PROCEDIMIENTO PARA EL RECUENTO AEROBIOS MESFILOS EN ALIMENTOS INTRODUCCIN

DE

MICROORGANISMOS

La presencia de microorganismos aerobios mesfilos en un alimento, nos da idea de la calidad de la materia prima y de los procesos de manipulacin y elaboracin del mismo. Cuando se realiza su recuento, no se especifica el tipo de microorganismos presentes, ni se pueden utilizar como indicadores de la presencia de patgenos o sus toxinas en los alimentos. Un recuento total de microorganismos aerobios mesfilos alto, se puede deber a un proceso de alteracin del alimento. En general, el recuento de los microorganismos aerobios mesfilos en los alimentos, refleja las condiciones de salubridad de los mismos. 1. OBJETO Y CAMPO DE APLICACIN Este procedimiento tiene la finalidad de especificar el mtodo a seguir, para realizar el recuento en placa de los microorganismos aerobios que crecen a una temperatura de 31 1 C, presentes en los productos alimenticios. 2. PRINCIPIO 2.1. Preparacin de una matriz de trabajo, por dilucin del alimento slido en el diluyente especificado (suspensin inicial). En el caso de los alimentos lquidos esta muestra se podr utilizar directamente. 2.2. Inoculacin en placas de PCA, por duplicado, de una cantidad determinada de una suspensin inicial y posterior siembra en superficie. 2.3. Inoculacin y siembra en las mismas condiciones, de las diluciones decimales que sean necesarias, en los casos en los que se sospeche un nmero elevado de microorganismos en la muestra, utilizando dos placas por dilucin. 2.4. Incubacin en condiciones aerbicas de las placas a 31 1 C y anlisis tras 48 horas. 2.5. Clculo del nmero de microorganismo aerobios mesfilos, por gramo de muestra, a partir del nmero de colonias de las placas. 3. DILUYENTES Y MEDIOS DE CULTIVO 3.1 Diluyente: Agua de Peptona Tamponada
Composicin Triptona . g/L 10

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Cloruro sdico .. Hidrgeno fosfato disdico dodecahidratado (Na2 HPO4 99%) ............... Dihidrgeno fosfato de potasio (K2HPO4) ............... Preparacin

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Agregar todos los ingredientes a 1000 mL de agua destilada fra. Mezclar bien y esterilizar a 121 C durante 20 minutos.

3.2 PCA (Plate Count Agar)

Principio
El PCA es un medio de crecimiento general que se utiliza para realizar un recuento total de microorganismos. En el caso de los productos de la pesca, se suplementa con el 1% de NaCl. Composicin Glucosa ........... Extracto de levadura .. Triptona ................. Cloruro sdico............................................................................................................ Agar bacteriolgico ................................................................................................... Preparacin Agregar todos los ingredientes a 1000 mL de agua destilada fra. Mezclar bien y esterilizar a 121 C durante 20 minutos. g/L 1.0 2.5 5.0 10.0 15.0

4. PROCEDIMIENTO 4.1 Toma y preparacin de las muestras Se tomar una muestra del lote que sea verdaderamente representativa y que no haya sufrido dao o transformacin durante el transporte o el almacenamiento. En el caso de alimentos slidos, la muestra se diluir con el diluyente indicado en el apartado 3.1. Si la masa de la porcin de anlisis no fuera 25 g, se empleara la cantidad necesaria de diluyente para obtener una dilucin 1/10. Ejemplo Utilizando unas pinzas y un bistur estriles, se pesan 25 g del alimento sobre un pesasustancias estril. Se depositan en una bolsa estril y se le aaden 225 mL de agua de peptona. Se introduce la bolsa en el Stomacher y se agita durante 30-60 segundos, dependiendo de la naturaleza del alimento. 4.2 Inoculacin

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Se depositan 100-300 L de inculo en dos placas de PCA y se extienden con un asa Digralsky estril, con cuidado para no romper el agar y tan pronto como sea posible, intentando no tocar las paredes de la placa. Dejar secar las placas con la tapa puesta, durante unos 15 minutos a temperatura ambiente. Este mismo procedimiento se repetir para la dilucin 10-2 y las diluciones sucesivas, si fuese necesario. 4.3 Incubacin Las placas se incuban invertidas a 31 1 C durante 48 horas. 4.4 Recuento de las placas Transcurrido el tiempo de incubacin, se cuentan todas las colonias que hayan crecido en las placas, escogiendo las placas de aquella dilucin en la cual las colonias estn mejor aisladas. 5. EXPRESIN DE LOS RESULTADOS El recuento medio de las dos o ms placas que se han sembrado, se multiplica por el factor de dilucin de la matriz, por el factor de dilucin de la placa y por la inversa del volumen de inculo sembrado en la placa, lo cual nos proporcionar el nmero de Unidades Formadoras de Colonia por gramo o mL presentes en el alimento. N= C x D x d x 1/I
N= Unidades formadoras de colonia por gramo o mL de alimento (UFC/g o UFC/mL) C= media del n de colonias contadas D= factor de dilucin de la matriz, Ej.: D sera igual a 10, si la dilucin madre es decimal 6, si el peso de la muestra es 10 g y el volumen de agua de peptona aadido, 50 mL (10+50/10=6) d= factor de las diluciones decimales seriadas en los tubos, Ej.: d sera 1, si contamos las placas correspondientes a la matriz, 10 si se cuentan las placas correspondientes a una siembra del primer tubo decimal, 100 del siguiente tubo de la serie y as sucesivamente. I= volumen de inculo sembrado en cada placa

En el caso de que no se observe crecimiento en las placas de la primera dilucin, el resultado se expresar como <10 UFC/g o <10 UFC/mL.

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5. ESQUEMA RESUMEN DEL PROCEDIMIENTO

PCA

Incubar a 31 1 C / 72 horas

Contar todas las colonias

Resultado

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6. BIBLIOGRAFA Manual prctico de Microbiologa. Carlos Gamazo, Ignacio Lpez-Goi, Ramn Daz. 2005 Microbiologa alimentaria. M del Rosario Pascual Anderson, Vicente Caldern y Pascual.

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