora modificada mencionada en el paso No. 1 (Fig. 1) a 35 1C con agitacin a 120 rpm. 6. Se tomaron muestras de 1ml de cada uno de los tratamientos por triplicado, cada una de las cuales fueron sembradas por el mtodo de vaciado en placa con agar nutritivo. 7. Las muestras se incubaron en estufa de incubacin a 35 1C por 24 h.
100

5 6 7 8 9 10 11

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8. Se procedi luego de las 24 h a realizar el conteo en placa. 9. Se realiz una tincin Gram para verificar la presencia del microorganismo.
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1 0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11

1 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12

Grfica 1. Crecimiento microbiano en medio de cultivo expuesto a luz UV (Tratamiento 2)

Grfica 2. Crecimiento microbiano en medio de cultivo expuesto a luz UV y adicionado con catalizador (Tratamiento 3)

Los resultados muestran que en el tratamiento (3) la fase de muerte se presenta 5 h despus de inoculado el medio de cultivo, mientras que en el tratamiento (2) la fase de muerte se presenta a la hora 6. Para el tratamiento (1) es entre las horas 5 y 6 cuando la bacteria pasa de la fase de crecimiento exponencial a la fase estacionaria, lo que genera grandes expectativas en cuanto a las posibles aplicaciones del mtodo. Se observa adems que el crecimiento bacteriano no solo se detiene, sino que no hay UFC en los medios de cultivo a los tiempos anteriormente sealados. Si bien los tiempos de la fase de muerte para T2 y T3 no son muy diferentes, la presencia del catalizador aceler dicha fase.
Figura 1. La incubadora modificada. Se muestra la lmpara de luz UV a 10 cm de la ubicacin de los matraces

CONCLUSIONES
De acuerdo a los resultados obtenidos, se sugiere que el catalizador P25 al ser activado por la luz UV a 365 nm, impide el crecimiento de la cepa DH5a de Escherichia coli, por lo que se recomiendan estudios posteriores para su aplicacin en la desinfeccin de aguas de consumo.